不同類型細(xì)胞因子的表達(dá)水平與復(fù)發(fā)性外陰陰道念珠菌病發(fā)病的相關(guān)性

靳風(fēng)英 郭燕華

【摘要】目的：探究并分析不同類型細(xì)胞因子的表達(dá)水平與復(fù)發(fā)性外陰陰道念珠菌病發(fā)病的相關(guān)性 。方法：回顧性分析我院自2012年12月至2014年12月收治的外陰陰道念珠菌?。╒VC）患者100例，其中初發(fā)患者50例，復(fù)發(fā)患者50例，按照發(fā)病情況分為初發(fā)組和復(fù)發(fā)組。此外，征集正常志愿者50名作為對照組。取各組患者陰道分泌物，ELISA 法檢測陰道分泌物中IL-12、IL-4、IFN-γ、IL-10、IL-23、HBD-2的表達(dá)水平，統(tǒng)計并記錄下結(jié)果。結(jié)果：對照組志愿者IL-4、IL-12、IFN-γ分別為0.35±0.25、0.63±0.31、0.73±0.21，初發(fā)組患者IL-4、IL-12、IFN-γ分別為0.33±0.23、1.34±0.38、1.16±0.22，復(fù)發(fā)組IL-4、IL-12、IFN-γ分別為0.39±0.27、0.74±0.42、1.19±0.23。三組志愿者者IL-4經(jīng)方差分析差異不明顯（F=0.36，P>0.05），而各組IL-12、IFN-γ等具有明顯差異（F=15.21，P<0.05；F=83.64，P<0.05），具有統(tǒng)計學(xué)意義。各組組間經(jīng)t檢驗兩兩比較，初發(fā)組患者IL-12明顯高于對照組志愿者和復(fù)發(fā)組患者（P<0.05），具有統(tǒng)計學(xué)意義。初發(fā)組患者IFN-γ明顯高于對照組志愿者（P<0.05），但復(fù)發(fā)組與初發(fā)組患者之間無明顯差異（P>0.05），不具有統(tǒng)計學(xué)意義。對照組志愿者IL-10、HBD-2、IL-23分別為（0.526±0.626）ng/L、（8.43±3.46）pg/mL、（1.34±0.39）pg/mL，初發(fā)組患者IL-10、HBD-2、IL-23分別為（0.934±0.335）ng/L、（10.23±3.57）pg/mL、（1.13±0.36）pg/mL，復(fù)發(fā)組患者IL-10、HBD-2、IL-23分別為（1.764±0.619）ng/L、（13.07±3.83）pg/mL、（0.91±0.35）pg/mL，三組志愿者IL-10、HBD-2、IL-23方差分析比較，差異明顯（F=9.56，P<0.05；F=7.25，P<0.05；F=6.26，P<0.05），具有統(tǒng)計學(xué)意義。初發(fā)組和復(fù)發(fā)組患者IL-10明顯高于對照組志愿者（P<0.05），但初發(fā)組和復(fù)發(fā)組患者之間無明顯差異（P>0.05）。初發(fā)組和復(fù)發(fā)組患者HBD-2明顯高于對照組志愿者（P<0.05），且復(fù)發(fā)組患者HBD-2明顯高于對照組志愿者（P<0.05），具有統(tǒng)計學(xué)意義。對照組和初發(fā)組患者IL-23無明顯差異（P>0.05），但復(fù)發(fā)組患者IL-23明顯高于對照組志愿者（P<0.05），具有統(tǒng)計學(xué)意義。結(jié)論：復(fù)發(fā)性外陰陰道念珠菌病患者可能存在一定的免疫缺陷，各類細(xì)胞因子的表達(dá)異?？赡芘c外陰陰道念珠菌病的發(fā)病以及復(fù)發(fā)有關(guān)，但其中具體機(jī)制尚未研究清楚，尚待進(jìn)一步研究。

