輻射誘導(dǎo)分子lnc-RI穩(wěn)定敲低細(xì)胞系建立及其功能

常 誠(chéng)沈麗萍張學(xué)清李 琳李孝鑫王治東周平坤

1（南華大學(xué)公共衛(wèi)生學(xué)院 衡陽(yáng) 421000）

2（軍事醫(yī)學(xué)科學(xué)院放射與輻射醫(yī)學(xué)研究所 北京 100850）

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輻射誘導(dǎo)分子lnc-RI穩(wěn)定敲低細(xì)胞系建立及其功能

常 誠(chéng)1,2沈麗萍2張學(xué)清2李 琳2李孝鑫2王治東2周平坤1,2

1（南華大學(xué)公共衛(wèi)生學(xué)院 衡陽(yáng) 421000）

2（軍事醫(yī)學(xué)科學(xué)院放射與輻射醫(yī)學(xué)研究所 北京 100850）

摘要制備lnc-RI干涉表達(dá)的慢病毒顆粒，建立lnc-RI穩(wěn)定下調(diào)的HeLa細(xì)胞系，探索lnc-RI對(duì)細(xì)胞輻射敏感性的作用。首先將lnc-RI特異性干涉序列插入干涉表達(dá)載體pGLV2中，并制備慢病毒顆粒；然后，將慢病毒顆粒感染HeLa細(xì)胞，建立lnc-RI穩(wěn)定下調(diào)的細(xì)胞系，并通過(guò)RT-PCR檢測(cè)不同干涉序列對(duì)lnc-RI表達(dá)的干涉效果；最后，通過(guò)平板克隆形成實(shí)驗(yàn)分析lnc-RI表達(dá)下調(diào)對(duì)HeLa細(xì)胞放射敏感性的影響。結(jié)果顯示，成功制備了攜帶lnc-RI干涉序列的慢病毒顆粒，并成功感染HeLa細(xì)胞，通過(guò)RT-PCR實(shí)驗(yàn)鑒定獲得兩株lnc-RI穩(wěn)定敲低細(xì)胞系?？寺⌒纬蓪?shí)驗(yàn)發(fā)現(xiàn)，與對(duì)照相比，lnc-RI敲低的HeLa細(xì)胞系的放射敏感性增加。因此，初步證實(shí)lnc-RI表達(dá)下調(diào)增加HeLa細(xì)胞放射敏感性。

關(guān)鍵詞長(zhǎng)鏈非編碼RNA，lnc-RI，慢病毒，RNA干涉，電離輻射

wangzhidong1977@126.com

Supported by the National Natural Science Foundation of China (No.81573083 and 81402631)

First author: CHANG Cheng, female, was born in June 1987 and graduated from North China University of Science and Technology in 2012. Now she is a master candidate of University of South China, majoring in public health and preventive medicine and focusing on health toxicology. E-mail: 1109308002@qq.com

professor, E-mail: wangzhidong1977@126.com

Received 17 September 2015; accepted 20 October 2015

Establishment of stable knock-down cell lines and function study of lnc-RI, a radiation-induced gene

CHANG Cheng1,2SHEN Liping2ZHANG Xueqing2LI Lin2LI Xiaoxin2WANG Zhidong2ZHOU Pingkun1,2

1(College of Public Health, University of South China, Hengyang 421000, China)
2(Institute of Radiation Medicine, Academy of Military Medical Sciences, Beijing 100850, China)

ABSTRACT To prepare the lentivirus granules interfering lnc-RI and establish HeLa cell lines consistently down-regulating lnc-RI, as well as discover its effects on radiation damage, the lentivirus granules bearing various interfering sequences were prepared by lnc-RI carrying specific interfering sequences in to interfering plasmid pGLV2. The estable cell lines were established after infecting HeLa cells with lentivirus granules. RT-PCR was employed to determine the inhibitory effects of various interfering sequences on lnc-RI expression. DNA damage of the established estable cell lines were induced by ionizing radiation sensitivity of the established cell lines which weredetermined by colony formation assay. The results showed that the lentivirus granules bearing various interfering sequences were successfully prepared. The estable HeLa cell lines infected by lentivirus were obtained and lnc-RI expression levels was down-regulated. The results of colony formation assay showed that radiation sensitivity of the estable cell lines increased when treated with each dose gamma ray irradiation.

