阿托伐他汀對(duì)自發(fā)性高血壓大鼠心肌組織p21蛋白表達(dá)和心肌肥厚的影響

趙麗華　張少利　郭長(zhǎng)磊

(新鄉(xiāng)醫(yī)學(xué)院第一附屬醫(yī)院心血管內(nèi)一科，河南　新鄉(xiāng)　453100)

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阿托伐他汀對(duì)自發(fā)性高血壓大鼠心肌組織p21蛋白表達(dá)和心肌肥厚的影響

趙麗華張少利郭長(zhǎng)磊

(新鄉(xiāng)醫(yī)學(xué)院第一附屬醫(yī)院心血管內(nèi)一科，河南新鄉(xiāng)453100)

〔摘要〕目的探討阿托伐他汀對(duì)自發(fā)性高血壓大鼠(SHR)心肌組織p21蛋白表達(dá)和心肌肥厚的影響。方法20只大鼠按照隨機(jī)數(shù)字表法分為干預(yù)組和高血壓對(duì)照組各10只，同時(shí)選取10只正常血壓大鼠為正常對(duì)照組，將阿托伐他汀片劑研碎，1 ml蒸餾水溶解，按照50 mg·kg(-1)·d(-1)在同一時(shí)間給干預(yù)組常規(guī)灌胃，高血壓對(duì)照組和正常對(duì)照組均給予等量蒸餾水灌胃，所有大鼠共給藥10 w，測(cè)定大鼠血壓、心室肥厚以及心肌組織p21蛋白mRNA的表達(dá)。結(jié)果干預(yù)后8、10、12、16 w大鼠血壓值組間差異顯著(P<0.05)，其中干預(yù)組、高血壓對(duì)照組血壓均高于正常對(duì)照組(P<0.05)。干預(yù)10 w后大鼠體重(B)、心臟重量(H)、左心室重量(LV)、H/B/1000、LV/B/1000組間差異顯著(P<0.05)，其中干預(yù)組、高血壓對(duì)照組中H/B/1000、LV/B/1000指標(biāo)高于正常對(duì)照組，干預(yù)組低于高血壓對(duì)照組(P<0.05)。三組大鼠心肌組織p21蛋白表達(dá)和p21 mRNA差異顯著(P<0.05)，干預(yù)組、高血壓對(duì)照組中p21蛋白、p21 mRNA表達(dá)低于正常對(duì)照組，干預(yù)組高于高血壓對(duì)照組(P<0.05)。 p21 mRNA與H/B/1000、LV/B/1000均呈負(fù)相關(guān)(r=-0.567，-0.685，P<0.05)。結(jié)論阿托伐他汀可以促使SHR心肌組織p21表達(dá)，降低心肌肥厚程度。

〔關(guān)鍵詞〕自發(fā)性高血壓大鼠；p21表達(dá)；心肌肥厚；阿托伐他汀

長(zhǎng)期高血壓可導(dǎo)致心血管系統(tǒng)異構(gòu)、左心室室壁代償性肥厚、心肌纖維化等變化，逐漸地降低心臟功能〔1〕，而心肌細(xì)胞自身的增殖和凋亡失衡起著主要作用。P21基因是近年來(lái)發(fā)現(xiàn)的細(xì)胞周期蛋白依靠性激酶抑制劑家族中的重要成員，既與腫瘤抑制作用密切相關(guān)〔2〕，又能通過(guò)抑制周期素依賴(lài)激酶復(fù)合物活性，協(xié)調(diào)細(xì)胞周期等〔3〕。但是p21與高血壓之間關(guān)系還不清楚，阿托伐他汀是最常用的降脂類(lèi)藥物〔4〕。本研究旨在觀察阿托伐他汀對(duì)自發(fā)性高血壓大鼠(SHR)心肌組織p21表達(dá)和心肌肥厚的影響。

