8種藥劑對(duì)煙草黑脛病菌室內(nèi)毒力測(cè)定

高亞星，彭麗娟，蔣選利*

(1.貴州大學(xué) 農(nóng)學(xué)院，貴州 貴陽 550025；2.貴州大學(xué) 煙草學(xué)院,貴州 貴陽 550025；3.貴州大學(xué) 貴州省煙草品質(zhì)研究重點(diǎn)實(shí)驗(yàn)室,貴州 貴陽 550025)

8種藥劑對(duì)煙草黑脛病菌室內(nèi)毒力測(cè)定

高亞星1，彭麗娟2,3，蔣選利1*

(1.貴州大學(xué) 農(nóng)學(xué)院，貴州 貴陽 550025；2.貴州大學(xué) 煙草學(xué)院,貴州 貴陽 550025；3.貴州大學(xué) 貴州省煙草品質(zhì)研究重點(diǎn)實(shí)驗(yàn)室,貴州 貴陽 550025)

為篩選出防治煙草黑脛病菌效果較好的藥劑，采用生長(zhǎng)速率法對(duì)8種藥劑進(jìn)行了室內(nèi)毒力測(cè)定。結(jié)果表明：化學(xué)藥劑58%甲霜·錳鋅(WP)、72%烯?！け\(WP)、80%代森錳鋅(WP)和生物農(nóng)藥1%申嗪霉素(SC)對(duì)煙草黑脛病菌菌絲生長(zhǎng)有較好的抑制效果。其中以1%申嗪霉素(SC)效果最好，其EC50為0.5276 μg/mL；58%甲霜·錳鋅(WP)、80%代森錳鋅(WP)和72%烯?！け\(WP)效果次之，EC50分別為2.6328 μg/mL、3.0775 μg/mL和5.8530 μg/mL，除50%氯溴異氰尿酸(SP)外，其余7種藥劑均隨使用劑量的增大抑制效果增強(qiáng)。

煙草黑脛??；1%申嗪霉素；EC50

煙草黑脛病(Tobacco Black Shank)是由煙草疫霉變種(P.nicotianaeBreda de Haan var.nicotianaeWaterhouse)引起的一種毀滅性土傳真菌病害，極易與煙草青枯病混發(fā)[1]。該病1896年在印度爪哇首次被報(bào)道后迅速波及至世界各大烤煙產(chǎn)區(qū)，我國于1950年在黃淮地區(qū)首次發(fā)現(xiàn)該病害[2]，主要引起烤煙整株萎蔫死亡，其根、莖和葉等各個(gè)部位均可受害，危害大田較重，苗床期發(fā)病情況相對(duì)較輕[3]。胡吉鳳等人[4]調(diào)查了貴州煙草黑脛病在威寧、開陽、天柱3個(gè)氣候區(qū)的發(fā)生情況，結(jié)果顯示發(fā)病率及危害程度呈逐漸加重。葛永怡等人[5]調(diào)查了畢節(jié)市煙草黑脛病發(fā)生情況，結(jié)果發(fā)現(xiàn)畢節(jié)市東部地區(qū)的黑脛病發(fā)生比較普遍，海拔較高的西部地區(qū)發(fā)病較輕。

目前，防治煙草黑脛病行之有效的方法主要有種植抗病品種、栽培技術(shù)管理及化學(xué)防治等方面，胡重怡等人[6]的研究表明貴州省現(xiàn)主栽品種主要有K326、云煙85、貴煙11、紅花大金元，其中貴煙11抗煙草黑脛病，王雷[7]的研究表明K326抗性強(qiáng)，云煙85為中感品種，紅花大金元為感病品種。利用化學(xué)藥劑防治具有及時(shí)和高效等特點(diǎn)，尤其在病害大流行時(shí)期較為突出，是目前防治煙草黑脛病不可或缺的主要途徑。

