AVE-763尿沉渣自動分析流水線與顯微鏡檢查結(jié)果比較及復(fù)檢規(guī)則的建立

劉天霞，王婷婷

(白銀市第二人民醫(yī)院檢驗科，甘肅白銀 730900)

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·臨床研究·

AVE-763尿沉渣自動分析流水線與顯微鏡檢查結(jié)果比較及復(fù)檢規(guī)則的建立

劉天霞，王婷婷

(白銀市第二人民醫(yī)院檢驗科，甘肅白銀 730900)

摘要:目的分析尿液干化學(xué)分析(簡稱干化學(xué))和有形成分分析(簡稱尿流式) 及顯微鏡尿沉渣結(jié)果的差異，建立顯微鏡復(fù)檢規(guī)則。方法以AVE-763尿有形成分分析儀及GEB600尿干化學(xué)分析儀構(gòu)成檢測流水線，對臨床尿標(biāo)本先用流水線進(jìn)行紅細(xì)胞(RBC)、白細(xì)胞(WBC)、管型(CAST)及潛血(BLD)、中性粒細(xì)胞酯酶(LEU)、蛋白(PRO)檢測，再用顯微鏡進(jìn)行驗證。結(jié)果GEB600和AVE-763兩者檢測均正常或同時異常的標(biāo)本用顯微鏡復(fù)檢，結(jié)果之間的差異無統(tǒng)計學(xué)意義(χ2=1.46，P=0.23)。AVE-763與GEB600兩者檢測結(jié)果不符合標(biāo)本，經(jīng)顯微鏡進(jìn)行RBC、WBC、CAST檢測,結(jié)果差異有統(tǒng)計學(xué)意義(χ2=16.75、15.29、79.18，P=0.001)。結(jié)論AVE-763與GEB600兩者檢測結(jié)果不符合時，不能以AVE-763代替顯微鏡尿沉渣檢查，需參照相應(yīng)的復(fù)檢規(guī)則進(jìn)行復(fù)檢，保證檢測結(jié)果準(zhǔn)確性。

關(guān)鍵詞:尿分析；自動分析；顯微鏡檢查

常規(guī)尿液分析是臨床工作中最常用的檢查手段之一，對泌尿系統(tǒng)疾病的篩查和鑒別診斷具有重要的參考價值[1-2]。傳統(tǒng)的尿液分析包括干化學(xué)檢測和顯微鏡鏡檢中的有形成分分析兩步[3]。近年來，隨著自動化尿液檢測技術(shù)的推廣應(yīng)用和持續(xù)進(jìn)步，自動尿液常規(guī)分析流水線越來越多在檢驗科中使用，但由于尿液標(biāo)本的復(fù)雜性和干化學(xué)分析儀存在方法學(xué)的局限性，干化學(xué)分析儀檢測與形態(tài)學(xué)鏡檢結(jié)果存在差異。所以，對自動化尿常規(guī)分析發(fā)現(xiàn)異常的尿液標(biāo)本，有待于進(jìn)一步通過形態(tài)學(xué)鏡檢進(jìn)行確認(rèn)核對分析。本研究以顯微鏡檢查為參考方法，對GEB600尿干化學(xué)分析儀檢測的潛血(BLD)、中性粒細(xì)胞酯酶(LEU)、蛋白(PRO)結(jié)果和AVE-763尿有形成分分析儀檢測的紅細(xì)胞(RBC)、白細(xì)胞(WBC)、管型(CAST)結(jié)果的可信度進(jìn)行評估[4-5]，當(dāng)二者檢測結(jié)果不符時，則有必要以形態(tài)學(xué)鏡檢結(jié)果為診斷依據(jù)，進(jìn)而區(qū)別假陽性或假陰性結(jié)果，達(dá)到提高檢驗結(jié)果準(zhǔn)確度的目的。

1材料與方法

1.1標(biāo)本來源收集本院門診患者尿液標(biāo)本870份，住院患者尿液標(biāo)本990份，共計1 860份，其中來自男性927例，女性933例，年齡2～82歲，中位年齡46歲。

