不同劑量特制牛肉湯對(duì)腦缺血大鼠神經(jīng)保護(hù)作用及其外周血T淋巴細(xì)胞亞群的影響▲

馬 茜 王 辛 朱 潔 王愛(ài)紅

(南京中醫(yī)藥大學(xué)護(hù)理學(xué)院，南京市 210023，E-mail：15298384973@163.com)

不同劑量特制牛肉湯對(duì)腦缺血大鼠神經(jīng)保護(hù)作用及其外周血T淋巴細(xì)胞亞群的影響▲

馬 茜 王 辛 朱 潔 王愛(ài)紅

(南京中醫(yī)藥大學(xué)護(hù)理學(xué)院，南京市 210023，E-mail：15298384973@163.com)

目的 探討不同劑量特制牛肉湯對(duì)局灶性腦缺血大鼠外周血T淋巴細(xì)胞亞群免疫活性的影響。方法 將48只雄性SD大鼠分成假手術(shù)組 Ⅰ、假手術(shù)組 Ⅱ、模型組及低、中、高劑量特制牛肉湯組各8只。模型組和各劑量特制牛肉湯組以線栓法建立永久性右側(cè)大腦中動(dòng)脈缺血模型。低、中、高劑量特制牛肉湯組于造模后分別予200、400、600 mg/(kg·d)特制牛肉湯灌胃，假手術(shù)組Ⅱ予600 mg/(kg·d)特制牛肉湯，其余兩組予等量生理鹽水。分別于術(shù)后2 h及7 d采用Longa評(píng)分法進(jìn)行神經(jīng)功能缺損評(píng)分，并檢測(cè)外周血T淋巴細(xì)胞亞群(CD3+、CD4+、CD8+)水平，計(jì)算CD4+/CD8+值；于術(shù)后7 d采用2，3，5-三苯基氯化四氮唑染色法測(cè)定腦梗死體積分?jǐn)?shù)。結(jié)果 術(shù)后2 h和7 d，6組神經(jīng)功能缺損評(píng)分，差異均無(wú)統(tǒng)計(jì)學(xué)意義(P>0.05)。術(shù)后7 d，假手術(shù)組Ⅰ和假手術(shù)組Ⅱ大鼠腦組織均未見(jiàn)梗死灶，模型組和各劑量特制牛肉湯組均可見(jiàn)梗死灶，中、高劑量特制牛肉湯組的腦梗死體積分?jǐn)?shù)較模型組明顯降低(P<0.05)。模型組外周血CD3+、CD4+水平及CD4+/CD8+值明顯低于假手術(shù)組Ⅰ(P<0.05)；與模型組相比，高劑量特制牛肉湯組外周血CD3+水平升高(P<0.05)，低、中、高劑量特制牛肉湯組外周血CD4+水平升高(P均<0.05)。兩組假手術(shù)組在腦梗死體積和外周血T淋巴細(xì)胞亞群水平方面比較，差異均無(wú)統(tǒng)計(jì)學(xué)意義(P>0.05)。結(jié)論 特制牛肉湯可改善腦缺血大鼠的神經(jīng)功能，對(duì)外周免疫抑制有調(diào)節(jié)作用，其機(jī)制可能與其升高外周血CD3+、CD4+水平有關(guān)。

