淺談薄層層析法檢測板藍根所含靛玉紅、靛藍的方法

朱玉琛

哈藥集團世一堂制藥廠 150000

淺談薄層層析法檢測板藍根所含靛玉紅、靛藍的方法

朱玉琛

哈藥集團世一堂制藥廠 150000

目的：應(yīng)用薄層層析法對于板藍根所含靛玉紅、靛藍的薄層色譜進行研究。方法：應(yīng)用硅膠G板進行點樣，選擇出最適合展開的系統(tǒng)進行實驗，同時選擇出實驗最合適的樣品，檢測出樣品的最低檢出量。結(jié)果：得出獲得靛玉紅、靛藍獲得最佳色譜的條件是：以硅膠G板作為吸附劑；同時應(yīng)用比例為1:8:1的石油醚、氯仿以及乙酸乙酯作為實驗展開劑。在得出的色譜中，板藍根中的靛玉紅的最低檢出量為20μl、靛藍的最低檢出量為12μl。結(jié)論：薄層層析方法在檢測板藍根的靛玉紅、靛藍實驗中，證明了此方法的有效性，并且測試方法簡單、便捷，同時保證了檢測結(jié)果的有效性。

薄層層析法；板藍根；靛玉紅；靛藍；硅膠G板；

板藍根是我國傳統(tǒng)的中藥，使用年限久遠，并且在多年的使用中驗證了其療效。在藥典中記載，板藍根歸屬于十字花科，是其中的菘藍屬植物中，菘藍的干燥根，在現(xiàn)階段的臨床應(yīng)用十分廣泛。在本文中，主要應(yīng)用薄層層析法對于板藍根中提取的靛玉紅、靛藍進行了分析。通過相同生長環(huán)境下成長的板藍根，進行靛玉紅、靛藍的斑點情況進行分析，并對比標(biāo)準(zhǔn)，來確定板藍根總的靛玉紅、靛藍是否符合標(biāo)準(zhǔn)要求。薄層層析法可以快速的實現(xiàn)實驗的分離，并且進行實驗的設(shè)備十分簡單，相對需要投資更低，實驗所需要的時間也更短，在大批量的樣品檢測中應(yīng)用效果良好。

1、儀器與試劑

1.1 儀器與試劑

JY1002型電子天平；101-2B型電熱烘干箱(江蘇海門實驗儀器廠)；微量進樣器(上海安亭微量進樣器廠)。靛玉紅標(biāo)準(zhǔn)品(分析純,中國藥品生物制品檢定所)；靛藍標(biāo)準(zhǔn)品(化學(xué)純,北京市旭東化工廠)；羧甲基纖維素納(上?；瘜W(xué)試劑公司)；硅膠G(分析純,青島海洋化工有限公司)；氯仿、苯、丙酮、石油醚、乙酸乙酯均為分析純。

1.2 實驗條件

薄層層析板:硅膠G板；展開劑:氯仿-乙酸乙酯(4∶1)、氯仿-丙酮(9∶1)、石油醚-氯仿-乙酸乙酯(1∶8∶1)、苯-氯仿-丙酮(5∶4∶1)、苯-氯仿-丙酮(6∶4∶1)；展開高度:12cm

2、實驗方法

2.1 薄層板的制備與活化

以硅膠G按每10g加0.8%CMC-Na30ml置于研缽中研磨均勻,鋪板,晾干。于105℃活化1h,冷卻后置干燥器中保存。一般可保存2-3d,若放置時間較長,可活化后再使用。

2.2 供試品溶液制備

（1）靛玉紅標(biāo)準(zhǔn)溶液的制備。精密稱取靛玉紅標(biāo)準(zhǔn)品10mg,置于100ml容量瓶中,加氯仿溶解,定容至刻度,搖勻。配成每毫升含0.1mg靛玉紅的標(biāo)準(zhǔn)溶液。避光保存。

（2）靛藍標(biāo)準(zhǔn)溶液的制備。精密稱取靛藍標(biāo)準(zhǔn)品50mg,置于250ml容量瓶中,加氯仿溶解,定容至刻度,搖勻。配成每毫升含0.2mg靛藍的標(biāo)準(zhǔn)溶液。避光保存。

（3）樣品溶液的制備。①稱取菘藍根 10.00g,置錐形瓶中,加入氯仿30ml,于60℃水浴中溫浸1.5h,過濾；濾渣以同樣方法再溫浸2次,合并三次濾液?；厥章确?同時濃縮濾液,并用氯仿定容至2ml,搖勻。避光保存。②按照①方法,分別稱取不同產(chǎn)地來源菘藍根19.30g,加入50ml氯仿,溫浸時間分別為2h、2h、1.5h,制得樣品液。避光保存。

2.3 定性及相對含量測定。

按照薄層色譜法試驗,取樣品液及標(biāo)準(zhǔn)液各 20μl點于同一硅膠板上,展開劑展開揮干,按樣品斑點與標(biāo)準(zhǔn)點的顏色和Rf值是否相同定性,根據(jù)斑點的大小深淺概略定量。

2.4 薄層層析展開劑的選擇

取對照品溶液和①方法制得的樣品溶液各20μl,點于同一硅膠G板上。以氯仿-乙酸乙酯(4∶1)、氯仿-丙酮(9∶1)、石油醚-氯仿-乙酸乙酯(1∶8∶1)、苯-氯仿-丙酮(5∶4∶1)、苯-氯仿-丙酮(6∶4∶1)五種溶劑系統(tǒng)展開。

