超高壓液相色譜-串聯(lián)質(zhì)譜法測定畜禽糞便中3種β-受體激動(dòng)劑殘留

石　奧

(北京市畜牧業(yè)環(huán)境監(jiān)測站，北京　102200)

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超高壓液相色譜-串聯(lián)質(zhì)譜法測定畜禽糞便中3種β-受體激動(dòng)劑殘留

石奧*

(北京市畜牧業(yè)環(huán)境監(jiān)測站，北京102200)

β-受體激動(dòng)劑俗稱“瘦肉精”，可促進(jìn)蛋白質(zhì)的合成，加速脂肪的轉(zhuǎn)化和分解，提高動(dòng)物的瘦肉率，常見的“瘦肉精”有克倫特羅、萊克多巴胺、沙丁胺醇等。盡管農(nóng)業(yè)部已于1997年嚴(yán)禁將包括克倫特羅、萊克多巴胺、沙丁胺醇在內(nèi)的β-受體激動(dòng)劑作為動(dòng)物促生長劑使用，但近年來持續(xù)發(fā)生瘦肉精中毒事件，例如2010年9月8日深圳商報(bào)報(bào)道深圳出現(xiàn)食用蛇肉瘦肉精中毒事件，2011年央視315特別行動(dòng)節(jié)目曝光雙匯使用“瘦肉精”豬肉事件，2012年12月6日南方周末報(bào)道湖南出現(xiàn)牛肉瘦肉精超標(biāo)事件等。β-受體激動(dòng)劑在豬、牛以及禽類上均出現(xiàn)違規(guī)使用現(xiàn)象。人食用含β-受體激動(dòng)劑的食品會(huì)出現(xiàn)心跳加快、心悸等癥狀，嚴(yán)重者會(huì)導(dǎo)致癌變。β-受體激動(dòng)劑在動(dòng)物體內(nèi)的吸收率低，大部分以原藥形式排出體外，通過尿液和糞便進(jìn)入環(huán)境，造成水體、土壤污染。

當(dāng)前的研究側(cè)重于畜禽尿液中β-受體激動(dòng)劑殘留對環(huán)境的影響，相對于尿液，糞便作為畜禽主要排泄物更易獲得，且穩(wěn)定性及代表性更強(qiáng)，但相關(guān)報(bào)道較少。1996年Batjoens等[1]采用氣相色譜-質(zhì)譜聯(lián)用儀檢測動(dòng)物糞便中的克倫特羅，2014年李丹妮等[2]采用在線凈化液相色譜-質(zhì)譜聯(lián)用儀檢測畜禽糞便中7種β-受體激動(dòng)劑，側(cè)重于研究苯胺型β-受體激動(dòng)劑。開展畜禽糞便中多種類型β-受體激動(dòng)劑殘留檢測技術(shù)的研究，對分析其進(jìn)入環(huán)境中產(chǎn)生的污染風(fēng)險(xiǎn)具有重要意義。目前，β-受體激動(dòng)劑殘留的檢測方法有酶聯(lián)免疫法、高效液相色譜法[3]、氣相色譜-質(zhì)譜聯(lián)用法[1，4-6]、液相色譜-質(zhì)譜聯(lián)用法[2，7-9]。相比較而言，酶聯(lián)免疫法的誤差較大，一般只能定性；高效液相色譜法易受干擾成分影響，低含量時(shí)易出現(xiàn)假陽性樣品；氣相色譜-質(zhì)譜聯(lián)用法準(zhǔn)確度較高，但前處理需衍生，操作較為繁瑣，檢測結(jié)果的穩(wěn)定性較差；而液相色譜-質(zhì)譜聯(lián)用法的準(zhǔn)確度高、檢出限低，基質(zhì)干擾較小，選擇性強(qiáng)、上機(jī)檢測簡便快速，在β-受體激動(dòng)劑的檢測中得到了更廣泛的應(yīng)用。

