SLCO1B1/ApoE基因多態(tài)性與瑞舒伐他汀療效及安全性的相關(guān)性研究

王仲朝李軍劉龍梅何穎娜

030001太原，山西省心血管病醫(yī)院心內(nèi)科（王仲朝、李軍、劉龍梅）；050200石家莊，河北中醫(yī)學(xué)院藥學(xué)院，河北省心腦血管病中醫(yī)藥防治重點(diǎn)實(shí)驗(yàn)室（何穎娜）

SLCO1B1/ApoE基因多態(tài)性與瑞舒伐他汀療效及安全性的相關(guān)性研究

王仲朝李軍劉龍梅何穎娜

030001太原，山西省心血管病醫(yī)院心內(nèi)科（王仲朝、李軍、劉龍梅）；050200石家莊，河北中醫(yī)學(xué)院藥學(xué)院，河北省心腦血管病中醫(yī)藥防治重點(diǎn)實(shí)驗(yàn)室（何穎娜）

目的探討SLCO1B1與ApoE基因多態(tài)性對瑞舒伐他汀的降脂療效和安全性的相關(guān)性。方法采用納米磁珠法提取全血基因組DNA，PCR-焦磷酸測序法檢測SLCO1B1與ApoE基因多態(tài)性。152名受試者口服瑞舒伐他汀10 mg/d，通過檢測用藥前以及用藥8周后的低密度脂蛋白膽固醇（LDL-C）水平，評價(jià)降脂療效；通過隨訪用藥期間肌痛的發(fā)生，評價(jià)肌病不良反應(yīng)的發(fā)生頻率。結(jié)果152名受試者SLCO1B1 521T＞C基因型分布為TT 73.7%，TC 23.7%，CC 2.6%；ApoE基因型分布為ε3/ε3 65.8%，ε3/ε2 13.2%，ε4/ε3 21.0%，未見ε4/ε4、ε2/ε2、ε4/ε2基因型。瑞舒伐他汀治療8周后，APOE ε3/ε3，ε3/ε3與ε4/ε3基因組比較，患者血漿中的LDL-C下降水平有統(tǒng)計(jì)學(xué)意義（P＜0.05）；SLCO1B1 521T＞C 3種基因型發(fā)生肌痛的頻率明顯不同（P＜0.05）。結(jié)論SLCO1B1/ApoE基因多態(tài)性與瑞舒伐他汀療效及安全性具有相關(guān)性，聯(lián)合檢測SLCO1B1與ApoE基因型有助于預(yù)測療效和不良反應(yīng)，實(shí)現(xiàn)瑞舒伐他汀的個(gè)體化用藥。

SLCO1B1；ApoE；基因多態(tài)性；瑞舒伐他?。魂P(guān)聯(lián)研究

Fund program:NationalNaturalScienceFoundationofChina(81441014);HealthDepartmentYouthFoundation of Shanxi Province,China(201201022)

0 引言

冠狀動脈粥樣硬化性心血管?。ü谛牟。┦峭{人類健康的主要?dú)⑹种籟1]。低密度脂蛋白膽固醇（low density lipoprotein-cholesterol，LDL-C）水平與冠心病危險(xiǎn)的關(guān)系密切。有效降低LDL-C水平可以阻止動脈粥樣硬化發(fā)展，從而降低冠心病的發(fā)病率及死亡率[2-3]。目前，他汀類藥物是最有效的降低血漿LDL-C水平的藥物，可有效降低心血管疾病風(fēng)險(xiǎn)。但是，不同個(gè)體對他汀類藥物治療的反應(yīng)性存在很大差異，即使調(diào)整他汀類藥物劑量，仍有部分患者達(dá)不到預(yù)期效果，其不良反應(yīng)也同樣存在個(gè)體差異，該差異除受患者的年齡、性別、肝腎功能和藥物相互作用等因素影響，還與參與藥物代謝的酶、轉(zhuǎn)運(yùn)蛋白及藥物靶受體等的基因多態(tài)性密切相關(guān)。

