參苓白術(shù)散對潰瘍性結(jié)腸炎患者血漿MMP-2、MMP-9水平的影響

王雪梅

065700　河北省廊坊市第四人民醫(yī)院康復(fù)科

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參苓白術(shù)散對潰瘍性結(jié)腸炎患者血漿MMP-2、MMP-9水平的影響

王雪梅

065700河北省廊坊市第四人民醫(yī)院康復(fù)科

【摘要】目的觀察參苓白術(shù)散對潰瘍性結(jié)腸炎(ulcerative colitis，UC)患者血漿基質(zhì)金屬蛋白酶(matrix metalloproteinase，MMP)-2、MMP-9表達水平的影響，探討參苓白術(shù)散治療UC的可能機制。方法將80例UC患者隨機分為對照組及試驗組各40例，對照組予以口服美沙拉嗪治療，試驗組聯(lián)合參苓白術(shù)散，1療程8周。觀察治療前后癥狀并進行臨床療效評價，采用Mayo評分表對疾病活動度進行評價。檢測外周靜脈血漿MMP-2、MMP-9，計算乳果糖/甘露醇比值(LMR)。結(jié)果試驗組總有效率(92.50%)明顯優(yōu)于對照組總有效率(77.50%)(χ2 =6.877，P=0.032)。治療后兩組的Mayo評分均小于治療前(t=12.584，t=14.641，P均<0.001)，試驗組治療后的Mayo評分小于對照組(t=3.306，P=0.001)。血漿MMP-2、MMP-9水平較治療前明顯降低(P<0.001)；試驗組低于對照組(t=3.039，P=0.003；t=4.669，P<0.001)。尿液LMR均小于治療前(t=8.478，t=10.333，P均<0.001)，試驗組治療后的尿液LMR小于對照組(t=2.834，P=0.006)。結(jié)論參苓白術(shù)散聯(lián)合美沙拉嗪治療UC，可顯著改善臨床癥狀，降低Mayo得分；UC患者血漿MMP-2、MMP-9水平下調(diào)，腸黏膜通透性的改善，可能是參苓白術(shù)散治療本病的機制之一。

【關(guān)鍵詞】參苓白術(shù)散；潰瘍性結(jié)腸炎；基質(zhì)金屬蛋白酶-2；基質(zhì)金屬蛋白酶-9

潰瘍性結(jié)腸炎(ulcerative colitis，UC)是腸道慢性非特異性炎癥性疾病，發(fā)病率呈逐年升高趨勢，病情反復(fù)影響著患者的生活質(zhì)量，然而其病因及發(fā)病機制尚未闡明[1]。而細(xì)胞外基質(zhì)的重構(gòu)已成為UC發(fā)病機制的研究熱點?；|(zhì)金屬蛋白酶(matrix metalloproteinase，MMPs)屬于蛋白水解酶，可水解細(xì)胞外基質(zhì)，破壞內(nèi)皮細(xì)胞間的緊密連接，增加血管通透性，加重腸黏膜損傷[2]。有研究表明，血漿MMP-2、MMP-9與UC的腸黏膜通透性密切相關(guān)[3]。目前關(guān)于參苓白術(shù)散對UC患者血漿MMP-2、MMP-9水平的作用尚未見報道。本研究通過觀察參苓白術(shù)散對UC患者的臨床療效，并檢測血漿MMP-2、MMP-9水平的變化，探討參苓白術(shù)散治療UC的可能機制。