1資料與方法

1.1材料與儀器健康雄性SHR大鼠(WKY)20只，體重180～220 g，8周齡，購(gòu)自中國(guó)科學(xué)院上海斯萊克實(shí)驗(yàn)動(dòng)物有限公司。阿托伐他汀購(gòu)自北京嘉林藥業(yè)股份有限公司，國(guó)藥準(zhǔn)字H19990257，規(guī)格10 mg/片。RNA提取試劑(TRNzol)、TagPCR MasterMix、DNA marker均購(gòu)自中科瑞泰(北京)生物科技有限公司，大鼠p21酶聯(lián)免疫吸附(Elisa)試劑盒購(gòu)自上海常斤生物科技有限公司，實(shí)時(shí)定量熒光PCR(RT-PCR)購(gòu)自上海星漢生物科技有限公司，p21基因引物購(gòu)自上海生工生物工程有限公司，p21兔抗鼠單克隆抗體購(gòu)自上海扶生實(shí)業(yè)有限公司，羊抗兔IgG 二抗購(gòu)自南京建成生物科技研究所。儀器：全自動(dòng)生物化學(xué)分析儀為貝克曼庫(kù)爾特AU680，PCR儀購(gòu)自杭州柏恒科技有限公司，電泳儀、槽，凝膠成像儀，紫外分光光度計(jì)，-80℃低溫冰箱等。

1.2研究方法

1.2.1實(shí)驗(yàn)分組20只大鼠按照隨機(jī)數(shù)字表法分為干預(yù)組和高血壓對(duì)照組，其中隨機(jī)數(shù)字前10個(gè)為干預(yù)組，后10個(gè)為高血壓對(duì)照組，并且同時(shí)選取10只正常血壓大鼠作為正常對(duì)照組，將阿托伐他汀片劑研碎，1 ml蒸餾水溶解，干預(yù)組按照50 mg·kg-1·d-1在同一時(shí)間給予鼠常規(guī)灌胃，高血壓對(duì)照組和正常對(duì)照組均給予等量蒸餾水灌胃，所有大鼠共給藥10 w，觀察小鼠變化。

1.2.2血壓測(cè)量大鼠安靜狀態(tài)下，并且未使用麻醉劑，使用尾袖法無(wú)創(chuàng)式血壓系統(tǒng)測(cè)量收縮壓及舒張壓，大鼠進(jìn)入實(shí)驗(yàn)后開(kāi)始測(cè)量8、10、12、16 w血壓變化。測(cè)量時(shí)間為上午8：00～10：00。每次測(cè)量重復(fù)3次，取均值。

1.2.3心室肥厚檢測(cè)大鼠給藥10 w后稱(chēng)取大鼠體重(B)，給予戊巴比妥鈉麻醉(50 mg/kg)，迅速摘取大鼠心臟，生理鹽水沖洗，吸水紙吸干，稱(chēng)重記錄心臟重量(H)，切開(kāi)心臟去除心房、大血管以及相應(yīng)的組織，生理鹽水沖洗，沿著室間隔分離左心室，清潔濾紙吸干后稱(chēng)取左心室的重量(LV)，計(jì)算H/B、LV/B。

1.2.4心肌組織p21蛋白表達(dá)檢查大鼠p21蛋白測(cè)量利用ELISA(試劑盒測(cè)量)，心臟組織標(biāo)本在新鮮時(shí)測(cè)量，其他步驟嚴(yán)格按照試劑盒要求嚴(yán)格進(jìn)行。

1.3統(tǒng)計(jì)學(xué)方法應(yīng)用SPSS13.0軟件進(jìn)行t檢驗(yàn)、方差分析、Pearson相關(guān)或者Spearson相關(guān)分析。

2結(jié)果

2.1三組血壓變化干預(yù)后8、10、12、16 w大鼠血壓值組間差異顯著(P<0.05)，其中干預(yù)組、高血壓對(duì)照組血壓均高于正常對(duì)照組(P<0.05)，見(jiàn)表1。

2.2三組心肌肥厚程度比較干預(yù)10 w后大鼠B、H、LV、H/B/1000、LV/B/1000組間差異顯著(P<0.05)，其中干預(yù)組、高血壓對(duì)照組中H/B/1000、LV/B/1000指標(biāo)高于正常對(duì)照組，干預(yù)組低于高血壓對(duì)照組(P<0.05)，見(jiàn)表2。

表1　三組干預(yù)后血壓變化

與正常對(duì)照組比較:1)P<0.05

表2　三組心肌肥厚程度比較

與正常對(duì)照組比較：1)P<0.05，與高血壓對(duì)照組比較：2)P<0.05；下表同

2.3大鼠心肌組織p21蛋白和mRNA表達(dá)三組大鼠心肌組織p21蛋白表達(dá)和p21 mRNA差異顯著(P<0.05)，干預(yù)組、高血壓對(duì)照組中p21蛋白、p21 mRNA表達(dá)低于正常對(duì)照組，干預(yù)組高于高血壓對(duì)照組(P<0.05)。見(jiàn)表3。