根據(jù)化學(xué)藥劑的發(fā)展史在某種意義上能夠看出煙草黑脛病藥劑防治的歷史[8]。最初針對(duì)煙草黑脛病使用硫酸銅(Cupricsulfate) 、王銅(Copper oxychloride)及波爾多液( Bordeaux mixture)等保護(hù)性銅制劑，到以甲霜靈為代表的具有內(nèi)吸作用的殺菌劑，再到現(xiàn)在的兼內(nèi)吸及保護(hù)作用的甲霜靈·錳鋅殺菌劑，在煙草黑脛病的防治過程中起到了至關(guān)重要的作用，隨著這些藥劑的長(zhǎng)時(shí)間大面積使用給生產(chǎn)上也帶來了嚴(yán)重的抗藥性問題[8-14]。生物藥劑相對(duì)化學(xué)藥劑而言成本高、見效慢，但是環(huán)境因素影響較小。為了提高烤煙產(chǎn)量與品質(zhì)，篩選出高效、低毒低殘留、低價(jià)位的藥劑，本文選用8種藥劑對(duì)煙草黑脛病菌進(jìn)行了室內(nèi)毒力測(cè)定，旨在篩選出對(duì)該病抑菌效果較好的藥劑，以期控制煙草黑脛病的發(fā)生與流行。

1 材料與方法

1.1 試驗(yàn)材料

1.1.1 供試標(biāo)本

K326典型發(fā)病菌株。

1.1.2 供試培養(yǎng)基

燕麥培養(yǎng)基[15]:用于煙草黑脛病菌的分離純化及保存；10%V8蔬菜汁培養(yǎng)基[15]:用于室內(nèi)毒力測(cè)定。

1.1.3 供試藥劑

本文供試藥劑名稱、劑型、生產(chǎn)廠家及濃度梯度見表1。

1.2 方法

1.2.1 病原菌分離純化

對(duì)樣品進(jìn)行拍照后摘去葉片，用自來水沖洗干凈后用無菌牛皮紙袋包裹，并進(jìn)行編號(hào)，記錄采集地點(diǎn)及日期。將樣品病株按鄭小波[15]常規(guī)分離方法分離，將莖稈剖開，從碟片狀的病健交界處取3 mm×3 mm的髓部組織塊接種于燕麥培養(yǎng)基上，在28℃恒溫培養(yǎng)箱中黑暗培養(yǎng)4 d后，根據(jù)菌落形態(tài)、顏色及菌絲形態(tài)初步判斷有隔無隔，無隔菌絲進(jìn)行鏡檢后純化，將純化的病原菌接種于裝有燕麥培養(yǎng)基的斜面試管中室溫保存。

1.2.2 8種藥劑對(duì)煙草黑脛病菌的室內(nèi)毒力測(cè)定

采用菌絲生長(zhǎng)速率法測(cè)定[16]。在實(shí)驗(yàn)室無菌條件下用無菌水菌將各藥劑稀釋成所需要的5個(gè)濃度梯度，各藥劑分別與V8培養(yǎng)基按1∶9混合均勻后倒入滅菌的培養(yǎng)皿中，每個(gè)濃度梯度重復(fù)3次，制成系列濃度梯度的含藥培養(yǎng)基，無菌水為對(duì)照，冷卻凝固。將培養(yǎng)7 d的煙草黑脛病病菌用直徑7 mm的打孔器沿菌落同一圓周打取菌餅，將菌餅接種到不同濃度含藥平板中央，菌絲面朝下，每平板接種1塊，每種濃度1個(gè)處理，每個(gè)處理3次重復(fù)，放置在28℃恒溫培養(yǎng)箱中黑暗培養(yǎng)7 d。用十字交叉法測(cè)量各供試藥劑不同濃度處理的菌落生長(zhǎng)直徑，取平均值后計(jì)算抑制率。

表1 供試藥劑及濃度梯度Tab.1 The tested fungicides and concentration gradie

1.2.3 數(shù)據(jù)處理分析

將生長(zhǎng)抑制率轉(zhuǎn)換成抑制機(jī)率值，采用農(nóng)藥室內(nèi)生物測(cè)定數(shù)據(jù)處理系統(tǒng)軟件[17]處理計(jì)算毒力回歸方程Y=A+B*X，抑制中濃度(EC50)及相關(guān)系數(shù)R。Y代表抑制率轉(zhuǎn)換的機(jī)率值，A代表斜率，斜率越大說明在一定時(shí)期內(nèi)越容易產(chǎn)生抗藥性，B代表一個(gè)常數(shù)，X代表藥劑濃度對(duì)數(shù)。

