吲哚胺2，3-雙加氧酶的表達(dá)與宮頸癌發(fā)生和病理進(jìn)程的關(guān)系研究

李華強(qiáng)　郭春芳　謝黎明

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吲哚胺2，3-雙加氧酶的表達(dá)與宮頸癌發(fā)生和病理進(jìn)程的關(guān)系研究

李華強(qiáng)郭春芳謝黎明

【摘要】目的探討吲哚胺2，3-雙加氧酶(IDO)的表達(dá)情況與女性宮頸癌的發(fā)生與病理進(jìn)程的相關(guān)性。方法

選取宮頸癌手術(shù)治療后的石鈉組織標(biāo)本75例(宮頸癌組)，宮頸上皮瘤變Ⅰ級標(biāo)本30例(CINⅠ級組)、宮頸上皮瘤變Ⅱ～Ⅲ級標(biāo)本30例(CINⅡ～Ⅲ級組)、體檢收集的正常宮頸標(biāo)本30例(正常組)，采用免疫組織化學(xué)法檢測各組樣本中的IDO陽性表達(dá)率，并追蹤觀察IDO表達(dá)與宮頸癌患者病理及生存與后的關(guān)系。結(jié)果宮頸癌組標(biāo)本的IDO陽性表達(dá)率顯著的高于CINⅠ級組、CINⅡ～Ⅲ級組和正常組(P＜0.05) ; CINⅡ～Ⅲ級組IDO陽性表達(dá)率顯著的高于正常組(P＜0.05)。低分化宮頸癌患者、Ⅲ+Ⅳ期宮頸癌患者、發(fā)生淋巴結(jié)轉(zhuǎn)移的宮頸癌患者的IDO陽性率表達(dá)顯著的增高，IDO陽性表達(dá)與患者的分化程度、FIGO分期、淋巴結(jié)轉(zhuǎn)移具有一定的關(guān)系(P＜0.05)。經(jīng)過36個(gè)月的隨訪，IDO陽性表達(dá)53例患者中有7例死亡、2例失訪，IDO陰性表達(dá)患者22例中有3例死亡，1例失訪，IDO表達(dá)陽性與陰性患者的3年病死率差異無統(tǒng)計(jì)學(xué)意義(P＞0.05) ; IDO陰性表達(dá)患者的3年生存中位時(shí)間35.4個(gè)月與IDO陽性表達(dá)患者的34.2個(gè)月差異無統(tǒng)計(jì)學(xué)意義(P＞0.05)。結(jié)論IDO在宮頸癌組織中高表達(dá)，與宮頸癌的分化程度、FIGO分期、淋巴結(jié)轉(zhuǎn)移具有一定的關(guān)系，與患者的3年生存預(yù)后關(guān)系不顯著，需進(jìn)一步延長隨訪時(shí)間進(jìn)行觀察。

【關(guān)鍵詞】吲哚胺2，3-雙加氧酶;宮頸癌;病理進(jìn)程

作者單位: 401320重慶市巴南區(qū)人民醫(yī)院病理科(李華強(qiáng)、郭春芳)，婦科(謝黎明)

宮頸癌為近年來嚴(yán)重威脅已婚女性生命健康的重要生殖系統(tǒng)惡性腫瘤，隨著宮頸常規(guī)篩查的普及，宮頸癌的臨床檢出率逐年升高。相關(guān)基礎(chǔ)領(lǐng)域研究證實(shí)，宮頸上皮局部組織的免疫調(diào)節(jié)異?？赡茱@著參與到了宮頸上皮來源惡性腫瘤的發(fā)生發(fā)展過程［1］。吲哚胺2，3-雙加氧酶(IDO)于1963年首次于兔子腸道中發(fā)現(xiàn)，并被證實(shí)與多種自身免疫性疾病、移植免疫、腫瘤免疫以及母胎免疫耐受相關(guān)［2，3］，部分學(xué)者認(rèn)為IDO在宮頸癌的發(fā)生發(fā)展過程中參與到了腫瘤細(xì)胞免疫逃逸等過程［4］，但迄今無明確臨床研究證實(shí)。本次研究重在分析IDO的表達(dá)情況與女性宮頸癌的發(fā)生與病理進(jìn)程的相關(guān)性，報(bào)告如下。

