火龍果離體快繁與組培苗移栽馴化技術(shù)

張 領(lǐng)，趙佐敏，陳紅艷，張 毅，李懷情

（安順市農(nóng)業(yè)科學(xué)研究院，貴州安順561000）

火龍果離體快繁與組培苗移栽馴化技術(shù)

張 領(lǐng)，趙佐敏，陳紅艷，張 毅，李懷情

（安順市農(nóng)業(yè)科學(xué)研究院，貴州安順561000）

為火龍果試管苗的批量生產(chǎn)提供基礎(chǔ)，以火龍果莖段上芽刺座為外植體，試驗(yàn)以MS為基本培養(yǎng)基，添加不同濃度不同種類激素，篩選火龍果離體培養(yǎng)誘導(dǎo)、增殖、生根培養(yǎng)的最適培養(yǎng)基，建立火龍果離體快繁體系。結(jié)果表明：適宜不定芽誘導(dǎo)分化的培養(yǎng)基為MS＋4．0mg／L 6－BA＋0．5mg／L NAA組，誘導(dǎo)率達(dá)58．33%；繼代增殖培養(yǎng)以MS＋9．0mg／L 6－BA＋0．5mg／L NAA的組合最好，增殖倍數(shù)達(dá)12倍；生根培養(yǎng)基組合以1／2MS添加0．4mg／L IBA＋0．2mg／L NAA，9d開始生根，生根效果最好，較最晚處理提前5d；試管苗入土馴化，以腐葉土為基質(zhì)，移栽環(huán)境空氣濕度為90%的綜合效應(yīng)最好，其試管苗成活率高達(dá)86．67%，生根時間早，根條數(shù)多、植株高、生長快，長勢強(qiáng)。

火龍果；離體快繁；入土馴化；成活率

火龍果，又稱紅龍果，果實(shí)含有VB1、VB2、VB3及人體所需礦物質(zhì)，常食火龍果能提高免疫力［1］。原產(chǎn)于中美洲熱帶地區(qū)，無明顯的產(chǎn)出季節(jié)性，但目前火龍果栽培采用的是掰芽扦插繁殖，而掰芽影響火龍果的生長及產(chǎn)量，要解決這一矛盾，唯一科學(xué)有效的途徑是通過試管苗組培快繁培養(yǎng)，而影響火龍果組培苗入土馴化的主要因素有苗質(zhì)、基質(zhì)、濕度、溫度等，是火龍果組培快繁中一個重要的技術(shù)環(huán)節(jié)，關(guān)系到火龍果組培苗移栽成活率的高低［2－5］。安順是種植火龍果的省級示范區(qū)，批量生產(chǎn)火龍果苗，優(yōu)質(zhì)的離體快繁技術(shù)能適應(yīng)生產(chǎn)市場需求。因此，開展以火龍果離體快繁技術(shù)研究，試驗(yàn)以MS為基本培養(yǎng)基，添加不同種類激素濃度，篩選火龍果離體培養(yǎng)誘導(dǎo)、增殖、生根培養(yǎng)的最適培養(yǎng)基，建立火龍果離體快繁體系，同時對影響組培苗入土馴化成活率的基質(zhì)和移栽環(huán)境空氣濕度組合進(jìn)行探索。筆者從不同的角度進(jìn)行研究，為火龍果試管苗的生產(chǎn)應(yīng)用提供科學(xué)依據(jù)。

1材料與方法

1．1供試材料

選擇貴州關(guān)嶺縣板貴鄉(xiāng)火龍果示范園5年生優(yōu)良健壯紅皮紅肉火龍果品種，以其莖段上芽刺座為外植體。

1．2組織培養(yǎng)方法

1．2．1外植體剪取及消毒 選擇生長健壯老莖萌發(fā)的火龍果嫩片，用毛刷蘸少許肥皂水，在流水下沖洗0．5～1h，切成4．0cm的小段，剝?nèi)ゴ套系拇毯兔?，沿波浪形陵緣縱向切（除去髓部）為4．0cm× 1．5cm帶有陵緣刺座的陵片，再用清水沖洗并浸泡4．5h，在無菌條件下先用75%酒精棉球擦拭嫩片表面后，將含有刺座的嫩片切1．5cm×1．5cm的方塊，再用10%次氯酸鈉消毒16～18min，無菌水沖洗3～4次，置于無菌濾紙吸干表面水分，最后將有刺座部分切取0．8cm×1．2cm大小的外植體接種于誘導(dǎo)培養(yǎng)基中。

表1 外植體各階段培養(yǎng)基的處理組合Table 1 Media for explants at different culture stage mg／L

