阿托伐他汀對(duì)自身免疫性腦脊髓膜炎大鼠白細(xì)胞介素-27和炎性趨化因子5的影響

殷旭華　徐　明　于慧玲　馬文娟

(內(nèi)蒙古醫(yī)科大學(xué)附屬醫(yī)院神經(jīng)內(nèi)科，內(nèi)蒙古　呼和浩特　010050)

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阿托伐他汀對(duì)自身免疫性腦脊髓膜炎大鼠白細(xì)胞介素-27和炎性趨化因子5的影響

殷旭華徐明1于慧玲2馬文娟

(內(nèi)蒙古醫(yī)科大學(xué)附屬醫(yī)院神經(jīng)內(nèi)科，內(nèi)蒙古呼和浩特010050)

摘要〔〕目的探討阿托伐他汀對(duì)自身免疫性腦脊髓膜炎(EAE)大鼠白細(xì)胞介素(IL)-27和炎性趨化因子(CCL)5蛋白表達(dá)的影響。方法取80只Wistar雄性大鼠(>18 w)隨機(jī)分為4組(n=20)：對(duì)照組、模型組、阿托伐他汀大劑量組(8 mg/kg組)和阿托伐他汀小劑量組(2 mg/kg組)。除對(duì)照組，其他3組均采用新鮮豚鼠全脊髓和完全弗氏佐劑(CFA)免疫制備EAE模型，免疫后第2天開始，模型組給予生理鹽水灌胃，阿托伐他汀組給予阿托伐他汀不同劑量灌胃，持續(xù)治療21 d，于第22天處死，取腦干和脊髓待測(cè)。采用酶聯(lián)免疫法檢測(cè)各組腦干、脊髓中IL-27和CCL5蛋白的表達(dá)水平。結(jié)果與對(duì)照組比較，模型組IL-27蛋白水平明顯降低、CCL5蛋白水平明顯升高(P<0.01)；阿托伐他汀小劑量組IL-27蛋白水平降低、CCL5蛋白水平升高(P<0.01)；阿托伐他汀大劑量組IL-27蛋白水平略降低、CCL5蛋白水平略升高無顯著差異(P>0.05)，模型組、阿托伐他汀大、小劑量組間差異顯著(P<0.01)。結(jié)論阿托伐他汀能夠通過上調(diào)IL-27蛋白水平、下調(diào)CCL5蛋白水平，減輕EAE大鼠發(fā)病程度及神經(jīng)功能損傷，且大劑量作用優(yōu)于小劑量。

關(guān)鍵詞〔〕阿托伐他汀；自身免疫性腦脊髓膜炎；白細(xì)胞介素-27；炎性趨化因子

1長(zhǎng)春大學(xué)特教學(xué)院2內(nèi)蒙古醫(yī)科大學(xué)病理教研室

第一作者：殷旭華(1966-)，女，碩士，主任醫(yī)師，主要從事神經(jīng)免疫學(xué)研究。

自身免疫性腦脊髓膜炎(EAE)發(fā)病機(jī)制中炎性反應(yīng)對(duì)其發(fā)生、發(fā)展有重要意義〔1〕。白細(xì)胞介素(IL)-27和炎性趨化因子(CCL)5在自身免疫性疾病和宿主抗感染過程中起著重要作用〔2〕。本實(shí)驗(yàn)旨在炎性水平探究阿托伐他汀對(duì)EAE大鼠的神經(jīng)保護(hù)作用。

1資料與方法

1.1實(shí)驗(yàn)動(dòng)物及分組從吉林大學(xué)白求恩醫(yī)學(xué)部實(shí)驗(yàn)動(dòng)物中心購(gòu)買80只Wistar雄性大鼠，鼠齡>18 w，體重(500±30)g，豚鼠10只，雌雄不限，平均體重(410±20)g，隨機(jī)分為4組(n=20)：對(duì)照組、模型組、阿托伐他汀大劑量組(8 mg/kg組)和阿托伐他汀小劑量組(2 mg/kg組)。

1.2模型制備〔3〕及實(shí)驗(yàn)試劑除對(duì)照組，其他3組均采用新鮮豚鼠全脊髓和完全弗氏佐劑(CFA)免疫制備EAE模型，即新鮮豚鼠全脊髓與生理鹽水制成50%勻漿液，加上等體積的CFA，按0.5 ml/只注射于大鼠四肢足墊皮下。阿托伐他汀(大連輝瑞制藥有限公司, 生產(chǎn)批號(hào)為55837001)；CFA購(gòu)于Sigma公司；IL-27和CCL5蛋白ELISA試劑盒購(gòu)于南京建成生物有限公司。

1.3給藥劑量及給藥方式免疫后第2天開始，模型組給予生理鹽水灌胃，阿托伐他汀組給予阿托伐他汀不同劑量灌胃(8 mg/kg組和2 mg/kg組)，持續(xù)治療21 d，于第22天處死，取腦干和脊髓待測(cè)。