1　資料與方法

1.1一般資料選取我院婦科收集的宮頸癌手術(shù)治療后的石蠟組織標(biāo)本75例(宮頸癌組)，宮頸上皮瘤變Ⅰ級標(biāo)本30例(CINⅠ級組)、宮頸上皮瘤變Ⅱ～Ⅲ級標(biāo)本30例(CINⅡ～Ⅲ級組)、體檢收集的正常宮頸標(biāo)本30例(正常組)。宮頸癌組75例患者，年齡33～69歲，平均年齡(48.5±10.6)歲;鱗癌67例、腺癌8 例;國際婦產(chǎn)聯(lián)盟(FIGO)分期:Ⅰ期31例、Ⅱ期20例、Ⅲ期17例、Ⅳ期7例;淋巴結(jié)轉(zhuǎn)移17例、未發(fā)生淋巴結(jié)轉(zhuǎn)移58例。CINⅠ級組30例患者，年齡30～68歲，平均年齡(46.3±9.6)歲。CINⅡ～Ⅲ級組30例患者，年齡29～65歲，平均年齡(47.5±10.4)歲。正常組30例，年齡26～63歲，平均年齡(45.2±10.5)歲。4組標(biāo)本的年齡構(gòu)成差異無統(tǒng)計(jì)學(xué)意義(P＜0.05)。

1.2納入與排除標(biāo)準(zhǔn)

1.2.1納入標(biāo)準(zhǔn):①宮頸癌患者、宮頸上皮瘤變患者的診斷均經(jīng)過手術(shù)后病理標(biāo)本檢查證實(shí);②正常組標(biāo)本來自于我院女性體檢取活組織標(biāo)本經(jīng)病理學(xué)檢查證實(shí)為正常宮頸組織;③宮頸癌患者、宮頸上皮瘤變患者術(shù)前未接受相關(guān)治療;④對宮頸癌患者進(jìn)行了隨訪觀察。

1.2.2排除標(biāo)準(zhǔn):①合并其他部位腫瘤的患者;②術(shù)前接受過放療、化療的宮頸癌患者。

1.3實(shí)驗(yàn)方法標(biāo)本放置于90℃烤箱中烘烤25 min，二甲苯溶液浸泡2次，5 min/次，采用不同濃度的乙醇水化后PBS洗滌3次，5 min/次，過氧化氫溶液室溫孵育10 min，檸檬酸緩沖鹽進(jìn)行熱抗原修復(fù)，之后分別加入一抗和二抗(抗體均采用PBS緩沖液1∶100稀釋配置，一抗以及二抗均購自南京凱基生物科技有限公司)。DAB顯色后，采用蘇木素復(fù)染、脫水、透明、封片，顯微鏡下觀察。

1.4免疫組織化學(xué)法結(jié)果判定標(biāo)準(zhǔn)免疫組織化學(xué)法的結(jié)果判定標(biāo)準(zhǔn)，IOD陽性表達(dá)為細(xì)胞質(zhì)內(nèi)棕黃色顆粒，按照著色強(qiáng)度進(jìn)行分級，無色: 0分;淡黃色: 1 分;棕黃色:2分，褐色:3分;顯微鏡下染色陽性細(xì)胞計(jì)數(shù):＜5%:0分;5%～29%: 1分; 30%～70%: 2分;＞ 70%:3分;兩個(gè)得分項(xiàng)目相加為最終評分，(－)為總分0～1分，陰性表達(dá); (+)為2～3分，弱陽性表達(dá); (++)為4～5分，中陽性表達(dá); (+++)為6分，強(qiáng)陽性表達(dá)。陽性表達(dá)=弱陽性+中陽性+強(qiáng)陽性。

2　結(jié)果

2.1不同組別標(biāo)本中IDO陽性表達(dá)率比較宮頸癌組標(biāo)本的IDO陽性表達(dá)率(62.67%)顯著高于CINⅠ級組、CINⅡ～Ⅲ級組和正常組(P＜0.05) ; CINⅡ～Ⅲ級組IDO陽性表達(dá)率顯著高于正常組(P＜0.05)。見表1。

表1　不同組別標(biāo)本中IDO陽性表達(dá)率比較　例

2.2宮頸癌患者IDO陽性表達(dá)與患者的臨床病理特征關(guān)系低分化宮頸癌患者、Ⅲ+Ⅳ期宮頸癌患者、發(fā)生淋巴結(jié)轉(zhuǎn)移的宮頸癌患者的IDO陽性率表達(dá)顯著的增高，IDO陽性表達(dá)與患者的分化程度、FIGO分期、淋巴結(jié)轉(zhuǎn)移具有一定的關(guān)系(P＜0.05)。見表2。