1．2．2培養(yǎng)基及培養(yǎng)條件 誘導(dǎo)分化與增殖培養(yǎng)基為MS＋適量細(xì)胞分裂素和生長素，生根培養(yǎng)基為MS＋適量生長素，所有培養(yǎng)基均添加蔗糖30g／L，瓊脂7g／L，pH 5．8。培養(yǎng)條件：組織培養(yǎng)室的培養(yǎng)溫度為（25±2）℃，每天光照14h，光照強(qiáng)度為2 000lx。各階段培養(yǎng)基處理組合詳見表1，3月22日接種，每個處理18個重復(fù)。

1．2．3芽的誘導(dǎo)培養(yǎng) 參照文獻(xiàn)［1］的方法，將處理外植體接種于附加不同濃度激素6－BA和NAA 的1～9號誘導(dǎo)培養(yǎng)基中，每個處理接種6瓶，每瓶接刺座2個，消毒時間16～18min，3d開始觀察記載外植體污染情況，50d觀察記載培養(yǎng)過程中外植體愈傷分化及芽產(chǎn)生情況，并統(tǒng)計出污染率和誘導(dǎo)率。

1．2．4試管苗繼代增殖培養(yǎng) 將誘導(dǎo)獲得的無菌芽（苗）接種到10～18號處理組合中，2種激素組合培養(yǎng)基，7月11日接種，每個處理接種5瓶（2苗／瓶），7d調(diào)查愈傷分化情況，30d調(diào)查1次增殖情況，60d統(tǒng)計試管苗增殖倍數(shù)與有效苗率。

1．2．5試管苗生根培養(yǎng) 對獲得的增殖試管苗，選取株高2．5～3cm，莖粗0．5～0．7mm，于9月22日接種于1／2MS附加不同激素組合的19～27號培養(yǎng)基，進(jìn)行生根壯苗培養(yǎng)，每個處理接種5瓶（2苗／瓶），10d開始觀察根原基誘導(dǎo)及根系生長情況，50d統(tǒng)計試管苗根系及生長指標(biāo)。

1．3入土馴化

1．3．1試驗(yàn)設(shè)計 設(shè)計為2因素3水平，即A因素基質(zhì)（A1腐葉土，A2腐葉土∶園土＝3∶1，A3腐葉土∶園土∶堆肥＝6∶2∶1）；B因素濕度（B190%，B280%，B370%），試驗(yàn)采用隨機(jī)區(qū)組設(shè)計（表2），每個處理扦插20株，采用50個穴位穴盤移栽。10d隨機(jī)取10株調(diào)查發(fā)根情況、成活率，50d調(diào)查株高、根系生長情況及植株鮮重，并對相關(guān)數(shù)據(jù)進(jìn)行統(tǒng)計分析。

表2 火龍果入土馴化的正交試驗(yàn)設(shè)計L9（33）Table 2 L9（33）orthogonal design for domestication of pitaya

1．3．2試管苗入土馴化 煉苗、栽植及栽培管理均參照文獻(xiàn)［3］的方法進(jìn)行。

1）煉苗與栽植。將生根培養(yǎng)基中同質(zhì)莖長5．0～6cm，莖粗0．8～1．0cm，具有4～5條根系且根長2～5cm的試管苗，在25℃左右的散射光下煉苗3～7d，然后取出試管苗洗凈根部培養(yǎng)基，移入事先消毒處理好的40%200倍甲醛液自配試驗(yàn)基質(zhì)上栽植，株行距20cm×30cm，30d觀察記載入土馴化生長情況和成活率。

2）栽培管理。試管苗栽入試驗(yàn)基質(zhì)后，要注意光照、溫度、濕度的管理，溫度控制在20～25℃為宜，空氣相對濕度保持在設(shè)定的90%、80%、70%的環(huán)境中培養(yǎng)，在此過程中加強(qiáng)作好殺菌防蟲及施肥工作。

2結(jié)果與分析

2．1不同激素配比外植體離體的誘導(dǎo)培養(yǎng)

從表3看出，以處理組合4號培養(yǎng)基（MS＋4．0mg／L 6－BA＋0．5mg／L NAA）表現(xiàn)較好，其誘導(dǎo)率、誘導(dǎo)芽數(shù)最高最多，分別為58．33%和7個，依次分別高于8號、3號、2號的8．33%、16．63%、25．03%，芽數(shù)也依次分別多1個、2個、3個；能形成愈傷組織的均可誘導(dǎo)出不定芽，說明火龍果離體從芽為愈傷型發(fā)生，且芽體健康飽滿。以4號分化苗時間最短，為52d；8號最長，為76d；其余培養(yǎng)基未分化。在分化的培養(yǎng)基中，外植體污染率以4號最低，為41．7%。4號培養(yǎng)基（MS＋4．0 6－B A mg／L＋0．5mg／L NAA）組合較適合火龍果不定芽的誘導(dǎo)。