1.2儀器與試劑尿液流水線由GEB600尿干化學(xué)分析儀與AVE-763全自動尿有形成分分析儀組成，AVE-763分析儀使用原裝配套試劑、質(zhì)控品、校準(zhǔn)品；GEB600尿干化學(xué)分析儀使用原裝配套試紙條和配套質(zhì)控品。顯微鏡采用日本Olympus光學(xué)工業(yè)株式會社生產(chǎn)的雙目顯微鏡。

1.3檢測方法

1.3.1自動化尿液常規(guī)分析尿液留取標(biāo)準(zhǔn)依據(jù)《臨床檢驗操作規(guī)程(第3版)》[6]，每日隨機(jī)抽取10～20份新鮮中段尿液標(biāo)本，每份標(biāo)本于留取2 h內(nèi)分別用干化學(xué)分析儀GEB600(簡稱“GEB600”)及尿有形成分分析儀AVE-763(簡稱“AVE-763”)進(jìn)行檢測，尿液干化學(xué)分析儀分析指標(biāo)包括BLD、LEU、PRO；尿有形成分分析指標(biāo)包括RBC、WBC、CAST等，將原始檢測結(jié)果備份存檔。

1.3.2尿沉渣顯微鏡檢查取混勻的尿液標(biāo)本10 mL于一次性尿液專用塑料試管，以1 500 r/min離心5 min，棄去上清液，留取0.2 mL尿沉渣，輕搖離心管，使尿沉渣充分混勻，滴入專用尿沉渣計數(shù)板中，進(jìn)行尿沉渣中RBC、WBC、CAST定量計數(shù)。

1.4判斷標(biāo)準(zhǔn)鏡檢結(jié)果以《臨床檢驗操作規(guī)程(第2版)》[7]中制定的“RBC>3/HP、WBC>5/HP、CAST>1/LP”作為陽性判斷標(biāo)準(zhǔn)；尿液干化學(xué)分析的參考范圍由廠家提供，以BLD、LEU和PRO達(dá)到陽性閾值及以上判斷為陽性；AVE-763尿有形成分分析儀的參考范圍為本實驗自建范圍，RBC、WBC和CAST超出參考范圍上限、出現(xiàn)非透明管型者判斷為陽性。

1.5統(tǒng)計學(xué)處理采用SPSS19.0統(tǒng)計軟件進(jìn)行數(shù)據(jù)處理及統(tǒng)計學(xué)分析。計數(shù)資料以例數(shù)或百分率表示，組間比較采用χ2檢驗，P<0.05為差異有統(tǒng)計學(xué)意義。

2結(jié)果

2.1AVE-763尿有形成分分析儀中細(xì)胞和管型成分的參考范圍建立(1)RBC：0～8.5/μL(男)，0～13.9/μL(女)；(2)WBC：0～11.5/μL(男)，0～12.7/μL(女)；(3)CAST：0～1.2/μL。陽性判斷標(biāo)準(zhǔn)如下：(1)RBC：>8.5/μL(男)，>13.9/μL(女)；(2)WBC：>11.5/μL(男)，>12.7/μL(女)；(3)CAST：>1.2/μL，出現(xiàn)非透明管型。

2.2GEB600和AVE-763檢測結(jié)果比較兩者檢測均正常的標(biāo)本765份，GEB600和AVE-763檢測匹配項目同時異常的標(biāo)本633份，包括：(1) GEB600潛血陽性和AVE-763紅細(xì)胞異常398份；(2) GEB600中性粒細(xì)胞酯酶陽性和AVE-763白細(xì)胞異常336份；(3) GEB600蛋白陽性和AVE-763 管型異常16份。同一份標(biāo)本可同時有2～3個匹配項目陽性，經(jīng)顯微鏡復(fù)檢結(jié)果見表1。AVE-763與GEB600檢測均正常和二者檢測匹配項目同時異常的標(biāo)本時，顯微鏡檢查結(jié)果與儀器檢測結(jié)果之間的差異無統(tǒng)計學(xué)意義(χ2=1.46，P=0.23)。