KEYWORDS Long non-coding RNA, lnc-RI, Lentivirus, RNA interference, Ionizing radiation

CLC TL71

長(zhǎng)鏈非編碼RNA (Large non-coding RNA, lncRNA)是一類轉(zhuǎn)錄本長(zhǎng)度大于200個(gè)核苷酸、絕大部分沒(méi)有長(zhǎng)閱讀框架、沒(méi)有編碼蛋白質(zhì)的功能、但像mRNA一樣具有帽式結(jié)構(gòu)和poly A尾巴的基因轉(zhuǎn)錄產(chǎn)物[1]。隨著基因組技術(shù)的發(fā)展，發(fā)現(xiàn)在人類基因組中大部分lncRNA存在轉(zhuǎn)錄現(xiàn)象，但與編碼蛋白質(zhì)的基因序列相比，其表達(dá)水平相對(duì)較弱[2]。lncRNA自身的表達(dá)水平不僅受到轉(zhuǎn)錄及轉(zhuǎn)錄后調(diào)控機(jī)制的嚴(yán)密調(diào)節(jié)[3]，它還具有調(diào)節(jié)多種重要的細(xì)胞生命活動(dòng)的生物學(xué)功能，如lncRNA能在表觀遺傳、基因組印記、轉(zhuǎn)錄及轉(zhuǎn)錄后水平上調(diào)控基因表達(dá)、參與X染色體沉默、染色體劑量補(bǔ)償效應(yīng)以及染色質(zhì)修飾、調(diào)節(jié)細(xì)胞周期、細(xì)胞分化、維持細(xì)胞結(jié)構(gòu)的完整性、 細(xì)胞內(nèi)物質(zhì)轉(zhuǎn)運(yùn)、干細(xì)胞重新編程和熱休克反應(yīng)等重要生命活動(dòng)過(guò)程與人類疾病的發(fā)生、發(fā)展也有著密切聯(lián)系[4-7]。lncRNA種類眾多，目前功能明確的lncRNA數(shù)量很少。

Lnc-RI是本實(shí)驗(yàn)室前期發(fā)現(xiàn)的輻射誘導(dǎo)表達(dá)的功能未知基因[8]，目前尚未見(jiàn)文獻(xiàn)對(duì)lnc-RI功能進(jìn)行報(bào)道。生物信息學(xué)分析表明其為一種長(zhǎng)鏈非編碼RNA(Gene ID: 401296)，定位于人7p22.3，全長(zhǎng)1423 bp，我們將其命名為lnc-RI (lncRNA radiation induced)。本研究構(gòu)建靶向lnc-RI的shRNA慢病毒顆粒并建立lnc-RI穩(wěn)定敲低的HeLa細(xì)胞系，初步探索lnc-RI對(duì)輻射敏感性的影響。

1　材料與方法

1.1材料

1.1.1細(xì)胞、質(zhì)粒和菌株

HEK293T細(xì)胞（人胚腎細(xì)胞）和Hela細(xì)胞（宮頸癌上皮細(xì)胞）為本實(shí)驗(yàn)室保存。慢病毒載體包裝系統(tǒng)（含pGag/Po1、pRev、pVSVG及穿梭質(zhì)粒pGLV2）由上海吉瑪公司構(gòu)建制備，采用TIANGEN公司的高純度質(zhì)粒小提中量試劑盒（離心柱形）提取質(zhì)粒DNA。大腸桿菌 Top10感受態(tài)細(xì)胞、嘌呤霉素為本室保存。