1對象和方法

1.1對象

收集2013年6月至2015年6月本院門診及住院符合UC患者80例，所有患者均經(jīng)腸鏡檢查確診。UC診斷標(biāo)準(zhǔn)參照中華醫(yī)學(xué)會消化病學(xué)分炎癥性腸病學(xué)組2012年制定的《炎癥性腸病診斷與治療的共識意見》[4]。隨機分為對照組40例，男22例，女18例；年齡23～57歲，平均年齡(38.62±9.97)歲；病程0.5～6.9年，平均(4.54±2.15)年；病情程度：輕度10例，中度24例，重度6例；病變范圍：直腸9例，左半結(jié)腸22例，廣泛結(jié)腸9例。試驗組40例，男24例，女16例；年齡18～61歲，平均年齡(38.87±10.15)歲；病程0.3～7.8年，平均(4.61±2.75)年；病情程度：輕度8例，中度27例，重度5例；病變范圍：直腸6例，左半結(jié)腸24例，廣泛結(jié)腸10例。兩組患者的性別、年齡、病程、病情分布等一般資料比較，差異無統(tǒng)計學(xué)意義(P>0.05)，組間具有可比性。

1.2治療方法

對照組予以美沙拉嗪(黑龍江天宏藥業(yè)股份有限公司，生產(chǎn)批號：H20103359)，1.0 g/次，4次/天。試驗組在美沙拉嗪治療基礎(chǔ)上，加用參苓白術(shù)散(山西華康藥業(yè)股份有限公司，生產(chǎn)批號：Z14020346)，6.0 g/次，3次/天。兩組均連續(xù)治療8周，為1療程。

1.3療效的評定

1.3.1臨床療效評定療效判斷標(biāo)準(zhǔn)具體參照文獻[5]：臨床癥狀消失，結(jié)腸鏡復(fù)查見黏膜大致正?；驘o活動性炎性反應(yīng)記為“緩解”；臨床癥狀基本消失，結(jié)腸鏡復(fù)查見黏膜輕度炎性反應(yīng)記為“有效”；臨床癥狀、結(jié)腸鏡復(fù)查均無改善記為“無效”。

1.3.2疾病活動度評估采用改良的Mayo評分進行活動度評估[6]：(1)排便次數(shù)：正常次數(shù)記為0分，比正常增加1～2次記為1分，增加3～4次評2分，增加5次或以上記為3分；(2)便血：無便血記為0分，不到一半時間便中混血記為1分，大部分時間便中混血記為2分，一直存在出血記為3分；(3)內(nèi)鏡發(fā)現(xiàn)：正?；驘o活動性病變記為0分，紅斑、血管紋理減少、輕度易脆等輕度病變表現(xiàn)記為1分，有明顯紅斑、血管紋理缺乏、易脆、糜爛等中度病變記為2分，有自發(fā)性出血、潰瘍形成等重度病變記為3分；(4)總體評價：正常記為0分，輕度病變記為1分，中度病變記為2分，重度病變記為3分。各分項評分之和為Mayo評分。

1.4檢測指標(biāo)及方法

1.4.1血漿MMP-2、MMP-9表達的檢測兩組研究對象均于門診或住院當(dāng)天清晨在空腹?fàn)顟B(tài)下抽取外周靜脈血3 mL，EDTA抗凝，室溫靜置30分鐘，3500 rpm，離心10分鐘后取上層血漿，置于-80℃冰箱保存待測。嚴(yán)格按照ELISA試劑盒說明書進行操作，酶標(biāo)儀450 nm波長處測定吸光度，最后通過標(biāo)準(zhǔn)曲線得出研究對象血漿MMP-2及MMP-9的表達水平。

1.4.2尿乳果糖/甘露醇比值(lactulose/mannitol ratio，LMR)測定兩組研究對象于測定前1天晚22時起禁食，第2天晨起應(yīng)于排空膀胱后口服100 mL的L和M混合溶液，30分鐘內(nèi)禁水、2小時內(nèi)禁食，收集6小時內(nèi)全部的尿液，中間10 mL加入2%硫柳汞防腐，保存在-80℃冰箱。檢測前室溫溶化、混勻、高速離心10分鐘，上清液加入試劑開始檢測。采用HPLC示差法檢測尿液中乳果糖(lactulose，L)和甘露醇(mannitol，M)濃度，并計算LMR。