1.4各組腦干、脊髓中IL-27和CCL5蛋白表達(dá)水平的檢測(cè)10%的水合氯醛腹腔麻醉大鼠，取大鼠腦干、脊髓各0.1 g制備成10%的勻漿懸液，采用ELISA檢測(cè)，操作嚴(yán)格按照試劑盒步驟。

1.5統(tǒng)計(jì)學(xué)方法采用SPSS16.0統(tǒng)計(jì)學(xué)軟件進(jìn)行t檢驗(yàn)。

2結(jié)果

與對(duì)照組比較，模型組腦干和脊髓IL-27蛋白水平明顯降低、CCL5明顯升高(P<0.01)；阿托伐他汀小劑量組腦干和脊髓IL-27蛋白水平降低、CCL5升高(P<0.01)；阿托伐他汀大劑量組腦干和脊髓IL-27蛋白水平略降低、CCL5略升高無顯著差異(P>0.05)，模型組、阿托伐他汀大、小劑量組差異顯著(P<0.01)，見表1。

表1　各組腦干和脊髓中IL-27及CCL5蛋白

與對(duì)照組比較：1)P<0.01；與模型組比較：2)P<0.01；與阿托伐他汀小劑量組比較：3)P<0.01

3討論

EAE確切病因及發(fā)病機(jī)制迄今不明，亦無有效治療藥物，它亦是由T細(xì)胞介導(dǎo)的發(fā)生于中樞神經(jīng)系統(tǒng)的自身免疫性病〔4〕。IL-27是由T淋巴細(xì)胞分泌的炎性因子，在Th1型免疫應(yīng)答中發(fā)揮重要作用，具有促進(jìn)Th1型反應(yīng)和減輕炎癥的雙重作用，在機(jī)體抗感染、抗腫瘤及自身免疫性疾病的病理過程中發(fā)揮著關(guān)鍵性作用〔5〕。CCL5是Th1介導(dǎo)分化的炎性趨化因子，它能誘導(dǎo)炎性細(xì)胞侵入中樞神經(jīng)系統(tǒng)，從而誘發(fā)炎性反應(yīng)〔6〕。以往研究〔7〕發(fā)現(xiàn)，他汀類藥物除降脂作用外，還具有免疫調(diào)節(jié)和抗炎效應(yīng)，能夠調(diào)節(jié)Th1/Th2細(xì)胞的平衡，抑制Th1細(xì)胞的增殖。本研究提示阿托伐他汀可以上調(diào)IL-27蛋白和下調(diào)CCL5蛋白水平的表達(dá)，在炎性水平干預(yù)EAE病變進(jìn)程，對(duì)中樞神經(jīng)系統(tǒng)起到保護(hù)作用。

參考文獻(xiàn)4

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2Mascanfroni ID, Yeste A, Vieira SM,etal.IL-27 acts on DCs to suppress the T cell response and autoimmunity by inducing expression of the immunoregulatory molecule CD39〔J〕.Nat Immunol, 2013;14(10)：1054-63.

3徐玉, 劉瑞春, 王穎, 等.Wistar大鼠實(shí)驗(yàn)性自身免疫性腦脊髓炎模型的建立〔J〕.腦與神經(jīng)疾病雜志, 2007;15(6)：415-7.

4金世杰,徐俊,黃榕,等.口服耐受防治大鼠實(shí)驗(yàn)性自身免疫性腦脊髓膜炎的實(shí)驗(yàn)研究〔J〕.嶺南急診醫(yī)學(xué)雜志,2009;14(2)：84-6.

5Moraes AS, Paula RF, Pradella F,etal.The suppressive effect of IL-27 on encephalitogenic Th17 cells induced by multiwalled Carbon nanotubes reduces the severity of experimental autoimmune encephalomyelitis〔J〕.CNS Neurosci Ther,2013;19(9)：682-7.

6Van-Veen T，Nielsen J，Berkhof J，etal.CCL5 and CCR5 genotypes modify clinical，radiological and pathological features of multiple sclerosis〔J〕.J Neuroimmunol,2007;190(1/2)：157-64.

7田廣平,石秋艷,張春陽,等.阿托伐他汀對(duì)實(shí)驗(yàn)性自身免疫性腦脊髓炎大鼠血清TNF-α和IL-10的影響〔J〕.海南醫(yī)學(xué),2014;25(6)：790-2.

〔2015-03-08修回〕

(編輯苑云杰)

通訊作者：馬文娟(1962-)，女，主任醫(yī)師，主要從事神經(jīng)免疫學(xué)研究。

基金項(xiàng)目：內(nèi)蒙古自治區(qū)自然科學(xué)基金(No.2011MS1154)

中圖分類號(hào)〔〕R392.11〔

文獻(xiàn)標(biāo)識(shí)碼〕A〔

文章編號(hào)〕1005-9202(2016)01-0038-02；

doi：10.3969/j.issn.1005-9202.2016.01.015