肝細(xì)胞肝癌組織中miR-21表達(dá)水平及與預(yù)后的相關(guān)性

劉　峰　梁國(guó)棟　王　巖　劉海瑞　王　斌　楊玉波

(吉林省腫瘤醫(yī)院肝膽胰胃外科，吉林　長(zhǎng)春　130012)

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肝細(xì)胞肝癌組織中miR-21表達(dá)水平及與預(yù)后的相關(guān)性

劉峰梁國(guó)棟王巖劉海瑞王斌楊玉波

(吉林省腫瘤醫(yī)院肝膽胰胃外科，吉林長(zhǎng)春130012)

摘要〔〕目的探討肝細(xì)胞肝癌患者組織中miR-21的表達(dá)水平及其預(yù)后意義。方法共收集50例肝細(xì)胞肝癌的患者，采用免疫組化法檢測(cè)肝細(xì)胞肝癌及配對(duì)癌旁組織中miR-21的表達(dá)水平，分析miR-21蛋白的表達(dá)與患者臨床病理特征及預(yù)后生存的相關(guān)性。結(jié)果肝細(xì)胞肝癌組織中miR-21表達(dá)水平顯著高于癌旁組織(58.0% vs 6.0%，χ2= 31.07,P<0.000 1)。miR-21高表達(dá)與臨床T分期相關(guān)(χ2=8.043,P=0.018)；但miR-21蛋白表達(dá)水平與患者年齡、性別、腫瘤大小、臨床分期、N分期及分化程度均無(wú)顯著關(guān)聯(lián)(P>0.05)。高表達(dá)miR-21的肝細(xì)胞肝癌患者總生存時(shí)間明顯降低(P=0.032)，但患者無(wú)疾病進(jìn)展生存期差異無(wú)統(tǒng)計(jì)學(xué)意義(P=0.116)。 結(jié)論肝細(xì)胞肝癌患者miR-21高表達(dá)可能作為腫瘤患者預(yù)后不良的重要標(biāo)志物之一，而與腫瘤的發(fā)生及發(fā)展的機(jī)制性研究尚需進(jìn)一步驗(yàn)證。

關(guān)鍵詞〔〕 肝細(xì)胞肝癌；miR-21；免疫組織化學(xué)

第一作者：劉峰(1968-)，男，副主任醫(yī)師，主要從事消化道腫瘤外科的臨床研究。

目前雖然有多種臨床手段治療肝細(xì)胞肝癌，但患者預(yù)后差，且5年生存率僅約10%〔1〕。miRNA作為內(nèi)源性非編碼小分子RNA，參與至少30%蛋白編碼基因的調(diào)控及多種疾病發(fā)生與進(jìn)展〔2〕。研究顯示miR-21可能成為肝癌不良預(yù)后的標(biāo)志物之一〔3〕。miR-21高表達(dá)在多種腫瘤中，且其表達(dá)程度參與腫瘤的發(fā)生與發(fā)展，但在肝癌中的研究尚未見(jiàn)報(bào)道，且缺乏預(yù)后生存的證據(jù)。本研究擬通過(guò)免疫組化方法檢測(cè)肝細(xì)胞肝癌樣本中miR-21的表達(dá)水平及其預(yù)后意義。

1材料與方法

1.1研究對(duì)象收集2013年1月至2014年1月吉林省腫瘤醫(yī)院肝膽外科住院肝細(xì)胞肝癌患者50例，其中男29例，女21例。年齡>50歲28例，<50歲22例；腫瘤大小<5 cm 20例，>5 cm 30例；低分化29例，中/高分化21例；臨床分期ⅡA期6例，ⅡB期7例，ⅢA期12例，ⅢB期14例，ⅢC期11例；T分期：T2期9例，T3期21例，T4期20例；N分期：N0 7例，N1期15例，N2期13例，N3期15例。由兩位臨床病理醫(yī)生根據(jù)肝細(xì)胞肝癌臨床病理分型對(duì)患者評(píng)定TNM分期。術(shù)后將患者腫瘤組織與癌旁組織分別進(jìn)行病理分析，癌旁組織選擇正常的肝組織，本實(shí)驗(yàn)已獲吉林省腫瘤醫(yī)院倫理委員會(huì)批準(zhǔn)。

1.2免疫組化將石蠟切片置于60℃烤箱中烘片3 h，脫蠟至水后浸于枸櫞酸緩沖溶液中高壓復(fù)性5 min，選用3%的H2O2封閉內(nèi)源性過(guò)氧化酶并使用羊血清抑制非特異性結(jié)合。以1∶1 000倍稀釋miR-21抗體(美國(guó)CST公司)并4℃過(guò)夜。染色強(qiáng)度判定由兩位來(lái)自吉林省腫瘤醫(yī)院病理醫(yī)生負(fù)責(zé)。根據(jù)染色陽(yáng)性細(xì)胞數(shù)進(jìn)行評(píng)分： 0分為無(wú)色，1分為<10%細(xì)胞，2分為10%～50%細(xì)胞，3分>50%細(xì)胞表達(dá)miR-21。根據(jù)染色評(píng)分結(jié)果將患者分為miR-21高表達(dá)(2～3分)與低表達(dá)(0～1分)。