1.5統(tǒng)計學(xué)處理

2結(jié)果

2.1兩組患者治療前后的臨床療效比較

對照組緩解15例、有效16例、無效9例，總有效率為77.50%；試驗組緩解26例、有效11例、無效3例，總有效率為92.50%。兩組經(jīng)卡方檢驗，差異具有顯著統(tǒng)計學(xué)意義(χ2=6.877，P<0.05)，可認(rèn)為參苓白術(shù)散治療UC具有明顯的臨床療效。見表1。

表1　兩組患者治療后臨床療效比較(%)

2.2兩組患者治療前后Mayo評分比較

治療前兩組的活動度Mayo評分無統(tǒng)計學(xué)意義差異(t=0.143，P=0.887)，治療后兩組的Mayo評分均小于治療前，差異有統(tǒng)計學(xué)意義(t=12.584，t=14.641，P均<0.001)，試驗組治療后的Mayo評分小于對照組，差異有統(tǒng)計學(xué)意義(t=3.306，P=0.001)，可認(rèn)為參苓白術(shù)散可顯著降低UC活動度。見表2。

表2　兩組患者治療前后的Mayo評分比較±s,分)

2.3兩組患者治療前后血漿MMP-2、MMP-9水平變化

治療前兩組患者血漿MMP-2、MMP-9水平比較，差異無統(tǒng)計學(xué)意義(t=-0.443，P=0.659；t=0.085，P=0.933)；治療后血漿MMP-2、MMP-9水平較治療前明顯降低，差異有統(tǒng)計學(xué)意義(P<0.001)；試驗組低于對照組，差異有統(tǒng)計學(xué)意義(t=3.039，P=0.003；t=4.669，P<0.001)，故認(rèn)為參苓白術(shù)散顯著降低UC患者血漿MMP-2、MMP-9水平。見表3。

表3　兩組患者治療前后血漿MMP-2、MMP-9、

注： 與本組治療前比較，aP<0.001

兩組治療前的尿液LMR無統(tǒng)計學(xué)意義差異(t=-0.457，P=0.649)，治療后LMR均明顯減少，差異有統(tǒng)計學(xué)意義(t=8.478，t=10.333，P均<0.001)，試驗組治療后的尿液LMR小于對照組，差異有統(tǒng)計學(xué)意義(t=2.834，P=0.006)，可認(rèn)為參苓白術(shù)散可顯著改善黏膜通透性。見表3。

3討論

臨床上，UC以腹瀉、黏液膿血便、腹痛、里急后重為表現(xiàn)特征，屬中醫(yī)“泄瀉”“痢疾”“腸澼”范疇，本病主要與感受外邪、飲食不調(diào)、勞倦內(nèi)傷、情志失調(diào)等因素相關(guān)，導(dǎo)致脾胃虛弱，腑氣不運，水谷不化，本虛標(biāo)實，治宜標(biāo)本兼治，宜健脾滲濕，益氣和中[7]。參苓白術(shù)散出自《太平惠民和劑局方》，方中黨參、白術(shù)、茯苓、甘草健脾益氣和中；白術(shù)健脾燥濕；炒山藥、白扁豆、薏苡仁、蓮子可補脾滲濕止瀉；陳皮行氣止痛，醒脾燥濕和胃；砂仁、陳皮調(diào)氣行滯。諸藥合用溫而不燥，補而不膩，起到健脾滲濕、溫脾燥濕、益氣調(diào)中作用。本研究證實UC患者使用參苓白術(shù)散聯(lián)合美沙拉嗪治療，對臨床療效及評估活動度的Mayo評分均有明顯的改善作用，較單用美沙拉嗪效果明顯(P<0.05)，且UC患者的腹痛、腹瀉、發(fā)熱及膿血病的緩解時間均顯著降低，這與徐紀(jì)文[8]、辛群等[9]研究結(jié)果一致，且患者Sutherland DAI評分也較單用美沙拉嗪改善明顯。

