復(fù)方依山紅化學(xué)成分的研究

韋建華　李常偉　廣西中醫(yī)藥大學(xué)　530001南寧市明秀東路179號向　楊　三峽大學(xué)仁和醫(yī)院　443001蒙秋艷　盧汝梅　龐宇舟廣西中醫(yī)藥大學(xué)　530001

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復(fù)方依山紅化學(xué)成分的研究

韋建華李常偉廣西中醫(yī)藥大學(xué)530001南寧市明秀東路179號
向楊三峽大學(xué)仁和醫(yī)院443001
蒙秋艷盧汝梅龐宇舟*廣西中醫(yī)藥大學(xué)530001

摘要目的：研究復(fù)方依山紅的化學(xué)成分。方法：采用乙醇滲漉提取，利用硅膠柱色譜、葡聚糖凝膠LH-20等色譜技術(shù)進行分離純化，根據(jù)理化性質(zhì)和波譜數(shù)據(jù)進行化合物的結(jié)構(gòu)鑒定。結(jié)果：從復(fù)方依山紅中分離鑒定了14個化合物，分別為2，2'-氧代雙（1，4-二叔丁苯）（1）、棕櫚酸（2）、白樺脂酸（3）、硬脂酸（4）、8-甲雷杜辛（5）、芒柄花素（6）、香草酸（7）、槲皮素（8）、木犀草素（9）、沒食子酸（10）、二十二烷酸（11）、1，6-己內(nèi)酰胺（12）、齊墩果酸（13）、相思子堿（14）。結(jié)論：化合物1～14主要是黃酮類和酚酸類成分，其中化合物1、5、11、12為首次從該復(fù)方中分離得到。

關(guān)鍵詞依山紅；化學(xué)成分；分離；純化；結(jié)構(gòu)

復(fù)方依山紅由滿山紅、毛雞骨草、牛大力組成，作為廣西民間用藥，具有祛邪排毒、清利散瘀、疏通道路、扶助正氣之功效，臨床上用于慢性乙型肝炎具有較好的療效。其中牛大力含有苯丙素類、黃酮類、三萜類、植物甾醇等成分［1-3］。滿山紅的研究較少，僅見其生藥學(xué)和揮發(fā)性成分的研究報道［4-5］。而毛雞骨草是常用的抗肝炎草藥，研究報道較多，其含有黃酮類［6］、酚酸類、生物堿、三萜類、甾醇等成分［7］?，F(xiàn)代研究表明，復(fù)方依山紅的水提取物、醇提取物對CCl4所致急性肝損傷有降酶保肝的作用［8］。為了進一步闡明該復(fù)方的藥效物質(zhì)基礎(chǔ)，本研究采用現(xiàn)代中藥化學(xué)方法對復(fù)方依山紅的化學(xué)成分進行分離純化、結(jié)構(gòu)鑒定，從中分離得到14個化合物，分別為2，2'-氧代雙（1，4-二叔丁苯）（1）、棕櫚酸（2）、白樺脂酸（3）、硬脂酸（4）、8-甲雷杜辛（5）、芒柄花素（6）、香草酸（7）、槲皮素（8）、木犀草素（9）、沒食子酸（10）、二十二烷酸（11）、1，6-己內(nèi)酰胺（12）、齊墩果酸（13）、相思子堿（14）。其中1、5、11、12為首次從該復(fù)方中分離得到。

1　儀器與材料

Waters Autospec Premier 776質(zhì)譜儀；瑞士Bruker AV-400MHz；顯微熔點測定儀XT4-100A（控溫型，北京科儀電光儀器廠）；Heidolph旋轉(zhuǎn)蒸發(fā)器（德國Heidolph公司）；Mettler-AE100電子分析天平（瑞士Mettler公司）；色譜柱：各種規(guī)格內(nèi)徑的普通玻璃柱；聚酰胺粉（30～60目、100～200目，國藥集團化學(xué)試劑公司）；D101大孔吸附樹脂（華東理工大學(xué)華昌聚合物有限公司）；Sephadex LH-20（美國pharmacia公司）；RP-C18反相硅膠（加拿大Silicycle公司）；MCI：聚苯乙烯型反相樹脂填料（北京慧德易科技有限公司）；其余試劑均為分析純，為國藥集團化學(xué)試劑有限公司提供。