本文旨在使用液相色譜-質(zhì)譜聯(lián)用儀建立畜禽糞便中多種β-受體激動(dòng)劑殘留的檢測方法，既能覆蓋苯胺型和苯酚型兩種類型的β-受體激動(dòng)劑以提高方法的適應(yīng)性，又能提高檢測效率以及獲得穩(wěn)定的回收率，為β-受體激動(dòng)劑在環(huán)境中的殘留分析和風(fēng)險(xiǎn)評價(jià)提供了基礎(chǔ)依據(jù)。

1實(shí)驗(yàn)部分

1.1儀器與試劑

XEVO TQ-S三重四極桿液相色譜質(zhì)譜聯(lián)用儀(美國 Waters公司)；T18高速分散器(德國IKA公司)；WD-12水浴氮吹儀(杭州奧盛儀器有限公司)；FE20 pH計(jì)(梅特勒-托利多儀器(上海)有限公司)；KH-100PE數(shù)控超聲波清洗器(昆山禾創(chuàng)超聲儀器有限公司)；TDL-40B型低速離心機(jī)、GL-20B型 高速冷凍離心機(jī)(上海安亭科學(xué)儀器廠)；THZ-82氣浴恒溫振蕩器(常州國華電器有限公司)；LGJ-12冷凍干燥機(jī)(北京松源華興科技發(fā)展有限公司)；QL-861漩渦混合器(海門市其林貝爾儀器制造有限公司)；負(fù)壓固相萃取裝置(天津博納艾杰爾科技有限公司)；MCX固相萃取柱(60 mg，3 mL，德國CNW公司)。

克倫特羅鹽酸鹽(CLE,C11668550)、萊克多巴胺鹽酸鹽(RAC,C16805000)、沙丁胺醇(SAL,C16903000)(德國Dr.Ehrenstorfer公司)；克倫特羅-D9、萊克多巴胺-D3、沙丁胺醇-D3(加拿大CDN公司)；β-葡萄糖醛苷酸酶：>100 000 units/mL(德國Merck公司)；甲醇、乙腈(色譜純，美國Fisher公司)；高氯酸(分析純，金鹿化工有限公司)。

1.2標(biāo)準(zhǔn)溶液的配制

準(zhǔn)確稱取適量的克倫特羅鹽酸鹽、萊克多巴胺鹽酸鹽、沙丁胺醇、克倫特羅-D9、萊克多巴胺-D3、沙丁胺醇-D3標(biāo)準(zhǔn)品，用甲醇分別配制成100 μg/mL的標(biāo)準(zhǔn)貯備液，置于-18 ℃冰箱保存。準(zhǔn)確移取各種單標(biāo)貯備液，配制各種濃度的混合標(biāo)準(zhǔn)液和混合內(nèi)標(biāo)液，備用。

1.3樣品采集與制備

選取北京規(guī)?；i場、雞場、牛場，采集新鮮糞便，多點(diǎn)采樣混合[10]，制成約500 g的代表性樣品，現(xiàn)場于4 ℃以下冷藏保存，盡快運(yùn)回實(shí)驗(yàn)室，冷凍儲(chǔ)存。將經(jīng)冷凍干燥處理后的樣品用研缽研磨，過1 mm篩制備檢測樣品，避光保存并測定含水率。

1.4樣品前處理

準(zhǔn)確稱取2.00 g畜禽糞便樣品，置于50 mL離心管中，加入10 mL乙酸鈉緩沖鹽(pH 5.2)，充分混勻，加入5 μLβ-葡萄糖醛苷酸酶，混勻，37 ℃氣浴避光振蕩水解16 h。酶解后置于室溫，加入50 μL 100 μg/L的內(nèi)標(biāo)混合液于待測樣品中，加蓋渦旋混勻，加高氯酸調(diào)節(jié)pH值至1.0±0.1，8 000 r/min高速離心5 min，取上清液。用10 mol/L NaOH溶液調(diào)節(jié)pH值至11.0，8 000 r/min高速離心5 min，取上清液。加入10 mL乙酸乙酯，渦旋混勻，振蕩10 min，8 000 r/min高速離心5 min，取上清液。殘液中加入10 mL乙酸乙酯再提取1次，合并上清液，50 ℃氮?dú)獯蹈桑? mL 0.1%甲酸-水定容，超聲混勻1 min，過0.22 μm微孔濾膜凈化，待測。

