東莞地區(qū)珠蛋白生成障礙性貧血篩查及基因譜分析

邵錦歡,肖　翔,張達(dá)秀,鐘陽(yáng)青

(東莞市塘廈醫(yī)院檢驗(yàn)科，廣東東莞 523721)

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·論著·

東莞地區(qū)珠蛋白生成障礙性貧血篩查及基因譜分析

邵錦歡,肖翔,張達(dá)秀,鐘陽(yáng)青

(東莞市塘廈醫(yī)院檢驗(yàn)科，廣東東莞 523721)

摘要:目的了解東莞地區(qū)珠蛋白生成障礙性貧血(簡(jiǎn)稱地貧)的發(fā)生率及基因譜特征。方法收集2014年6月至2015年5月來(lái)該院就診的門(mén)診/住院患者的血液，根據(jù)血常規(guī)、電泳結(jié)果篩查疑似病例，再進(jìn)行Gap-PCR和反向斑點(diǎn)雜交法(RBD)確診地貧類(lèi)型。結(jié)果7 845 例樣本中疑似病例1 132例，疑似病例中檢出α和β地貧共662例，地貧基因總攜帶率為8.44%(662/7 845)。其中α-地貧412例，占5.25%，最常見(jiàn)的為αα/--SEA、-α3.7/αα兩型分別占α-地貧的61.17%和17.48%，還檢測(cè)出1例HKαα/--SEA混合型；β-地貧250例占3.19%，最常見(jiàn)的為βCD41-42/βN、βIVS-Ⅱ-654/βN、βCD17/βN這3型分別占β-地貧基因型的37.6%、23.2%和16.0%；α-地貧復(fù)合β-地貧12例占0.18%。結(jié)論廣東省東莞市為地貧高發(fā)地區(qū)，應(yīng)該加強(qiáng)婚前檢查、遺傳咨詢，減少地貧患兒的出生率，提高人口素質(zhì)。

關(guān)鍵詞:珠蛋白生成障礙性貧血；基因譜；流行病學(xué)調(diào)查

珠蛋白生成障礙性貧血(簡(jiǎn)稱地貧),它是一種單基因遺傳病，可導(dǎo)致遺傳性溶血性貧血，分為α-珠蛋白生成障礙和β-珠蛋白生成障礙兩種類(lèi)型[1-2]。本病高發(fā)于地中海沿岸及東南亞各國(guó)，我國(guó)以南方地區(qū)多見(jiàn)，尤以廣東、廣西和海南為甚[3]，據(jù)報(bào)道廣東省地貧基因的攜帶率達(dá) 11.07%左右[4]。地貧特別是重型地貧已給患兒的家庭和社會(huì)帶來(lái)了巨大的損失和負(fù)擔(dān)[5]，是導(dǎo)致出生缺陷高發(fā)，以及圍產(chǎn)兒和嬰兒死亡的一個(gè)主要原因[6]。國(guó)際國(guó)內(nèi)的研究均表明，通過(guò)婚前、孕前檢查及產(chǎn)前篩查等防控措施可有效減少地貧患兒的出生[7]。本文通過(guò)調(diào)查和分析本地區(qū)的地貧基因攜帶率為遺傳質(zhì)詢和產(chǎn)前檢查提供依據(jù)。

1資料與方法

1.1一般資料2014年6月至2015年5月來(lái)本院就診的門(mén)診/住院患者總7 845例，其中男性2 806例，女性4 039例,年齡1月至83歲。

1.2儀器與試劑血常規(guī)分析儀使用日本SYSMEX XE-5000血液分析儀；血紅蛋白電泳分析使用法國(guó)Sebia全自動(dòng)電泳分析儀做瓊脂糖凝膠電泳；基因檢測(cè)使用深圳亞能公司的診斷試劑盒。所有儀器均使用配套試劑。

1.3方法

1.3.1標(biāo)本收集每一個(gè)實(shí)驗(yàn)對(duì)象使用EDIA抗凝管采集血液2～3 mL；初篩陽(yáng)性的患者采集枸櫞酸鈉抗凝血3 mL進(jìn)行PCR檢測(cè)。

1.3.2初篩每一份標(biāo)本都使用SYSME XE-5000血液分析儀進(jìn)行血常規(guī)檢測(cè)，觀察紅細(xì)胞平均體積(MCV)和平均血紅蛋白水平(MCH)兩項(xiàng)指標(biāo)，MCV<80 fL、MCH<27 pg則使用瓊脂糖凝膠電泳進(jìn)行血紅蛋白電泳檢測(cè)。血紅蛋白電泳異常的標(biāo)本判斷為初篩陽(yáng)性。