2．2不同激素配比試管苗的增殖效果

從表4看出，9個處理中，以16號培養(yǎng)基（9．0mg／L 6－BA＋0．5mg／L NAA）表現(xiàn)較好，增殖倍數(shù)達(dá)12倍，是增殖倍數(shù)最小的4號組合3倍，有效苗率在所有處理組合中最高（83．3%），且生成的火龍果組培苗生長健壯、莖色翠綠、粗細(xì)適中；其次是11號培養(yǎng)基（5．0mg／L 6－BA＋0．09mg／L NAA）的處理組合，增殖系數(shù)達(dá)11倍，有效苗率為72．7%。說明，火龍果試管苗增殖培養(yǎng)基適宜較高濃度的6－BA配以較低濃度的NAA組合。

表3 不同誘導(dǎo)培養(yǎng)基誘導(dǎo)的愈傷組織Table 3 Cali cultured on different induction media

表4 不同培養(yǎng)基處理組合的試管苗增殖情況Table 4 Propagation of in vitro plantlets cultured on different media

2．3不同激素配比火龍果試管苗的生根

從表5看出，將健壯組培苗接種于8個生根培養(yǎng)基處理中，以21號培養(yǎng)基（1／2MS＋0．4mg／L IBA＋0．2mg／L NAA）最早生根，為9d，比最晚生根26號培養(yǎng)基提前11d；根長最長達(dá)25．4cm，比26號培養(yǎng)基根長長12．4cm；根粗以23號最粗（0．7mm），除26號培養(yǎng)基根較細(xì)外，其余根粗均達(dá)0．5mm，根粗差異較小；單株根條數(shù)也以21號培養(yǎng)基最多，為7．9條；其次是19號培養(yǎng)基，為7．1條；26號最少，僅0．7條。全部處理根色白、健壯，且生根率平均達(dá)100%。

表5 不同培養(yǎng)基試管苗的生根Table 5 Rootage of plantlets cultured on different media

2．4不同基質(zhì)及空氣濕度試管苗的成活率及生長

2．4．1不同處理組合 由表6可知，不同馴化基質(zhì)及空氣濕度對試管苗成活、根數(shù)、株高均達(dá)到極顯著差異水平。在馴化成活率、根條數(shù)、株高及植株鮮重等方面，處理1組合（腐葉土、濕度90%）極顯著高于其他處理。處理1組合成活率最高，為86．67%，其極顯著高于最低的處理9組合43．33%，顯著高于處理2的13．3%；根條數(shù)以處理1組合最高，達(dá)4．78條／株，與處理7間差異不顯著，但極顯著高于最低根條數(shù)處理9的2．35%；株高仍以處理1組合最高，為79．9cm，與處理7間不存在顯著差異，但極顯著高于其他處理，比最低的處理9平均株高高42．57cm；植株鮮重以處理1最高，為1．86g／株，顯著高于最低的處理90．953g／株。

2．4．2不同基質(zhì) 從表6可知，基質(zhì)對試管苗馴化成活率間無顯著性差異，但以處理A1（腐葉土）成活率最高（為63．33%）；基質(zhì)對生根根條數(shù)及株高間存在極顯著差異，根條數(shù)以處理A1最多為4．05條／株，極顯著高于處理A3間的34．88，即每株多約1．4條根，顯著高于處理A20．59條；株高以處理A1最高為63．024cm，分別極顯著高于A2、A3為8．956 6cm，11．262 2cm；植株鮮重以A1處理最高，為1．561 1g／株，與A2無顯著性差，顯著高于A30．246 7g／株。

2．4．3不同空氣濕度 由表6可知，不同空氣濕度對試管苗成活、根數(shù)、株高及植株鮮重均達(dá)到極顯著差異，且空氣濕度以處理B1（90%）的均極顯著高于其余處理。在空氣濕度為90%的環(huán)境條件下，成活率最高，為77．22%，極顯著高于B3（70%）的31．11%；根條數(shù)最高，為3．99條／株，極顯著高于B3處理20．09%；株高最高，為72．182 3cm，極顯著高于B3的43．46%；植株鮮重最高為1．835 6g／株，極顯著高于B3的41．40%。說明，火龍果試管苗馴化移栽前期要保持較高的空氣濕度，有利于成活。