2　提取與分離

取復(fù)方依山紅藥材粗粉10.0kg，用10倍量乙醇滲漉提取，回收溶劑得到總浸膏，加適量水懸浮，依次用石油醚（60～90℃）、乙酸乙酯、正丁醇萃取，回收溶劑，得到石油醚部位8 g，乙酸乙酯部位95 g，正丁醇部位100 g，水部位400 g和不溶物部位600 g。

取石油醚部位6.1 g，經(jīng)硅膠柱色譜分離，以石油醚-乙酸乙酯梯度洗脫。石油醚-乙酸乙酯（20∶1）洗脫，得到白色簇晶1（30 mg）；石油醚-乙酸乙酯（10∶1）洗脫，得到白色粉末2（10 mg）；石油醚-乙酸乙酯（5∶1）洗脫，得到白色針晶3（7 mg）。

取乙酸乙酯部位85.5 g，經(jīng)硅膠柱色譜分離，以石油醚-乙酸乙酯（50∶0→2∶1）和氯仿-甲醇（10∶0→0∶100）梯度洗脫。得到的9個洗脫流份經(jīng)硅膠、MCI、聚酰胺和Sephadex LH-20柱色譜分離，得到化合物4（10mg）、5（5mg）、6（4mg）、7（4 mg）、8（15 mg）、9（8 mg）、10（6 mg）、11（5 mg）、12（25 mg）、13（6 mg）。

取正丁醇部位54.7 g，經(jīng)大孔吸附樹脂柱色譜分離，以水-乙醇（水→20∶1→50∶1→75∶1→乙醇）梯度洗脫。水洗脫部分用MCI分離和Sephadex LH-20純化得到白色顆粒狀結(jié)晶14（20 mg）。

3　結(jié)構(gòu)鑒定

化合物1：白色簇晶，EI-MSm/ z：394［M］+，208，192，57；分子式為C28H42O。1H-NMR（400 MHz，CDCl3）δ：7.38［2H，d，H-3（3'）］，7.16［2H，dd，H-5（5'）］，7.57［2H，d，H-6（6'）］，1.30［18H，s，H-8，9，10（8'，9'，10'）］，1.36 ［12H，s，H-12，13（12'，13'）］，1.36［6H，s，H-14（14'）］；13C-NMR（100 MHz，CDCl3）δ：147.0［C-1（1）］，147.6［C-2 （2'）］，124.4［C-3（3'）］，138.5［C-4 （4'）］，123.9［C-5（5'）］，119.1［C-6 （6'）］，34.8［C-7（7'）］，31.4［C-8，9，10（8'，9'，10'）］，34.5［C-11（11'）］，30.1［C-12，13，14（12'，13'，14'）］。以上數(shù)據(jù)分析與文獻報道［9］基本一致，故鑒定化合物1為2，2'-氧代雙（1，4-二叔丁苯）［2，2'-oxybis （1，4-di-tert-butylbenzene）］。

化合物2：白色粉末，EI-MS m/z：185，171，157，143，129，115，101，73，分子式為C16H32O2。1H-NMR （400 MHz，CDCl3）δ：0.89（3H，t），1.29- 1.25［24H，m，H-（4～15）］，1.63 （2H，m），2.34（2H，t）；13C-NMR（100 MHz，CDCl3）δ：179.7（C-1），34.0（C-2），31.9（C-3），29.7～29.0（C-4～13），24.7（C-14），22.7（C-15），14.3（C-16）。以上數(shù)據(jù)分析與文獻報道［10］基本一致，故鑒定化合物2為棕櫚酸（palmitic acid）。

化合物3：白色針晶，EI-MS m/z：456［M］+，248，203；分子式為C30H48O3。1H-NMR（400 MHz，C5D5N）δ：0.88（3H，s，H-27），1.02（3H，s，H-26），1.18（3H，s，H-25），1.18（3H，s，H-24），1.23（3H，s，H-23），1.80 （3H，s，H-29），3.32（1H，m，H-3）；13C-NMR（100 MHz，C5D5N）δ：39.5 （C-1），28.3（C-2），78.1（C-3），39.5 （C-4），55.9（C-5），18.9（C-6），34.8 （C-7），41.1（C-8），51.0（C-9），37.6 （C-10），21.2（C-11），26.1（C-12），38.6（C-13），42.9（C-14），31.2（C-15），32.9（C-16），56.7（C-17），47.8（C-18），49.8（C-19），151.4（C-20），30.3（C-21），37.5（C-22），28.7（C- 23），16.4 （C-24），16.4（C-25），16.4（C-26），14.9 （C-27），178.9（C-28），19.5（C-29），110.0（C-30）。以上數(shù)據(jù)分析與文獻報道［11］基本一致，故鑒定化合物3為白樺脂酸（betulinic acid）。