【關(guān)鍵詞】細(xì)胞因子；表達(dá)水平；復(fù)發(fā)；外陰陰道念珠菌病

【中圖分類號】R711. 31【文獻(xiàn)標(biāo)志碼】A

外陰陰道念珠菌?。╲ulvovaginal candidiasis，VVC）是由念珠菌感染引起常見的婦女外陰陰道炎癥之一＼[1＼]，累及部位以陰道黏膜為主。有資料＼[2，3＼]顯示75%的女性一生中至少患過一次VVC，其中45%的婦女經(jīng)歷過2次以上的發(fā)作。主要癥狀為外陰瘙癢、白帶增多，白帶為典型豆腐渣樣或者凝乳樣，混合其他細(xì)菌感染者多有尿頻尿急尿痛。VVC常規(guī)治療容易治愈，但治愈后復(fù)發(fā)是VVC患者常見的問題，作為一個普遍存在的婦科疾病，VVC的發(fā)生發(fā)展以及預(yù)防逐漸受到重視＼[4＼]。隨著醫(yī)療技術(shù)的發(fā)展，以及對于分子生物學(xué)領(lǐng)域的深入研究，關(guān)于免疫因素對于復(fù)發(fā)型陰道念珠菌?。≧VVC）治療價值的研究逐漸開展＼[5＼]。其中IL-12、IL-4、IFN-γ、IL-10、IL-23、HBD-2等細(xì)胞因子的研究較多，這些細(xì)胞因子在一定程度上反映了陰道局部的免疫能力，具有參考價值。有學(xué)者＼[6＼]發(fā)現(xiàn)，健康志愿者、VVC以及RVVC患者之間某些細(xì)胞因子的表達(dá)存在顯著差異。若能弄清楚陰道局部免疫功能情況和陰道念珠菌病復(fù)發(fā)的關(guān)系，必定能在RVVC的預(yù)防以及治療中有所突破。為此，我院對150例患者及健康志愿者進(jìn)行研究，現(xiàn)報道如下。

1資料與方法

1.1一般資料

回顧性分析我院自2012年12月至2014年12月收治的VVC患者100例，其中初發(fā)型和復(fù)發(fā)型患者各50例，分別作為初發(fā)組和復(fù)發(fā)組。另外征集50名健康志愿者作為對照組。其中初發(fā)組患者年齡在25～58歲之間，平均年齡為（34±17）歲，病程在1～3年之間，平均病程為（1.6±2.5）年，已婚女性39名，未婚11名；復(fù)發(fā)組患者年齡在25～59歲之間，平均年齡為（35±16）歲，病程在1～3年之間，平均病程為（1.8±2.6）年，已婚女性37名，未婚13名；對照組志愿者初發(fā)組患者年齡在24～59歲之間，平均年齡為（35±18）歲，已婚女性40名，未婚10名。排除標(biāo)準(zhǔn)：本身有嚴(yán)重呼吸、循環(huán)系統(tǒng)疾病無法保證本研究順利進(jìn)行者；對本研究所用藥物過敏者；嚴(yán)重感染或者患有HIV、乙肝等傳染病患者；處于月經(jīng)期患者；患者檢查前1周內(nèi)自行使用抗生素者：免疫功能異常，嚴(yán)重營養(yǎng)不良或者正在服用免疫抑制劑者。以上患者均于我院確診為VVC，并且各組患者年齡、結(jié)婚情況、病程等均無明顯差異（P>0.05），具有可比性?；颊呒凹覍僦椴⑼獗敬窝芯?。

1.2方法

所有參與研究的志愿者均于我院進(jìn)行健康體檢，確定未感染VVC，且既往體健。VVC患者均與我院進(jìn)行再次確診為陰道念珠菌感染。具體檢驗方法：患者取截石位便于醫(yī)生觀察以及操作，將2根無菌棉拭子用生理鹽水潤濕，置于患者陰道后穹窿處，并停留30s左右取出。將1根棉拭子置于備好的1.0mL含有蛋白酶抑制劑PMSF的PBS液中，攪拌混勻后放入離心機(jī)。速度調(diào)整為3000r/min，離心3min。取上清液500μL放入-70℃冰箱保存。將另一支棉拭子進(jìn)行涂片、培養(yǎng)、鑒定，根據(jù)真菌學(xué)的結(jié)果及臨床癥狀體征分別歸入上述各組。細(xì)胞因子定量采用ELISA法檢測陰道分泌物上清液細(xì)胞因子水平。將分泌物樣本加入到酶標(biāo)板中，按試劑盒的說明書進(jìn)行實驗室檢測，在酶標(biāo)儀上以450nm波長測樣本吸光度值，根據(jù)試劑盒提供的樣本制作標(biāo)準(zhǔn)曲線取得回歸方程，計算出各樣品中待測細(xì)胞因子的含量（100pg/mg）。以上操作均為無菌操作。所用試劑盒（hp2008091521）均購自上海嵐派生物制劑有限公司，酶標(biāo)儀型號為美國寶特ELx800（ht200907032112）購自上海巴玖實業(yè)有限公司。

