蒲地藍(lán)消炎片中黃芩苷的含量測定

王葳　劉冬麗　李維熙　王文靜　吳建敏

【摘要】目的：探討蒲地藍(lán)消炎片中黃芩苷的含量測定方法。方法：利用高效液相色譜法對蒲地藍(lán)消炎片中黃芩苷的含量測定進(jìn)行測定。結(jié)果：黃芩苷的線性范圍為0.422～16.88μg，R.2=0.9999，加樣回收率為95.03%～101.1%（RSD=1.99%）。結(jié)論：建立的方法更簡便、準(zhǔn)確、易控，可用于蒲地藍(lán)片中黃芩苷的含量測定。

【關(guān)鍵詞】蒲地藍(lán)消炎片；黃芩；黃芩苷；HPLC

【中圖分類號】R284.1 【文獻(xiàn)標(biāo)志碼】 A 【文章編號】1007-8517（2016）03-0017-02

蒲地藍(lán)消炎片收載于中藥部頒標(biāo)準(zhǔn)中[1]，由黃芩、蒲公英、板藍(lán)根、苦地丁等四味中藥組成，具有清熱解毒、抗炎消腫的功效，臨床可用于癤腫、咽炎、扁桃腺炎等。黃芩是蒲地藍(lán)消炎片的主藥之一，具有清熱燥濕、瀉火解毒，止血的功效，其有效成分為黃芩苷等多種成分[2]?，F(xiàn)代藥理研究表明，黃芩具有抗炎、保護(hù)腦缺血及心肌缺血再灌注損傷的神經(jīng)、抗寄生蟲等作用[3]。為控制該制劑的質(zhì)量，對組方中黃芩藥材的質(zhì)量情況進(jìn)行檢測，并制定合理檢查標(biāo)準(zhǔn)。

蒲地藍(lán)消炎片在市場上銷售的生產(chǎn)廠家較多，但目前尚無統(tǒng)一的質(zhì)量控制方法。研究根據(jù)組方及《中國藥典》中黃芩藥材項(xiàng)下黃芩苷含量要求，依托云南白藥集團(tuán)生產(chǎn)的多批蒲地藍(lán)消炎片樣品，對原有HPLC測定法進(jìn)行了改進(jìn)和提高，制訂蒲地藍(lán)消炎片中黃芩苷含量的測定方法，以控制制劑中黃芩藥材的投料量，從而保證藥物的質(zhì)量和療效。

1 儀器與材料

1.1 儀器 Waters2695高效液相色譜儀（紫外檢測器）。

1.2 材料 黃芩苷對照品（批號：110715-201318，中國藥品生物制品檢定所）；蒲地藍(lán)消炎片（云南白藥集團(tuán)股份有限公司）。

2 方法與結(jié)果

2.1 色譜條件 Sunfire C18色譜柱 （4.6 mm×250 mm，5 μm）；流動相甲醇-0.5‰磷酸水溶液（43∶57）；流速1.0ml/min；柱溫30℃；進(jìn)樣量20μl；檢測波長：280 nm[4-5]。

2.2 對照品溶液的制備 精密稱取黃芩苷對照品21.1mg，加甲醇溶解并定容至50 ml （0.422 mg/ml），即得。

2.3 供試品溶液的制備 取重量差異項(xiàng)下本品10片，除去包衣，精密稱定，研細(xì)，混勻，取約0.5g，精密稱定，置錐形瓶中，精密加入70%甲醇25ml，稱重，超聲處理（功率180w、頻率53kHz）60min，放置至室溫，用70%甲醇補(bǔ)足減失的重量。搖勻，濾過，取續(xù)濾液，即得。

2.4 陰性供試品溶液 取按處方制備方法制備缺黃芩的陰性對照樣品2g，按供試品溶液的制備方法制備，即得。

2.5 專屬性考察 按照“2.1”條件進(jìn)樣，結(jié)果表明供試品的色譜圖中，有一個色譜峰與對照品色譜峰的保留時間一致，空白樣品的色譜圖中在與對照品相同保留時間（±5%）位置上沒有吸收峰，說明該制劑中的其它藥物及輔料對黃芩苷的含量測定沒有干擾，用本法測定黃芩的含量專屬性較強(qiáng)、靈敏度高。見圖1。

2.6 線性關(guān)系考察分別精密吸取對照品溶液1.0、2.0、3.0、4.0、5.0、6.0、7.0、8.0ml，稀釋并定容至10ml，注入液相色譜儀，按照“2.1”的色譜條件進(jìn)行分析。以峰面積Y對進(jìn)樣量X回歸處理，得回歸方程為 Y=3311222.6 X+ 38811.9 （R.2=0.9999），黃芩苷在0.422～16.88μg范圍內(nèi)，線性關(guān)系良好。

