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    2015年全國多中心自身抗體檢測質量調查評價

    2016-04-08 08:16:29胡朝軍張蜀瀾鄧垂文李夢濤曾小峰
    關鍵詞:免疫性陰性抗體

    胡朝軍,張蜀瀾,鄧垂文,李夢濤,曾小峰

    (中國醫(yī)學科學院 北京協(xié)和醫(yī)學院 北京協(xié)和醫(yī)院風濕免疫科 風濕免疫病教育部重點實驗室,北京 100730)

    自身免疫性疾病以患者體內出現(xiàn)多種自身抗體為重要特征之一,自身抗體的檢測對自身免疫性疾病的診療及病情評估非常重要,其檢測結果正確與否直接影響到自身免疫性疾病患者的診斷和治療[1]。由于受自身抗體檢測技術相對落后、自動化程度較低、檢測項目繁多、檢測人員業(yè)務技能不同等多種因素影響,不同實驗室之間的檢測結果差異較大,可比性較差。為促進實驗室給臨床提供更準確、可靠的自身抗體檢測結果,國家風濕病數(shù)據(jù)中心(Chinese Rheumatism Data Center,CRDC)2015年在全國范圍內組織開展自身抗體檢測質量室間比對調查評價工作,以便發(fā)現(xiàn)問題,進一步改進和提高自身抗體檢測質量,促進我國自身免疫性疾病的整體診治水平。

    資料與方法

    室間比對品來源

    室間比對樣本由CRDC牽頭單位北京協(xié)和醫(yī)院風濕免疫科制備。比對品為自身免疫性疾病患者血清,經(jīng)除纖維蛋白原和防腐處理,分裝于離心管中。比對樣本為液體血清,常溫運輸,-20 ℃長期保存。

    參與單位

    基于CRDC平臺,在全國范圍內發(fā)放2015年自身抗體檢測實驗室室間比對指南。擬參與的自身抗體室間比對項目的單位或科室自愿在線填寫報名表申請。

    比對項目及檢測要求

    本次自身抗體比對項目包括:抗核抗體(antinuclear antibody,ANA)、抗可提取性核抗原(extractable nuclear antigen,ENA)抗體[抗核糖核蛋白(ribonuclear protein,RNP)抗體、抗Sm抗體、抗SSA抗體、抗SSB抗體、抗Scl-70抗體和抗Jo-1抗體]、抗雙鏈DNA(double-stranded DNA,ds-DNA)抗體、抗環(huán)瓜氨酸肽(cyclic citrullinated peptides,CCP)抗體、抗心磷脂抗體(anti cardiolipin,ACA)、抗β2糖蛋白1(β2-plycoprotein 1,β2GP1)抗體、抗中性粒細胞胞質抗體[antineutrophil cytoplasmic antibodies,ANCA,胞質型ANCA(cytoplasmic ANCA,cANCA)/核周型ANCA(perinuclear ANCA,pANCA)]、抗髓過氧化物酶(myeloperoxidase,MPO)抗體、抗蛋白酶3(protease 3,PR3)抗體、抗線粒體抗體(antimitochdrial antibody,AMA)/AMA-M2、抗平滑肌抗體(antismooth muscle antibody,ASMA)和抗可溶性肝抗原(soluble liver antigen,SLA)/肝胰(liver-pancreas,LP)抗體。,共計18項。每個比對項目發(fā)放5支室間比對樣本,ANA和ANCA檢測需要回報定性檢測結果、核型和滴度,其余檢測項目需要回報陰性或陽性定性檢測結果。

    室間比對品發(fā)放與檢測結果回報

    室間比對樣本由北京歐蒙生物技術有限公司協(xié)助寄送給各參加單位負責人,各單位收到比對樣本按要求檢測后,在規(guī)定時間內通過網(wǎng)絡在CRDC實驗室質量認證平臺回報檢測結果。檢測結果經(jīng)統(tǒng)計分析后,通過CRDC實驗室質量認證平臺反饋給各參與實驗室。