2 結(jié)果與分析

2.1 不同濃度藥劑對(duì)煙草黑脛病菌絲的抑菌作用

由表2可知，除T7外的7種藥劑在對(duì)應(yīng)的濃度梯度范圍內(nèi)均對(duì)煙草黑脛病有較好的抑菌作用。7種藥劑隨劑量增加抑制率明顯上升，菌落直徑逐漸減小，藥劑質(zhì)量與抑制率呈正相關(guān)。T7隨濃度增加菌落直徑逐漸增大，濃度與抑制作用之間成負(fù)相關(guān)關(guān)系。T2、T3、T4和T6隨濃度增加抑制率均達(dá)到90%以上，T1、T5和T8效果均在20%～80%之間，其中T8在濃度為0.3125 μg/mL～0.625 μg/mL之間效果變化不大。T7濃度在250 μg/mL～500 μg/mL之間菌落直徑差異不大，濃度在200 μg/mL時(shí)菌落直徑超過對(duì)照菌落直徑，停止抑菌作用，不僅沒有抑制作用反而有促進(jìn)菌絲生長(zhǎng)作用。

2.2 8種對(duì)煙草黑脛病菌室內(nèi)毒力測(cè)定

由表3可知，供試的8種藥劑對(duì)煙草黑脛病的毒力回歸方程分別相關(guān)系數(shù)r分別為0.9906、0.9553、0.9368、0.9983、0.9853、0.9985、0.5336和0.9571，可見除T7外線性關(guān)系均表現(xiàn)良好,各藥劑的毒力回歸方程的相關(guān)系數(shù)均在0.9以上,說明回歸方程擬合程度較高。其中T8的抑制中濃度(EC50)最低，為0.5276 μg/mL。其次是T1，EC50值為2.6328 μg/mL，T3 EC50值為 3.0775 μg/mL，T2 EC50值為5.8530 μg/mL。結(jié)果表明：T1、T2、T3和T8效果相對(duì)較好。T5和T7相比差異顯著，可能作用機(jī)理不同所致，說明供試菌株對(duì)這兩種藥不敏感。T6分別與T5、T1、T2、T3、T4和T8無差異顯著。T1、T2、T3、T4和T8均在同一水平，差異不顯著。

表2 8種藥劑對(duì)煙草黑脛病菌抑制作用Tab.2 Inhibition of eight kinds of fungicides to Phytophthora nicotiance

3 結(jié)論與討論

本文選用8種藥劑對(duì)煙草黑脛病菌進(jìn)行室內(nèi)毒力測(cè)定，EC50值是藥物安全性指標(biāo)，旨在說明所選藥劑防治煙草黑脛病菌效果，該值越小說明藥劑效果越好，由小到大順序?yàn)椋?%申嗪霉素(SC)(0.5276 μg/mL)<58%甲霜·錳鋅(WP)(2.6328 μg/mL)<80%代森錳鋅(WP)(3.0775 μg/mL)<72%烯?！け\(WP)(5.8530 μg/mL)<30%甲霜·噁霉靈(AS)(24.9082 μg/mL)<52.5%噁酮·霜脲氰(WG)(107.8243 μg/mL)<70%噁霉靈(WP)(293.0293μg/mL)<50%氯溴異氰尿酸(SP)(9074.5566 μg/mL)。1%申嗪霉素(SC)效果最好，抑制中濃度(EC50)最低，其次是58%甲霜·錳鋅(WP)、80%代森錳鋅(WP)和72%烯?！け\(WP)。

表3 8種藥劑對(duì)煙草黑脛病菌的毒力測(cè)定Tab.3 eight kinds of fungicides indoor virulence levels were tested to Phytophthora nicotiance