SLCO1B1和載脂蛋白E（ApoE）是人體內(nèi)影響他汀類藥物的藥代動力學(xué)和藥效動力學(xué)的2個(gè)重要基因[4]。SLCO1B1基因編碼有機(jī)陰離子轉(zhuǎn)運(yùn)多肽1B1（organic anion transporting polypeptide 1B1，OATP1B1）。OATP1B1是分布在肝細(xì)胞膜上的一種主動轉(zhuǎn)運(yùn)體。SLCO1B1基因遺傳變異對他汀類藥物降脂療效的影響尚不確定，但SLCO1B1單核苷酸多態(tài)性顯著降低OATP1B1對其底物的攝取能力，使他汀類藥物的血漿及肝臟藥物濃度升高，進(jìn)而導(dǎo)致不良反應(yīng)發(fā)生風(fēng)險(xiǎn)增加[5]，尤其是521T＞C位點(diǎn)的變化與他汀類藥物相關(guān)的肌病不良反應(yīng)的危險(xiǎn)性強(qiáng)相關(guān)[6-7]。ApoE是血漿脂蛋白的重要成分，通過與LDL受體結(jié)合調(diào)節(jié)體內(nèi)的血脂水平。ApoE具有顯著遺傳多態(tài)性，且其各基因型與冠心病嚴(yán)重程度及血脂質(zhì)代謝水平有較密切的關(guān)系[8]。ApoE基因多態(tài)性可導(dǎo)致患者LDL-C水平差異，并對他汀類藥物的調(diào)脂療效產(chǎn)生不同反應(yīng)，其多態(tài)性是他汀類藥物調(diào)脂療效個(gè)體化差異的標(biāo)記物之一[9]。

瑞舒伐他汀作為一種親水性羥甲基戊二酰輔酶A還原酶（HMG-CoA）抑制劑是目前降低LDL-C效果最強(qiáng)的他汀類藥物，但在臨床應(yīng)用中存在較大的個(gè)體間療效差異。長期使用瑞舒伐他汀可能出現(xiàn)肌病、橫紋肌溶解癥等不良反應(yīng)，并呈個(gè)體差異現(xiàn)象，這些不良反應(yīng)通常與瑞舒伐他汀的血藥濃度相關(guān)。目前，國內(nèi)外關(guān)于遺傳多態(tài)性對瑞舒伐他汀影響的研究多集中在藥代動力學(xué)相關(guān)方面。本研究從藥效學(xué)角度，探討SLCO1B1和ApoE基因多態(tài)性與瑞舒伐他汀的療效及不良反應(yīng)的相關(guān)性，為個(gè)體化用藥提供依據(jù)。

1 資料與方法

1.1 臨床資料

選取2015年9月～2016年6月山西省心血管病醫(yī)院心內(nèi)科高血脂癥患者152例，平均年齡（60.5±8.4）歲，排除標(biāo)準(zhǔn)為急性冠脈綜合征患者、嚴(yán)重的肝腎功能不全患者、入院前已較長時(shí)間（大于1月）應(yīng)用他汀降脂治療者及聯(lián)合用藥（如：他汀聯(lián)合貝特或依折麥布）降脂的患者。

1.2 方法

1.2.1 主要材料與儀器

瑞舒伐他汀鈣（美國阿斯利康公司，10 mg/片），TGuide S32磁珠法血液基因組提取試劑盒（北京天根生化科技有限公司），SLCO1B1基因分型檢測試劑盒（焦磷酸測序法）、ApoE基因分型檢測試劑盒（焦磷酸測序法）（長沙三濟(jì)生物科技有限公司）。Arktik多功能PCR儀（美國Thermo Fisher Scientific公司），QIAGEN PyroMark Q24焦磷酸測序儀（德國QIAGEN公司），AU5800系列全自動生化分析儀（美國貝克曼庫爾特公司）。