1.1.2試劑

反轉(zhuǎn)錄試劑盒購(gòu)自TaKaRa公司；DNA連接酶、限制性內(nèi)切酶(AgeI, EcoRI) 購(gòu)于MBI Fermentas；瓊脂糖DNA凝膠純化回收試劑盒購(gòu)買于Biomed；高純度質(zhì)粒小提中量質(zhì)粒提取試劑盒購(gòu)自于TIANGEN公司，質(zhì)粒體轉(zhuǎn)染試劑RNAi-Mate購(gòu)自吉瑪公司；TRIZOL購(gòu)自ambion公司；細(xì)胞培養(yǎng)基1640、H-DMEM及胎牛血清均為Gibco公司產(chǎn)品。

1.1.3特異性干涉序列和 PCR引物設(shè)計(jì)及合成

表1　shRNA對(duì)應(yīng)靶序列和lnc-RI及β-actin引物與探針序列Table 1 The shRNA sequence and primer, probe sequence of lnc-RI and β-actin

1.2方法

1.2.1細(xì)胞培養(yǎng)

293T細(xì)胞用含10％胎牛血清、0.1％青霉素和鏈霉素的H-DMEM培養(yǎng)基，HeLa細(xì)胞用含10％胎牛血清、0.1％青霉素和鏈霉素的1640培養(yǎng)基，5％ CO2、飽和濕度、37℃培養(yǎng)箱中培養(yǎng)。

1.2.2干涉載體構(gòu)建與鑒定

對(duì)載體LV2進(jìn)行雙酶切（內(nèi)切酶為AgeI和EcoRI），經(jīng)瓊脂糖電泳回收新合成的載體DNA。將合成的目的DNA進(jìn)行退火反應(yīng)，然后用DNA連接酶將形成的雙鏈DNA與回收的載體DNA進(jìn)行連接反應(yīng)（反應(yīng)條件：22℃，1 h）。連接后的產(chǎn)物轉(zhuǎn)入感受態(tài)細(xì)胞（大腸桿菌 Top10）中，挑取3?5個(gè)單克隆菌落并進(jìn)行PCR鑒定，挑選鑒定陽(yáng)性的克隆進(jìn)行搖菌。根據(jù)質(zhì)粒提取試劑盒提取質(zhì)粒，用 EcoRI酶對(duì)提取的質(zhì)粒用進(jìn)行單酶切鑒定，酶切鑒定正確的送去公司進(jìn)行基因測(cè)序分析。

1.2.3包裝、收取慢病毒顆粒

293T細(xì)胞在15cm培養(yǎng)皿中培養(yǎng)至60％～70％融合時(shí)除去培養(yǎng)液，加8 mL無(wú)血清的H-DMEM培養(yǎng)液。取一支高壓滅菌的10 mL離心管，加入1.5 mL無(wú)血清無(wú)抗生素的H-DMEM培養(yǎng)基，然后加入含目的序列的重組干涉質(zhì)粒pGLV2和不同的包裝質(zhì)粒（pGag/Po1、pRev和 pVSVG），混勻，然后再取一支高壓滅菌的10 mL離心管，加入1.5 mL無(wú)血清無(wú)抗生素的H-DMEM培養(yǎng)基，再加入300 μL RNAi-Mate，靜置5 min，然后將兩管混合，靜置15 min。將混合物加到含有8 mL培養(yǎng)液的15 cm培養(yǎng)皿中，在5％ CO2、飽和濕度、37℃培養(yǎng)箱中培養(yǎng)6 h后，更換為18 mL含10％血清的H-DMEM新鮮培養(yǎng)液。繼續(xù)培養(yǎng)72 h后，將培養(yǎng)皿中細(xì)胞上清液吸至50 mL離心管，在4℃，4000 r/min，離心4 min后，將離心管上清液倒入50 mL注射器內(nèi)，用0.45 μm過(guò)濾器過(guò)濾。濾液經(jīng)4℃，20000 r/min，2 h離心將濃縮液收集分裝，?80℃保存（因慢病毒干涉質(zhì)粒無(wú)綠色熒光蛋白(Green fluorescent protein, GFP)元件，故采用LV2-GFP質(zhì)粒作為對(duì)照，平行操作作為參考）。