2.3AVE-763與顯微鏡鏡檢結(jié)果比較AVE-763與GEB600結(jié)果不符合標(biāo)本，經(jīng)顯微鏡進(jìn)行RBC、WBC、CAST檢測，見表2。AVE-763檢測的RBC、WBC、CAST結(jié)果與GEB600檢測的BLD、LEU、PRO結(jié)果不符的標(biāo)本，與顯微鏡鏡檢的RBC、WBC及CAST檢測結(jié)果的差異均有統(tǒng)計學(xué)意義(χ2=16.75、15.29、79.18，P=0.001)。

表1　　AVE-763與GEB600相符合標(biāo)本的顯微鏡檢查

表2　　AVE-763與GEB600結(jié)果不相符的標(biāo)本顯微鏡檢查

3討論

自動尿液常規(guī)分析流水線近年來越來越多地在檢驗科中使用，它將尿液自動干化學(xué)分析和有形成分分析結(jié)合起來，使尿液常規(guī)檢驗更加迅速、準(zhǔn)確。但尿干化學(xué)法存在方法學(xué)的局限，如僅能檢測尿清蛋白和尿中性粒細(xì)胞，不能排除尿球蛋白、尿淋巴細(xì)胞、單核細(xì)胞及細(xì)菌對細(xì)胞的干擾等。當(dāng)尿液中存在過多的結(jié)晶、上皮細(xì)胞、黏液絲、大量細(xì)菌、大量細(xì)胞時，會干擾尿液有形成分分析儀的檢測結(jié)果。所以即使聯(lián)合使用干化學(xué)和尿流式分析儀對尿液進(jìn)行常規(guī)分析檢測也不能完全替代有形成分的鏡檢[8-9]。對此需要制定相應(yīng)的復(fù)檢規(guī)則，對不需要鏡檢的標(biāo)本直接發(fā)放報告，篩選出需要鏡檢的標(biāo)本，以保證檢驗結(jié)果的正確性。

本研究結(jié)果顯示，應(yīng)用尿液流水線AVE-763檢測的RBC、WBC、CAST與GEB600檢測的BLD、LEU、PRO結(jié)果均正?；蛲瑫r異常的標(biāo)本時，顯微鏡檢查結(jié)果與流水線AVE-763檢測結(jié)果比較，差異無統(tǒng)計學(xué)意義(P>0.05)。47份AVE-763與GEB600檢測匹配項目同時異常的標(biāo)本，顯微鏡檢查正常者有21份為干化學(xué)蛋白陽性和尿沉渣管型異常，顯微鏡檢查發(fā)現(xiàn)有大量的上皮細(xì)胞、大量WBC聚集成團(tuán)及一些黏液絲；1份為隱血陽性和紅細(xì)胞異常，顯微鏡檢查是由于存在草酸鈣結(jié)晶、細(xì)菌、少量精子；另外12份為干化學(xué)和尿沉渣檢測WBC異常，顯微鏡檢查發(fā)現(xiàn)標(biāo)本含有小圓上皮細(xì)胞、細(xì)菌、扁平上皮細(xì)胞和脂肪滴等，其中以小圓上皮細(xì)胞為主。36份AVE-763與GEB600檢測均正常，而顯微鏡檢查異常者有21份為孕婦標(biāo)本，顯微鏡檢查為略超出正常的WBC；3例痛風(fēng)患者，顯微鏡檢查發(fā)現(xiàn)略超出正常的RBC；12例為糖尿病患者，顯微鏡檢查為略超出正常的WBC。因此，當(dāng)2種儀器RBC與BLD檢測結(jié)果一致時，不再需要進(jìn)行顯微鏡復(fù)檢，有利于尿標(biāo)本檢測的規(guī)范化與標(biāo)準(zhǔn)化[10-11]。