1.3觀察指標(biāo)

觀察并記錄酶標(biāo)儀上（白介素）IL-12、IL-4、（干擾素）IFN-γ、IL-10、IL-23、（防御素）HBD-2等細(xì)胞因子于450nm波長處吸光度值，計算出細(xì)胞因子水平。

1.4統(tǒng)計學(xué)方法

以SPSS21.0進(jìn)行數(shù)據(jù)統(tǒng)計分析。經(jīng)統(tǒng)計分析，所得數(shù)據(jù)均符合正態(tài)分布。因此，計量資料以（±s）表示并進(jìn)行t檢驗；計數(shù)資料則進(jìn)行χ2檢驗，P<0.05時，所比較數(shù)據(jù)差異具有統(tǒng)計學(xué)意義。

2結(jié)果

2.1各組患者陰道分泌物細(xì)胞因子水平

對照組志愿者IL-4、IL-12、IFN-γ分別為0.35±0.25、0.63±0.31、0.73±0.21，初發(fā)組患者IL-4、IL-12、IFN-γ分別為0.33±0.23、1.34±0.38、1.16±0.22，復(fù)發(fā)組IL-4、IL-12、IFN-γ分別為0.39±0.27、0.74±0.42、1.19±0.23。三組IL-4經(jīng)方差分析差異不明顯（F=0.36，P>0.05），而各組IL-12、IFN-γ等具有明顯差異（F=15.21，P<0.05；F=83.64，P<0.05），具有統(tǒng)計學(xué)意義。各組組間經(jīng)t檢驗兩兩比較，初發(fā)組患者IL-12明顯高于對照組志愿者和復(fù)發(fā)組患者（P<0.05），具有統(tǒng)計學(xué)意義。初發(fā)組患者IFN-γ明顯高于對照組（P<0.05），但復(fù)發(fā)組與初發(fā)組患者之間無明顯差異（P>0.05），不具有統(tǒng)計學(xué)意義。見表1。

3討論

念珠菌病指念珠菌屬真菌所引起的急性、亞急性或慢性感染，通常累及皮膚、黏膜，亦可累及內(nèi)臟和各個系統(tǒng)器官而造成嚴(yán)重后果，是目前發(fā)病率最高的深部真菌?。躘7，8＼]。念珠菌是真菌中最常見的條件致病菌。它常寄生于人的皮膚、口腔、陰道和腸黏膜等處，當(dāng)機(jī)體免疫機(jī)能低下或正常寄居部位的微生態(tài)環(huán)境失調(diào)，容易引起念珠菌病。此外，陰道多褶皺，若不注意衛(wèi)生，致病菌容易在此駐留＼[9-11＼]。有報道＼[12，13＼]指出，VVC的復(fù)發(fā)可能與陰道局部免疫能力有關(guān)，局部免疫能力的降低會增加VVC患者復(fù)發(fā)的幾率＼[14＼]。機(jī)體對于念珠菌感染的免疫主要以細(xì)胞免疫為主，即T細(xì)胞主導(dǎo)的免疫。其中Th1和Th2類免疫因子在免疫過程中起到主要的免疫調(diào)控作用，Th1類細(xì)胞因子可以通過激活巨噬細(xì)胞和中性粒細(xì)胞，使其進(jìn)入抗真菌狀態(tài)以增強(qiáng)其對于念珠菌的免疫能力。而Th2類細(xì)胞因子可以抑制Th1類細(xì)胞介導(dǎo)的吞噬作用而降低其免疫能力。兩者在念珠菌免疫反應(yīng)中相互制約，達(dá)到平衡。VVC患者經(jīng)過治療可以治愈，但是某些患者治愈后常常復(fù)發(fā)，這可能與患者免疫機(jī)制的缺陷有關(guān)。有學(xué)者認(rèn)為，通過對IL-12、IL-4、IFN-γ、IL-10、IL-23、HBD-2等的表達(dá)水平進(jìn)行測定，可以一定程度上反應(yīng)患者對于念珠菌的免疫能力，并借此研究各類細(xì)胞因子對于念珠菌病復(fù)發(fā)情況的關(guān)系＼[15-18＼]。為此，我院對150例患者及志愿者進(jìn)行研究，并取得了一定成果。