表2　宮頸癌患者IDO陽性表達(dá)與患者的臨床病理特征關(guān)系例

2.3宮頸癌患者的3年隨訪情況經(jīng)過36個(gè)月的隨訪，IDO陽性表達(dá)53例患者中有死亡7例、失訪2例，IDO陰性表達(dá)患者22例中有死亡3例，失訪1例，IDO表達(dá)陽性與陰性患者的3年病死率差異無統(tǒng)計(jì)學(xué)意義(P＞0.05)。IDO陰性表達(dá)患者的3年生存中位時(shí)間35.4個(gè)月與IDO陽性表達(dá)患者的34.2個(gè)月差異無統(tǒng)計(jì)學(xué)意義(χ2=1.084，P＞0.05)。見表3，圖1。

表3　IDO表達(dá)陽性、陰性患者的3年生存率比較　例(%)

圖1　IDO表達(dá)陽性、陰性患者的3年生存函數(shù)圖

3　討論

宮頸癌為嚴(yán)重威脅女性生命健康的疾病，每年死于宮頸癌的病例可達(dá)30萬人，多年來基礎(chǔ)領(lǐng)域研究以及臨床分析研究均在試圖尋找宮頸癌的發(fā)生機(jī)制，進(jìn)而為臨床治療提供理論基礎(chǔ)，然而迄今為止尚無重大發(fā)現(xiàn)，但在此過程中部分學(xué)者發(fā)現(xiàn)，宮頸局部上皮組織微環(huán)境中的免疫調(diào)節(jié)平衡的打破可能為宮頸癌的早期發(fā)生發(fā)展提供了有利條件，認(rèn)為腫瘤微環(huán)境的改變以及部分細(xì)胞因子導(dǎo)致的促免疫逃逸是宮頸癌的重要病因［5，6］。既往研究認(rèn)為IDO主要分布于子宮內(nèi)膜腺體和表面上皮細(xì)胞、螺旋動(dòng)脈以及毛細(xì)血管內(nèi)皮［5］，而近年來相關(guān)學(xué)者進(jìn)一步研究后發(fā)現(xiàn)，IDO在宮頸腺體間質(zhì)以及輸卵管上皮內(nèi)均存在不同程度的表達(dá)，隨著對于IDO的免疫逃逸機(jī)制的研究的深入，部分研究者發(fā)現(xiàn)IDO在宮頸癌鱗狀上皮細(xì)胞內(nèi)存在一定程度的表達(dá)［4，7］，但并無組織學(xué)以及臨床分析研究證實(shí)，本次研究重在分析IDO的表達(dá)情況與女性宮頸癌的發(fā)生與病理進(jìn)程的相關(guān)性，進(jìn)而為宮頸癌的免疫治療提供一定的理論基礎(chǔ)。

筆者發(fā)現(xiàn)，不同組別標(biāo)本中IDO陽性表達(dá)率存在明顯差異，宮頸癌組標(biāo)本的IDO陽性表達(dá)率顯著高于宮頸CIN組，而宮頸CIN的病例其IDO的陽性表達(dá)率明顯高于正常對照宮頸組織，提示IDO隨著宮頸病變程度的加深，其陽性表達(dá)水平顯著增加，部分研究者分析認(rèn)為，腫瘤細(xì)胞刺激巨噬細(xì)胞和樹突細(xì)胞后，可以產(chǎn)生IDO進(jìn)而改變局部色氨酸以及其代謝產(chǎn)物的濃度，并抑制T細(xì)胞的腫瘤抗原的特異性克隆增殖［6，8］，提示宮頸病變組織通過表達(dá)IDO來抑制T細(xì)胞的腫瘤殺傷性作用，協(xié)助腫瘤細(xì)胞逃脫免疫監(jiān)察、促進(jìn)細(xì)胞增殖和侵襲轉(zhuǎn)移［9］;筆者對于宮頸癌患者IDO陽性表達(dá)與患者的臨床病理特征關(guān)系也證實(shí)了這一點(diǎn)，低度分化、中晚期期宮頸癌、發(fā)生淋巴結(jié)轉(zhuǎn)移的患者，其IDO表達(dá)陽性率明顯增加，在此過程中，溶細(xì)胞性T淋巴細(xì)胞相關(guān)抗原與DC細(xì)胞表明的B7受體相結(jié)合，通過色氨酸的耗竭來抑制CD8+T淋巴細(xì)胞的增殖，進(jìn)而發(fā)揮負(fù)性免疫調(diào)節(jié)作用，誘導(dǎo)其對于局部宮頸上皮環(huán)境的免疫耐受能力［10］。Ferns等［11，12］研究也發(fā)現(xiàn)，在發(fā)生腹主動(dòng)脈旁淋巴結(jié)以及髂總淋巴結(jié)轉(zhuǎn)移的宮頸癌患者中，IDO的表達(dá)與淋巴結(jié)轉(zhuǎn)移具有較好的一致性，同時(shí)其在中晚期宮頸癌患者特別是ⅡB期以后的患者，IDO的陽性表達(dá)水平的增高能在一定程度上預(yù)測患者遠(yuǎn)期臨床預(yù)后。但筆者發(fā)現(xiàn)本次臨床研究中相關(guān)隨訪結(jié)果并未提示IDO具有明顯的預(yù)后價(jià)值，IDO陽性組以及IDO陰性組的3年病死率差異無統(tǒng)計(jì)學(xué)意義(P＞0.05)，同時(shí)其術(shù)后生存時(shí)間也并無明顯差異，提示相關(guān)結(jié)論仍需要進(jìn)一步證實(shí)。