2.7 精密度實(shí)驗(yàn) 分別精密吸取黃芩苷對照品溶液、供試品（ZAB1302） 溶液各20μl，連續(xù)進(jìn)樣6次，按“2.1”色譜條件測定峰面積，結(jié)果對照品峰面積RSD 0.33%，供試品峰面積RSD 0.37%，結(jié)果表明精密度良好。

[JP+2]2.8 穩(wěn)定性實(shí)驗(yàn) 分別取黃芩苷對照品溶液（0.014 mg/ml）、供試品（ZAB1302） 溶液，按“2.1”項(xiàng)下方法，于第0、2、4、6、8、24 h測定。黃芩苷對照品峰面積RSD 0.40%，供試品溶液的峰面積RSD 0.49%。結(jié)果表明黃芩苷對照品溶液和蒲地藍(lán)消炎片供試品溶液在24h內(nèi)穩(wěn)定。

2.9 重復(fù)性實(shí)驗(yàn) 取同一批蒲地藍(lán)消炎片（批號：ZAB1302），按供試品溶液的制備方法制備6份供試品溶液，按“2.1”項(xiàng)下方法分別測定，以供試品中黃芩苷的含量計(jì)算，RSD 0.78%。

2.10 加樣回收率實(shí)驗(yàn) 分別取同一批已知含量的蒲地藍(lán)消炎片（批號：ZAB1302，黃芩苷15.38mg/片）9份，每份0.25g，精密稱定，精密加入黃芩苷對照品溶液適量（3個水平，每水平3份），揮干甲醇，按“2.3”項(xiàng)下方法制備供試液，按“2.1”項(xiàng)下方法測定黃芩苷含量，以加入量計(jì)算，回收率在95.03%～101.1%，平均回收率為96.94%，RSD 1.99%；結(jié)果見表1。

2.11 樣品含量測定 取蒲地藍(lán)消炎片10批，按“2.1”項(xiàng)下方法測定其中黃芩苷的含量，每批測定兩次，其結(jié)果見表2，每片黃芩苷含量在11.14～16.44mg之間。

3 討論

[JP+2]蒲地藍(lán)消炎片方中黃芩用量較大，根據(jù)《中國藥典》規(guī)定，其主要成分黃芩苷含量相對較高，故將黃芩苷作為該制劑質(zhì)量控制的含量指標(biāo)。但復(fù)方中各藥材之間相互影響，含量測定方法、規(guī)定限量等需做相應(yīng)的調(diào)整，并根據(jù)實(shí)際測定情況制訂相應(yīng)的具有實(shí)用價值的標(biāo)準(zhǔn)。

選擇RP-HPLC法檢測波長時，取黃芩苷對照品溶液在190～800nm范圍內(nèi)測量，結(jié)果表明280 nm為最大吸收，且樣品中其它成分在此波長處對測定無干擾，靈敏度高，可準(zhǔn)確測定黃芩苷，故測定波長選定280 nm[4]。

《中國藥典》規(guī)定黃芩中黃芩苷的限量檢查方法需要煎煮提取，但在復(fù)方中煎煮提取法損失較多，且耗時、繁瑣，經(jīng)過正交實(shí)驗(yàn)我們選擇了超聲提取法，結(jié)果表明該法不僅簡便、易行，且準(zhǔn)確度更高。而藥典中規(guī)定的黃芩苷限量檢查的RP-HPLC方法流動相為甲醇-水-磷酸 （47∶53∶0.2），經(jīng)過試驗(yàn)，選擇甲醇-0.5‰磷酸水溶液（43∶57）為流動相，改良后的條件更有利于保護(hù)色譜材料，且易于實(shí)現(xiàn)。

參考文獻(xiàn)

[1]WS3-B-0649-91，中國藥品部頒標(biāo)準(zhǔn)[S]，中藥分冊.

[2]國家藥典委員會.中華人民共和國藥典（一部）[S].北京：中國醫(yī)藥科技出版社，2010.

[3]文敏，李雪，付守廷.黃芩苷藥理作用研究新進(jìn)展[J].沈陽藥科大學(xué)學(xué)報，2008，25（2）：158-162.

[4]邵禮梅，王云龍，李延雪.高效液相色譜法測定蒲地藍(lán)消炎片中黃芩苷與黃芩素含量[J].中國藥業(yè)，2012，21（4）：37-38.

[5]靜國峰.HPLC測定蒲地藍(lán)消炎片中黃芩苷的含量[J].中國中藥雜志，2008，33（15）：1919.

（收稿日期：2015.11.20）