結(jié)果顯示，對照組志愿者IL-4、IL-12、IFN-γ分別為0.35±0.25、0.63±0.31、0.73±0.21，初發(fā)組患者IL-4、IL-12、IFN-γ分別為0.33±0.23、1.34±0.38、1.16±0.22，復(fù)發(fā)組IL-4、IL-12、IFN-γ分別為0.39±0.27、0.74±0.42、1.19±0.23。三組IL-4經(jīng)方差分析差異不明顯（F=0.36，P>0.05），而各組IL-12、IFN-γ等具有明顯差異（F=15.21，P<0.05；F=83.64，P<0.05），具有統(tǒng)計學(xué)意義。各組組間經(jīng)t檢驗兩兩比較，初發(fā)組患者IL-12明顯高于對照組志愿者和復(fù)發(fā)組患者（P<0.05），具有統(tǒng)計學(xué)意義。初發(fā)組患者IFN-γ明顯高于對照組志愿者（P<0.05），但復(fù)發(fā)組與初發(fā)組患者之間無明顯差異（P>0.05），不具有統(tǒng)計學(xué)意義。此結(jié)果表明，VVC復(fù)發(fā)組患者以及初發(fā)組患者與健康女性體內(nèi)IL-12、IFN-γ水平有明顯差異，可能與VVC患者高復(fù)發(fā)率有關(guān)。對照組志愿者IL-10、HBD-2、IL-23分別為（0.526±0.626）ng/L、（8.43±3.46）pg/mL、（1.34±0.39）pg/mL，初發(fā)組患者IL-10、HBD-2、IL-23分別為（0.934±0.335）ng/L、（10.23±3.57）pg/mL、（1.13±0.36）pg/mL，復(fù)發(fā)組患者IL-10、HBD-2、IL-23分別為（1.764±0.619）ng/L、（13.07±3.83）pg/mL、（0.91±0.35）pg/mL，三組IL-10、HBD-2、IL-23方差分析比較，差異明顯（F=9.56，P<0.05；F=7.25，P<0.05；F=6.26，P<0.05），具有統(tǒng)計學(xué)意義。初發(fā)組和復(fù)發(fā)組患者IL-10明顯高于對照組志愿者（P<0.05），但初發(fā)組和復(fù)發(fā)組患者之間無明顯差異（P>0.05）。初發(fā)組和復(fù)發(fā)組患者HBD-2明顯高于對照組志愿者（P<0.05），且復(fù)發(fā)組患者HBD-2明顯高于對照組志愿者（P<0.05），具有統(tǒng)計學(xué)意義。對照組志愿者和初發(fā)組患者IL-23無明顯差異（P>0.05），但復(fù)發(fā)組患者IL-23明顯高于對照組志愿者（P<0.05），具有統(tǒng)計學(xué)意義。此結(jié)果表明，VVC復(fù)發(fā)組患者以及初發(fā)組患者與健康女性體內(nèi)IL-10、HBD-2、IL-23水平有明顯差異，其中IL-10、HBD-2在復(fù)發(fā)組患者中明顯高于初發(fā)組患者以及對照組志愿者，可能與VVC患者高復(fù)發(fā)率有關(guān)。

綜上所述，復(fù)發(fā)性外陰陰道念珠菌病患者可能存在一定的免疫缺陷，各類細(xì)胞因子的表達(dá)異?？赡芘c外陰陰道念珠菌病的發(fā)病以及復(fù)發(fā)有關(guān)，但其中具體機(jī)制尚未研究清楚，尚待進(jìn)一步研究。

參考文獻(xiàn)

＼[1＼]李俊艷，占志萍，孔祥君，等.T細(xì)胞亞群及相關(guān)細(xì)胞因子在復(fù)發(fā)性外陰陰道念珠菌病發(fā)病中的作用.中國皮膚性病學(xué)雜志，2011，25（9）：699-700，708.