注:表中數(shù)據(jù)后標(biāo)不同小寫字母者表示在0.05水平上差異顯著。

本實(shí)驗(yàn)選用的8種藥劑除50%氯溴異氰尿酸(SP)外，其余7種藥劑對(duì)煙草黑脛病菌菌絲生長(zhǎng)均有較好的抑制作用。58%甲霜·錳鋅(WP)是一種安全性較高，具有內(nèi)吸保護(hù)性作用的化學(xué)殺菌劑，生產(chǎn)上用于防治煙草黑脛病較為常見，但是因甲霜靈對(duì)病原菌作用位點(diǎn)較單一加之長(zhǎng)期大面積使用已經(jīng)使病原菌易對(duì)其產(chǎn)生抗藥性[13,19]。72%烯酰·丙森鋅(WP)和80%代森錳鋅(WP)同樣表現(xiàn)出較好的抑菌效果,因此建議同58%甲霜·錳鋅(WP)輪換使用，避免引起抗藥性。

1%申嗪霉素(SC)屬于生物藥劑，該藥劑高效、低毒、廣譜，并且與環(huán)境相容性好[18]，本實(shí)驗(yàn)中1%申嗪霉素(SC)抑制菌絲生長(zhǎng)的效果優(yōu)于同甲霜靈復(fù)配的58%甲霜·錳鋅(WP)，目前未有文獻(xiàn)報(bào)道1%申嗪霉素(SC)防治煙草黑脛病田間試驗(yàn)，所以大面積推廣該藥防治煙草黑脛病還需進(jìn)一步田間小區(qū)試驗(yàn)。朱流紅等人[20]選用1%申嗪霉素對(duì)煙草黑脛病菌進(jìn)行了研究，但效果相較還存在一定差異，原因可能是菌株來源不同，導(dǎo)致病原菌對(duì)該藥劑的敏感性不同，還有可能是選用培養(yǎng)基不同，所含利于病原菌生長(zhǎng)的營養(yǎng)物質(zhì)不同所致。50%氯溴異氰尿酸(SP)是在農(nóng)藥商家推薦下進(jìn)行試驗(yàn)，但效果最差，促進(jìn)菌絲生長(zhǎng)可能與藥劑濃度及菌種致病性強(qiáng)弱有關(guān)。

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Toxicological Test of Eight Fungicides to Tobacco Black Shank

GAOYa-xing1，PENGLi-juan2，3JIANGXuan-li1*

(1.CollegeofAgriculture,Guiyang,Guizhou550025，China；2.CollegeofTobacco，GuizhouUniversity，Guiyang,Guizhou550025，China;3.GuizhouKeyLaboratoryforTobaccoQuality,GuizhouUniversityGuiyang,Guizhou550025，China)

In order to screen out effective fungicides to control tobacco black shank pathogen, eight fungicideswere tested by plate growth rate method. The results showed that the chemicalsof 58% ridomil-MZ (WP), 72% acryloxyethyl-zinc, 80% mancozeb (WP) and the biological pesticideof 1% phenazine-1-carboxylic (SC) had better inhibitory effectontobacco black shank pathogen. The 1% phenazine-1-carboxylic (SC) had the best inhibitory effect and itsEC50was 0.5276 μg/mL, followed by 58% ridomil-MZ, 80% mancozeb (WP) and 72% acryloxyethyl-zinc (WP) with theEC50of 2.6328 μg/mL, 3.0775 μg/mL and 5.8530 μg/mL, respectively. For these seven fungicides, the inhibitory effect increases withtheincreasingofthe using dosage,exceptfor 50% chlorobromoiso cyanurate acid (SP).

Tobacco Black Shank；1% phenazine-1-carboxylic (SC)；EC50

2016-08-06；

2016-09-27

遵義市煙草科技項(xiàng)目“抗菌肽對(duì)烤煙青枯病的防治技術(shù)研究”[201405]。

蔣選利(1960-)，男，漢族，教授，博導(dǎo)，主要研究方向：植物病理學(xué)的教學(xué)與研究；E-mail：jxl3237@163.com。

S432.1

A

1008-0457(2016)06-0031-04 國際

10.15958/j.cnki.sdnyswxb.2016.06.005