腦缺血；特制牛肉湯；T淋巴細(xì)胞亞群；腦梗死體積；神經(jīng)功能評(píng)分；大鼠

卒中后感染是腦卒中患者急性期和后遺癥期最常見(jiàn)的并發(fā)癥[1]，是導(dǎo)致卒中患者預(yù)后不良和死亡的主要原因[2-3]。卒中誘發(fā)的免疫抑制綜合征(stroke-induced immunodepression syndrome，SIDS)在卒中后感染的發(fā)生中發(fā)揮重要作用[4]，而T淋巴細(xì)胞免疫功能下降是其主要表現(xiàn)之一[5]。肌肽是一種有效的免疫調(diào)節(jié)劑，可提高T淋巴細(xì)胞亞群表達(dá)，改善腦缺血后免疫抑制狀態(tài)[6]。本課題組前期在朱丹溪“倒倉(cāng)法”的基礎(chǔ)上，開(kāi)發(fā)簡(jiǎn)易食療方—特制牛肉湯，經(jīng)游離氨基酸含量檢測(cè)，其中富含肌肽，動(dòng)物實(shí)驗(yàn)顯示，特制牛肉湯可減輕腦缺血后免疫炎癥反應(yīng)[7]。本研究觀察富含肌肽的特制牛肉湯對(duì)腦缺血大鼠的神經(jīng)保護(hù)作用及對(duì)外周血T淋巴細(xì)胞亞群的影響，擬進(jìn)一步探討其對(duì)腦缺血大鼠的免疫調(diào)節(jié)作用。

1 材料與方法

1.1 實(shí)驗(yàn)動(dòng)物 健康雄性SD大鼠48只，SPF級(jí)，體質(zhì)量(300±20)g，由南京中醫(yī)藥大學(xué)實(shí)驗(yàn)動(dòng)物中心提供，合格證號(hào)：SCXK(京)2012-0001。實(shí)驗(yàn)前適應(yīng)性飼養(yǎng)1周，溫度控制在19℃～26℃，12 h明暗循環(huán)，自由飲水和進(jìn)食，造模前禁食12 h。

1.2 特制牛肉湯的制備 參照前期方法制備特制牛肉湯[7]：將2 L室溫水和絞好的1 kg牛肉糜加入鍋中，利用功率轉(zhuǎn)換器使牛肉湯在2 h時(shí)沸騰，然后繼續(xù)熬制10 h，后撇去浮油，用紗布過(guò)濾渣滓，得到約1 500 ml特制牛肉湯，再用旋轉(zhuǎn)蒸發(fā)儀濃縮25倍，最終得到濃縮特制牛肉湯約60 ml。經(jīng)S-433D氨基酸分析儀分析，濃縮特制牛肉湯中肌肽含量為36.34 mg/ml。

1.3 主要試劑 2，3，5-三苯基氯化四氮唑(2，3，5-triphenyltetrazolium chloride，TTC)由美國(guó)Sigma公司生產(chǎn)(批號(hào)：101328055)，Anti-rat CD3(別藻藍(lán)蛋白，allophycocyanin，APC)抗體由美國(guó)Bioscience公司生產(chǎn)(批號(hào)：17-0030-82)，Anti-rat CD4(異硫氰酸熒光素，fluorescein isothiocyanate，F(xiàn)ITC)抗體由美國(guó)Biolegend公司生產(chǎn)(批號(hào)：201505)，Anti-rat CD8(藻紅蛋白，phycoerythrin，PE)抗體由美國(guó)Biolegend公司生產(chǎn)(批號(hào)：201705)。

1.4 主要儀器 FC500MPL流式細(xì)胞儀(美國(guó)Beckman公司)，Allegra 64R高速冷凍離心機(jī)(美國(guó)Beckman公司)，RE-52A旋轉(zhuǎn)蒸發(fā)儀(上海亞榮儀器公司)，CNP-9050恒溫隔水培養(yǎng)箱(上海精宏儀器公司)。

1.5 腦缺血模型制備及術(shù)后給藥 應(yīng)用隨機(jī)數(shù)字表法將大鼠分為假手術(shù)組Ⅰ，假手術(shù)組Ⅱ，模型組及低、中、高劑量特制牛肉湯組，每組8只。采用Longa等[8]的線栓法制作大鼠永久性右側(cè)大腦中動(dòng)脈閉塞(permanent middle cerebral artery occlusion，pMCAO)模型，大鼠術(shù)后單籠飼養(yǎng)，自由進(jìn)食和飲水。假手術(shù)組只分離血管，不插入線栓，其余步驟同模型組。特制牛肉湯劑量的確定以湯中肌肽含量為標(biāo)準(zhǔn)，根據(jù)《保健食品學(xué)功能評(píng)價(jià)方法》[9]及動(dòng)物與人劑量換算方法[10]，低、中、高劑量分別為200、400、600 mg/(kg·d)，相當(dāng)于人體推薦攝入量的10倍、20倍和30倍。假手術(shù)組Ⅰ和模型組給予等容積生理鹽水，假手術(shù)組Ⅱ給予高劑量特制牛肉湯。首次灌胃時(shí)間為術(shù)后2 h，之后每天上午9 ∶00和下午15 ∶00各灌胃1次，持續(xù)7 d。