化合物4：白色顆粒，EI-MS m/z：284［M］+，227［M-CH2-CH3］+，213［M-COOH-H］+，185，171，157，143，129，115，101，73，分子式為C18H36O2。1H-NMR（400 MHz，CDCl3）δ：0.87（3H，t，H-18），1.25［28H，m，H-（4～17）］，1.80（2H，m，H-3），2.53 （2H，t，H-2）；13C-NMR（100 MHz，CDCl3）δ：176.1（C-1），34.9（C-2），32.2（C-3），29.7～31.4［C-（4～15）］，25.7（C-16），23.0（C-17），14.3（C-18）。以上數(shù)據(jù)分析與文獻報道［12］基本一致，故鑒定化合物4為硬脂酸（stearic acid）。

化合物5：白色粉末，EI-MS m/z：298［M］+，283［M-CH3］+，255，166，138，132，89，63；分子式為C17H14O5。1H-NMR（400 MHz，CDCl3）δ：3.88（3H，s，4'-OCH3），3.79（3H，s，8-OCH3），7.73（1H，d，J=9.0 Hz，H-5）和7.03（1H，d，J=9.0 Hz，H-6）為鄰位偶合質(zhì)子信號；7.52（2H，d，J=8.4 Hz，H-2'，6'）和7.00（2H，d，J=8.4 Hz，H-3'，5'）為苯環(huán)1，4取代上的質(zhì)子信號。13C-NMR（100 MHz，CDCl3）δ：151.4（C-2），123.9（C-3），175.7（C-4），122.2（C-5），114.0 （C-6），152.9（C-7），133.9（C-8），145.0（C-9），119.0（C-10），124.8 （C-1'），130.2（C-2'），113.7（C-3'），159.7（C-4'），113.7（C-5'），130.2（C-6'），55.3（4'-OCH3），61.9（8-OCH3）。以上數(shù)據(jù)分析與文獻報道［13］基本一致，故鑒定化合物5為8-甲雷杜辛（8-O-Methylreyusi）。

化合物6：白色針晶，EI-MS m/z：268［M］+，253［M-CH3］+，225，197，132，117，89；分子式為C16H12O4。1H-NMR（400 MHz，CDCl3）δ：8.15（1H，d，J=8.8 Hz，H-5）和6.97 （1H，d，J=8.8 Hz，H-6）為鄰位偶合質(zhì)子信號，7.78（2H，d，J=8.6 Hz，H-2'，6'）和7.07（2H，d，J=8.6 Hz，H-3'，5'）為苯環(huán)1，4取代上的質(zhì)子信號，8.15，6.97，8.43形成ABX偶合系統(tǒng)，3.67（3H，s，-OCH3）。13C-NMR（100 MHz，C5D5N）δ：152.8 （C-2），124.6（C-3），175.6（C-4），128.2（C-5），115.9（C-6），164.2 （C-7），103.2（C-8），158.6（C-9），117.9（C-10），125.4（C-1'），130.8 （C-2'），114.2（C-3'），156.0（C-4'），114.2（C-5'），130.8（C-6'），55.2 （-OCH3）。以上數(shù)據(jù)分析與文獻報道［14］基本一致，故鑒定化合物6為芒柄花素（formononetin）。

化合物7：白色結(jié)晶，EI-MS m/z：168［M］+，153，125，108，97；分子式為C8H8O4。1H-NMR（400MHz，CDCl3）δ：7.50（1H，d，J=1.8 Hz，H-2），6.80（1H，d，J=8.4 Hz，H-5），7.52（1H，dd，J=1.8、8.4 Hz，H-6）為苯環(huán)的1，2，4-三取代，3.85（3H，s，3-OCH3）。13C-NMR（100 MHz，CD3OD）δ：123.2（C-1），115.8（C-2），148.6 （C-3），152.6（C-4），113.7（C-5），125.2（C-6），56.3（3-OCH3），170.2 （-COOH）。以上數(shù)據(jù)分析與文獻報道［15］基本一致，故鑒定化合物7為香草酸（vanillic acid）。