1.3統(tǒng)計(jì)學(xué)方法應(yīng)用SPSS17.0軟件進(jìn)行χ2檢驗(yàn)、t檢驗(yàn)和Kaplan-Meier。

2結(jié)果

2.1肝細(xì)胞肝癌及癌旁組織中miR-21蛋白的表達(dá)水平50例樣本中29例患者miR-21高表達(dá)，其中評(píng)分2分11例，3分18例。配對(duì)的癌旁組織3例為miR-21高表達(dá)，miR-21在肝癌中的表達(dá)明顯高于癌旁組織(χ2= 31.07,P<0.000 1)。

2.2miR-21表達(dá)水平與肝細(xì)胞肝癌臨床病理因素的相關(guān)性研究miR-21高表達(dá)與T分期相關(guān)(P= 0.018)。但miR-21表達(dá)水平與患者年齡、性別、腫瘤大小、臨床分期及分化程度均無(wú)顯著關(guān)聯(lián)(P>0.05)。見(jiàn)表1。

表1　miR-21表達(dá)水平與肝細(xì)胞肝癌患者

2.3預(yù)后統(tǒng)計(jì)統(tǒng)計(jì)患者隨訪時(shí)間總計(jì)為27個(gè)月，其中失訪4例，失訪率達(dá)8.0%。高表達(dá)miR-21的肝細(xì)胞肝癌患者總生存時(shí)間明顯短于miR-21低表達(dá)者(P=0.032)(圖1)，而無(wú)疾病進(jìn)展生存時(shí)間則無(wú)顯著性差異(P=0.116)(圖2)。

圖1　miR-21表達(dá)水平與患者總生存率的相關(guān)性

圖2　miR-21表達(dá)水平與患者無(wú)疾病生存率的相關(guān)性

3討論

80%的肝細(xì)胞肝癌患者對(duì)于化療療效不佳，而化療敏感的患者在治療一段時(shí)間后也將產(chǎn)生耐藥。近來(lái)已有研究證實(shí)，miRNA是一種非編碼RNA(UTR)，通過(guò)靶基因 3'UTR的結(jié)合來(lái)調(diào)節(jié)靶基因表達(dá)程度，從而參與腫瘤細(xì)胞生長(zhǎng)、增殖、分化和凋亡等信號(hào)通路的調(diào)控過(guò)程〔4〕。相關(guān)研究顯示miR-21在肝細(xì)胞肝癌耐藥機(jī)制中起著重要作用，參與細(xì)胞趨化運(yùn)動(dòng)并與腫瘤細(xì)胞侵襲轉(zhuǎn)移緊密關(guān)聯(lián)。miR-21在高表達(dá)的乳腺癌、結(jié)直腸癌及胃癌等惡性腫瘤中患者預(yù)后生存差〔5，6〕，Romanska等〔7〕研究顯示miR-21表達(dá)水平與臨床分化程度無(wú)相關(guān)性(P<0.05)，但miR-21表達(dá)陽(yáng)性率隨著腫瘤臨床分期升高而增加。而有關(guān)miR-21在肝細(xì)胞肝癌中的預(yù)后生存研究少見(jiàn)。

在進(jìn)一步實(shí)驗(yàn)中本研究團(tuán)隊(duì)將通過(guò)基礎(chǔ)實(shí)驗(yàn)驗(yàn)證miR-21在人肺癌細(xì)胞系(hepG2)等肝癌細(xì)胞中的生物學(xué)作用，進(jìn)一步表明miR-21在肝癌細(xì)胞中表達(dá)的相關(guān)機(jī)制研究，為臨床肝細(xì)胞肝癌的診斷、預(yù)后評(píng)估和臨床新治療模式提供前期基礎(chǔ)。

參考文獻(xiàn)4

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2Wierstra L,Alves J,Fox M.A typical proliferation associated transcription factor〔J〕.Biol Chem，2007;388(12):1257-74.

3Kang BW,Lee D,Chung HY,etal.Tetraspanin CD151 expression associated with prognosis for patients with advanced gastric cancer〔J〕.J Cancer Res Clin Oncol,2013;139(11):1835-43.

4Allen KE,Weiss GJ.Resistance may not be futile:microRNA biomarkers for chemoresistance and potential therapeutics〔J〕.Mol Cancer Ther,2010;9(12);3126-36.

5Zhong M,Ma X,Sun CJ,etal.MicroRNAs reduce tumor growth and contribute to enhance cytotoxicity induced by gefitinib in non-small cell lung cancer〔J〕.Chem Biol interact,2010;184(3):431-8.

6Z?ller M.Tetraspanins:push and pull in suppressing and promoting metastasis〔J〕.Nat Rev Cancer,2009;9(1):40-55.

7Romanska HM,Berditchevski F.Tetraspanins in human epithelial malignancies〔J〕.J Pathol,2011;223(1):4-14.

〔2015-01-07修回〕

(編輯袁左鳴/滕欣航)

通訊作者：梁國(guó)棟(1983-)，男，主治醫(yī)師，博士，主要從事普通外科的臨床研究。

基金項(xiàng)目：吉林省科技廳項(xiàng)目(200705274)

中圖分類號(hào)〔〕R735.2〔

文獻(xiàn)標(biāo)識(shí)碼〕A〔

文章編號(hào)〕1005-9202(2016)01-0105-02；

doi：10.3969/j.issn.1005-9202.2016.01.047