表3　大鼠心肌組織p21蛋白和mRNA表達(dá)

2.4p21 mRNA相對(duì)含量與H/B/1000、LV/B/1000相關(guān)性p21 mRNA與H/B/1000、LV/B/1000均呈負(fù)相關(guān)(r=-0.567，-0.685，P<0.05)。見(jiàn)圖1。

圖1　心肌組織p21 Mrna與H/B/1000、LV/B/1000散點(diǎn)圖

3討論

高血壓長(zhǎng)期作用，心肌需要抵擋額外的負(fù)荷，心室壁會(huì)代償肥厚，如果高血壓沒(méi)有被合理的控制，心肌就會(huì)失代償，導(dǎo)致心肌功能?chē)?yán)重的下降，可能導(dǎo)致心臟功能衰竭〔5〕。傳統(tǒng)學(xué)者認(rèn)為心肌細(xì)胞不會(huì)發(fā)生增殖，但是現(xiàn)在發(fā)現(xiàn)心肌細(xì)胞和正常細(xì)胞一樣在心臟發(fā)育和心臟病例過(guò)程可能發(fā)生心肌細(xì)胞的凋亡和增殖過(guò)程，并且維持一種平衡狀態(tài)，但是如果平衡被打破或者受到外界的影響就可能發(fā)生疾病，并且為心肌器質(zhì)性病變，因此心肌肥厚可能涉及心肌細(xì)胞增殖和心肌細(xì)胞肥大兩個(gè)過(guò)程〔6〕。p21基因是Clp家族中的一員，位于p53下游，是一種細(xì)胞周期依賴(lài)激酶抑制因子〔7〕，p21和p53協(xié)同作用，起著檢查作用，因DNA損傷后不經(jīng)過(guò)修復(fù)則無(wú)法通過(guò)，減少了受損DNA的復(fù)制和積累，從而發(fā)揮抑癌作用。文獻(xiàn)〔8〕表明p21與腫瘤的分化、浸潤(rùn)深度、增生和轉(zhuǎn)移有關(guān)，具有判斷預(yù)后的價(jià)值，同樣p21基因?qū)?xì)胞有抑制作用，一旦細(xì)胞受到毒素或輻射損害，它就會(huì)使細(xì)胞停止生長(zhǎng)，并使細(xì)胞獲得休息和自我修復(fù)的時(shí)間，此外，p21基因還具有促進(jìn)其他約50種基因活性的作用。其中許多基因控制蛋白質(zhì)形成，有的起到防止周?chē)?xì)胞死亡的作用，有的起到刺激他們生長(zhǎng)的作用。這可能意味著p21基因與癌癥也有關(guān)系。他汀類(lèi)藥物〔9〕是輔酶抑制劑，可以通過(guò)競(jìng)爭(zhēng)抑制內(nèi)源性膽固醇合成限速酶和還原酶，致使細(xì)胞內(nèi)膽固醇合成減少，從而反饋性刺激細(xì)胞膜表面低密度脂蛋白受體數(shù)量和活性增加、水平降低。他汀類(lèi)藥物還可抑制肝臟合成載脂蛋白B-100，從而減少富含甘油三酯、脂蛋白的合成和分泌。

本研究結(jié)果與林愛(ài)琴等〔10〕研究結(jié)果相同。另外說(shuō)明長(zhǎng)期高血壓可能心肌肥厚，并且經(jīng)過(guò)他汀類(lèi)藥物干預(yù)后有所好轉(zhuǎn)，并且阿托伐他汀作用機(jī)制可能是通過(guò)增加p21表達(dá)和p21 mRNA控制血壓水平，這與邵慧真等研究相似〔7〕。本研究還說(shuō)明p21也同樣與高血壓之間存在間接相互關(guān)系〔11〕。

4參考文獻(xiàn)

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〔2015-07-10修回〕

(編輯袁左鳴/滕欣航)

〔中圖分類(lèi)號(hào)〕R544

〔文獻(xiàn)標(biāo)識(shí)碼〕A

〔文章編號(hào)〕1005-9202(2016)06-1302-03；

doi：10.3969/j.issn.1005-9202.2016.06.010

第一作者：趙麗華(1981-)，女，碩士，主治醫(yī)師，主要從事心血管內(nèi)科方面的研究。