按3×104個(gè)細(xì)胞/孔的濃度接種96孔板，混勻后于37℃、5％ CO2條件下培養(yǎng)24 h。將同時(shí)獲得的對(duì)照病毒LV2-GFP原液10 μL，用含10％ FBS 的H-DMEM培液10倍稀釋3～5個(gè)梯度，加入終濃度為5 μg/mL的Polybrene促進(jìn)感染。然后除去培養(yǎng)液，按100 μL/孔加入稀釋的不同梯度的病毒液，同時(shí)設(shè)立陰性對(duì)照和空白對(duì)照組，于5％ CO2、飽和濕度、37℃培養(yǎng)箱中培養(yǎng)24 h。吸棄96孔板中的稀釋病毒液，每孔加入100 μL 含10％ FBS的HDMEM培養(yǎng)液，于37℃、5％ CO2培養(yǎng)箱中繼續(xù)培養(yǎng)72 h。利用熒光顯微鏡分析GFP 表達(dá)情況，并計(jì)算病毒滴度(TU/mL)：

觀察平時(shí)的語(yǔ)文教學(xué)，我們就會(huì)發(fā)現(xiàn)有些學(xué)生的預(yù)習(xí)不主動(dòng)，效果差，這直接影響了課堂教學(xué)效果。由于沒(méi)有預(yù)習(xí)或預(yù)習(xí)效果差，上課時(shí)他們沒(méi)法跟上預(yù)習(xí)的同學(xué)的思維，無(wú)法跟上老師的教學(xué)節(jié)奏，思考不深入，回答不深刻、不全面。因此，指導(dǎo)學(xué)生掌握科學(xué)的預(yù)習(xí)方法尤為重要。我覺(jué)得應(yīng)從以下方面進(jìn)行預(yù)習(xí)：

病毒滴度=(P×N/100×V) ×1/FD。

其中：P = ％GFP+cells；N 為轉(zhuǎn)染時(shí)的細(xì)胞數(shù)；V 為每孔加入病毒稀釋液體積(μL)；FD為稀釋因子(Dilution factor)。

1.2.4lnc-RI穩(wěn)定下調(diào)表達(dá)細(xì)胞系的構(gòu)建及PCR鑒定

實(shí)驗(yàn)前一天分別接種3×105個(gè)/孔HeLa細(xì)胞到6孔細(xì)胞培養(yǎng)板中，所加培養(yǎng)基為2 mL。培養(yǎng)24 h后，將攜帶不同lnc-RI干涉序列的LV2-NC、LV2-lnc-RI-1和LV2-lnc-RI-2的慢病毒上清按感染復(fù)數(shù)(Multiplicity of infection, MOI)為20，去感染HeLa細(xì)胞，同時(shí)每孔加入終濃度為10 μg/mL的Polybrene以促進(jìn)慢病毒的感染力。于37℃、5％ CO2培養(yǎng)箱中溫育24 h后，因慢病毒感染成功的細(xì)胞具有嘌呤霉素抗性，所以更換含1.5 g/mL嘌呤霉素、10％ FBS的1640培養(yǎng)液以篩選穩(wěn)定細(xì)胞系。維持含1.5 g/mL嘌呤霉素藥物繼續(xù)培養(yǎng)3～5天，不再死亡的細(xì)胞即為lnc-RI穩(wěn)定敲低表達(dá)細(xì)胞系，替換含嘌呤霉素(0.5 g/mL)細(xì)胞培養(yǎng)液維持培養(yǎng)。將建立的穩(wěn)定細(xì)胞系分別命名為HeLa-LV2-NC、HeLa-LV2-lnc-RI-1和HeLa-LV2-lnc-RI-2。