AVE-763與GEB600結(jié)果不符合標(biāo)本，經(jīng)顯微鏡進(jìn)行RBC、WBC、CAST檢測結(jié)果存在明顯差異，研究顯示:(1)RBC檢測AVE-763為陽性，GEB600為陰性，顯微鏡檢測陰性，多見于尿液中存在草酸鈣結(jié)晶、真菌、細(xì)菌、非定型結(jié)晶等的干擾；AVE-763為陽性，GEB600為陰性，顯微鏡檢測陽性，分析原因可能是由于尿液中還原性物質(zhì)維生素C的濃度大于100 mg/L時，使干化學(xué)法檢測潛血呈假陰性結(jié)果；AVE-763為陰性，GEB600為陽性，顯微鏡檢測陰性，可能是因為干化學(xué)法通過對破損的紅細(xì)胞和游離血紅蛋白或肌紅蛋白發(fā)生過氧化物酶反應(yīng)所致。(2)WBC檢測AVE-763為陽性，GEB600為陰性，顯微鏡檢測陰性，可能尿中含有較多腎小管上皮細(xì)胞、某些結(jié)晶與黏液同時存在，導(dǎo)致尿沉渣分析儀誤判，致使WBC出現(xiàn)假陽性[12]；AVE-763為陽性，GEB600為陰性，顯微鏡檢測陽性，可能因為GEB600僅能檢測中性粒細(xì)胞中的酯酶成分，而單核細(xì)胞和淋巴細(xì)胞不含有酯酶成分，而尿標(biāo)本中的WBC又是以單核細(xì)胞和淋巴細(xì)胞為主，也可能是使用了慶大霉素，對干化學(xué)造成負(fù)干擾表現(xiàn)為假陰性；AVE-763為陰性，GEB600為陽性，顯微鏡檢測陰性，可能是由于尿液在膀胱貯存時間過長或標(biāo)本放置時間延長導(dǎo)致WBC破壞，酯酶釋放到尿液中。(3)AVE-763檢測CAST為陽性，GEB600檢測PRO為陰性，可能是干化學(xué)法檢測PRO的原理采用指示劑誤差法，當(dāng)尿液pH<3時，以及臨床大量應(yīng)用青霉素、呋喃類藥物時，均可造成PRO的假陰性；也可能是因為GEB600僅能檢測尿清蛋白，在慢性腎小球腎病進(jìn)展過程中，常見成分升高的先后順序為：尿黏蛋白、尿微球蛋白、尿管型、尿清蛋白，所以CAST陽性會比PRO陽性出現(xiàn)得更早一些。因此，當(dāng)2種儀器CAST與PRO檢測結(jié)果存在差異時，有必要用傳統(tǒng)的顯微鏡方法復(fù)檢。

綜上所述，尿液流水線具有操作流程簡便、快捷、圖像真實、重復(fù)性好、可以降低勞動強(qiáng)度、資料易保存等優(yōu)點(diǎn)，但干化學(xué)分析儀對尿液的物質(zhì)是間接檢測，方法缺乏特異性。尿有形成分分析儀檢測RBC、WBC、CAST時，易受結(jié)晶、上皮細(xì)胞、黏液絲、大量細(xì)菌和細(xì)胞的干擾。所以，為了提高檢測結(jié)果的準(zhǔn)確性，只有尿有形成分分析儀、干化學(xué)分析儀及人工顯微鏡鏡檢有機(jī)結(jié)合，聯(lián)合應(yīng)用，才能減少假陰性及陽性的發(fā)生。筆者認(rèn)為有以下幾種情況的尿液標(biāo)本必須進(jìn)行顯微鏡檢查：(1)干化學(xué)法檢查的BLD、LEU異常，而尿沉渣檢查RBC、WBC正常者；(2)干化學(xué)檢查的BLD、LEU正常，而尿沉渣檢查RBC、WBC異常者；(3)干化學(xué)檢查的PRO陽性，而尿沉渣檢查CAST陰性者；(4)干化學(xué)檢查的PRO陰性，而尿沉渣檢查CAST陽性者；(5)腎病科的患者及妊娠女性；(6)尿沉渣結(jié)果顯示有大量結(jié)晶或小圓上皮細(xì)胞出現(xiàn)時；(7)本次結(jié)果與最近一次結(jié)果有明顯差異者。

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(收稿日期：2015-11-08)

DOI:10.3969/j.issn.1673-4130.2016.03.054

文獻(xiàn)標(biāo)識碼：A

文章編號：1673-4130(2016)03-0406-03