1.5儀器條件

1.5.1超高壓液相色譜條件采用BEH C18色譜柱(1.7 μm，2.1 mm×50 mm)，流動(dòng)相：乙腈(A)和0.1%甲酸-水(B)，流速0.3 mL/min，柱溫40 ℃。梯度洗脫程序?yàn)椋? ~2 min,5%~40%A;2 ~3 min,40%~95%A;3 ~3.1 min,95%A;3.1 ~4 min,95%~5%A。

1.5.2質(zhì)譜條件離子源：電噴霧離子源；電離方式：ESI；掃描方式：正離子；監(jiān)測方式：多離子反應(yīng)監(jiān)測(MRM)；離子源溫度：150 ℃。根據(jù)歐盟指令[11]規(guī)定：為確保質(zhì)譜檢測的可信度，低分辨質(zhì)譜聯(lián)用檢測應(yīng)選擇檢測化合物1個(gè)母離子和2個(gè)以上的子離子。在確定各物質(zhì)的母離子基礎(chǔ)上，經(jīng)Daughter-scan方式選擇子離子的質(zhì)量數(shù)及最佳碰撞能量，建立MRM模式，相關(guān)質(zhì)譜參數(shù)見表1。

表1　3種β-受體激動(dòng)劑和相應(yīng)內(nèi)標(biāo)物的質(zhì)譜參數(shù)

*quantitative ion(定量子離子)

2結(jié)果與討論

2.1提取液的選擇

根據(jù)苯環(huán)上取代基的差異，β-受體激動(dòng)劑可分為苯胺型和苯酚型。苯胺型結(jié)構(gòu)中具有芳伯胺基，中等極性，如克倫特羅；苯酚型一般具有鄰(間)苯二酚或苯酚結(jié)構(gòu)，由于含有胺基和酚羥基，故具有較高極性，沙丁胺醇和萊克多巴胺屬于苯酚型。苯酚型的軛合代謝過程較強(qiáng)，沙丁胺醇的代謝物主要以硫酸軛合物的形式存在，其次為葡萄糖醛酸軛合物，萊克多巴胺主要以葡萄糖醛酸軛合物形式存在[12]，所以，苯酚型β-受體激動(dòng)劑需通過酸性水溶液水解和酶解解離，使其轉(zhuǎn)化為代謝前的化合物后再進(jìn)行提取，而文獻(xiàn)[1-2]只針對苯胺型β-受體激動(dòng)劑，無需此過程。

表2　豬糞中3種β-受體激動(dòng)劑的絕對回收率

畜禽糞便樣品的成分非常復(fù)雜，特別是有機(jī)質(zhì)含量特別高[13]，僅通過高氯酸水解[14]很難將樣品凈化提取，必須轉(zhuǎn)化到堿性條件下，通過有機(jī)溶劑進(jìn)一步凈化提取。常用的液液萃取劑[15]有乙腈、乙醚、乙酸乙酯、叔丁基甲醚等，也有采用混合溶劑萃取的研究，如乙酸乙酯-異丙醇(60∶40)[9]、乙酸乙酯-丁醇、乙醇-水[16]等。本文比較了不同提取液對畜禽糞便中β-受體激動(dòng)劑殘留的提取效果，提取液包括乙腈、異丙醇、叔丁基甲醚、乙酸乙酯、乙酸乙酯-異丙醇(60∶40)。以添加絕對回收率(同等濃度，加標(biāo)樣品的峰面積/溶于基質(zhì)空白溶液中樣品的峰面積×100%)為指標(biāo)，考察了上述5種提取液對畜禽糞便中1 μg/kg的克倫特羅、萊克多巴胺和沙丁胺醇的提取效果，結(jié)果表明：用異丙醇、乙酸乙酯-異丙醇(60∶40)提取的樣品中雜質(zhì)較多，基體干擾嚴(yán)重，克倫特羅和萊克多巴胺的回收率<10%，沙丁胺醇的回收率為0%；叔丁基甲醚提取樣品的回收率小于15%,回收率均過低；乙腈和乙酸乙酯提取的樣品雜質(zhì)較少，回收率較高，分別可達(dá)到35.2%~55.3%和38.1%~52 .1%，但乙腈不易揮發(fā)，難以吹干濃縮樣品，前處理時(shí)間較長。綜合比較而言，乙酸乙酯的提取效果較好，實(shí)驗(yàn)結(jié)果見表2。由表2可以看出，苯胺型β-受體激動(dòng)劑的極性較弱，采用極性有機(jī)溶劑提取時(shí)，回收率較好；而苯酚型β-受體激動(dòng)劑的極性較強(qiáng)，提取回收率差。由于樣品基質(zhì)復(fù)雜，需要較為復(fù)雜的前處理凈化和降低基質(zhì)干擾，導(dǎo)致樣品的絕對回收率較低，無法滿足外標(biāo)法測定時(shí)對回收率的要求(60%~120%)，需通過內(nèi)標(biāo)法來降低前處理過程中樣品的損失和基質(zhì)的影響。

