全自動(dòng)微柱凝膠技術(shù)在ABO、RhD血型鑒定中的應(yīng)用分析

張 茜，陳黎輝

全自動(dòng)微柱凝膠技術(shù)在ABO、RhD血型鑒定中的應(yīng)用分析

張 茜，陳黎輝

全自動(dòng)微柱凝膠技術(shù)；ABO；RhD；血型鑒定

血型鑒定工作是臨床醫(yī)療工作的重要組成部分，是保障輸血安全的基礎(chǔ)。目前，血型鑒定的方法很多，例如玻片法、紙板法和試管法等［1］。隨著醫(yī)療科技的不斷進(jìn)步，全自動(dòng)微柱凝膠技術(shù)開始廣泛應(yīng)用于ABO、RhD的血型鑒定中，具有較強(qiáng)的特異性，安全可靠，消除了人為因素對鑒定結(jié)果的影響［2］。為了探討全自動(dòng)微柱凝膠技術(shù)在ABO、RhD血型鑒定中的臨床應(yīng)用價(jià)值，筆者所在醫(yī)院選取了6820例ABO和RhD血型抗原標(biāo)本進(jìn)行了如下研究。

1 資料與方法

1.1 一般資料 于2016年1月—3月筆者所在醫(yī)院采集6820例首患者的首次血樣標(biāo)本。

1.2 試劑與方法

1.2.1 檢測準(zhǔn)備 （1）血樣采集?？崭?fàn)顟B(tài)下采集5 ml外周靜脈血，置入EDTA－K2抗凝真空無菌采血管，3 h內(nèi)完成檢測。（2）儀器準(zhǔn)備。血型血清學(xué)多用離心機(jī)（日本久保田，KA－2200型），自動(dòng)加樣系統(tǒng) （Swing Twin Sampler）和瑞士達(dá)亞美生產(chǎn)的SaxoID－Reader系統(tǒng)［3］。（3）試劑準(zhǔn)備。實(shí)驗(yàn)室自制的人源抗A、抗B血清，長春博德生物技術(shù)有限責(zé)任公司生產(chǎn)的單克隆抗A、抗B標(biāo)準(zhǔn)血清以及凹形ABO/RhD血型鑒定紙板，上海血液生物醫(yī)藥有限公司生產(chǎn)的3%A、B、O紅細(xì)胞試劑和IgM單克隆抗D血清，瑞士達(dá)亞美生產(chǎn)的ABO/RhD血型鑒定卡［4］。

1.2.2 檢測方法 A組采用紙板法鑒定，參照玻片法操作，在抗A、抗B和抗D的紙板凹形檢測孔內(nèi)，分別滴入1滴對應(yīng)的標(biāo)準(zhǔn)血清和1滴3～5%的紅細(xì)胞懸液，攪拌均勻后，在Ac和Bc檢測孔內(nèi)，滴1滴受檢者血漿，然后分別滴1滴3%A、B型紅細(xì)胞試劑，攪拌均勻。

B組采用全自動(dòng)微柱凝膠技術(shù)鑒定，使用自動(dòng)加樣系統(tǒng)，嚴(yán)格按照操作要求執(zhí)行，然后使用SaxoID－Reader系統(tǒng)對血型離心、鑒定結(jié)果等信息進(jìn)行保存。

若A組和B組的血型鑒定結(jié)果不一致，則采用經(jīng)典試管法，同時(shí)配合吸收放射實(shí)驗(yàn)、唾液型物質(zhì)抑制實(shí)驗(yàn)以及檢測H抗原強(qiáng)度來確定最終血型［5］。

1.3 觀察指標(biāo) 對兩組ABO和RhD血型鑒定的一次性準(zhǔn)確率進(jìn)行統(tǒng)計(jì)和比較。A組的ABO鑒定結(jié)果參照正反定型結(jié)果，RhD血型則以反應(yīng)系統(tǒng)是否出現(xiàn)凝集作為判定標(biāo)準(zhǔn)；B組則為自動(dòng)判定結(jié)果［6］。