表6 不同處理試管苗生根及生長情況Table 6 Rooting and growth of plantlets under different treatments

3小結(jié)與討論

3．1火龍果組培快繁

芽的誘導(dǎo)培養(yǎng)基，以MS＋4．0（mg／L）6－BA＋0．5（mg／L）NAA組合表現(xiàn)較好，其誘導(dǎo)率最高58．33%、誘導(dǎo)苗數(shù)多7個，能形成愈傷的外植體均可分化不定芽，說明火龍果不定芽離體的再生為愈傷分化型。

3．2火龍果繼代增殖培養(yǎng)

以MS＋9．0mg／L 6－BA＋0．5mg／L NAA最好，增殖倍數(shù)和有效苗最高，且生成的火龍果組培苗生長健壯，莖色翠綠，粗細(xì)適中。其次是以NAA 0．5mg／L和6－BA 1．0mg／L的2號組合。

3．3試管苗生根培養(yǎng)

以1／2MS添加0．4mg／L IBA＋0．2mg／L NAA的培養(yǎng)基組合綜合效果最好，生根最早，根粗細(xì)均勻，平均根粗0．5mm，單株根條數(shù)多，所有處理根色白、健壯，且生根率平均達(dá)100%。

3．4火龍果試管苗入土馴化

以腐葉土為基質(zhì)，在空氣濕度90%的環(huán)境條件下，試管苗成活率最高，達(dá)86．67%，綜合性狀良好。綜合以上試驗(yàn)結(jié)果，從減少生產(chǎn)成本考慮，也可因地制宜選擇處理腐葉土6份∶園土2份∶堆肥1份于濕度為90%的環(huán)境入土馴化。該試驗(yàn)結(jié)果在實(shí)際應(yīng)用中可提供較好的參考依據(jù)。

致謝：本文得到李用奇研究員、馮明友總農(nóng)藝師的指導(dǎo)，在此表示感謝！

［1］周傳明，黃壽先，熊 英，等．火龍果莖段離體培養(yǎng)快速繁殖試驗(yàn)［J］．廣西科學(xué)，2002，9（1）：78－80．

［2］馮奕璽．火龍果生物學(xué)特性、栽培技術(shù)及發(fā)展前景［J］．云南熱作科技，2002（3）：36－40．

［3］謝曉明，陳廣超．火龍果組培苗的移栽技術(shù)［J］．農(nóng)業(yè)科技通訊，2005（9）：45．

［4］田新民，李洪立，何 云．火龍果研究現(xiàn)狀［J］．北方園藝，2015（18）：188－193．

［5］王會全，張知杭．NaCl脅迫對不同品系火龍果種子萌發(fā)及枝條扦插的影響［J］．安徽農(nóng)業(yè)科學(xué)，2015（3）：89－91．

（責(zé)任編輯：劉忠麗）

Rapid Propagation in Vitro and Domestication Technique of Tissue Culture Plantlets in Pitaya

ZHANG Ling，ZHAO Zuomin，CHEN Hongyan，ZHANG Yi，LIHuaiqing
（Anshun Institute of Agricultural Sciences，Anshun，Guizhou561000，China）

The adventitious buds on pitaya stem were cultured on MS plus different hormones with different concentration to establish the in vitro rapid propagation system by studying callus induction and differentiation，proliferation and rooting for volume production of pitayaplantlets．Results：The optimum medium for induction and differentiation of adventitious buds is MS＋4．0mg／L 6－BA＋0．5mg／L NAA and the induction rate reaches 58．33%．The optimum medium for multiplication of subculture is MS＋9．0 mg／L 6－BA＋0．5mg／L NAA and the multiplication times is up to 12times．The optimum medium for rooting of plantlets is 1／2MS＋0．4mg／L IBA＋0．2mg／L NAA and the plantlets cultured on the optimum medium can root after 9d，5dearlier than the treatment with the latest rooting．The survival rate of plantlets transplanted in the leaf mould under 90%air humidity reaches 86．67%and the plantlets have the advantages of early rooting，more root number，higher height，fast growth and strong vigor．

pitaya；rapid proliferation in vitro；domestication；survival rate

S604＋．4；S617

A

1001－3601（2016）02－0055－0020－04

2015－07－10；2016－01－16修回

2012－2014年安順市科技計劃項目“火龍果組培快繁技術(shù)研究”［安順科合（2012）26］

張 領(lǐng)（1969－），女，農(nóng)藝師，從事植物組培及花卉栽培技術(shù)研究與繁育。E－mail：1203726269＠qq．com