2.2固相萃取與液液萃取的比較

基質(zhì)效應(yīng)是指在樣品測試過程中，待測物以外的其他物質(zhì)的存在，直接或間接影響待測物響應(yīng)的現(xiàn)象[17]。采用液質(zhì)聯(lián)用方法檢測瘦肉精時(shí)，由于基質(zhì)抑制效應(yīng)明顯，普遍采用內(nèi)標(biāo)法降低基質(zhì)效應(yīng)的影響，適當(dāng)?shù)那疤幚矸椒ㄒ灿欣诮档突|(zhì)效應(yīng)，但前處理方法過于復(fù)雜會(huì)降低檢測效率，增加污染的風(fēng)險(xiǎn)，造成目標(biāo)組分的損失，降低目標(biāo)組分的回收率。本實(shí)驗(yàn)以添加2 μg/kg克倫特羅的豬糞為參照，比較了液液萃取及固相萃取(樣品經(jīng)MCX柱凈化)的加標(biāo)回收率，兩者的相對回收率((加標(biāo)樣品的峰面積/加標(biāo)樣品內(nèi)標(biāo)物的峰面積)/(溶于空白基質(zhì)溶液中樣品的峰面積/溶于空白基質(zhì)溶液中內(nèi)標(biāo)物的峰面積)×100%)分別為95.4%和96.3%，相差不大，表明采用固相萃取后，基質(zhì)效應(yīng)未明顯改善。而固相萃取后的絕對回收率為32.8%，較液液萃取的絕對回收率(37.5%)有所降低，可見經(jīng)過固相萃取后，待測組分有更多損失。一般質(zhì)譜類實(shí)驗(yàn)要求回收率在60%~120%之間，從檢測結(jié)果看，兩種處理方式的絕對回收率都無法滿足實(shí)驗(yàn)要求(<60%),通過內(nèi)標(biāo)法定量，液液萃取和固相萃取均可滿足檢測要求(60%~120%)。而固相萃取因操作繁瑣、耗時(shí)、成本高，對檢測結(jié)果無明顯改善，所以本實(shí)驗(yàn)采用液液萃取，在滿足實(shí)驗(yàn)要求的同時(shí)，又可節(jié)省成本和時(shí)間。