1.2.2 標(biāo)本采集

檢測受試者SLCO1B1 521T＞C、ApoE的基因多態(tài)性。所有受試者口服瑞舒伐他汀10 mg進(jìn)行降脂治療，每晚1次，連續(xù)服用8周。用藥前及用藥8周后空腹采靜脈血，EDTA抗凝血分離血漿及白細(xì)胞層，進(jìn)行基因型測定；促凝血分離血清，檢測LDL-C水平，依據(jù)LDL-C水平變化率評價(jià)不同基因型組降脂療效。此外，于治療期內(nèi)隨訪肌痛等不良反應(yīng)。

1.2.3 SLCO1B1及ApoE基因型測定

取受試者EDTA抗凝靜脈血約2 ml，采用納米磁珠法提取外周血基因組DNA，用PCR-焦磷酸測序法檢測患者ApoE和SLCO1B1 521T＞C基因型。PCR擴(kuò)增及焦磷酸測序引物序列分別為：SLCO1B1 521T＞C引物序列：前引物5'-GTT GTT TAA AGG AAT CTG GGT CAT 3'（加生物素標(biāo)記），后引物5'-AGC GAA ATC ATC AAT GAT AGA AAG-3'，測序引物5'-CAC GAA GCA TAT TAC CCA T-3'；ApoE引物序列：前引物5'-CCCCGGCCTGGTACACTG-3'（加生物素標(biāo)記），后引物5'-GGGCGCGGACATGGAGG-3'，測序引物5'-GAC ATG GAG GAC GTG-3'（112T＞C）和5'-CCG ATG ACC TGC AGA-3'（158C＞T）。

1.3 統(tǒng)計(jì)學(xué)方法

應(yīng)用SPSS 15.0軟件進(jìn)行統(tǒng)計(jì)學(xué)分析，計(jì)數(shù)資料以率表示，采用χ2檢驗(yàn)，正態(tài)分布的計(jì)量資料以均數(shù)±標(biāo)準(zhǔn)差（x±s）表示，組間均數(shù)比較采用方差分析，以P＜0.05為差異有統(tǒng)計(jì)學(xué)意義。

2 結(jié)果

2.1 SLCO1B1 521T＞C和ApoE的基因型分析

SLCO1B1（521T＞C）基因型分布為TT 73.7%，TC 23.7%，CC 2.6%；ApoE 2個(gè)位點(diǎn)（158C＞T和112T＞C）的基因型分布為ε3/ε3 65.8%，ε3/ε2 13.2%，ε4/ε3 21.0%，未見ε4/ε4、ε2/ε2、ε4/ε2基因型。（表1）

表1 SLCO1B1與ApoE基因型分布

2.2 ApoE基因多態(tài)性與LDL-C水平相關(guān)性

服用藥物8周后LDL-C水平變化如表2所示，瑞舒伐他汀對ε3/ε2基因型LDL-C水平降低作用最強(qiáng)，對ε4/ε3基因型LDL-C水平降低作用最弱，經(jīng)過統(tǒng)計(jì)分析發(fā)現(xiàn)差異具有統(tǒng)計(jì)學(xué)意義（P＜0.05），可認(rèn)為瑞舒伐他汀對不同ApoE基因型降脂療效有差異。

表2 瑞舒伐他汀治療后ApoE各基因型組LDL-C變化率

2.3 ApoE基因多態(tài)性與肌病不良反應(yīng)相關(guān)性

服用藥物8周后，152名受試者中，有5.3%出現(xiàn)相關(guān)性肌病不良反應(yīng)，表現(xiàn)為肌痛。其中TT、TC、CC基因型的肌痛發(fā)生率分別為2.6%、13.9和25.0%，與TT基因型相比，TC和CC基因型的肌痛發(fā)生率顯著增加，差異均具有統(tǒng)計(jì)學(xué)意義（均P＜0.05）。（表3）

