滇黃芩總黃酮不同提取方法的比較分析

劉海鷗　虎春艷　普春霞　劉曉玲　林玉萍　趙聲蘭

【摘 要】 目的： 研究不同提取方法對滇黃芩總黃酮提取率的影響。方法：以滇黃芩總黃酮得率、干膏得率為指標(biāo)，對煎煮法、乙醇回流提取法、纖維素酶-磷酸緩沖水溶液提取法、乙醇超聲提取法、纖維素酶-乙醇超聲提取法進(jìn)行研究分析。結(jié)果：考察五種提取方法對考察指標(biāo)的影響，計算綜合評價指標(biāo)Y值，Y值的大小順序為纖維素酶-乙醇超聲提取法>乙醇超聲提取法>煎煮法>乙醇回流提取法>纖維素酶-磷酸緩沖水溶液提取法。結(jié)論：滇黃芩總黃酮的提取方法以纖維素酶-乙醇超聲提取法為佳。

【關(guān)鍵詞】 滇黃芩；總黃酮；提取方法；比較分析

【中圖分類號】R284.2 【文獻(xiàn)標(biāo)志碼】 A 【文章編號】1007-8517（2016）04-0021-03

Abstract：Objective To research the extraction rate of different extraction of total flavonoids from Scutellaria amoena.Methods To optimize the extract technology of flovonoids for Scutellaria amoena，five methods such as water extraction，ethanol extraction， cellulose enzyme-phosphate buffer solution extraction，ethanol ultrasonic extraction method，cellulose enzyme-ethanol ultrasonic extraction method，were useed to extract flavonoids for Scutellaria amoena， also were compared and analyzed the flavonoids by adopting the total content of flavonoids and the yield of dry extract as markers. Results The comprehensive values Y ranked in the order of cellulose enzyme-ethanol ultrasonic extraction，ethanol ultrasonic extraction， water extraction， ethanol extraction， Cellulose enzyme-phosphate buffer solution extraction. Conclusion The optimal method to extract flavonoids for Scutellaria amoena is Cellulose enzyme-ethanol ultrasonic extraction.

Keywords：Scutellaria Amoena；Total Flavonoids；Different Extraction Methods；Comparison and Analysis

滇黃芩（Scutellaria amoena C.H.W right）是云南道地中藥材，地方本草《滇南本草》（明朝）記其“味苦，性寒，上行瀉肺火，下降瀉膀胱火”。滇黃芩為多年生草本，生于向陽坡草地、石隙或雜草叢中[1]。

滇黃芩是我國西南地區(qū)藥用黃芩的主流品種，具有較高的利用價值。現(xiàn)代研究表明黃芩主要含有黃酮類成分及揮發(fā)油類、萜類、甾醇類等成分[2]，具有抗菌、抗病毒、抗氧化、調(diào)節(jié)脂代謝、抗腫瘤、保護(hù)心血管系統(tǒng)等作用[3-7]。滇黃芩與黃芩相似，主要含有黃酮類化合物，目前對黃酮類化合物的提取方法有水提、醇提、酶解等提取方法。據(jù)文獻(xiàn)報道纖維素酶可以提高藥材有效成分的溶出率[8]，趙洪等研究發(fā)現(xiàn)乙醇和纖維素酶在提取總黃酮類成分時具有協(xié)同作用[9]。高文秀等[10]研究表明超聲-酶解法在提取總黃酮成分時同樣具有協(xié)同作用。為尋找具有較高總黃酮提取得率的提取方法，本文對不同的提取方法進(jìn)行比較和分析，為滇黃芩的研究和開發(fā)奠定基礎(chǔ)。

1 材料與方法

1.1 材料與儀器 滇黃芩（Scutellaria amoena C.H.W right）采自云南玉溪新平；黃芩苷標(biāo)準(zhǔn)品、纖維素酶（酶活力35U/mg）購自于中國藥品生物制品檢定所；所用試劑均為國產(chǎn)分析純。