化合物8：黃色針晶，EI-MS m/ z：302［M］+，281，274，221，153［B2+］；分子式為C15H10O7。1H-NMR （400 MHz，DMSO-d6）δ：7.66（1H，d，J=2.0Hz，H-2'）、7.53（1H，dd，J=8.5、2.0 Hz，H-6'）、6.88（1H，d，J=8.5 Hz，H-5'），結(jié)合MS中153［B2+］離子峰，可知B環(huán)為3'、4'-二羥基取代。6.17（1H，d，J=2.0 Hz，H-6），6.39 （1H，d，J=2.0 Hz，H-8）以及12.48 （1H，s，5-OH），結(jié)合MS碎片離子分析可知A環(huán)為5-OH、7-OH取代。13C-NMR（100 MHz，DMSO- d6）δ：146.8（C-2），135.7（C- 3），175.8 （C-4），160.7（C-5），9 8.2（C-6），163.9（C-7），93.3（C-8），156.1（C-9），103.0（C-10），121.9（C-1'），115.6 （C-2'），145.0（C-3'），147.7（C-4'），115.0（C-5'），120.0（C-6'）。以上數(shù)據(jù)分析與文獻報道［16］基本一致，故鑒定化合物8為槲皮素（quercetin）。

化合物9：黃色針晶，EI-MS m/z：286［M］+，258，229，153，69；分子式為C15H10O6。1H-NMR（400 MHz，DMSO-d6）δ：7.38（1H，d，J=2.0 Hz，H-2'）、7.40（1H，dd，J=8.4、2.0 Hz，H-6'）、6.87（1H，d，J=8.4 Hz，H- 5'），結(jié)合MS中153［B2+］離子峰，可知B環(huán)為3'、4'-二羥基取代。6.15 （1H，d，J=2.0 Hz，H-6），6.41（1H，d，J=2.0 Hz，H-8）以及12.48（1H，s，5-OH）。13C-NMR（100 MHz，DMSO-d6）δ：163.9（C-2），102.7（C-3），181.6（C-4），157.3（C-5），98.9（C-6），164.5（C-7），93.9（C-8），161.9（C-9），103.5（C-10），119.0（C-1'），113.2 （C-2'），145.8（C-3'），150.1（C-4'），116.0（C-5'），121.2（C-6'）。以上數(shù)據(jù)分析與文獻報道［17］基本一致，故鑒定化合物9為木犀草素（luteolin）。

化合物10：白色針晶，EI-MS m/z：170［M］+，153，125，79；分子式為C7H6O5。1H-NMR（400 MHz， CD3OD）δ：7.07（2H，s，H-2，6）；13CNMR（100 MHz，CD3OD）δ：122.1 （C-1），110.3（C-2，6），146.4（C-3，5），139.5（C-4），170.5（C-7）。以上數(shù)據(jù)分析與文獻報道［18］基本一致，故鑒定化合物10為沒食子酸（gallic acid）。

化合物11：白色粉末，EI-MS m/z：340［M］+，256，185，171，157，143，129，115，101，73；分子式為C22H44O2。1H-NMR（400 MHz，CDCl3）δ：2.09（2H，t，H-2），1.52（2H，m，H-3），1.19（36H，m，H-4～21），0.82 （3H，t，H-22）；13C-NMR（100 MHz，CDCl3）δ：175.3（C-1），39.0（C-2），36.3（C-3），31.7（C-4），29.1～29.9 ［C-（5～19）］，25.6（C-20），22.4（C-21），13.8（C-22）。以上數(shù)據(jù)分析與文獻報道［19］基本一致，故鑒定化合物11為二十二烷酸（behenic acid）。

化合物12：白色結(jié)晶，EI-MS m/z：113［M］+；分子式為C6H11ON。1H-NMR（400 MHz，CDCl3+CD3OD）δ：2.01（2H，dd，J=7.3、7.3 Hz，H-2），1.47（2H，m，J = 7.5、7.5 Hz，H-3），1.17（2H，m，J = 7.2、7.5 Hz，H-4），1.35（2H，m，J = 7.2、7.2 Hz，H-5），3.00（2H，t，J = 6.5 Hz，H-6）；174.8 （C-1），36.3（C-2），25.6（C-3），29.1 （C-4），26.5（C-5），39.4（C-6）。以上數(shù)據(jù)分析與文獻報道［20］基本一致，故鑒定化合物12為1，6-己內(nèi)酰胺（1，6-Caprolactam）。