UC病理主要表現(xiàn)為炎癥細(xì)胞浸潤和潰瘍形成及細(xì)胞外基質(zhì)成分的破壞。MMPs來源于腸黏膜基質(zhì)細(xì)胞和炎癥細(xì)胞，是降解細(xì)胞外基質(zhì)的蛋白水解酶，在潰瘍的發(fā)生和結(jié)締組織的重構(gòu)中發(fā)揮至關(guān)重要作用[10]。MMP-2、MMP-9屬于明膠酶，主要降解明膠和Ⅳ型膠原。Ⅳ型膠原構(gòu)成基底膜的主要成分，起著抑制炎癥擴散的作用，Ⅳ型膠的破壞導(dǎo)致腸黏膜屏障的破壞、細(xì)胞外基質(zhì)的降解、器官或組織潰瘍的發(fā)生。研究發(fā)現(xiàn)重度活動期UC患者血漿MMP-2、MMP-9水平明顯高于中度患者，同時活動期UC患者血漿MMP-2、MMP-9水平與疾病嚴(yán)重程度、病變范圍呈相關(guān)性。本研究發(fā)現(xiàn)，參苓白術(shù)散聯(lián)合美沙拉嗪可明顯降低UC患者血漿MMP-2、MMP-9的表達，抑制促炎因子的表達，改善細(xì)胞外基質(zhì)的結(jié)構(gòu)重構(gòu)。既往研究表明，參苓白術(shù)散可顯著降低UC患者血清腫瘤壞死因子α，升高白細(xì)胞介素4(interleukin-4，IL-4)，同時也可降低輔助性T細(xì)胞17分泌的IL-17、IL-23，而這些因子均與腸壁炎癥及腸黏膜的損傷密切相關(guān)[11]。

腸黏膜屏障的破壞在UC發(fā)病中起重要作用，當(dāng)屏障功能受損傷，導(dǎo)致黏膜通透性增高，促進腸道細(xì)菌、內(nèi)毒素進入血循環(huán)，誘導(dǎo)炎癥介質(zhì)釋放，進一步使腸黏膜損傷，通透性增高，因此提高腸黏膜屏障功能也是治療UC的重要手段。顧鑒秋等[12]研究發(fā)現(xiàn)，腸炎清口服液可改善小鼠UC腸道黏膜通透性，從而起到治療效果。

綜上，參苓白術(shù)散聯(lián)合美沙拉嗪可明顯改善UC患者的臨床癥狀，提高Mayo評分，降低血漿MMP-2、MMP-9的表達，改善腸道黏膜通透性，具體機制還有待進一步深入研究。

參考文獻

[1]Gerhard R. Chronic ulcerative colitis and colorectal cancer[J]. Cancer Letters，2014，345(2)：235-241.

[2]趙曼，高峰.潰瘍性結(jié)腸炎發(fā)病機制研究進展[J].現(xiàn)代生物醫(yī)學(xué)進展，2010，10(16)：3160-3165.

[3]薛永舉，梅俏，丁浩，等.潰瘍性結(jié)腸炎患者外周血中MMP-2、MMP-9與腸黏膜通透性關(guān)系的臨床研究[J].安徽醫(yī)科大學(xué)學(xué)報，2014，49(4)：495-498.

[4]中華醫(yī)學(xué)會消化病學(xué)分會炎癥性腸病學(xué)組.炎癥性腸病診斷與治療的共識意見(2012年·廣州)[J].中華內(nèi)科雜志，2012，51(10)：818-831.

[5]裴強偉，孫志翠，宋小莉，等.半夏瀉心湯及其加減方治療潰瘍性結(jié)腸炎療效和安全性的系統(tǒng)評價[J].中國實驗方劑學(xué)雜志，2012，18(14)：290-294.

[6]高翠賢，古麗巴哈爾·司馬義.潰瘍性結(jié)腸炎疾病活動指數(shù)的回顧性比較研究[J].中國全科醫(yī)學(xué)，2012，15(19)：2167-2169，2172.

[7]吳撼平.中藥治療潰瘍性結(jié)腸炎的臨床研究與進展[J].中醫(yī)臨床研究，2012，4(8)：115-116.

