高效液相色譜法測定瑞格列奈中左旋異構(gòu)體

沈　渝（福安藥業(yè)集團重慶禮邦藥物開發(fā)有限公司，重慶　401121）

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高效液相色譜法測定瑞格列奈中左旋異構(gòu)體

沈渝
（福安藥業(yè)集團重慶禮邦藥物開發(fā)有限公司，重慶401121）

摘要：采用手性色譜柱（填料為α-酸性糖蛋白，100mm×4.0mm×5μm），進行高效液相色譜法測定。建立了液相色譜法測定瑞格列奈中左旋異構(gòu)體的方法。左旋異構(gòu)體和瑞格列奈完全分離，在所考察的濃度范圍內(nèi)相關(guān)系數(shù)均大于0.99，方法準(zhǔn)確定度回收率均在95.0%～105.0%。由此可知該方法操作高效簡便，結(jié)果準(zhǔn)確可靠，可用于瑞格列奈中左旋異構(gòu)體的測定。

關(guān)鍵詞：高效液相色譜法；瑞格列奈；左旋異構(gòu)體

1 主要儀器與試劑

Agilent1100液相色譜儀及工作站。對照品：瑞格列奈消旋體、瑞格列奈左旋異構(gòu)體、瑞格列奈。試劑：磷酸二氫鉀、氫氧化鈉、乙腈（色譜純）。

2 方法與結(jié)果

2.1 色譜條件

色譜柱：手性色譜柱（填料為α-酸性糖蛋白，100mm×4.0mm×5μm）。檢測波長：240nm；流速：1.0mL/min。以磷酸鹽緩沖液（取磷酸二氫鉀2.72g，加水800mL使溶解，用氫氧化鈉試液調(diào)節(jié)pH值至7.0，加水稀釋至1000mL，即得）為流動相A，乙腈為流動相B，進行梯度洗脫。

2.2 溶液制備

供試品溶液：取本品約10mg，置50mL量瓶中，加甲醇15mL使溶解，用水稀釋至刻度，搖勻。對照溶液：精密量取供試品溶液1mL，置100mL量瓶中，用水稀釋至刻度，搖勻。對照品溶液：取瑞格列奈消旋體對照品適量，用甲醇溶解并稀釋制成每1mL中含0.1mg的溶液。

2.3 測定方法

精密量取對照溶液20μL注入液相色譜儀，調(diào)節(jié)檢測靈敏度，使主成分色譜峰的峰高約為滿量程的25%，再精密量取供試品溶液與對照溶液各20μL分別注入液相色譜儀，記錄色譜圖至主成分峰保留時間的3倍。

2.4 系統(tǒng)適應(yīng)性試驗

取對照品溶液20μL注入液相色譜儀，瑞格列奈與左旋異構(gòu)體依次出峰，其分離度大于1.5。

2.5 檢測限及定量限測定

稱取左旋異構(gòu)體及瑞格列奈適量，配制其標(biāo)準(zhǔn)品溶液，逐級稀釋該溶液，注入色譜儀，記錄色譜圖，其信噪比（S/ N＝10±1）的樣品濃度即為定量限濃度，其比（S/N＝3±1）的樣品濃度即為檢測限濃度，在得到檢測限溶液的基礎(chǔ)上，用該溶液配制異構(gòu)體樣品檢測溶液，進行了檢測限加入試驗。結(jié)果見表1。