1.3.3地貧基因分析初篩陽(yáng)性的標(biāo)本使用亞能生物技術(shù)(深圳)有限公司的試劑盒分別檢測(cè)α-地貧基因和β-地貧基因；其中α-地貧基因檢測(cè)3種常見(jiàn)缺失型，分別為-SEA、-α3.7、-α4.2和3種我國(guó)常見(jiàn)的非缺失型，分別為αQSα、αWSα、αCSα；β-地貧基因17種突變，分別為41-42M、654M、-28M、71-72M、17M、13EM、IVS-Ⅰ-IM、27/28M、43M、-29M、31M、-32M、-30M、14-15M、CAPM、IntM、IVS-I．5M。檢測(cè)操作嚴(yán)格按照試劑說(shuō)明書(shū)的要求進(jìn)行。

2結(jié)果

2.1地貧基因攜帶情況7 845例樣本中地貧初篩陽(yáng)性例數(shù)為1 132例。初篩陽(yáng)性的樣本檢測(cè)出地貧基因總數(shù)為662例，其中α-地貧412例占62.36%，β-地貧250例占37.64%，其中α-地貧復(fù)合β-地貧有12例占0.18%。

2.2α-地貧基因檢測(cè)本次調(diào)查共檢測(cè)出α-地貧基因412例，試劑盒聲明的3種缺失型和3種非缺失型都有檢出，其中最常見(jiàn)的為αα/--SEA、-α3.7/αα兩型分別占α-地貧的61.17%和17.48%，其次為ααCS/αα、-α3.7/--SEA、αWSα/aa這3種基因類(lèi)型，分別占α-地貧的5.83%、4.85%、2.91%。本次還檢測(cè)出1例HKαα/--SEA混合型。

2.3β-地貧基因檢測(cè)共檢出β-地貧250例，其中最常見(jiàn)的為βCD41-42/βN、βIVS-Ⅱ-654/βN、βCD17/βN這3型分別占β-地貧基因型的37.6%，23.2%和16.0%，其次為β-28/βN、βE雜合子、βCD71-72/βN這3種基因型，分別占8.80%、4.80%、4.00%。此外本研究還檢測(cè)出基因型βIVS-1-1，βCD27/28，β-29/βN 和βCD43/βN 等少見(jiàn)基因型。

2.4α-地貧復(fù)合β-地貧基因檢測(cè)本次共檢出12例復(fù)合型，其中-α3.7/αα復(fù)合βCD41-42/βN基因型3例，αWSα/aa復(fù)合β-28/βN基因型2例，-α3.7/αα復(fù)合βE雜合子、-α3.7/αα復(fù)合βCD17/βN αWSα/aa，αWSα/aa復(fù)合βIVS-Ⅰ-1，αα/--SEA復(fù)合βCD17/βN，αα/--SEA復(fù)合βCD71-72/βN，ααCS/αα復(fù)合βIVS-Ⅰ-16種基因型各1例。

3討論

地貧是一種血紅蛋白病，是由于調(diào)控珠蛋白合成的基因缺失或突變引起的一種單基因隱性遺傳病。最常見(jiàn)的為α-地貧和β-地貧兩種類(lèi)型。

α-地貧基因位于16號(hào)染色體短臂13區(qū)3帶(16 P13.3)。其缺陷主要為缺失型和非缺失型，缺失型主要包括左側(cè)缺失(-α4.2)、右側(cè)缺失(-α3.7)和缺失兩個(gè)α珠蛋白基因的東南亞型(-SEA)。非缺失型主要為基因突變(αTα)。在中國(guó)人中最常見(jiàn)的突變類(lèi)型主要有3種，分別為αQSα、αWSα、αCSα。本研究中共發(fā)現(xiàn)了412例α-地貧基因缺陷者，其中東南亞型(-SEA)占61.17%，右側(cè)缺失(-α3.7)占17.48%，點(diǎn)突變?chǔ)力罜S 占5.83，-a3.7/--SEA占4.85%，這4種基因型占了α-地貧基因基因總數(shù)的89.33%。α-地貧基因總?cè)毕萋蕿?.25%，這與相關(guān)研究報(bào)道結(jié)果相符。

β-地貧基因位于11號(hào)染色體短臂1區(qū)2帶(11P1.2)，其主要為點(diǎn)突變。我國(guó)常見(jiàn)的突變類(lèi)型有17種，分別為41-42M、654M、-28M、71-72M、17M、13EM、IVS-I-IM、27/28M、43M、-29M、31M、-32M、-30M、14-15M、CAPM、IntM、IVS-I-5M。在本次調(diào)查中一共檢出β-地貧基因缺陷250例，其中βCD41-42/βN、βIVS-Ⅱ-654/βN、βCD17/βN這3種分別占37.6%、23.20%、16.0%。β-地貧基因總?cè)毕萋蕿?.19%。

本研究還檢測(cè)出了12例α-地貧復(fù)合β-地貧和1例HKαα/-SEA復(fù)合地貧。HKaa是種極少見(jiàn)的非平衡交叉連接，表現(xiàn)為在同一條染色體上同時(shí)含有-a3.7缺失的交叉連接片段[8-9]?；蛐蜑镠Kaa/aa的患者易被診斷為-a3.7/αα，與健康者比較，HKαα/αα患者的球蛋白mRNA 水平無(wú)明顯不同。