IDO在宮頸癌組織中高表達(dá)，與宮頸癌的分化程度、FIGO分期、淋巴結(jié)轉(zhuǎn)移具有一定的關(guān)系，表明IDO可能顯著參與到了宮頸癌的發(fā)生發(fā)展過程，對于IDO在宮頸癌發(fā)生發(fā)展過程中的免疫耐受以及免疫逃逸的研究，將可能為宮頸癌的免疫治療提供新的思路。

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·論著·

Study on the correlation between the expression of indolakylamine 2，3 dioxygenase and the pathogenesis and pathological process of cervical cancer

LI Huaqiang，GUO Chunfang，XIE Liming.
People’s Hospital of Ba’nan District， Chongqing City，Chongqin 401320，China

【Abstract】ObjectiveTo investigate the correlation between the expression of indolakylamine 2，3 dioxygenase (IDO) and the pathogenesis and pathological process of cervical cancer.Methods Seventy－five cases of stone sodium tissue specimens after cervical cancer surgery (cervical cancer group) were collected in Department of Gynaecology and Obstetrics of our hospital，and 30 cases of cervical intraepithelial neoplasia class I (CIN gradeⅠgroup)，30 cases of cervical intraepithelial neoplasia classⅡ～Ⅲ(CIN gradeⅡ～Ⅲgroup)，30 cases of normal cervical tissues (control group)，were collected in the study.The positive expression rates of IDO were detected by immunohistochemical method in all the groups，moreover，the correlation between the expression of IDO and pathological process of cervical cancer，survivorship and prognosis of patients was analyzed.Results The positive expression rates of IDO in cervical cancer group were significantly higher than those in CIN gradeⅠgroup，CIN gradeⅡ～Ⅲgroup，control group (P＜0.05).The positive expression rates of IDO inⅡ～Ⅲgroup were significantly higher than those in control group (P＜0.05).The positive expression rates of IDO in patients with poorly differentiated cervical cancer，patients withⅢ+Ⅳstage cervical cancer，patients with lymph node metastasis，were obviously increased，furthermore，the positive expression rates of IDO were closely correlated to the differentiation degree of cervical cancer，F(xiàn)IGO staging and lymph node metastasis (P＜0.05).After 36－month follow up，among 53 patients with positive expression of IDO，7 patients died and 2 patients were failure to follow up，among 22 patients with negative expression of IDO，3 patients died and 1 patient was failure to follow up.There was no significant difference in 3－year mortality between patients with positive expression of IDO and patients with negative expression of IDO (P＞0.05).The 3－year survival neutral time in patients with negative expression was 35.4 months，which in patients with positive expression of IDO was 34.2 months，there was no significant difference between them (P＞0.05).ConclusionThe high－expression of IDO is observed in cervical cancer，which is correlated to differentiation degree of cervical cancer，F(xiàn)IGO staging，lymph node metastasis at certain extent，however，which is not related with 3－year survival prognosis of patients，it is need to lengthen follow up time to observe further.

【Key words】indolakylamine 2，3 dioxygenase; cervical carcinoma; pathological process

(收稿日期:2015－09－25)

doi:10.3969/j.issn.1002－7386.2016.05.003

【中圖分類號】R 711.74

【文獻(xiàn)標(biāo)識碼】A

【文章編號】1002－7386(2016) 05－0653－03