表3 瑞舒伐他汀治療后SLCO1B1 521T＞C各基因型組的肌痛發(fā)生頻率

3 討論與結(jié)論

藥物的體內(nèi)代謝、轉(zhuǎn)運(yùn)及藥物作用靶點(diǎn)基因的遺傳變異及其表達(dá)水平的變化可影響藥物的體內(nèi)濃度和敏感性，導(dǎo)致藥物反應(yīng)性個(gè)體差異[10]。本研究從藥效學(xué)的角度研究了藥物代謝轉(zhuǎn)運(yùn)體基因SLCO1B1和作用靶點(diǎn)基因ApoE的多態(tài)性對瑞舒伐他汀的降脂療效和安全性的影響。

采用納米磁珠法提取外周血基因組DNA。納米磁珠是運(yùn)用納米技術(shù)對超順磁性納米顆粒的表面進(jìn)行改良和表面修飾，制備而成的超順磁性氧化硅納米磁珠，能與核酸分子特異性地識別和高效結(jié)合[11]。DNA的抽提方法很多，如傳統(tǒng)的酚-氯仿法、鹽析法、濾膜離心柱法等的步驟繁雜、費(fèi)時(shí)長、收率低，需接觸有毒試劑，且很難實(shí)現(xiàn)自動化操作。以納米磁珠為載體的提取技術(shù)，利用在高鹽低pH值條件下核酸通過靜電作用、疏水作用和氫鍵作用吸附到磁珠氧化硅殼層表面形成磁珠核酸復(fù)合物，在低鹽高pH值條件下核酸與磁珠解吸附的原理，實(shí)現(xiàn)對核酸的提取、純化。該方法具有操作簡單，快速，提取效率高，產(chǎn)物純度高，能夠?qū)崿F(xiàn)高通量，自動化操作等優(yōu)點(diǎn)，尤其適合大批量的DNA提取純化[12]。

ApoE基因含3種等位基因ε2、ε3，ε4，可組成ε3/ε3、ε3/ε2、ε4/ε3、ε4/ε4、ε2/ε2、ε4/ε2 6種基因型，其多態(tài)性可能與他汀類藥物療效存在關(guān)聯(lián)性[9]。有研究發(fā)現(xiàn)，ApoE基因型與總膽固醇（total cholesterol，TC）變化無關(guān)，與LDL-C變化有關(guān)[13-14]。本研究統(tǒng)計(jì)了ApoE基因型分布頻率分別為ε3/ε3 65.8%，ε3/ε2 13.2%，ε3/ε4 21.0%；口服瑞舒伐他?。?0 mg）治療8周后，3種基因型LDL-C水平下降有差異，以ε3/ε2組下降最為顯著，ε3/ε3組下降幅度居中，ε3/ε4下降幅度最小，組間差異具有統(tǒng)計(jì)學(xué)意義（P＜0.05）。因此，推測ApoE基因多態(tài)性與瑞舒伐他汀降低LDL-C水平的作用相關(guān)，監(jiān)測ApoE基因多態(tài)性有助于預(yù)測瑞舒伐他汀的療效。

瑞舒伐他汀在體內(nèi)只有10%被CYP450酶代謝，大部分是原形排泄，所以負(fù)責(zé)轉(zhuǎn)運(yùn)的轉(zhuǎn)運(yùn)體OATP1B1將會很大程度的影響其在體內(nèi)的藥物分布。有研究證實(shí)，編碼OATP1B1的SLCO1B1基因多態(tài)性對中國人的瑞舒伐他汀藥代動力學(xué)影響較大，SLCO1B1 521T＞C多態(tài)性與瑞舒伐他汀的血藥濃度等藥代動力學(xué)參數(shù)呈現(xiàn)的個(gè)體差異密切相關(guān)，而瑞舒伐他汀血藥濃度越高發(fā)生肌病、橫紋肌溶解癥等副反應(yīng)的風(fēng)險(xiǎn)隨之升高[7]。本研究統(tǒng)計(jì)SLCO1B1 521T＞C基因型分布頻率，野生純合子TT為73.7%，突變雜合子TC為23.7%，突變純合子CC為2.6%；研究過程中隨訪了受試者用藥期間（8周）肌病不良反應(yīng)（臨床表現(xiàn)為肌痛）的發(fā)生頻率，TT、TC、CC 3種基因型肌痛的發(fā)生頻率分別為2.6%、13.9%和25.0%，差異有統(tǒng)計(jì)學(xué)意義（P＜0.05）。因而，推測SLCO1B1521T＞C多態(tài)性與瑞舒伐他汀的肌病不良反應(yīng)的個(gè)體差異相關(guān)，TC與CC基因型發(fā)生肌病不良反應(yīng)的風(fēng)險(xiǎn)增加，監(jiān)測SLCO1B1 521T＞C的基因多態(tài)性將有助于預(yù)測瑞舒伐他汀發(fā)生不良反應(yīng)的危險(xiǎn)性。