地貧為染色體隱性遺傳病，如果夫婦雙方均為攜帶者，則他們的后代中有1/2的概率為地貧基因攜帶者，有1/4的概率為地貧患者。目前對(duì)于輕型地貧還沒(méi)有有效的治療方法，重癥α-地貧常出現(xiàn)死胎和出生后水腫隨后死亡，重癥β-地貧在出生后3～6月出現(xiàn)貧血癥狀，只能通過(guò)造血干細(xì)胞移植能是患者得到長(zhǎng)期的血液學(xué)療效，否則需要長(zhǎng)期輸血來(lái)維持生命。無(wú)論是造血干細(xì)胞移植還是輸血治療對(duì)于一個(gè)家庭來(lái)說(shuō)都是一個(gè)沉重的負(fù)擔(dān)。因此加強(qiáng)婚前檢查和遺傳質(zhì)詢，提高地貧檢出率，優(yōu)生優(yōu)育減少地貧患兒的出生率對(duì)于家庭和社會(huì)都有重要意義。

參考文獻(xiàn)

[1]杜傳書(shū)．地中海貧血研究的現(xiàn)在與未來(lái)[J]．中華醫(yī)學(xué)遺傳雜志，1996，13(5)：257．

[2]Schwartz PE,Taylork J.Is early detecti on of ovari an can cer possible[J].Ann Med,1995,27(5):519-528.

[3]梁華銘，黎金美．1 826例育齡期婦女地中海貧血篩查結(jié)果分析[J]．中國(guó)實(shí)用醫(yī)藥，2010，5(17)：52-53．

[4]杜麗，尹愛(ài)華，張彥，等．2 171例地中海貧血產(chǎn)前基因診斷回顧性分析[J]．國(guó)際婦產(chǎn)科學(xué)雜志，2012，39(2)：208-210．

[5]Kojima M,Hosoda H,Date Y,et al.Ghrelin is a growth-hormone-releasing acylated peptide from stomach[J].Nature,1999,402(6762):656-660.

[6]朱慧明．24 743例婚檢人群地中海貧血篩查情況分析[J]．中國(guó)婦幼保健，2011，26(23)：3598-3599．

[7]楊文姬，麥杰，樊銳全．出生缺陷干預(yù)及優(yōu)生篩查體系的效果分析[J]．中國(guó)優(yōu)生與遺傳雜志，2010，18(4)：123-124．

[8]Wang W,Chan AY,Chan LC,et al.Unusual rearrangement of the alpha-globin gene cluster containing both thealpha 3.7 and alpha alphaalphaanti-4.2 crossover junctions:clinical diagnostic implications and possible mechanisms[J].Clin Chem,2005,51(11):2167-2170.

[9]Shang X,Li Q,Cai R,et al.Molecular characterization and clinical presentation of HKαα and anti-HKαα alleles in southern Chinese subjects[J].Clin Genet,2013,83(5):472-476.

Thalassemia gene detection and investigate in Dongguan

ShaoJinhuan,XiaoXiang,ZhangDaxiu,ZhongYangqing

(DepartmentofClinicalLaboratory，TangxiaHospitalofDongguan,Dongguan,Guangdong523721，China)

Abstract:ObjectiveTo investigate the type of gene mutation and its distribution in patients with thalassemia in Dongguan．Methods7 845 specimens collected from the patients and individuals with physical examination in our hospital from June 2014 to May 2015 were performed according to the results of routine blood and electrophoresis screening with suspected cases．The specimens with phenotype positive were definitely verified the thalassemia type by using Gap-PCR and reverse dotblot(RDB).ResultsAmong 7 845 specimens，suspected cases of 1 132 cases,662 specimens were finally diagnosed as α-thalassemia and β-thalassemia,with the thalassemia carrying rate of 8.44%(662/7 845),including 412 cases(5.25%) of a-thalassemia.The most common type of αα/--SEA,-α3.7/αα accounted for 61.17% and 17.48% in α-thalassemia,also detected HKαα/--SEA mixed type in 1 case and 250 cases(3.19%) of β-thalassemia cases．The most common type of βCD41-42/βN，βIVS-Ⅱ-654/βN，βCD17/βN accounted for 37.6%，23.2%,16.0% in β-thalassemia.The α-thalassemia composite β-thalassemia for 12 cases(0.18%).ConclusionDongguan city of Guangdong province is a high incidence area of thalassemia.Premarital examination,genetic counseling should be strengthened,and reduce the birth rate of the thalassemia children to improve the quality of the population.

Key words:thalassemia；genotypes；epidemiological investigation

(收稿日期：2015-12-22)

DOI:10.3969/j.issn.1673-4130.2016.09.031

文獻(xiàn)標(biāo)識(shí)碼：A

文章編號(hào)：1673-4130(2016)09-1230-02

作者簡(jiǎn)介：邵錦歡，女，主管技師，主要從事分子診斷工作研究。