將病毒感染的細(xì)胞系根據(jù)Trizol法提取細(xì)胞總RNA，按TAKARA試劑盒操作說(shuō)明經(jīng)反轉(zhuǎn)錄和PCR檢測(cè)lnc-RI 表達(dá)。PCR條件為95℃ 3 min、95℃10 s、55℃ 30 s、72℃ 30 s，40循環(huán)，所得實(shí)驗(yàn)結(jié)果經(jīng)2?△△CT法計(jì)算其相對(duì)定量值。

1.2.5細(xì)胞平板克隆形成實(shí)驗(yàn)

取對(duì)數(shù)生長(zhǎng)期的細(xì)胞HeLa-LV2-NC、HeLa-LV2-lnc-RI-1、HeLa-LV2-lnc-RI-2進(jìn)行細(xì)胞計(jì)數(shù)，分別將三種細(xì)胞各按500個(gè)/孔細(xì)胞數(shù)接種于6孔細(xì)胞培養(yǎng)板。接種后24 h，分別給與0、1、2、4、6 Gy60Co γ-射線照射處理（劑量率：104.89 cGy/min），每種細(xì)胞每個(gè)劑量點(diǎn)接種3個(gè)復(fù)孔。照射后繼續(xù)培養(yǎng)，隔3～4d換一次液。當(dāng)細(xì)胞培養(yǎng)板中出現(xiàn)肉眼可見(jiàn)的克隆時(shí)（約12d）倒掉培養(yǎng)液，用PBS洗2次，甲醇固定30 min，去固定液，自然風(fēng)干后Giemsa染色30 min，流水清洗后室溫晾干，統(tǒng)計(jì)細(xì)胞克隆數(shù)（普通顯微鏡下計(jì)數(shù)≥50個(gè)細(xì)胞的單克?。?。計(jì)算細(xì)胞抑制率：細(xì)胞克隆抑制率=照射組克隆數(shù)目/未照射組克隆數(shù)目× 100％。

1.2.6數(shù)據(jù)處理

所有實(shí)驗(yàn)均重復(fù)3次，采用SPSS17.0軟件對(duì)所得數(shù)據(jù)進(jìn)行統(tǒng)計(jì)學(xué)分析，組間比較采用t-test，p<0.05為差異具有統(tǒng)計(jì)學(xué)意義。

2　結(jié)果

2.1干涉載體構(gòu)建及病毒包裝

在pGLV2載體多克隆位點(diǎn)處插入包含不同干涉序列的雙鏈DNA片段，所得的重組質(zhì)粒進(jìn)行測(cè)序分析，結(jié)果比對(duì)表明：插入的干涉序列與理論設(shè)計(jì)的目的序列一致。將成功構(gòu)建的干涉載體命名為L(zhǎng)V2(U6/Puro)-lnc-RI-1和LV2 (U6/ Puro)-lnc-RI-2。

我們采用的pGag/Po1、pRev、pVSVG和pGLV2慢病毒系統(tǒng)共轉(zhuǎn)染293T細(xì)胞，24 h后熒光顯微鏡下觀察，同批次轉(zhuǎn)染LV2-GFP質(zhì)粒的細(xì)胞大部分可見(jiàn)綠色熒光表達(dá)，說(shuō)明慢病毒干涉體系已經(jīng)順利轉(zhuǎn)染細(xì)胞。換取含有10％ FBS的H-DMEM培養(yǎng)液培養(yǎng)72 h，收集細(xì)胞上清，經(jīng)濃縮后獲得慢病毒上清。將制備的慢病毒顆粒分別命名為L(zhǎng)V2-NC、LV2-lnc-RI-1和LV2-lnc-RI-2。將3×104個(gè)/孔的293T細(xì)胞接種于96孔板中，加入不同稀釋倍數(shù)的病毒上清，培養(yǎng)24 h。吸棄96孔板中的稀釋病毒液，每孔加100 μL 含10％ FBS的H-DMEM培液，培養(yǎng)72 h，收集細(xì)胞，利用同批次GFP 熒光表達(dá)比例結(jié)合稀釋倍數(shù)計(jì)算病毒滴度。如圖1所示，稀釋倍數(shù)為10?2和10?3的細(xì)胞感染效率接近100％，按照10?3為最低的飽和滴度，經(jīng)計(jì)算分析，LV2-NC、LV2-lnc-RI-1 和LV2-lnc-RI-2的病毒滴度約為1×109TU/mL。