綜上所述，SLCO1B1/ApoE基因多態(tài)性與瑞舒伐他汀的不良反應(yīng)和降脂療效具有相關(guān)性。在實(shí)際應(yīng)用中，聯(lián)合檢測SLCO1B1和ApoE基因型，有助于預(yù)測瑞舒伐他汀的不良反應(yīng)和降脂療效，提高其安全性和有效性，實(shí)現(xiàn)瑞舒伐他汀的個(gè)體化用藥。

利益沖突無

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SLCO1B1/ApoE gene polymorphisms associated with efficacy and safety of rosuvastatin

Wang Zhongchao, Li Jun,Liu Longmei,He Yingna
Department of Cardiology,Cardiovascular Disease Hospital of Shanxi Province,Taiyuan 030001,China(Wang ZC,Li J,Liu LM);Department of Pharmacy,Hebei University of Chinese Medicine,Hebei Key Laboratory of Chinese Medicine Research on Cardio-cerebrovascular Disease,Shijiazhuang 050200,China(He YN)

ObjectiveTo investigate the association between SLCO1B1/ApoE gene polymorphisms and lipid-lowering efficacy and safety of rosuvastatin.MethodsDNA samples were extracted from blood using nano paramagnetic particle method.The SLCO1B1 521T＞C and ApoE gene polymorphisms were screened by PCR-pyrophosphate sequencing method.Totally 152 patients received rosuvastatin orally at a dose of 10 mg/d.The lipidlowering efficacy was evaluated through detecting serum low-density lipoprotein cholesterol(LDL-C)level before and 8 weeks after the treatment.The incidence of myopathic adverse effect was assessed by follow-up of the occurrence of myalgia.ResultsThe gene distribution of SLCO1B1 521T＞C was 73.7%,23.7%and 2.6%respectively for TT,TC and CC in 152 patients,and the distribution of ApoE gene was 65.8%,13.2%and 21.0%respectively for ε3/ε3, ε3/ε2 and ε4/ε3.The genotype ε4/ε4,ε2/ε2 and ε4/ε2 were not detected.After orally receiving rosuvastatin 10 mg daily for 8 weeks,the decreased LDL-C levels showed significant differences(P＜0.05)among ApoE genotype ε3/ε2, ε3/ε3 and ε4/ε3 groups,and the frequencies of myalgia showed significant differences in the three genotype groups of SLCO1B1 521T＞C(P＜0.05).ConclusionThe gene polymorphism of SLCO1B1/ApoE was correlated with efficacy and safety of rosuvastatin.The combined detection of SLCO1B1/ApoE genes can be utilized to predict efficacy and risk,and then realize individualized medication.

SLCO1B1;ApoE;Gene polymorphism;Rosuvastatin;Correlation research

He Yingna,Email:heyingna2002@163.com

國家自然科學(xué)基金（81441014）；山西省衛(wèi)生廳青年基金（201201022）

2016-09-15）

何穎娜，Email：heyingna2002@163.com

10．3760/cma．j．issn．1673-4181．2016．06．009