2.3色譜條件的優(yōu)化

比較了甲醇和乙腈作為流動(dòng)相中的有機(jī)相時(shí)對目標(biāo)物分離效果和響應(yīng)值的影響。結(jié)果發(fā)現(xiàn)，乙腈作為有機(jī)相可獲得更好的分離效果和檢測靈敏度。在流動(dòng)相的水相中加入甲酸，可增加其在ESI+模式下的離子化效率。本實(shí)驗(yàn)分別配制0.05%，0.1%，0.15%，0.2%，0.25%的甲酸水溶液和乙腈作為流動(dòng)相，考察了甲酸濃度對待測物分離效果的影響。結(jié)果表明，加入0.1%的甲酸時(shí)能獲得最好的分離效果，同時(shí)可獲得較好的離子化效率。經(jīng)過反復(fù)優(yōu)化，確定了“1.5.1”所述梯度洗脫條件。圖1為優(yōu)化條件下，3種化合物在多反應(yīng)監(jiān)測模式(MRM)下的特征離子質(zhì)量色譜，可觀察到3種化合物在2 min內(nèi)出峰并且分離效果理想。

表3　3種β-受體激動(dòng)劑的線性方程、相關(guān)系數(shù)及檢出限

2.4線性范圍與檢出限

用基質(zhì)溶液配制質(zhì)量濃度分別為0.5，1.0，2.0，5.0，10.0，20.0 μg/L的系列標(biāo)準(zhǔn)溶液，加入50 μL 100 μg/L的內(nèi)標(biāo)混合液，定容至1.0 mL，上機(jī)測定。以濃度(X，μg/L)為橫坐標(biāo)，分析物峰面積與內(nèi)標(biāo)物峰面積的比值(Y)為縱坐標(biāo)繪制標(biāo)準(zhǔn)曲線。3種β-受體激動(dòng)劑在0.5 ~20.0 μg/L范圍內(nèi)呈良好的線性關(guān)系，相關(guān)系數(shù)(r2)均大于0.998。采用空白樣品添加3種β-受體激動(dòng)劑的方法，根據(jù)信噪比S/N≥3確定方法檢出限(LOD)，得到畜禽糞便樣品中沙丁胺醇、萊克多巴胺、克倫特羅的檢出限分別為0.04，0.06，0.07 μg/kg(表3)。β-受體激動(dòng)劑作為我國明令禁用的獸藥，中國人民共和國農(nóng)業(yè)部第235號公告[18]中規(guī)定在所有食品中不得檢出，因此在實(shí)際檢測中對檢出限要求較高，參考農(nóng)業(yè)部1025號公告-18-2008[19]的檢出限(0.25 μg/kg)，本方法的檢出限均低于0.25 μg/kg，滿足畜禽糞便中β-受體激動(dòng)劑的檢測要求。

2.5回收率與精密度

準(zhǔn)確稱取豬糞、牛糞、雞糞陰性樣品進(jìn)行加標(biāo)回收率與精密度實(shí)驗(yàn)，加標(biāo)水平為1，2，5 ng，每個(gè)水平做3個(gè)平行，結(jié)果見表4。結(jié)果表明，3種β-受體激動(dòng)劑的平均回收率為80.3%~110.2%，相對標(biāo)準(zhǔn)偏差(RSD)為3.0%~7.7%。可見本方法的準(zhǔn)確度和精密度均可滿足畜禽糞便中瘦肉精殘留的檢測要求。

2.6實(shí)際樣品的分析

在北京郊區(qū)采集16家規(guī)?；笄蒺B(yǎng)殖場的畜禽糞便樣品，其中豬場8家、雞場5家、牛場3家。

表4　3種β-受體激動(dòng)劑的平均回收率與相對標(biāo)準(zhǔn)偏差(n=3)

采用本方法對所采集樣品進(jìn)行測試，每個(gè)樣品做2個(gè)平行，結(jié)果所有樣品中均未檢出克倫特羅、沙丁胺醇和萊克多巴胺。

3結(jié)論

本文建立了超高壓液相色譜-串聯(lián)質(zhì)譜法(UPLC-MS/MS)測定畜禽糞便中3種β-受體激動(dòng)劑殘留的檢測方法。采用液液萃取的前處理方法，省去了固相萃取凈化樣品的步驟，節(jié)省了時(shí)間，降低了成本。通過內(nèi)標(biāo)物的使用彌補(bǔ)了基體抑制效應(yīng)和前處理過程中被測物損失對定量結(jié)果的影響，該方法靈敏度高，適用范圍廣，具有較好的穩(wěn)定性，適用于各類畜禽糞便中β-受體激動(dòng)劑殘留的檢測。

參考文獻(xiàn)：

[1]Batjoens P,Courtheyn D,De Brabander H F,Vercammen J,De Wasch K,Logghe M.J.Chromatogr.A，1996,750(1/2):133-139.