2.2穩(wěn)定干涉細(xì)胞系建立及干涉效果鑒定

將攜帶不同特異性干涉序列LV2-lnc-RI-1、LV2-lnc-RI-2和LV2-NC分別感染 Hela細(xì)胞(20 MOI)，感染后24 h加入含有嘌呤霉素(1.5 g/mL)的培養(yǎng)液繼續(xù)培養(yǎng)3～5 d，細(xì)胞不再死亡，獲得穩(wěn)定細(xì)胞系。將各個(gè)感染慢病毒顆粒的Hela細(xì)胞系分別命名為HeLa-LV2-NC、HeLa-LV2-lnc-RI-1和Hela-LV2-lnc-RI-2。

將上述幾種感染病毒顆粒的Hela細(xì)胞系HeLa-LV2-NC、HeLa-LV2-lnc-RI-1和HeLa-LV2-lnc-RI-2分別提取總RNA后進(jìn)行實(shí)時(shí)定量 PCR，以β-actin作為內(nèi)參進(jìn)行分析，結(jié)果如圖2所示。與對(duì)照組HeLa-LV2-NC細(xì)胞相比，干涉細(xì)胞系HeLa-LV2-lnc-RI-1和HeLa-LV2-lnc-RI-2的Lnc-RI的相對(duì)表達(dá)量分別下降為0.73和0.16，說(shuō)明建立的兩個(gè)慢病毒干涉細(xì)胞系Lnc-RI的表達(dá)均受到不同程度的抑制，慢病毒干涉細(xì)胞系HeLa-LV2-lnc- RI-1 和HeLa-LV2-lnc-RI-2為有效的抑制Lnc-RI基因表達(dá)的細(xì)胞模型。

2.3細(xì)胞平板克隆形成實(shí)驗(yàn)

為了分析lnc-RI對(duì)HeLa細(xì)胞輻射敏感性的影響，我們進(jìn)行細(xì)胞克隆形成實(shí)驗(yàn)。結(jié)果如圖3所示，對(duì)照細(xì)胞LV2-NC受照1、2、4、6 Gy劑量后，克隆數(shù)目分別為未照射組的95.7％、89.4％、68.2％、30.1％；HeLa-LV2-lnc-RI-1和Hela-LV2-lnc-RI-2細(xì)胞經(jīng)l、2、4、6 Gy60Co γ-射線照射后，克隆數(shù)目分別為未照射組的92.1％、81.3％、63.0％、23.8％ 和90.5％、79.1％、53.2％、20.7％。統(tǒng)計(jì)學(xué)分析表明，在6 Gy以內(nèi)的照射條件下，與對(duì)照細(xì)胞系相比，lnc-RI表達(dá)下調(diào)的HeLa細(xì)胞照射后克隆形成能力下降，提示lnc-RI表達(dá)下降增加HeLa細(xì)胞的放射敏感性。

