小牛血去蛋白注射液對(duì)糖尿病大鼠周?chē)窠?jīng)病變的保護(hù)作用

王廣紅　徐廣宇　安麗萍　邵曉彤　李洪宇　杜培革

(北華大學(xué)藥學(xué)院，吉林　吉林　132013)

?

小牛血去蛋白注射液對(duì)糖尿病大鼠周?chē)窠?jīng)病變的保護(hù)作用

王廣紅徐廣宇安麗萍邵曉彤李洪宇杜培革

(北華大學(xué)藥學(xué)院，吉林吉林132013)

摘要〔〕目的探討小牛血去蛋白注射液(DCSI)對(duì)糖尿病大鼠初期周?chē)窠?jīng)病變(DPN)的作用。方法大鼠腹腔注射2%鏈脲佐霉素(STZ)65 mg/kg建立DM模型，DM大鼠隨機(jī)分為模型組(DM)，聯(lián)合給藥高劑量組(H，二甲雙胍105 mg/kg+DCSI 378 mg/kg)，聯(lián)合給藥中劑量組(M，二甲雙胍105 mg/kg+ DCSI 189 mg/kg)，聯(lián)合給藥低劑量組(L，二甲雙胍105 mg/kg+ DCSI 94.5 mg/kg)，降糖組(PN，二甲雙胍105 mg/kg)。8 w后，采集大鼠血清，測(cè)定血清生化指標(biāo)。蘇木素-伊紅(HE)染色觀(guān)察坐骨神經(jīng)組織病理學(xué)改變。結(jié)果聯(lián)合給藥組空腹血糖(FPG)、總膽固醇(TC)、丙二醛(MDA)、低密度脂蛋白(LDL-C)、甘油三酯(TG)含量降低，高密度脂蛋白(HDL-C)、谷胱甘肽(GSH)含量升高，超氧化物歧化酶(SOD)、谷胱甘肽過(guò)氧化物酶(GSH-Px)活力升高(均P<0.05)。軸突-神經(jīng)膠質(zhì)連接趨于正常，毛細(xì)血管壁變粗，阻塞減輕。結(jié)論DCSI對(duì)DM大鼠初期周?chē)窠?jīng)病變有保護(hù)作用。

關(guān)鍵詞〔〕糖尿病周?chē)窠?jīng)病變;小牛血去蛋白注射液;抗氧化

第一作者：王廣紅(1989-)，女，教授，主要從事生物大分子功能開(kāi)發(fā)與應(yīng)用方向研究。

小牛血去蛋白注射液(DCSI)能夠顯著提高網(wǎng)狀內(nèi)皮系統(tǒng)活力，提高酶活性，加速細(xì)胞的氧化磷酸化反應(yīng)和ATP的合成，激活細(xì)胞呼吸，促進(jìn)新陳代謝，加快組織再生，對(duì)腦神經(jīng)損傷、腦卒中及腦梗死等疾病有積極的治療效果〔1〕。此外，DCSI具有類(lèi)似胰島素樣作用，但不依賴(lài)胰島素受體，直接激活第二信使，促進(jìn)葡萄糖轉(zhuǎn)運(yùn)和細(xì)胞能量代謝，改善氧的利用率，促進(jìn)細(xì)胞對(duì)氧和葡萄糖的攝取與利用，對(duì)缺血缺氧造成的細(xì)胞能量代謝降低具有拮抗作用〔2〕。近年來(lái)DCSI開(kāi)始在臨床上用于糖尿病(DM)并發(fā)癥的治療，但其作用機(jī)制還不十分清楚。本實(shí)驗(yàn)主要探討DCSI對(duì)DM大鼠初期周?chē)窠?jīng)病變的作用及其部分機(jī)制。

1材料與方法

1.1材料

1.1.1實(shí)驗(yàn)動(dòng)物Wistar雄性大鼠，體重(200±20)g，購(gòu)自吉林大學(xué)動(dòng)物實(shí)驗(yàn)中心，動(dòng)物許可證編號(hào)為SCXK(吉)-2011-0004。

1.1.2儀器與試劑酶標(biāo)儀(TECAN InfiniteM200)。DCSI(長(zhǎng)春市長(zhǎng)慶藥業(yè)集團(tuán)有限公司)，鏈脲佐霉素(美國(guó)Sigma公司)，血糖試劑盒、甘油三酯(TG)測(cè)定試劑盒、總膽固醇(TC)測(cè)定試劑盒、低密度脂蛋白膽固醇(LDL-C)測(cè)定試劑盒、高密度脂蛋白膽固醇(HDL-C)測(cè)定試劑盒購(gòu)自中生北控生物科技股份有限公司，總超氧化物歧化酶(SOD)測(cè)定試劑盒、丙二醛(MDA)測(cè)定試劑盒、谷胱甘肽測(cè)定試劑盒、谷胱甘肽過(guò)氧化物酶測(cè)定試劑盒購(gòu)自南京建成生物工程研究所。

