犬細小病毒病的實驗室診斷技術(shù)

鄧文超

（遼寧省動物疫病預(yù)防控制中心，遼寧 沈陽 110164）

犬細小病毒病的實驗室診斷技術(shù)

鄧文超

（遼寧省動物疫病預(yù)防控制中心，遼寧 沈陽 110164）

犬細小病毒是犬的一種常見的傳染病，臨床常見，可以通過直接接觸或者間接接觸傳播該病，該病分為兩種表現(xiàn)型：腸炎型與心肌炎型。腸炎型常以主要以嘔吐和嚴(yán)重腹瀉為臨床特征。心肌炎型犬呼吸與心血管的衰竭。該病發(fā)病較急，如果不及時治愈死亡率較高。目前診斷該病多以臨床癥狀進行判定，實驗室檢測方面的研究和報道較少，現(xiàn)將目前實驗室診斷技術(shù)綜述如下：

1 PCR診斷技術(shù)

PCR診斷技術(shù)具備快速，靈敏，準(zhǔn)確的優(yōu)點，目前該方法已經(jīng)在出入境檢驗檢疫，動物防疫等部門廣泛應(yīng)用，且建立了多種動物疫病檢測的國家標(biāo)準(zhǔn)和行業(yè)標(biāo)準(zhǔn)。姚大偉等根據(jù)犬細小病毒基因的保守序列應(yīng)用引物設(shè)計軟件設(shè)計了檢測引物,通過體系優(yōu)化與反應(yīng)條件的摸索，建立了犬細小病毒的PCR診斷方法，擴增目的片段大小為448bp，并對37份臨床病料進行了檢測，結(jié)果表明該方法完全適用于犬細小病毒病的臨床診斷。劉忠華等利用PCR技術(shù)研制犬細小病毒的PCR診斷試劑盒。該試劑盒具有特異、靈敏等優(yōu)點。

2 巢式PCR診斷技術(shù)

巢式PCR是在經(jīng)典PCR方法原理的技術(shù)上的一種改良，該方法特點是敏感性較高。簡子健等以犬細小病毒的VP2基因序列的保守區(qū)域應(yīng)用生物軟件設(shè)計了二對巢式PCR引物,成功建立了犬細小病毒的巢式PCR診斷方法，該方法以從病犬腹瀉物中提取的DNA為模板，進行巢式PCR擴增。該方法特異性較好，與犬類的其他病原無交叉，敏感性較強，檢測限度為10-9個稀釋度，對采集的臨床樣品進行檢測，陽性率為76.9%。

3 膠體金診斷技術(shù)

膠體金快速診斷技術(shù)，是近年來發(fā)展起來的一種快速簡單實用的免疫學(xué)診斷技術(shù)。該技術(shù)目前已經(jīng)廣泛的應(yīng)用在奶牛，家禽，豬等傳染病的病原和抗體檢測，是目前推廣應(yīng)用最好的一種診斷技術(shù)。王中力等應(yīng)用納米金標(biāo)記犬的細小病毒的單克隆抗體為捕獲抗體，同時在膜上噴印上多克隆抗體，建立了夾心法檢測犬細小病毒的膠體金試紙條。該方法簡單，快速，方便。5min既可判定結(jié)果。與其他方法同時對臨床樣品進行檢測，符合率達95%以上，結(jié)果證明該方法可以在臨床上進行快速診斷，也可以進行流行病學(xué)調(diào)查。

4 ELISA方法

趙國星等利用真核表達的犬細小病毒病毒樣顆粒純化后作為包被抗原建立犬細小病毒的間接ELISA檢測方法，可特異性檢測犬細小病毒陽性血清，與其他陽性血清均不發(fā)生反應(yīng)。該方法的敏感性為1∶640。趙丹等用表達純化的重組蛋白免疫家兔制備VP2多抗,采用辣根過氧化物酶進行標(biāo)記,初步建立了競爭ELISA方法。姜騫等用純化的犬細小病毒重組VP2蛋白為包被抗原,建立了檢測犬細小病毒抗體的間接ELISA方法。

10．3969/J.ISSN．1671-6027．2016．05.119