化合物13：白色簇晶，EI-MS m/z：456［M］+，438，410，248，234，207，203，189，175；分子式為C30H48O3。1H-NMR（400 MHz，C5D5N）δ：0.80 （3H，s，H-23），0.94（3H，s，H-24），0.96（3H，s，H-25），0.98（3H，s，H-26），1.18（3H，s，H-27），0.99（3H，s，H-29），1.05（3H，s，H-30），3.44（1H，dd，J=11.0、4.3 Hz，H-3），5.01（1H，t，J=2.3 Hz，H-12），2.72（1H，dd，H=15.0，5.0 Hz，H-18）；13C-NMR（100 MHz，C5D5N）δ：180.24的羰基信號，122.60（C-12），144.87（C-13），確定母核為齊墩果酸型的五環(huán)三萜類化合物。以上數(shù)據(jù)分析與文獻報道［21］基本一致，故鑒定化合物13為齊墩果酸（oleanolic acid）。

化合物14：白色顆粒狀結(jié)晶，EI-MSm/z：218［M］+，173［M-COOH］+，130，103，77；分子式為C12H14N2O2。1H-NMR（400 MHz，DMSO-d6）δ：7.29（1H，s，H-2），7.58（1H，d，J= 7.8 Hz，H-4），7.08（2H，m，H-5，6），7.36（1H，d，J=7.8 Hz，H-7），3.43 （2H，m，H-10），4.22（1H，dd，J= 4.8，7.8 Hz，H-11），2.5 5（3H，s，NH-CH3）；13C-NMR（100 MHz，DMSO-d6）δ：125.2（C-2），106.3（C-3），118.5（C-4），118.7（C-5），121.2（C-6），111.6（C-7），127.1（C-8），136.3（C-9），25.2（C-10），60.5（C-11），170.1 （C- 12），31.9（NH-CH3）。以上數(shù)據(jù)分析與文獻報道［22］基本一致，故鑒定化合物14為相思子堿（abrine）。

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（2015-12-27收稿/編輯陳明偉）

Study on Chemical Composition for the Compound Recipe of Yishanhong

Wei Jianhua Li Changwei Guangxi University of Chinese Medicine，NO.179，Mingxiu Dong Rd，Nanning，530001
Xiang Yang Ren he Hospital of Three Gorges University，443001 Meng Qiuyan Lu Rumei Pang Yuzhou Guangxi University of Chinese Medicine，530001

AbstractObjective: To study the chemical constituents for the compound recipe of Yishanhong. Methods: Percolation extraction with ethanol was applied on the compound，which is to be separated and purified by Silica gel column chromatography and Sephadex LH-20 chromatography. Structural identification of the compound was conducted based on the physicochemical properties and spectroscopic data. Results: Fourteen compounds were isolated from Yishanhong，and identified as 2，2'-oxybis（1，4-di-tert-butylbenzene）（1），palmitic acid（2），betulinic acid（3），stearic acid（4），8 -O -Methylreyusi（5），formononetin（6），vanillic acid（7），quercetin（8），luteolin（9），gallic acid （10），behenic acid（11），1，6-Caprolactam（12），oleanolic acid（13），abrine（（14）. Conclusion: Those compounds which isolated from Yishanhong are mainly flavonoids and phenolic acids. The compound 1，5，11 and 12 were isolated from Yishanhong for the first time.

Key wordsYishanhong；chemical constituents；isolate；purify；structures

*通信作者，E-mail：Pangyz422@sina.com.cn

作者簡介：韋建華，碩士，副教授，研究方向：中藥、民族藥化學(xué)成分及質(zhì)量控制研究

基金項目：國家十二五科技支撐計劃項目（編號：2013BAI11B06）；廣西科學(xué)研究與技術(shù)開發(fā)計劃項目（桂科重12118005-1-3）；廣西中醫(yī)藥大學(xué)賽恩斯新醫(yī)藥學(xué)院課題（編號：2012zr10）

中圖分類號：R284.1

文獻標識碼：A

文章編號：1003-0719（2016）02-0075-04