1.2 主要儀器 H.H.S11-4電熱恒溫水浴鍋；超聲儀（KUDOS）；電子天平（賽多瑞斯北京電子有限公司）；UV759S紫外-可見分光光度計（上海精科）；RE-2000A旋轉(zhuǎn)蒸發(fā)儀（亞榮生化儀器廠）。

2 實驗方法

2.1 樣品溶液及干膏的制備

2.1.1 煎煮法[11] 精確稱取3.0g 干燥的滇黃芩粉末，第1次加10倍量的沸水，100℃回流提取1.5h，趁熱抽濾，濾渣再加8倍量的水100℃回流提取1h，趁熱抽濾，合并兩次濾液，冷卻至室溫，加蒸餾水定容至100ml，平行試驗三次 ，測278nm處的吸光值。

2.1.2 纖維素酶-磷酸緩沖水溶液提取法[12] 精確稱取3.0g 干燥的滇黃芩粉末，加入纖維素酶-磷酸緩沖水溶液（pH=4.8）60ml，煮沸3min，待冷卻至室溫，加20U/g（干原料）纖維素酶1.7mg，50℃回流提取8h，趁熱抽濾，濾液置于沸水浴中滅活酶3min，加蒸餾水定容至100ml，平行試驗三次 ，測278nm處的吸光值。

2.1.3 乙醇回流提取法[13] 精確稱取3.0g 干燥的滇黃芩粉末，第1次加8倍量的60%乙醇水溶液，80℃水浴回流提取2h，趁熱抽濾，濾渣再加6倍量的60%乙醇水溶液，80℃水浴回流提取0.5h，趁熱抽濾，合并兩次濾液，冷卻至室溫，加蒸餾水定容至100ml，平行試驗三次 ，測278nm處的吸光值。

2.1.4 纖維素酶-乙醇提取法[14] 精確稱取3.0g 干燥的滇黃芩粉末，加入50 %乙醇45ml，煮沸3min，待冷卻至室溫，加50U/g（干原料）纖維素酶4.3mg，50℃回流提取6h，趁熱抽濾，濾液置于沸水浴中滅活酶3min，回收乙醇，加蒸餾水定容至100ml，平行試驗三次 ，測278nm處的吸光值。

2.1.5 纖維素酶-乙醇超聲提取法[15] 精確稱取3.0g 干燥的滇黃芩粉末，加入55%乙醇90ml，煮沸3min，待冷卻至室溫，加50U/g（干原料）纖維素酶4.3mg，50℃超聲回流提取3h，趁熱抽濾，濾液置于沸水浴中滅活酶3min，回收乙醇，加蒸餾水定容至100ml，平行試驗三次 ，測278nm處的吸光值。

2.1.6 干膏的制備 精密量取上述各樣品溶液各10ml，置于已干燥至恒重的蒸發(fā)皿中，50℃鼓風(fēng)干燥至恒重，置于干燥器中冷卻30min，稱重，計算干膏得率。

2.2 標(biāo)準(zhǔn)品全波長掃描 取黃芩苷標(biāo)準(zhǔn)品溶液在200～400nm紫外下掃描，分別在278nm 和315nm處有較大吸收度，278nm有最大吸收，即λmax=278nm。

2.3 標(biāo)準(zhǔn)曲線的制備 精密稱取黃芩苷對照品7.1mg，置于 25ml的容量瓶中，用70%的乙醇水溶液定容至25ml，搖勻，分別量取 0.0、0.5、1.0、1.5、2.0、2.5、3.0ml置于25ml容量瓶中，用無水乙醇定容至刻度。采用紫外分光光度計測其在278nm的吸光度（A）。以吸光度對濃度（C）進(jìn)行線性回歸，得到回歸方程 A = 63.248C - 0.0108 （R2 = 0.9998）。