1.4 統(tǒng)計(jì)學(xué)分析 采用SPSS17.0軟件對研究數(shù)據(jù)進(jìn)行分析，計(jì)數(shù)資料用%表示，進(jìn)行χ2檢驗(yàn)，當(dāng)P＜0.05時(shí)，差異有統(tǒng)計(jì)學(xué)意義。

2 結(jié)果

2.1 血型鑒定一次性準(zhǔn)確率比較 經(jīng)比較，A組ABO血型的一次性準(zhǔn)確率為99.69%，低于B組的99.90%，組間差異有統(tǒng)計(jì)學(xué)意義 （P＜0.05）；A組RhD血型的一次性準(zhǔn)確率為99.96%，和B組的100%比較，差異無統(tǒng)計(jì)學(xué)意義（P＞0.05）。見表1。

表1 兩種鑒定方法的一次性準(zhǔn)確率比較

2.2 最終定型結(jié)果 經(jīng)試管法配合吸收放射實(shí)驗(yàn)、唾液型物質(zhì)抑制實(shí)驗(yàn)以及檢測H抗原強(qiáng)度，上述未定型標(biāo)本均正確定型。

3 討論

試管法、玻片法和紙板法是血型鑒定的傳統(tǒng)方法，不同的鑒定方法均有顯著優(yōu)勢，但也存在一定的局限性。其中試管法是ABO和RhD血型鑒定的金標(biāo)準(zhǔn)，鑒定結(jié)果可靠，但是由于其操作很難進(jìn)行規(guī)范化管理，所以不適合大量標(biāo)本的批量處理。玻片法的操作比較簡單，而且不需要進(jìn)行離心處理，在血液普查中具有顯著優(yōu)勢，但是反應(yīng)速度較慢，耗時(shí)較長，很容易因?yàn)楹雎苑磻?yīng)較弱的凝集，導(dǎo)致定型錯(cuò)誤。紙板法則是在玻片法基礎(chǔ)上的一種改良，能夠同時(shí)完成ABO正反和RhD鑒定，但是周圍環(huán)境和觀察時(shí)間等都會對鑒定結(jié)果造成干擾。

隨著醫(yī)學(xué)技術(shù)的不斷進(jìn)步和相關(guān)設(shè)備的更新，全自動(dòng)微柱凝膠技術(shù)應(yīng)運(yùn)而生，并開始在血型鑒定中廣泛使用。微柱凝膠技術(shù)屬于免疫學(xué)檢測技術(shù)的范疇，在常規(guī)紅細(xì)胞血型血清學(xué)檢測中，已被歐美發(fā)達(dá)國家接受。其中的凝膠會產(chǎn)生分子篩效應(yīng)，所以紅細(xì)胞為主凝膠中，可以和相對應(yīng)的抗體結(jié)合。經(jīng)過低速的離心處理后，凝集的紅細(xì)胞就會在凝膠中懸浮，但是假若紅細(xì)胞沒有和抗體結(jié)合，則會沉淀在凝膠的底部［7］。

正因?yàn)槲⒅z技術(shù)具備上述特點(diǎn)，所以在ABO血型及其亞型的鑒定中具有顯著的優(yōu)勢。由于很多亞型的紅細(xì)胞在和標(biāo)準(zhǔn)的血清發(fā)生反應(yīng)后，會呈現(xiàn)出混合視野，就是在同一個(gè)反應(yīng)體系中，既存在凝集的細(xì)胞群，也存在游離的細(xì)胞群。在這種情況下，若采用傳統(tǒng)的試管法或者紙板法就很難發(fā)現(xiàn)，極容易忽略，導(dǎo)致定型錯(cuò)誤。但是采用全自動(dòng)微柱凝膠技術(shù)，則可以清晰地呈現(xiàn)雙視野。在本次血型的鑒定中，B組只有1例在后來的檢驗(yàn)中，被證實(shí)為A3亞型的標(biāo)本，該結(jié)果充分證實(shí)，在ABO血型的亞型鑒定中，全自動(dòng)微柱凝膠技術(shù)具有顯著優(yōu)勢。