[2]Li D N,Yan F,Wu J P,Zhou Y R,Gu X,Zhang X.Chin.J.Anal.Chem.(李丹妮，嚴(yán)鳳，吳劍平，周悅榕，顧欣，張鑫.分析化學(xué))，2014，42(12)：1797-1803.

[3]Dai H,Yuan Z N,Huang Z Q,Chen X H.J.Instrum.Anal.(戴華,袁智能,黃志強(qiáng),陳新煥.分析測試學(xué)報(bào)),2003，22(3)：57-60.

[4]Kong Y,Qiu Y M,Li P,Shen J Z.J.Instrum.Anal.(孔瑩,邱月明,李鵬,沈建忠.分析測試學(xué)報(bào)),2010，25(2)：63-66.

[5]Tian M.J.Instrum.Anal.(田苗.分析測試學(xué)報(bào))，2010，29(7)：712-716.

[6]Wang P L,Fan L,Song R,Gao S,Su X O,Yang S M.Chin.J.Anal.Chem.(王培龍，范理，宋榮，高生，蘇曉鷗，楊曙明.分析化學(xué))，2007，35(9)：1319-1322.

[7]Zhu W X,Yang J Z,Guo H L,Zhang L,Wang C J,Zhang L.J.Instrum.Anal.(祝偉霞，楊冀州，郭慧領(lǐng)，張莉，王彩娟，張麗.分析測試學(xué)報(bào)),2015，34(7)：802-806.

[8]Mi J B,Li S J,Wang F,Dong X C,Xu H,Ge B K,Chen Q Y.J.Instrum.Anal.(宓捷波,李淑靜,王飛,董襄朝,許泓,葛寶坤,陳其勇.分析測試學(xué)報(bào)),2014，33(12)：1356-1361.

[9]Wang Y,Xing L J,Hao J Y,Lu L L,Tang Z G,Luo X L.FoodSci.(王遠(yuǎn)，邢麗杰，郝家勇，魯立良，唐宗貴，羅小玲.食品科學(xué))，2012，34(8)：216-219.

[10]GB/T 25169-2010.Technical Specifications for Monitoring of Animal Manure.National Standards of the People’s Republic of China(畜禽糞便監(jiān)測技術(shù)規(guī)范.中華人民共和國國家標(biāo)準(zhǔn)).

[11]Commission Decision of 12 August 2002 Implementing Council Directive 96 23 EC Concerning the Performance of Analytical Methods and the Interpretation of Results(2002 657 EC),12.8.2002.

[12]Li J S,Qiu Y M，Wang C.ResidueAnalysisforVeterinaryDrug.Shanghai:Shanghai Scientific and Technical Publishers(李俊鎖,邱月明,王超.獸藥殘留分析.上海:上海科學(xué)技術(shù)出版社)，2002:641-658.

[13]Li Y X,Li W,Zhang X L,Yang M.Chin.J.Anal.Chem.(李艷霞，李帷，張雪蓮，楊明.分析化學(xué))，2012，40:213-217.

[14]Zhai S P,Zhou D G,Sun Z W,Yan X F,Zhang L Y,Zuo W X.ChinaJ.Veter.Med.(翟淑平,周德剛,孫志文,閆小峰,張連彥,左文霞.中國獸藥雜志)，2007,41(12)：24-26.

[15]Wang G M,Li Y G,Xi C X,Zhang J Z,Li Z G.FoodInd.Technol.(王國民，李應(yīng)國，郗存顯，張進(jìn)忠，李正國.食品工業(yè)科技)，2011，(4)：400-404.

[16]Wang W,Zhang Y,Wang J,Shi X,Ye J.MeatSci.,2010,85(2):302-305.