[8]徐紀(jì)文. 參苓白術(shù)散聯(lián)合美沙拉嗪治療脾胃氣虛型潰瘍性結(jié)腸炎療效觀察[J].四川中醫(yī)，2015，33(10)：60-61.

[9]辛群，孫擎，葛現(xiàn)才，等.參苓白術(shù)散與美沙拉嗪對潰瘍性結(jié)腸炎患者血清IL-17、IL-23及TNF-α水平的影響[J].現(xiàn)代生物醫(yī)學(xué)進展，2015，15(9)：1663-1665，1670.

[10]Abdelazeem M A，El-Sayed M. The pattern of CD44 and matrix metaloproteinase-9 expression is a useful predictor of ulcerative colitis associated dysplasia and neoplasia[J]. Annals of Diagnostic Pathology，2015，19(6)：369-374.

[11]馬惠紅，秦艷，王立紅.參苓白術(shù)散合艾迪莎治療潰瘍性結(jié)腸炎療效觀察及對炎癥相關(guān)因子的影響[J].中醫(yī)藥導(dǎo)報，2015，21(4)：71-72.

[12]顧鑒秋，邵夢茹，陳家藝，等.腸炎清口服液改善小鼠潰瘍性結(jié)腸炎腸道黏膜通透性的作用機制[J].中國實驗方劑學(xué)雜志，2014，20(23)：133-137.

(本文編輯： 董歷華)

·論著·

Effects ofShenlingBaizhuPowder on serum MMP-2、 MMP-9 in patients with ulcerative colitis

WANGXue-mei.

DepartmentofRehabilitationtheFourthPeople’sHospitalofLangfang,Langfang065700,China

【Abstract】ObjectiveTo explore the treatment mechanism of Shenling Baizhu Powder on patients with ulcerative colitis(UC)by observing the plasma matrix metalloproteinases(MMPs) level before and after the treatment. Methods80 patients with UC were randomly divided into control group and experimental group, 40 patients in each group. Patients in the control group were given mesalazine and experimental group were given Shenling Baizhu Powder combined with mesalazine for 8 weeks. Before and after treatment, improvement of clinical symptoms was observed, and the disease activity was scored by Mayo. The blood samples of patients were collected and the plasma MMP-2、 MMP-9 were measured and the ratio of lactulose/mannitol was calculated. ResultThe total effective rate in the experimental group was 92.50%, superior to 77.50% in control group (χ2 =6.877，P=0.032). Mayo score after treatment in both groups was lower than that before treatment(t=12.584, t=14.641, P<0.001). Mayo score in the experimental group was lower than that in the control group (t=3.306，P=0.001) after treatment. The plasma levels of MMP-2、 MMP-9 were obviously decreased after treatment(P<0.001). The level was lower in the experimental group compared with the control group(t=3.039，P=0.003；t=4.669，P<0.001). The lactulose/mannitol ratio of both groups was decreased after treatment(t=8.478，t=10.333，P<0.001), and that in the experimental group was significantly lower than in the control group after treatment (t=2.834，P=0.006). ConclusionShenling Baizhu Powder combined with mesalazine shows significant efficacy in improving the clinical symptoms and decreasing Mayo scores in patients with UC; Shenling Baizhu Powder can decrease the plasma levels of MMP-2,MMP-9, improve the permeability of intestinal mucosa, which may be one of the effective mechanisms in treating this disease.

【Key words】Shenling Baizhu Powder；Ulcerative colitis；Matrix metalloproteinase-2；Matrix metalloproteinase-9

(收稿日期：2015-11-25)

Corresponding author:WANG Xue-mei, E-mail： fengxfxsof@sina.com

【中圖分類號】R285.6

【文獻標(biāo)識碼】A

doi：10.3969/j.issn.1674-1749.2016.04.004

作者簡介：王雪梅(1977- )，女，本科，主治中醫(yī)師。研究方向：中醫(yī)內(nèi)科。E-mail：fengxfxsof@sina.com