2.6 線性測定

①瑞格列奈左旋異構(gòu)體線性考察。精密量取200%標(biāo)準(zhǔn)濃度的瑞格列奈左旋異構(gòu)體對照品母液適量至10mL的容量瓶中，稀釋配制成相當(dāng)于標(biāo)準(zhǔn)濃度的25%、60%、80%、100%、120%、140%、200%濃度的對照品溶液，分別精密量取上述對照品溶液各20μL注入液相色譜儀，記錄色譜圖，以樣品進樣量為X軸，以峰面積為Y軸做回歸曲線，計算回歸方程及相應(yīng)的線性回歸系數(shù)，實驗結(jié)果表明，瑞格列奈左旋異構(gòu)體在0.55μg/mL～4.40μg/mL濃度范圍，峰面積與濃度之間的線性關(guān)系良好，相關(guān)系數(shù)達0.9997。②瑞格列奈線性考察。精密量取200%標(biāo)準(zhǔn)濃度的瑞格列奈對照品母液適量至10mL的容量瓶中，稀釋配制成相當(dāng)于標(biāo)準(zhǔn)濃度的25%、60%、80%、100%、120%、140%、200%濃度的對照品溶液，分別精密量取上述對照品溶液各20μL注入液相色譜儀，記錄色譜圖，以樣品進樣量為X軸，以峰面積為Y軸做回歸曲線，計算回歸方程及相應(yīng)的線性回歸系數(shù)，試驗表明，瑞格列奈在0.052μg/mL ～3.720μg/mL濃度范圍，濃度之間的線性關(guān)系良好，相關(guān)系數(shù)達0.9991。通過校正因子計算，左旋異構(gòu)體相對于瑞格列奈的校正因子為0.93，因此測定左旋異構(gòu)體以相對校正因子為1帶入計算。

2.7 精密度實驗

①重復(fù)性試驗。精密稱取本品六份，每份約10mg，分別置50mL量瓶中，加甲醇15mL使溶解，用水稀釋至刻度，搖勻，作為六份供試品溶液；精密量取供試品溶液各1mL，分別置100mL量瓶中，用水稀釋至刻度，搖勻，作為六份對照溶液；按上述色譜條件，分別精密量取供試品溶液和對照溶液各20μL注入液相色譜儀，記錄色譜圖，計算左旋異構(gòu)體的量。試驗結(jié)果表明，六份瑞格列奈樣品均未檢出左旋異構(gòu)體，六份對照液峰面積RSD% 為0.9%，小于5.0%，用本方法測定瑞格列奈左旋異構(gòu)體重復(fù)性好。②中間精密度試驗。更換不同的分析人員，于不同時間不同儀器檢測同批樣品的左旋異構(gòu)體含量，試驗結(jié)果表明：更換不同的分析人員，于不同時間不同儀器檢測同批樣品的左旋異構(gòu)體，12份結(jié)果均未檢出瑞格列奈左旋異構(gòu)體，用本方法測定瑞格列奈左旋異構(gòu)體的方法中間精密度好。

表1　檢測限測定結(jié)果與定量限測定結(jié)果（n＝3）

2.8 方法準(zhǔn)確度考察

分別精密量取供試品溶液和對照品溶液20μL進樣檢測，記錄色譜圖，按外標(biāo)法計算瑞格列奈左旋異構(gòu)體回收率。試驗數(shù)據(jù)表明：樣品中瑞格列奈左旋異構(gòu)體的回收率均在95.0%～105.0%，表明該檢測方法能準(zhǔn)確有效的檢出瑞格列奈中的左旋異構(gòu)體。

3 討論

3.1 方法的選擇和建立

本品水溶性比較差，基本不溶，因此樣品制備中加入部分甲醇（30%），以增加其溶解性。將樣品在甲醇、水等溶劑條件下進行紫外掃描，在240nm處均有最大吸收，確定檢測波長為240nm。

3.2 限度的測定

結(jié)合中國藥典2010年版二部中瑞格列奈項下標(biāo)準(zhǔn)，其左旋異構(gòu)體限度不得高于1.0%，采用本方法對數(shù)批放大研究樣品進行檢驗，均未知雜質(zhì)檢出左旋異構(gòu)體，結(jié)果符合規(guī)定。綜上所述，該方法檢測高效迅速，靈敏度高，專屬性好，結(jié)果準(zhǔn)確可靠，可用于瑞格列奈中左旋異構(gòu)體測定。

參考文獻

[1]國家藥典委員會.中華人民共和國藥典.2010年版二部[M].北京：中國醫(yī)藥科技出版社，2010.

中圖分類號：R917

文獻標(biāo)識碼：A