天麻多糖對環(huán)磷酰胺所致免疫功能低下小鼠體液免疫功能的影響

李曉冰　展俊平　張月騰　謝忠禮　朱艷琴　陳玉龍　程　凱　王君明　李瑞琴

(河南中醫(yī)學院,河南　鄭州　450008)

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天麻多糖對環(huán)磷酰胺所致免疫功能低下小鼠體液免疫功能的影響

李曉冰展俊平1張月騰2謝忠禮朱艷琴陳玉龍程凱王君明李瑞琴

(河南中醫(yī)學院,河南鄭州450008)

〔摘要〕目的探討天麻多糖對環(huán)磷酰胺所致免疫功能低下小鼠體液免疫功能的影響。方法環(huán)磷酰胺制造免疫功能低下小鼠模型。實驗設鹽酸左旋咪唑?qū)φ战M、模型組、天麻多糖高劑量組、天麻多糖中劑量組、天麻多糖低劑量組。造模后給予天麻多糖治療10 d。實驗結(jié)束處死小鼠，比較各組小鼠胸腺指數(shù)、脾指數(shù)、血清IgA、IgG和IgM及溶血素水平。結(jié)果與模型組比較，天麻多糖中、高劑量組顯著升高血清IgA、IgG及血清溶血素水平(P<0.01)，多糖高劑量組升高脾指數(shù)和胸腺指數(shù)，多糖中劑量組明顯升高血清IgM水平(P<0.05)。結(jié)論天麻多糖可以緩解環(huán)磷酰胺對小鼠體液免疫功能的抑制作用。

〔關鍵詞〕天麻；多糖；體液免疫

現(xiàn)代藥理試驗表明,天麻具有鎮(zhèn)靜、鎮(zhèn)痛、抗驚厥、降壓、抗炎、抗氧化、延緩衰老等作用〔1〕。天麻中含有天麻素、赤箭苷、胡蘿卜苷、天麻多糖、腺嘌呤、腺嘌呤核苷、多種氨基酸等活性成分〔2〕。目前國內(nèi)外對天麻化學成分報道較多的是酚類中的天麻素和多糖類中的天麻多糖，兩者是目前已知的天麻中主要活性成分。研究表明，天麻多糖具有免疫調(diào)節(jié)、延緩衰老、降低血壓、抑制病毒、抗抑郁等作用〔3〕。本研究旨在觀察天麻多糖對環(huán)磷酰胺(CTX)所致免疫功能低下小鼠血清免疫球蛋白(Ig)A、IgG和IgM及血清溶血素水平的影響，探討天麻多糖對免疫功能低下小鼠體液免疫的作用機制。

1材料與方法

1.1動物昆明種(KM)小鼠，雄性，SPF 級，體質(zhì)量18～22 g，河南省實驗動物中心提供，合格證號SCXK(豫) 2010-0002。

1.2主要試劑及儀器天麻多糖，西安慧科生物公司提供，批號20120620，純度96.5%；環(huán)磷酰胺(CTX)，上海華聯(lián)制藥有限公司生產(chǎn)，批號120706；鹽酸左旋咪唑(LH)片購自四川奇力同心制藥有限公司(國藥準H51022852)。IgA、IgG和IgM ELISA 試劑盒購自上海易利生物科技有限公司。RT-6000酶標分析儀、TD24-WS低速離心機等。

1.3方法

1.3.1動物分組與造模實驗1，用隨機分組方法將50只小鼠分為生理鹽水模型組、LH陽性對照組、天麻多糖低劑量組、中劑量組和高劑量組，每組10只。于實驗第3、5、7天皮下注射CTX 30 mg/kg，制造免疫功能低下小鼠模型。各組從分組開始，分別灌胃生理鹽水、LH(用生理鹽水稀釋濃度為5 g/L),100、200、400 mg/kg天麻多糖，1次/d，各組動物灌胃體積均為0.2 ml，持續(xù)10 d。實驗2，分組及給藥方案同實驗1，于實驗第6天每只小鼠腹腔注射20%的兔紅細胞0.2 ml，用于血清溶血素水平測定。

1.3.2取材小鼠處死前1 d禁食不禁水24 h，動物摘眼球取血，取胸腺和脾臟。

1.3.3指標測定用ELISA 法測定各組小鼠血清IgA、IgG 和 IgM 含量。血清溶血素水平參照文獻方法〔4〕，采用分光光度法測定。斷頸法處死小鼠，稱量體重，解剖摘取脾臟及胸腺，計算脾臟和胸腺指數(shù)。脾臟指數(shù)=脾臟質(zhì)量/體質(zhì)量，胸腺指數(shù)=胸腺質(zhì)量/體質(zhì)量〔5〕。

1.4統(tǒng)計學方法應用SPSS15.0軟件，采用單因素方差分析，組間兩兩比較采用最小顯著差法。

2結(jié)果

2.1天麻多糖對小鼠血清IgA、IgG和IgM合成的影響與模型組比較，多糖各劑量組IgA，多糖中、高劑量組IgG，多糖高劑量組IgM水平顯著上升(P<0.01)，LH對照組血清IgA、IgG，多糖低劑量組IgG及多糖中劑量組IgM明顯升高(P<0.05)；與LH對照組比較，多糖高劑量組IgA、IgG和IgM水平上升(P<0.05)。見表1。

表1　天麻多糖對小鼠血清IgA、IgG和

與LH對照組比較:1)P<0.05；與模型組比較:2)P<0.05，3)P<0.01；下表同

2.2天麻多糖對小鼠血清溶血素水平和脾指數(shù)、胸腺指數(shù)的影響與模型組比較，多糖中、高劑量組溶血素水平顯著升高(P<0.01)，多糖低劑量組溶血素，多糖高劑量組脾指數(shù)、胸腺指數(shù)及LH對照組溶血素、脾指數(shù)水平均上升(P<0.05)，與LH對照組比較，多糖高劑量組胸腺指數(shù)明顯升高(P<0.05)。見表2。