3　討論

隨著芯片技術(shù)的發(fā)展和人類基因組測(cè)序的完成，越來(lái)越多的長(zhǎng)鏈非編碼RNA為人們所熟知。到目前為止，已有100000 多種lncRNA的轉(zhuǎn)錄本被發(fā)現(xiàn)[9-10]，但相對(duì)于蛋白質(zhì)編碼序列以及各種小分子RNA，對(duì)于lncRNA 的研究相對(duì)較少。隨著研究深入，越來(lái)越多的lncRNA的功能將被揭示。電離輻射可以造成嚴(yán)重的DNA損傷反應(yīng)(DNA-damage response, DDR)，如：細(xì)胞DNA雙鏈的斷裂，堿基的錯(cuò)配與缺失，細(xì)胞周期檢查點(diǎn)異常，細(xì)胞發(fā)生凋亡等，是發(fā)生染色體畸變、基因突變、細(xì)胞異常死亡的主要原因之一[11]。開展輻射相關(guān)lncRNA研究將有助于進(jìn)一步闡明輻射誘導(dǎo)細(xì)胞損傷的分子機(jī)制。有研究發(fā)現(xiàn)，lincRNA-p21、PANDA1 (p21 associated ncRNA DNA damage activated)等 lncRNA分子參與輻射誘導(dǎo)細(xì)胞損傷過(guò)程[12-13]。但是，關(guān)于電離輻射相關(guān)lncRNA的研究還很少。

本研究中的lnc-RI是本實(shí)驗(yàn)室前期研究篩選到的一種輻射誘導(dǎo)表達(dá)的一種長(zhǎng)鏈非編碼RNA (Gene ID: 401296)[8]。目前，關(guān)于該分子沒(méi)有任何功能研究報(bào)道，我們前期研究首次發(fā)現(xiàn)電離輻射可以誘導(dǎo)lnc-RI表達(dá)上調(diào)，提示其可能參與電離輻射誘導(dǎo)損傷過(guò)程。本研究采用慢病毒系統(tǒng)建立靶向lnc-RI的干涉細(xì)胞系，并初步探索lnc-RI在輻射誘導(dǎo)細(xì)胞損傷中的作用。采用生物信息學(xué)方法結(jié)合RT-PCR鑒定，獲得兩條靶向lnc-RI的干涉序列，并成功制備其慢病毒顆粒，獲得兩株lnc-RI特異性下調(diào)的干涉細(xì)胞系，lnc-RI抑制效果分別為對(duì)照組的73％和16％。隨后采用克隆形成實(shí)驗(yàn)，探索lnc-RI對(duì)輻射誘導(dǎo)細(xì)胞損傷的作用。結(jié)果分析表明，與未照射細(xì)胞相比，6 Gy照射對(duì)HeLa-LV2-lnc-RI-1、HeLa-LV2-lnc-RI-2的克隆形成抑制率分別為23.8％ 和20.7％，明顯低于對(duì)照細(xì)胞系(30.1％)，這表明，下調(diào)lnc-RI表達(dá)增強(qiáng)HeLa細(xì)胞的輻射敏感性。結(jié)合lnc-RI為電離輻射誘導(dǎo)表達(dá)，提示lnc-RI具有抗輻射損傷的作用。本研究篩選獲得靶向功能未知分子lnc-RI的干涉序列，并成功制備慢病毒顆粒，建立lnc-RI穩(wěn)定下調(diào)的HeLa細(xì)胞系，初步發(fā)現(xiàn)lnc-RI的抗輻射作用。

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Corresponding author:ZHOU Pingkun, doctoral tutor, professor, E-mail: zhoupk@bmi.ac.cn; Ph.D. WANG Zhidong, associate

收稿日期：初稿2015-09-17；修回2015-10-20

通訊作者：周平坤，博士生導(dǎo)師，研究員，E-mail: zhoupk@bmi.ac.cn；王治東，副研究員，博士，E-mail:

基金項(xiàng)目：國(guó)家自然科學(xué)基金面上項(xiàng)目(81573083)和國(guó)家自然科學(xué)基金青年項(xiàng)目(81402631)資助

DOI:10.11889/j.1000-3436.2016.rrj.34.010203

中圖分類號(hào)TL71

第一作者：常誠(chéng)，女，1987年6月出生，2012年畢業(yè)于華北理工大學(xué)，現(xiàn)為南華大學(xué)在讀研究生，公共衛(wèi)生與預(yù)防醫(yī)學(xué)專業(yè)，研究方向衛(wèi)生毒理學(xué)，E-mail: 1109308002@qq.com