1.2方法

1.2.1DM大鼠模型建立100只Wistar大鼠，隨機(jī)選取10只作為正常對(duì)照組，其余90只作為造模組。造模組大鼠禁食12 h，腹腔注射2%鏈脲佐霉素(STZ)65 mg/kg。1 w后，尾靜脈采血測(cè)定空腹血糖(FPG)值，將血糖值≥7.8 mmol/L者視為造模成功。

1.2.2動(dòng)物分組正常對(duì)照組(CON)：生理鹽水2 ml；模型組(DM)：生理鹽水2 ml；聯(lián)合給藥高劑量組(H)：二甲雙胍105 mg/kg+ DCSI 378 mg/kg；聯(lián)合給藥中劑量組(M)：二甲雙胍105 mg/kg+ DCSI 189 mg/kg；聯(lián)合給藥低劑量組(L)：二甲雙胍105 mg/kg+ DCSI 94.5 mg/kg；降糖組(PN)：二甲雙胍105 mg/kg;給藥方式：生理鹽水和DCSI為腹腔注射，二甲雙胍為口服灌胃，共給藥8 w。

1.2.3生化指標(biāo)檢測(cè)給藥第8周末，大鼠禁食12 h，稱(chēng)量體重，腹腔注射20%烏拉坦(1 ml/100 g)麻醉大鼠，腹主動(dòng)脈取血，4 000 r/min離心15 min，分離血清，根據(jù)試劑盒說(shuō)明書(shū)檢測(cè)FPG、TC、TG、HDL-C、LDL-C、SOD、MDA、GSH、GSH-Px。

1.2.4神經(jīng)組織病理形態(tài)學(xué)觀(guān)察取大鼠坐骨神經(jīng),經(jīng)乙醇、二甲苯脫水后用石蠟包埋，制成蠟塊；蠟塊切成2 μm的薄片，60℃下烘干15 min；再經(jīng)二甲苯、乙醇脫蠟；自來(lái)水沖洗5 min，蒸餾水浸濕；蘇木精中染色2～3 min，自來(lái)水沖洗；鹽酸酒精中分色5 min，自來(lái)水沖洗10 min；伊紅中染色2 min，自來(lái)水沖洗；乙醇、二甲苯脫水；中性樹(shù)膠封片。觀(guān)察神經(jīng)組織病理形態(tài)。

1.3統(tǒng)計(jì)學(xué)分析采用SPSS20.0軟件進(jìn)行t檢驗(yàn)。

2結(jié)果

2.1給藥后各組大鼠血糖、血脂變化與DM組相比，H、M組大鼠FPG、TC、LDL-C含量顯著降低，HDL-C含量顯著升高(P<0.05)；H、M、L組和PN組大鼠TG含量顯著降低(P<0.05)；與PN組相比，H、M組大鼠血糖顯著降低，TC、TG、LDL-C含量顯著降低，HDL-C含量顯著升高(P<0.05)。見(jiàn)表1。

表1　給藥后大鼠血糖、血脂變化

與DM組比較：1)P<0.05;與PN組比較：2)P<0.05，下表同

2.2給藥后各組大鼠血清SOD、MDA、 GSH、 GSH-Px變化與模型組相比，H、M、L組和PN組大鼠GSH含量，SOD、GSH-Px活力有顯著升高，MDA含量有顯著降低(P<0.05)；與PN組相比，H、M組大鼠GSH含量，GSH-Px、SOD活力有顯著升高，MDA含量有顯著降低(P<0.05)。見(jiàn)表2。

表2　DSCI對(duì)糖尿病大鼠血清SOD、 MDA、

2.3神經(jīng)組織病理形態(tài)變化CON組神經(jīng)纖維形態(tài)規(guī)整，軸突-神經(jīng)膠質(zhì)連接良好，供養(yǎng)神經(jīng)內(nèi)膜和神經(jīng)外膜的微血管壁正常，毛細(xì)血管無(wú)阻塞。DM組大鼠神經(jīng)細(xì)胞胞質(zhì)內(nèi)髓脂質(zhì)纖維喪失、細(xì)胞突起變薄、膠原纖維增生并有薄膜狀體積聚；軸突-神經(jīng)膠質(zhì)連接不良；供養(yǎng)神經(jīng)外膜和內(nèi)膜的微血管壁增厚(基底膜增厚、內(nèi)皮細(xì)胞肥大增生)和透明樣變性，毛細(xì)血管內(nèi)徑變細(xì)，甚至阻塞。M組神經(jīng)細(xì)胞胞質(zhì)內(nèi)呈髓脂質(zhì)纖維有一定的恢復(fù)，軸突-神經(jīng)膠質(zhì)連接趨于正常，毛細(xì)血管壁變粗，阻塞情況有所減輕；H、L組及PN組神經(jīng)病變無(wú)明顯好轉(zhuǎn)。見(jiàn)圖1。

圖1　DM大鼠周?chē)窠?jīng)組織病理學(xué)形態(tài)變化(×400)