    結果分析

    以室間比對標本的揭盲結果為評判依據(jù),間接免疫熒光法(indirect immunofluorescence,IIF)的判定包括定性及主要熒光核型。免疫印跡法(immunoblotting,IB)、酶聯(lián)免疫吸附試驗(enzyme-linked immunosorbent assay,ELISA)等其他檢測方法均以陰、陽性為判定標準。

    結  果

    參加室間比對的單位分布

    2015年全國多中心自身抗體室間比對報名單位共計131家,室間比對樣本檢測回報結果顯示,有效回報單位116家,來自全國27個省、市、自治區(qū),其詳細分布見表1。其中檢驗科57家(49.14%),臨床實驗室49家(42.24%),診斷試劑公司質控部6家(5.17%),第三方檢驗中心4家(3.45%)

    ANA回報結果

    ANA有效回報結果單位107家,采用IIF法97家(90.65%)(其中采用2倍稀釋系統(tǒng)16家,3.2倍稀釋系統(tǒng)81家),ELISA法9家(8.41%),IB法1家(0.93%)。5份ANA室間比對樣本結果分別為:1號:陽性,均質型,滴度1∶640(2倍稀釋系統(tǒng)),1∶3 200(3.2倍稀釋系統(tǒng));2號:陰性;3號:陰性;4號:陽性,顆粒型,滴度1∶640(2倍稀釋系統(tǒng)),1∶3 200(3.2倍稀釋系統(tǒng));5號:陽性,顆粒型,滴度1∶640(2倍稀釋系統(tǒng)),1∶3 200(3.2倍稀釋系統(tǒng));5個樣本全部正確單位共計104家,占97.20%(表2)。

    抗ds-DNA回報結果

    抗ds-DNA抗體有效回報結果單位101家,采用IIF法47家(46.53%)(其中采用2倍稀釋系統(tǒng)10家,3.2倍稀釋系統(tǒng)37家),ELISA法31家(30.69%),IB法20家(19.80%)。膠體金法2家(1.98%),放射免疫分析法1家(0.99%)。5份抗ds-DNA抗體室間比對樣本結果分別為:1號:陽性,滴度1∶640(2倍稀釋系統(tǒng)),1∶320(3.2倍稀釋系統(tǒng));2號:陰性;3號:陰性;4號:陰性;5號:陰性;所有單位5個樣本全部正確。

    表1 參加全國多中心自身抗體檢測室間比對的實驗室分布Table 1 Distribution of laboratories paticipated in this nationwide multi-center autoantibody detection comparison

    表2 ANA回報結果Table 2 Report results of ANA

    IIF:間接免疫熒光法;ELISA:酶聯(lián)免疫吸附試驗;IB:免疫印跡法;ANA:抗核抗體

    抗ENA抗體回報結果分析

    抗ENA抗體有效回報結果單位102家,其中采用IB法100家(98.04%),ELISA法1家(0.98%),膠體金法1家(0.98%)。5份抗ENA抗體室間比對樣本結果分別為:1號:陰性;2號:陰性;3號:陰性;4號:抗SSA抗體陽性,抗SSB抗體陽性;5號:抗RNP抗體陽性、抗Sm抗體陽性;5個樣本全部正確的單位共計82家,占80.39%(表3)。

    抗磷脂抗體回報結果分析

    抗心磷脂抗體有效回報結果單位66家,采用ELISA法63家(95.45%),膠體金法2家(3.03%),IB法1家(1.52%)。5份抗心磷脂抗體室間比對樣本結果分別為:1號:ACA-IgAGM陰性、ACA-IgM陰性、ACA-IgG陰性;2號:ACA-IgAGM陽性、ACA-IgM陽性、ACA-IgG陽性;3號:ACA-IgAGM陽性、ACA-IgM陽性、ACA-IgG陽性;4號:ACA-IgAGM陰性、ACA-IgM陰性、ACA-IgG陰性;5號:ACA-IgAGM陰性、ACA-IgM陰性、ACA-IgG陰性;5個樣本全部正確的單位共計58家,占87.88%(表4)。