紙板法是在玻片法的基礎(chǔ)上加以改良形成的，因?yàn)槟軌蛲瑫r(shí)進(jìn)行ABO和RhD的血型鑒定，所以在廣大的基層醫(yī)院中，是血型鑒定的主要方法。由于紙板法的鑒定結(jié)果會受到多種外界因素的影響，所以很容易產(chǎn)生假陽性結(jié)果。該研究中，A組ABO血型的一次性準(zhǔn)確率為99.69%，低于B組的99.90%，組間差異存在統(tǒng)計(jì)學(xué)意義（P＜0.05）。其中有10例出現(xiàn)了正反定型不一致，很有可能是受到血漿蛋白的干擾。即使改用試管法后仍然無法定型，經(jīng)過對患者紅細(xì)胞洗滌在反定體系中滴加鹽水等處理后方可正確定型。但是這10例標(biāo)本使用全自動(dòng)微柱凝膠技術(shù)則一次正確定型，表示該鑒定技術(shù)不受血漿蛋白等因素的影響。

同時(shí)，本組的研究結(jié)果還顯示，A組RhD血型的一次性準(zhǔn)確率為99.96%，和B組的100%比較，差異無統(tǒng)計(jì)學(xué)意義（P＞0.05）。該結(jié)果表示，柱凝膠技術(shù)的敏感度較高，具有較強(qiáng)的抗干擾能力，結(jié)果可靠。

綜合上述分析可知，全自動(dòng)微柱凝膠技術(shù)在ABO、RhD血型鑒定中具有較高的準(zhǔn)確率，安全可靠，靈敏度較高，亞型發(fā)現(xiàn)率較高，有助于實(shí)現(xiàn)標(biāo)準(zhǔn)化和規(guī)范化的實(shí)驗(yàn)操作，減少人為因素的差錯(cuò)率，而且能永久保存，為醫(yī)療工作提供服務(wù)，具有較高的臨床應(yīng)用價(jià)值。

［1］孟慶寶，單萬水，張 平.一種國產(chǎn)全自動(dòng)血庫系統(tǒng)的臨床應(yīng)用效果評估［J］.中國輸血雜志，2015，28（2）：143－145.

［2］王 玲，駱 宏，姬艷麗.探討RhD陰性確認(rèn)試驗(yàn)預(yù)測胎母輸血綜合征的臨床應(yīng)用［J］.臨床輸血與檢驗(yàn)，2015，17（2）：150－152.

［3］梅方超，黃 飛，吳麗娜，等.HSI全自動(dòng)微柱凝膠免疫檢測分析儀在血型鑒定中的應(yīng)用評價(jià)［J］.臨床血液學(xué)雜志：輸血與檢驗(yàn)，2015，28（4）：320－321，325.

［4］袁宏香，于艷華，張瑞金，等.戴安娜全自動(dòng)血型儀在血型鑒定及交叉配血中的應(yīng)用［J］.國際檢驗(yàn)醫(yī)學(xué)雜志，2014，35（11）：1480－1481.

［5］田 寧.手工微柱凝膠免疫檢驗(yàn)法在ABO、RhD血型抗原鑒定中的應(yīng)用［J］.大家健康：學(xué)術(shù)版，2014，8（8）：81－82.

［6］劉桂曄.卡式微柱凝膠法在ABO、RhD血型鑒定中的應(yīng)用價(jià)值［J］.生物技術(shù)世界，2013（8）：70.

［7］吳 濤，張長虹，周 俊，等.全自動(dòng)血型及配血系統(tǒng)在新生兒輸血安全中的應(yīng)用［J］.臨床血液學(xué)雜志：輸血與檢驗(yàn)版，2012，25（6）：337－340.

［2016－03－12收稿，2016－04－10修回］ ［本文編輯：吳 蓉］

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10.14172/j.issn1671－4008.2016.09.021

450007河南鄭州，解放軍153醫(yī)院輸血科（張茜，陳黎輝）