2.5 樣品液中靛玉紅、靛藍的薄層層析最低檢出量的確定

（1）樣品中靛玉紅最低檢出量的確定。?、诜椒ㄖ频玫臉悠芬?根據(jù)溶液顏色,由深至淺選擇 S61、S3、S4、S9、S20、S39樣品溶液,分別吸取50μl、40μl、30μl、25μl、20μl、15μl、10μl樣品溶液點樣于同一硅膠G板。同時分別吸取0.1mg/ml的靛玉紅標(biāo)準(zhǔn)溶液 4μl、6μl、8μl、10μl、12μl……46μl、48 μl、50μl點樣于另一塊硅膠G板。將兩薄層板放于同一層析缸中展開。

（2）樣品中靛藍最低檢出量的確定。按照以上述方法相同的方式,選擇S61、S3、S4、S9、S20、S39樣品溶液,分別吸取30 μl、25μl、20μl、15μl、12μl、10μl、5μl樣品溶液點樣于同一硅膠G板。同時分別吸取0.2mg/ml靛藍標(biāo)準(zhǔn)溶液4μl、6μ l、8μl、10μl、12μl……46μl、48μl、50μl、55μl、60μl點樣于另一塊硅膠G板。將兩薄層板放于同一層析缸中展開。

3、實驗結(jié)果

3.1 薄層層析法優(yōu)勢分析

薄層層析法只要實驗方式，是將適宜的固定相涂布于玻璃板、塑料或鋁基片上，成一均勻薄層。待點樣、展開后，根據(jù)比移值（Rf）與適宜的對照物按同法所得的色譜圖的比移值（Rf）作對比，用以進行藥品的鑒別、雜質(zhì)檢查或含量測定的方法。薄層色譜法是快速分離和定性分析少量物質(zhì)的一種很重要的實驗技術(shù)，也用于跟蹤反應(yīng)進程。在實驗中證明了薄層層析法保持了操作方便性、實驗設(shè)備簡單、顯色容易，同時展開速率快；混合物易分離，分它既適用于只有 0.01μg的樣品分離，又能分離大于500mg的樣品作制備用，是十分優(yōu)秀的實驗方式。

3.2 展開劑的選擇結(jié)果

在進行實驗的時候，通過五個相同樣品進行實驗，最后選擇出了薄層層析法實驗中，應(yīng)用比例為4:1的氯仿混合乙酸乙酯作為展開劑的時候，靛玉紅的Rf值為0.56，靛藍的Rf值為0.32；應(yīng)用比例為 9:1氯仿以及丙酮作為展開劑的時候，靛玉紅的 Rf值為0.54，靛藍的Rf值為0.28；應(yīng)用比例為比例為1:8:1的石油醚、氯仿以及乙酸乙酯為展開劑的時候，靛玉紅的Rf值為0.54，靛藍的Rf值為0.22；應(yīng)用比例為5:4:1的苯、氯仿以及丙酮作為展出劑的時候，靛玉紅的Rf值為0.57，靛藍的Rf值為0.27。所以經(jīng)過比較，最適合板藍根靛玉紅、靛藍的展開劑為比例為1:8:1的石油醚、氯仿以及乙酸乙酯，在試驗中展開劑的展距為十二厘米。

3.3 最低檢出量的確定結(jié)果

五種樣品溶劑的點樣點通過與標(biāo)準(zhǔn)靛玉紅、靛藍的標(biāo)準(zhǔn)數(shù)值對比，就可以發(fā)現(xiàn)顯色的斑點顏色是由淺至深的一個過程。所以在進行最低檢出量的選擇時候，選定靛玉紅的最低檢出量為 20 μl。靛藍的最低檢出量為12μl。在正常情況下，板藍根中的靛玉紅含量相較于靛藍含量更高，所選定的靛藍最低檢出量更低。在進行實驗的時候，為了盡可能的使半點不受到影響，選擇點樣量的時候要盡可能的少，以保證減少點樣時間，避免斑點擴散。靛玉紅、靛藍的比較容易受到氧化，只能在兩個小時內(nèi)保持穩(wěn)定，所以為了確保實驗測量的準(zhǔn)確，要盡可能的確保實驗的過程和結(jié)果確定在兩個小時內(nèi)完成。

4、討論

薄層層析法主要是應(yīng)用展開劑、吸附劑以及分離樣品來進行操作的方式，這種共同作用的操作方式可以更加有效地實現(xiàn)樣品的分離，所以是否可以很快速的找到與實驗樣品磁場相合的吸附劑，就成為了薄層層析法成功的關(guān)鍵因素。在本次實驗中，將進行實驗的樣品分為了五個相同部分，通過不同的吸附劑與樣品的反應(yīng)，選擇出了最適合板藍根靛玉紅、靛藍的吸附劑，并在最后進行實驗的時候選定了硅膠G板作為吸附劑，取得了很好的實驗效果。確定了板藍根中靛玉紅、靛藍的最低檢出量。

[1]陳華妮,蘭翠玲,劉芳,張金磊.抗腫瘤活性成分靛玉紅的研究進展[J].廣州化工,2012

[2]徐靜.靛玉紅衍生物的合成及應(yīng)用[D].天津理工大學(xué), 2014.

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1672-5018（2016）11-238-01