    表3 抗ENA抗體回報結果Table 3 Report results of ENA

    ENA:可提取性核抗原;RNP:核糖核蛋白

    抗β2GP1抗體有效回報結果單位52家,采用ELISA 51家(98.08%),IB法1家(1.92%)。5份抗β2GP1抗體室間比對樣本結果分別為:1號:抗β2GP1-IgAGM抗體陰性、抗β2GP1-IgM抗體陰性、抗β2GP1-IgG抗體陰性;2號:抗β2GP1-IgAGM抗體陽性、抗β2GP1-IgM抗體陽性、抗β2GP1-IgG抗體陽性;3號:抗β2GP1-IgAGM抗體陽性、抗β2GP1-IgM抗體陽性、抗β2GP1-IgG抗體陽性;4號:抗β2GP1-IgAGM抗體陰性、抗β2GP1-IgM抗體陰性、抗β2GP1-IgG抗體陰性;5號:抗β2GP1-IgAGM抗體陰性、抗β2GP1-IgM抗體陰性、抗β2GP1-IgG抗體陰性;所有單位5個樣本全部正確。

    抗血管炎相關抗體回報結果

    ANCA有效回報結果單位75家,采用IIF法74家(98.67%),ELISA法1家(1.33%)。5份ANCA室間比對樣本結果分別為:1號:陰性;2號:pANCA陽性,抗MPO抗體陽性;3號:pANCA陽性,抗PR3抗體陽性;4號:陰性;5號:pANCA陽性,抗MPO抗體陽性。5個樣本全部正確的單位共計47家,占62.67%(表5)。

    抗MPO抗體有效回報結果87家,其中采用IB法45家(51.72%),ELISA法42家(48.28%);5個樣本全部正確的單位共計86家,占98.85%(表5)。

    抗PR3抗體有效回報結果88家,其中采用IB法45家(51.14%),ELISA法43家(48.86%);5個樣本全部正確的單位共計88家,占100.00%(表5)。

    自身免疫性肝病相關抗體回報結果

    AMA采用IIF法有效回報結果單位53家,5份室間比對樣本結果分別為:1號:陰性;2號:陽性;3號:陽性;4號:陰性;5號:陰性;5個樣本全部正確的單位共計53家,占100.00%。

    表4 抗磷脂抗體回報結果Table 4 Report results of antiphospholipid antibodies

    ELISA:酶聯(lián)免疫吸附試驗;IB:免疫印跡法;ACA:抗心磷脂抗體;β2GP1:β2糖蛋白1

    表5 抗血管炎相關抗體回報結果Table 5 Report results of vasculitis related antibodies

    IIF:間接免疫熒光法;ELISA:酶聯(lián)免疫吸附試驗;IB:免疫印跡法;ANA:抗核抗體;ANCA:抗中性粒細胞胞質抗體;MPO:髓過氧化物酶;PR3:蛋白酶3

    AMA-M2有效回報結果單位78家,其中采用IB法61家(78.21%),ELISA法17家(21.79%)。5份室間比對樣本結果分別為:1號:陰性;2號:陽性;3號:陽性;4號:陰性;5號:陰性;5個樣本全部正確的單位共計77家,占98.72%。

    采用IIF法檢測ASMA有效回報結果單位52家。1~4號標本為陰性,5號標本陽性;5個樣本全部正確的單位共計40家,占76.92%(表6)。

    抗SLA/LP抗體有效回報結果單位66家,其中采用IB法65家(98.48%),ELISA法1家(1.52%)。5個樣本全部陰性,全部正確的單位共計66家,占100.00%。

    抗CCP抗體回報結果

    抗CCP抗體有效回報結果單位86家,采用ELISA法74家(86.05%),電化學發(fā)光法9家(10.47%),膠體金法2家(2.33%),免疫比濁1家(1.16%)。5份抗CCP抗體室間比對樣本結果分別為:1號:陽性;2號:陰性;3號:陽性;4號:陽性;5號:陰性;5個樣本全部正確的單位共計82家,占95.35%(表7)。