＼[2＼]劉紅芳，黃進(jìn)梅，薛汝增，等.陰道局部免疫狀態(tài)與復(fù)發(fā)性外陰陰道念珠菌病發(fā)病的關(guān)系.皮膚性病診療學(xué)雜志，2011，18（6）：369-372.

＼[3＼]李春陽，李穎.復(fù)發(fā)性外陰陰道念珠菌病的病因與控制對策.中華皮膚科雜志，2006，39（8）：489-492.

＼[4＼]孫愛軍，林守清，鄭淑蓉，等.硝酸咪康唑栓治療初發(fā)與復(fù)發(fā)性外陰陰道念珠菌病療效觀察.實用婦產(chǎn)科雜志，2001，17（5）：295-298.

＼[5＼]谷曄紅，黃醒華.復(fù)發(fā)性外陰陰道假絲酵母菌病.中國實用婦科與產(chǎn)科雜志，2004，20（8）：505-507.

＼[6＼]姚冬梅，濮德敏.復(fù)發(fā)性外陰陰道念珠菌病危險因素分析.中國優(yōu)生與遺傳雜志，2007，15（2）：60-61.

＼[7＼]夏毓，喻楠，何秉潔，等.外陰陰道念珠菌病患者陰道分泌物IL-12和IL-23的檢測.中國皮膚性病學(xué)雜志，2010，24（2）：103-105.

＼[8＼]羅萍，張洪文.復(fù)發(fā)性外陰陰道念珠菌病研究進(jìn)展.國外醫(yī)學(xué)（婦幼保健分冊），2005，16（3）：179-180.

＼[9＼]張萍，濮德敏，陳素華，等.復(fù)發(fā)性外陰陰道念珠菌病的危險因素及治療研究.同濟(jì)醫(yī)科大學(xué)學(xué)報，2000，29（3）：243-245.

＼[10＼]范紅燕，孫媛媛，李淑嫻，等.復(fù)發(fā)性外陰陰道念珠菌病合并細(xì)菌性陰道病伴發(fā)解脲支原體感染臨床分析.中國綜合臨床，2009，25（5）：550-552.

＼[11＼]黃鳳珍.61例復(fù)發(fā)性外陰陰道念珠菌病的相關(guān)因素分析及護(hù)理對策.護(hù)理實踐與研究，2008，5（18）：49-51.

＼[12＼]楊志英，曹艷華，陽帆，等.復(fù)發(fā)性外陰陰道念珠菌病患者陰道局部免疫狀態(tài)的變化.中國醫(yī)藥導(dǎo)報，2008，5（17）：23-24.

＼[13＼]張國平，董佳輝，吳海娟，等.惠州地區(qū)復(fù)發(fā)性外陰陰道念珠菌病復(fù)發(fā)因素分析.中國醫(yī)學(xué)創(chuàng)新，2014，（12）：82-83，84.

＼[14＼]樊尚榮，劉小平，嚴(yán)冬霞，等.外陰陰道念珠菌病的臨床特征和抗真菌藥物敏感性研究.中國全科醫(yī)學(xué)，2010，13（27）：3068-3070.

＼[15＼]路會俠，李紹波.IL-10、IFN-γ在外陰陰道念珠菌病患者發(fā)病中的作用.四川解剖學(xué)雜志，2008，16（2）：25-27.

＼[16＼]Watson CJ， Pirotta M， Myers P， et al.Use of complementary and alternative medicine in recurrent vulvovaginal candidiasis-Results of a practitioner survey.Complementary therapies in medicine，2012，20（4）：218-221.

＼[17＼]Rosa MI， Silva BR， Pires PS， et al.Weekly fluconazole therapy for recurrent vulvovaginal candidiasis： A systematic review and meta-analysis.European Journal of Obstetrics， Gynecology and Reproductive Biology： An International Journal，2013，167（2）：132-136.

＼[18＼]Vergers-Spooren HC， Van DerMeijden WI， Luijendijk A， et al. Self-sampling in the diagnosis of recurrent vulvovaginal candidosis. Journal of Lower Genital Tract Disease，2013，17（2）：187-192.

（收稿日期：2015-05-08）