試析高效液相色譜法測定壯腎安神片中淫羊藿苷苷含量

楊麗紅

哈藥集團(tuán)三精制藥四廠有限公司 150000

試析高效液相色譜法測定壯腎安神片中淫羊藿苷苷含量

楊麗紅

哈藥集團(tuán)三精制藥四廠有限公司 150000

目的：采用高效液相色譜的方式檢測壯腎安神片中淫羊藿苷的含量。方法：選擇ShimadzuC18色譜柱為主要的設(shè)備，其具體的規(guī)格為（250mm×4.6mm，5μm），選擇水作為流動(dòng)相，比例為30:70，每分鐘的流速為1.0mL，將檢測波長確定為270nm。結(jié)果：通過檢測結(jié)果的顯示，當(dāng)淫羊藿苷的進(jìn)樣量控制在 8.56mg至 136.96mg之間時(shí)，可以得到最為理想的峰面積線性關(guān)系，其中r=0.9999，并且平均回收率可以達(dá)到98.60%以上，檢測RSD的結(jié)果為2.57%，其中n為6。結(jié)論：在檢測壯腎安神片中淫羊藿苷的含量過程中可以采用高效液相色譜法進(jìn)行檢測，這種方法不但具有簡便的特點(diǎn)，還能保證結(jié)果的準(zhǔn)確性，自身的靈敏性也較高，并且可以用作對壯腎安神片的質(zhì)量控制。

高效液相色譜法；壯腎安神片；淫羊藿苷；含量測定

壯腎安神片的主要作用是滋陰補(bǔ)腎以及生精填髓，在其主要的構(gòu)成成分中，主要是由九味藥物組成的，其中有牛鞭、山藥、地黃、牛睪丸、龍骨等，在臨床治療中具有十分顯著的功效。其在臨床治療中主要治療的病癥是心悸耳鳴、腎精不足等，但是這一品種在藥典中并沒有具體的標(biāo)準(zhǔn)，只有薄層定性鑒別，并且也沒有包含對其中所含有的有效成分的檢測。在所組成的藥物中，淫羊藿苷是主要的成分之一，屬于小檗科植物，其種類也可以分為很多種，取干燥的地上部分能夠用作補(bǔ)腎陽、祛風(fēng)濕以及強(qiáng)筋骨之用，因此本文重點(diǎn)對淫羊藿苷在壯腎安神片中的含量進(jìn)行檢測，采用高效液相色譜的方式能夠?qū)ζ滟|(zhì)量得到有效的控制。

1、儀器與試藥

高效液相色譜儀（日本島津）。淫羊藿苷對照品（批號(hào)為110737—200312，中國藥品生物制品檢定所）；壯腎安神片（自制，批號(hào)分別為20061025，20061106，20061121，規(guī)格為基片重0.3g／片）；水為超純水，乙腈為色譜純。

2、方法與結(jié)果

2.1 色譜條件

色譜柱：ShimadzuCl8柱（250mm×4.6mm，5μm）；流動(dòng)相：乙腈-水（30：70）；檢測波長：270nm；流速：1.0mL／min；柱溫：室溫。

2.2 溶液制備

在對溶液進(jìn)行制備的過程中，先在溫度為105℃的環(huán)境下精密的稱取一定含量的淫羊藿苷對照品，將其處在干燥的環(huán)境中，并且保證淫羊藿苷對照品為恒重，在其中加入適量的甲醇配制成對照品溶液，其規(guī)格為4.0μg／mL，再取壯腎安神片40片，將外部的糖衣清除，經(jīng)過仔細(xì)的研磨之后形成粉末狀，取出 6.0g并且經(jīng)過精密的稱量，將其放入容積為50mL的具塞錐形瓶中，在其中加入20mL的稀乙醇，將其密封嚴(yán)實(shí)并且加以準(zhǔn)確的稱量，測定出具體的質(zhì)量，然后將其放入超聲儀器設(shè)備中1h，進(jìn)行超聲處理，1h過后取出并且加以冷卻，再對其質(zhì)量進(jìn)行精密的稱量，使用稀乙醇將失去的質(zhì)量補(bǔ)回，將溶液搖晃均勻以后進(jìn)行離心處理，通過微孔濾膜進(jìn)行過濾，再續(xù)取濾液當(dāng)作供試品溶液，將不含有淫羊藿苷的陰性樣品按照上述相同的方法進(jìn)行處理，最終得到陰性對照品溶液。

2.3 方法學(xué)考察

首先應(yīng)該進(jìn)行專屬性實(shí)驗(yàn)，分別取適當(dāng)?shù)膶φ掌啡芤阂约肮┰嚻啡芤哼€有陰性對照品溶液若干，按照相應(yīng)的方法進(jìn)樣并且加以進(jìn)一步的鑒定，結(jié)果顯示在陰性對照品溶液的色譜中，淫羊藿苷在保留時(shí)間上并不存在干擾峰。具體的檢測結(jié)果見圖1。