表2　天麻多糖對小鼠血清溶血素水平、脾指數(shù)和

3討論

胸腺是T細胞分化和發(fā)育的場所，是機體重要中樞免疫器官。脾臟是最大的淋巴器官，也是對血源性抗原產(chǎn)生免疫應答的場所，因此，胸腺指數(shù)、脾臟指數(shù)間接反映了機體的免疫狀況〔5〕。本研究結(jié)果說明天麻多糖可能對體液免疫存在一定調(diào)節(jié)作用。血清免疫球蛋白可反映機體的體液免疫功能。IgG是血清中Ig主要成分，約占血清中Ig總含量的75%；IgM抗體一般為保護性抗體，具有免疫性，二者均對防止感染起重大作用。本研究顯示，與模型組比較，天麻多糖中、高劑量組可顯著提高免疫低下機體的IgA、IgG和IgM水平。血清溶血素可以反映機體內(nèi)抗體量,反映體液免疫功能〔6〕。本研究進一步檢測了天麻多糖對溶血素水平的影響，結(jié)果表明，與模型組比較，天麻多糖各劑量組均明顯升高血清溶血素水平，進一步支持了天麻多糖可強化免疫低下機體體液免疫功能的推測。LH是目前國內(nèi)外使用最廣的免疫調(diào)節(jié)劑之一，可增強細胞功能，刺激前體T淋巴細胞分化成熟，增強中性粒細胞的活性，增強吞噬功能〔7〕。本研究表明，與LH比較，天麻多糖高劑量組可顯著提高免疫低下小鼠胸腺指數(shù)及血清IgA、IgG和IgM水平。且天麻多糖作為天然食品，不存在LH在發(fā)揮藥效時伴生的頭暈、惡心、嘔吐、腹痛、發(fā)熱、嗜睡、乏力、皮疹、發(fā)癢等不良反應，說明天麻多糖具有極高的市場推廣價值。

4參考文獻

1沈映君.中藥藥理學〔M〕.北京:人民衛(wèi)生出版社,2000:797-801.

2范玉奇,李文蘭,王艷萍,等.天麻化學成分及藥理性質(zhì)研究的進展〔J〕.藥品評價,2005;2(4):309-12.

3陳芳，杜娟，張秉華.天麻多糖的理化性質(zhì)和藥理活性研究〔J〕.現(xiàn)代中醫(yī)藥，2009;29(6):71-3.

4仇成鳳，雷林生，吳玉英,等.以兔紅細胞作為抗原建立小鼠體液免疫反應動物模型〔J〕.南方醫(yī)科大學學報,2009;29(12):2473-6.

5李曉冰，陳玉龍，展俊平，等.枸杞多糖對糖尿病大鼠血糖水平及機體免疫功能的影響〔J〕.中國全科醫(yī)學,2013;16(27)：3208-10.

6段博文,李運,劉昕,等.柳茶多糖對小鼠免疫功能的影響〔J〕.中國中藥雜志,2010;35(11)：1466-9.

7李向東,王瑩,蘇培,等.鹽酸左旋咪唑栓免疫調(diào)節(jié)作用的臨床觀察〔J〕.天津醫(yī)藥,2000;12(2):44-5.

〔2015-10-09修回〕

(編輯袁左鳴)

Effect of polysaccharide from Gastrodia Elata B1 on humoral immune function in immunosuppressed mice induced by cyclophosphamide

LI Xiao-Bing,ZHAN Jun-Ping,ZHANG Yue-Teng，etal.

Henan University of Traditional Chinese Medicine,Zhengzhou 450008,Henan,China

【Abstract】ObjectiveTo observe the effects of Polysaccharide from Gastrodia Elata B1 on humoral immune function in immunosuppressed mice induced by cyclophosphamide，and explore its mechanisms.MethodsMice were randomly divided into hydrochloride levamisole control,model,Gastrodia Elata B1 Polysaccharide high,middle,and low groups.Mice in the Polysaccharide group were orally treated by gavage with Gastrodia Elata B1 Polysaccharide at different doses respectively.10 days later,Spleen index,thymus index,serum hemolysin level,as well as serum levels of IgA,IgG and IgM were inspected respectively.ResultsCompared with those of model group,spleen index ,thymus index were increased in Polysaccharide high group,serum IgM level was increased in Polysaccharide middle group (P<0.05), serum IgA,IgG and hemolysin levels were greatly increased in Polysaccharide middle and high groups(P<0.01).ConclusionsPolysaccharide from Gastrodia Elata B1 could alleviate cyclophosphamide-induced suppression of humoral immune function in mice．

【Key words】Gastrodia Elata B1;Polysaccharide;Humoral immune

〔中圖分類號〕R285

〔文獻標識碼〕A

〔文章編號〕1005-9202(2016)05-1027-02；

doi：10.3969/j.issn.1005-9202.2016.05.002

通訊作者：李瑞琴(1963-),女，教授，主要從事免疫藥理學研究。

基金項目：國家自然科學基金資助項目(81173177)；河南省教育廳自然科學研究計劃資助項目(2010B360015)；鄭州市科技創(chuàng)新團隊資助項目(121PCXTD520)；河南中醫(yī)學院基本科研業(yè)務費(2014KYYWF-QN10)

1河南省中醫(yī)院2廣州中醫(yī)藥大學

第一作者：李曉冰(1980-),女,副教授,博士,主要從事多糖免疫藥理學研究。