    討  論

    自身抗體在自身免疫性疾病出現(xiàn)典型臨床癥狀前數(shù)月甚至數(shù)年即可檢測到,已成為自身免疫性疾病臨床診療的重要指標之一。由于自身免疫性疾病發(fā)病機制復雜,臨床表現(xiàn)多樣,往往一種自身免疫病可檢測出數(shù)十種甚至上百種自身抗體[2],所以自身抗體的準確檢測已成為自身免疫性疾病診斷和鑒別診斷、活動程度及療效預后評估的重要手段。近年來,隨著臨床需求的提高,進入臨床常規(guī)檢測的自身抗體項目不斷增加,因此國外已經(jīng)非常重視自身抗體檢測室間質量評價體系的建立[3- 4]。然而受限于檢測方法的多樣化、實驗室儀器配置的參差不齊、操作人員自身的條件等因素,自身抗體檢測結果的質量仍存在問題。為了更好地了解國內自身抗體臨床檢測情況,提高自身抗體檢測結果的準確性,促進我國自身免疫性疾病的整體診治水平,CRDC 2015年在全國范圍內組織開展自身抗體檢測質量室間比對調查評價工作。

    表6 自身免疫性肝病相關抗體回報結果Table 6 Report results of autoimmune live disease related antibodies

    IIF:間接免疫熒光法;ELISA:酶聯(lián)免疫吸附試驗;IB:免疫印跡法;ANA:抗核抗體;ANCA:抗線粒體抗體;ASMA:抗平滑肌抗體;SLA:抗可溶性肝抗原;LP:肝胰

    表7 抗CCP抗體回報結果Table 7 Report results of anti-CCP antibodies

    ELISA:酶聯(lián)免疫吸附試驗;CCP:環(huán)百氨酸肽

    本次全國多中心室間比對與既往多次全國自身抗體檢測比對相比,比對項目更為全面。本次自身抗體室間比對中,報名單位共計131家,比對樣本檢測結果有效回報單位116家,涵蓋全國27個省、市、自治區(qū)醫(yī)院的檢驗科57家(49.14%),臨床實驗室49家(42.24%),診斷試劑公司質控部6家(5.17%),第三方檢驗中心4家(3.45%)。由于本次室間比對涵蓋范圍廣,參與單位自愿參加,而且回報結果僅作為了解各參與單位自身抗體檢測質量的基本情況,受其他外界因素影響較小,因此回報結果能更客觀、真實地反映我國自身抗體檢測質量的實際情況。

    107家單位的ANA回報結果顯示,采用IIF法97家(90.65%),其中采用2倍稀釋系統(tǒng)16家,3.2倍稀釋系統(tǒng)81家;ELISA 9家(8.41%)。5個樣本全部正確的單位共計104家,占97.20%。由此可見我國ANA的臨床檢測以IIF為主,而且多數(shù)單位采用3.2倍稀釋系統(tǒng),ANA的臨床檢測結果正確率較高,能滿足臨床診療需求。

    101家回報的抗ds-DNA抗體檢測結果中,采用IIF法47家(46.53%),其中采用2倍稀釋系統(tǒng)10家,3.2倍稀釋系統(tǒng)37家;ELISA 31家(30.69%),IB法20例(19.80%)。本次回報結果中采用IIF法或ELISA法檢測抗ds-DNA抗體的比例為77.23%,高于既往室間比對回報結果(62.10%)[5]。由于IIF法和ELISA法是檢測抗ds-DNA抗體的可靠方法,因此隨著這些標準方法的采用,抗ds-DNA抗體檢測結果的正確性也將逐步提高,本次回報結果顯示,抗ds-DNA抗體檢測結果陽性符合率為100.00%,高于既往的89.5%[5]。

    抗ENA抗體檢測是臨床成熟的自身抗體檢測項目。本次102家回報結果顯示,我國抗ENA抗體的檢測方法構成:IB法98.04%,ELISA法0.98%,膠體金法0.98%,與既往全國多中心回報情況基本一致,我國抗ENA抗體檢測以IB法為主的情況與國外以ELISA和免疫微球技術為主的情況差距甚遠[6]。隨著我國自身抗體自動化程度的不斷提高,這一現(xiàn)狀將逐步改善。