圖1 高效液相色譜圖

緊接著對線性關(guān)系進(jìn)行考察，在考察的過程中，要先對淫羊藿苷的對照品進(jìn)行精密的稱量 8.56mg，然后將其放入容積為100mL的量瓶中，使用甲醇對其進(jìn)行稀釋直到達(dá)到相應(yīng)的刻度，均勻的進(jìn)行搖晃。再精密量取10mL，置100mL量瓶中，用甲醇使溶解并稀釋至刻度，然后分別精密吸取0.5，1.0，2.0，4.0，8.0mL對照品溶液，置10mL量瓶中，加甲醇至刻度，搖勻。再分別精密吸取20μL注入液相色譜儀，記錄色譜圖。以淫羊藿苷的峰面積為縱坐標(biāo)、進(jìn)樣質(zhì)量濃度為橫坐標(biāo)繪制標(biāo)準(zhǔn)曲線，得線性回歸方程y=21850X一32587，r=0.9999（n=5）。結(jié)果表明，淫羊藿苷進(jìn)樣量在8.56至136.96mg范圍內(nèi)與峰面積線性關(guān)系良好。

精密度試驗(yàn)：精密吸取供試品溶液20，連續(xù)進(jìn)樣6次。結(jié)果的RSD為0.95%（n=6）。

穩(wěn)定性試驗(yàn)：取同一樣品，依法制備供試品溶液，分別于0，2，4，8h時(shí)進(jìn)樣20μL。結(jié)果的RSD為0.76%（n=4），表明8h內(nèi)供試品溶液的淫羊藿苷穩(wěn)定。

重復(fù)性試驗(yàn)：精密稱取同一批樣品5份，依法制備供試品溶液，在擬訂的色譜條件下測定。結(jié)果淫羊藿苷的平均含量為1.25g／片，RSD為0.86%（n=5）。

加樣回收試驗(yàn)：精密稱取 6份已知含量的樣品（批號(hào)為20061025，含量為4.5218μg／g，平均片重為0.3g）各3.0g，精密加入淫羊藿苷對照品稀乙醇溶液（4.25μg／mL）3.0mL，按樣品含量測定項(xiàng)下方法操作，記錄色譜圖，計(jì)算加樣回收率。結(jié)果見表1。

表1 淫羊藿苷加樣回收試驗(yàn)結(jié)果（n=6）

2.4 樣品含量測定

取3批樣品各40片，去糖衣層，研細(xì)，各取6.0g，精密稱定，依法制成供試品溶液，均進(jìn)樣20μL，分別測定吸收峰面積，以外標(biāo)法計(jì)算淫羊藿苷含量。結(jié)果淫羊藿苷含量分別為1.2871，1.2689，1.2736g／片，平均1.2765g／片。

3、結(jié)語

淫羊藿苷為箭葉淫羊藿、柔毛淫羊藿、巫山淫羊藿巫，朝鮮淫羊藿等干燥莖葉提取物。本品呈淡黃色針狀結(jié)晶粉末，分子量為676.65。淫羊藿苷能增加心腦血管血流量、促進(jìn)造血功能、免疫功能及骨代謝，還具有補(bǔ)腎壯陽、抗衰老等功效。淫羊藿苷能增加心腦血管血流量、促進(jìn)造血功能、免疫功能及骨代謝，具有補(bǔ)腎壯陽、抗衰老、抗腫瘤等功效?，F(xiàn)代藥理研究表明，淫羊藿有效成分及其提取物具有廣泛的生理活性，并發(fā)現(xiàn)許多新的藥理作用及新用途。

在對提取條件進(jìn)行篩選的過程中，分別用超聲的方式對50%的甲醇，含量為95%的乙醇以及稀乙醇進(jìn)行了處理，在1h以后取出，對相應(yīng)的成分進(jìn)行測定，結(jié)果證明相互之間存在的差異并不明顯，但是從溶液的毒性進(jìn)行考慮，最終選擇了在超聲提取中使用稀乙醇。在本文的實(shí)驗(yàn)中，主要選擇了高效液相色譜的方式對壯腎安神片中的有效成分進(jìn)行分離，并且采用陰性對照的方式進(jìn)行證明，證明當(dāng)處于色譜峰的位置時(shí)，并不會(huì)對成分造成干擾的影響，并且這種方法具有十分靈敏的特點(diǎn)，能夠簡單的進(jìn)行操作，在分離效果上也十分優(yōu)秀，能夠在壯腎安神片質(zhì)量控制的過程中作為主要的控制方法。

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