[17]FDA Guidance for Industry Bioanalytical Method Validation,US Department of Health and Human Services,Food and Drug Administration,Center for Drug Evaluation and Research (CDER),2001.

[18]No.235 Bulletin of the Ministry of Agriculture of the People’s Republic of China.Maximum Residue Limits of Veterinary Drugs in Animal Food(中華人民共和國農(nóng)業(yè)部公告第235號.動(dòng)物性食品中獸藥最高殘留限量)，2002.

[19]No.1025 Bulletin-18-2008 of the Ministry of Agriculture of the People’s Republic of China.Determination ofβ-Agonists Residues in Animal Derived Food by Liquid Chromatography-Tandem Mass Spectrometry.National Standards of the People’s Republic of China(農(nóng)業(yè)部1025號公告-18-2008.動(dòng)物源性食品中β-受體激動(dòng)劑殘留檢測 液相色譜-串聯(lián)質(zhì)譜法.中華人民共和國國家標(biāo)準(zhǔn)).

摘要：建立了畜禽糞便中3種β-受體激動(dòng)劑藥物殘留的超高壓液相色譜-串聯(lián)四極桿質(zhì)譜聯(lián)用儀測定方法。樣品酶解后經(jīng)高氯酸溶液凈化，調(diào)節(jié)pH值至堿性，乙酸乙酯提取，凈化濃縮后以流動(dòng)相定容，用超高壓液相色譜-質(zhì)譜聯(lián)用儀檢測，內(nèi)標(biāo)法定量。3種β-受體激動(dòng)劑在0.5 ~20.0 μg/L范圍內(nèi)線性關(guān)系良好，相關(guān)系數(shù)均大于0.998。畜禽糞便中3種β-受體激動(dòng)劑的加標(biāo)回收率為80.3%~110.2%，相對標(biāo)準(zhǔn)偏差為3.0%~7.7%，檢出限(S/N=3)為0.04 ~0.07 μg/kg。

關(guān)鍵詞：超高壓液相色譜-串聯(lián)四極桿質(zhì)譜聯(lián)用儀;畜禽糞便;β-受體激動(dòng)劑;內(nèi)標(biāo)法

Determination of 3β-Agonists in Animal Manure by Ultra High Performance Liquid Chromatography and Mass SpectrometrySHI Ao*

(Beijing Monitoring Station for Animal Husbandry Environment,Beijing102200,China)

Abstract：A method for the simultaneous determination of 3 β-agonists in animal manure was studied by ultra high performance liquid chromatography coupled with electrospray ionization triple-quadruple tandem mass spectrometry(UPLC-ESI MS/MS).The drugs were cleaned up with perchloric acid solution after enzymolysis and adjusting pH to alkaline.The purified analyte was extracted with ethyl acetate.The extract was evaporated to dryness under nitrogen,and reconstituted in mobile phase solution.The target compounds were confirmed and quantified by UPLC-ESI MS/MS with the internal standard method.Under the optimal conditions,the calibration curves of 3 β-agonists showed good linearities in the range of 0.5-20.0 μg/L with correlation coefficients more than 0.998.The average recoveries of 3 β-agonists were in the range of 80.3%-110.2%,and the relative standard deviations(RSDs) were 3.0%-7.7%.The limits of detection(S/N=3) ranged from 0.04 μg/kg to 0.07 μg/kg.

Key words：ultra high performance liquid chromatography coupled with electrospray ionization triple-quadruple tandem mass spectrometry(UPLC-ESI MS/MS);animal manure;β-agonists;internal standard method

中圖分類號：O657.63

文獻(xiàn)標(biāo)識碼:A

文章編號：1004-4957(2016)01-0074-05

doi：10.3969/j.issn.1004-4957.2016.01.012

通訊作者：*石奧，碩士，研究方向：畜禽養(yǎng)殖產(chǎn)地環(huán)境，Tel:010-28348303，E-mail:stoneao12@sohu.com

基金項(xiàng)目：北京市農(nóng)委 (PXM2014 036240 000012)

收稿日期：2015-07-08；修回日期：2015-08-07