3討論

DM脂質(zhì)代謝紊亂使神經(jīng)內(nèi)膜微血管的結(jié)構(gòu)與功能變化，缺氧或缺血，引起血神經(jīng)障礙，導(dǎo)致神經(jīng)纖維變性，發(fā)展為DM周?chē)窠?jīng)病變〔3，4〕；本研究提示DCSI具有調(diào)節(jié)脂質(zhì)代謝紊亂的作用。長(zhǎng)期高血糖、高血脂狀態(tài)會(huì)使葡萄糖的自身氧化增強(qiáng)，氧自由基生成過(guò)多，氧化平衡破壞，ROS生成增多，最終導(dǎo)致了體內(nèi)氧化應(yīng)激反應(yīng)發(fā)生〔5〕。氧化應(yīng)激可損害DM動(dòng)物的神經(jīng)和血管組織的DNA、脂質(zhì)及蛋白質(zhì)，導(dǎo)致神經(jīng)傳導(dǎo)速度下降，產(chǎn)生DPN〔6,7〕。MDA 是自由基作用下脂質(zhì)過(guò)氧化的產(chǎn)物,它反映體內(nèi)脂質(zhì)過(guò)氧化的程度,間接反映氧自由基對(duì)組織的損傷狀態(tài)。SOD是機(jī)體內(nèi)氧自由基的清除劑，反映機(jī)體的抗氧化能力，其含量的減少會(huì)降低體內(nèi)氧自由基的清除率，致使內(nèi)皮細(xì)胞損傷。GSH-Px是反映機(jī)體抗氧化能力的另一指標(biāo)，它能夠催化過(guò)氧化氫的分解與還原，保護(hù)細(xì)胞膜的功能和結(jié)構(gòu)〔8〕。因此,測(cè)定MDA 水平，SOD和GSH-PX活性可以有效反映機(jī)體脂質(zhì)過(guò)氧化的程度以及機(jī)體清除氧自由基的能力。本實(shí)驗(yàn)結(jié)果表明DCSI可以增強(qiáng)機(jī)體的抗氧化能力。病理形態(tài)學(xué)結(jié)果提示給藥后神經(jīng)細(xì)胞胞質(zhì)內(nèi)呈髓脂質(zhì)纖維有一定的恢復(fù)，軸突-神經(jīng)膠質(zhì)連接趨于正常，毛細(xì)血管壁變粗，阻塞情況有所減輕，從而說(shuō)明DCSI對(duì)大鼠的周?chē)窠?jīng)起保護(hù)作用，具體作用機(jī)制需進(jìn)行進(jìn)一步研究。

參考文獻(xiàn)4

1楊淑敏.銀杏達(dá)莫聯(lián)合小牛血去蛋白提取物治療腦梗死的臨床觀(guān)察〔J〕.中國(guó)實(shí)用醫(yī)藥,2009;32(4):110-1.

2陳榮平,吳涓涓,宋海鋒,等.硫辛酸聯(lián)合小牛血去蛋白提取物治療糖尿病合并腦梗死的療效觀(guān)察〔J〕.中外醫(yī)療,2014;8(22):16-8.

3Sethi JK,Vidal-Puig A.Visfatin:the missing link between intra-abdominal obesity and diabetes〔J〕.Trends Mol Med,2005;11(8):344-7.

4Chen MP,Chung FM,Chang DM,etal.Elevated plasma level of visfatin/PreB cell colony enhancing factor in patients with type 2 diabetes mellitus〔J〕.J Clin Endocrinol Metab,2006;91(3):295-9.

5唐豆.血脂紊亂對(duì)C57BL/6小鼠外周神經(jīng)病變的影響及其可能機(jī)制〔D〕.廣州:南方醫(yī)科大學(xué),2012:24-5.

6Liu F,Ma F,Kong G,etal.Zinc supplementation alleviates diabetic peripheral neuropathy by inhibiting oxidative stress and up regulating metallothionein in peripheral nerves of diabetic rats〔J〕.Biol Trace Elem Res,2014;158(2):211-8.

7Kaszniciki J,Kosmalski M,Sliwinska A,etal.Evaluation of oxidative stress markers in pathogenesis of diabetic neuropathy〔J〕.Mol Biol Rep,2012;39(9):8669-78.

8馮小芳.脂代謝紊亂與2型糖尿病周?chē)窠?jīng)病變的相關(guān)分析〔D〕.杭州:浙江大學(xué),2007:23-4.

〔2015-07-26修回〕

(編輯滕欣航)

通訊作者：杜培革(1963-)，女，碩士，主要從事生物大分子功能開(kāi)發(fā)與應(yīng)用方向研究。

基金項(xiàng)目：吉林省科技廳項(xiàng)目(YYZX201207);吉林省發(fā)改委(2014Y103);吉林省衛(wèi)生廳(20142078)

中圖分類(lèi)號(hào)〔〕R96〔

文獻(xiàn)標(biāo)識(shí)碼〕A〔

文章編號(hào)〕1005-9202(2016)01-0028-03；

doi：10.3969/j.issn.1005-9202.2016.01.012