2.4 樣品的處理和提取率的計算 采集的樣品經(jīng)普春霞副教授鑒定為滇黃芩，清洗、干燥、粉碎過20目篩。測定方法參照標(biāo)準(zhǔn)曲線的制備流程，根據(jù)標(biāo)準(zhǔn)曲線測定總黃酮的含量，根據(jù)如下公式計算得率。

η= [（C×V）/m]×100%

式中濃度C為濾液中總黃酮的質(zhì)量濃度，mg/ml，體積V為濾液體積，m為滇黃芩干質(zhì)量，g。

2.5 五種提取方法的綜合評價

將五種提取方法的總黃酮的得率和干膏得率進(jìn)行標(biāo)準(zhǔn)化處理。

3 結(jié)果與分析

3.1 滇黃芩五種不同提取方法的總黃酮得率 滇黃芩五種不同提取方法對總黃酮得率的影響見表1。

從表 1可以看出，纖維素酶-磷酸緩沖水溶液提取法的總黃酮提取得率最低，而纖維素酶-乙醇超聲提取法的提取得率最高。由于滇黃芩中的主要成分是黃酮類化合物，黃酮類化合物易溶于乙醇難溶于水，則采用乙醇做溶劑的提取得率均高于水做溶劑的提取方法。植物細(xì)胞壁中有大量的纖維素，纖維素酶可以有效的破壞細(xì)胞壁，有利于成分的溶出。超聲波同樣能加速細(xì)胞壁的裂解，加速成分的溶出，提高效率，縮短時間，減少雜質(zhì)。

3.2 滇黃芩五種不同提取方法的干膏得率 五種提取方法得到的滇黃芩總黃酮的干膏得率見表2。

從表2可以看出煎煮法得到的干膏得率最高，但煎煮法得到的總黃酮的得率卻不高，說明煎煮法雜質(zhì)溶出率高，純化較困難。纖維素酶-磷酸緩沖水溶液提取法得到的干膏得率和總黃酮的含量均較低，說明單純的酶解法作用不明顯。纖維素酶-乙醇提取法兩個指標(biāo)相對于纖維素酶-磷酸緩沖水溶液提取法以及乙醇回流提取法均有所提高，說明纖維素酶和乙醇對滇黃芩總黃酮的提取存在協(xié)同作用。纖維素酶-乙醇超聲提取法得到的干膏得率和總黃酮的含量最高，綜合評價指標(biāo)值最大，超聲對滇黃芩總黃酮的溶出也有促進(jìn)作用。

3.3 綜合評價比較 對滇黃芩總黃酮的提取得率和干膏得率兩個指標(biāo)進(jìn)行標(biāo)準(zhǔn)化處理，根據(jù)影響因素的主次選擇不同的加權(quán)系數(shù)，計算綜合評價指標(biāo)Y值，其提取方法的綜合評價比較見表3。

從表3可知Y值的大小順序為：纖維素酶-乙醇超聲提取法>乙醇超聲提取法>對煎煮法>乙醇回流提取法>纖維素酶-磷酸緩沖水溶液提取法。說明纖維素酶-乙醇超聲提取法適合滇黃芩總黃酮的提取，超聲、纖維素酶、乙醇對黃酮類化合物的提取有協(xié)同作用。

4 結(jié)論

在中藥制劑提取制備工藝流程中，中藥制劑的質(zhì)量受到多方面的影響，不僅要考慮到主成分的溶出度，也要考慮干膏得率，兩者綜合評價分析得出最佳提取工藝條件。根據(jù)實驗結(jié)果得出滇黃芩最佳提取方法為纖維素酶-乙醇超聲提取法，纖維素酶、超聲、乙醇、50℃的適宜水浴溫度，不僅使得滇黃芩總黃酮提取率增大，而且雜質(zhì)的含量明顯降低，有利于總黃酮的純化，為中藥中黃酮類成分的提取工藝研究奠定基礎(chǔ)。

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（收稿日期：2015.12.26）