    本次自身抗體比對中,抗心磷脂抗體、抗β2GP1抗體、抗MPO抗體和抗PR3抗體回報的正確率較高,但ANCA熒光陽性標本檢測結果的正確率僅為62.67%,ASMA陽性標本檢測結果的正確率僅為76.92%。ASMA是臨床診斷自身免疫性肝炎的重要血清自身抗體,由于其靶抗原較多,臨床上主要采用IIF檢測該抗體。但是ASMA的臨床檢測質量一直不理想,本次回報結果中,ASMA的陽性符合率為76.92%,雖然高于以前的全國比對回報結果(57.3%)[7],但仍遠低于其他臨床常用自身抗體的檢測結果一致性。

    抗CCP抗體的檢測對于類風濕關節(jié)炎的臨床診療非常重要。既往多次全國自身抗體檢測回報結果都顯示抗CCP抗體檢測結果較好,能滿足臨床診療的需求。本次全國比對結果也表明抗CCP抗體的檢測質量較好,但是本次回報結果提示,采用膠體金法和免疫比濁法檢測抗CCP抗體結果一致性較差。采用膠體金檢測抗CCP抗體其敏感性較差,當抗CCP抗體濃度較低或者較高時,該方法都容易漏檢導致假陰性結果。而采用免疫比濁檢測抗CCP抗體時容易受到類風濕因子干擾導致假陽性結果。為了確保抗CCP抗體檢測結果的準確性,臨床應采用ELISA、化學發(fā)光和熒光免疫微球等可靠方法進行該項目的檢測。

    本次全國多中心自身抗體檢測比對結果顯示,我國目前臨床常用的自身抗體檢測項目中ANA、抗ds-DNA抗體、抗ENA抗體、抗CCP抗體、AMA、AMA-M2、ANCA、抗MPO抗體、抗PR3抗體、抗心磷脂抗體和抗β2GP1抗體等項目的檢測質量較好,能很好地滿足臨床診療需求。但是由于靶抗原的特殊性和采用的檢測方法為需要較高技能的IIF,ANCA和ASMA的測定質量相對較差,這些項目在臨床常規(guī)檢測中應受到更多重視,努力為臨床提供可靠結果。此外,由于自身抗體檢測具有重要的臨床意義,而且進入臨床常規(guī)檢測的自身抗體檢測項目不斷增加,在國內官方自身抗體檢測室間質量評價體系涵蓋項目嚴重不足的情況下,CRDC質控平臺將長期、持續(xù)進行自身抗體全國多中心室間比對,該平臺將有助于提高我國風濕免疫領域臨床常用自身抗體檢測結果的準確性和可比性,促進我國風濕免疫病診療水平的提高。

    [1]Roggenbuck D,Reinhold D,Hiemann R,et al.Standardized detection of anti-ds DNA antibodies by indirect immunofluorescence - a new age for confirmatory tests in SLE diagnostics[J].Clin Chim Acta,2011,412:2011-2012.

    [2]Hu CJ,Zhang FC,Li YZ,et al.Primary biliary cirrhosis:What do autoantibodies tell us?[J].World J Gastroenterol,2010,16:3616-3629.

    [3]Tsunekawa S,Arai J,Ishihara Y,et al.MBL quality control survey of autoantibodies—25 years of activity and its achievement—mainly antinuclear antibodies[J].Rinsho Byori,2010,58:131-138.

    [4]Pham BN,Albarede S,Guyard A,et al.Impact of external quality assessment on antinuclear antibody detection performance[J].Lupus,2005,14:113-119.

    [5]宋寧,胡朝軍,張蜀瀾,等.2013年全國229家實驗室抗核抗體譜結果比對分析[J].臨床檢驗雜志,2013,33:542-546.

    [6]胡朝軍,李永哲.重視自身抗體檢測質量管理和臨床應用[J].中華檢驗醫(yī)學雜志,2013,36:673- 676.

    [7]鄧垂文,胡朝軍,白伊娜,等.中國154家實驗室檢測抗平滑肌抗體和抗線粒體抗體的比對分析[J].中華檢驗醫(yī)學雜志,2014,37:127-131.

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