1.6 檢測(cè)指標(biāo)及方法

1.6.1 神經(jīng)功能缺損評(píng)分：采用Longa等[8]的評(píng)分方法，于大鼠pMCAO術(shù)后2 h和7 d進(jìn)行神經(jīng)功能缺損評(píng)分。評(píng)分標(biāo)準(zhǔn)為：0分，無(wú)神經(jīng)功能缺失，活動(dòng)正常；1分，提尾倒懸時(shí)不能完全伸展左側(cè)前爪；2分，爬行時(shí)向左側(cè)轉(zhuǎn)圈；3分，爬行時(shí)向左側(cè)傾倒；4分，不能自發(fā)行走，出現(xiàn)意識(shí)障礙。得分越高表明神經(jīng)功能缺損程度越重，相反損害較輕。術(shù)后2 h大鼠清醒后評(píng)分1～3分者為pMCAO模型制作成功，0分、4分者均視為造模失敗，剔除。

1.6.2 TTC染色測(cè)量腦梗死體積分?jǐn)?shù)：術(shù)后7 d，將每組6只大鼠用10%水合氯醛腹腔注射麻醉，在冰皿上斷頭取腦，放入-20℃冰箱冰凍20 min，后放入專用腦切片模具中，去除嗅球和低位腦干，間隔2 mm連續(xù)冠狀切片5片，將腦片置入2% TTC溶液中，在37℃條件下避光孵育30 min，每隔10 min翻片1次，以保證染色均勻。再將染好的腦片置于4%多聚甲醛中固定24 h，用數(shù)碼相機(jī)拍照，Image Pro-Plus 6.0 圖像處理軟件分析圖像。腦梗死體積分?jǐn)?shù)(%)=患側(cè)梗死面積/對(duì)側(cè)半腦面積×100%。

1.6.3 外周血T淋巴細(xì)胞亞群(CD3+、CD4+、CD8+)檢測(cè)：術(shù)后7 d，將每組8只大鼠用10 %水合氯醛腹腔注射麻醉，仰臥位固定，左心室取血至抗凝管中，再吸取100 μl到流式管中，向每個(gè)流式管中分別加入CD3抗體1.25 μl，CD4抗體0.5 μl及CD8抗體1.25 μl，室溫避光孵育20 min。再加2 ml 1×紅細(xì)胞裂解液，室溫避光孵育10 min。后以1 500 r/min 離心3 min后棄去上清，加入2 ml磷酸鹽緩沖液，輕輕吹打渦旋，再次以1 500 r/min離心3 min后棄去上清，最后加入200 μl 磷酸鹽緩沖液，采用流式細(xì)胞儀檢測(cè)T淋巴細(xì)胞亞群(CD3+、CD4+、CD8+)水平，并計(jì)算CD4+/CD8+值。

1.7 統(tǒng)計(jì)學(xué)分析 采用SPSS 17.0軟件進(jìn)行統(tǒng)計(jì)學(xué)分析，符合正態(tài)分布的計(jì)量資料用(x±s)表示，多組間比較采用單因素方差分析，組間多重比較采用LSD-t檢驗(yàn)；非正態(tài)分布的計(jì)量資料以中位數(shù)(P25～P75)表示，組間比較采用Kruskal-Wallis檢驗(yàn)。以P<0.05表示差異有統(tǒng)計(jì)學(xué)意義。

2 結(jié) 果

2.1 各組大鼠神經(jīng)功能缺損評(píng)分比較 假手術(shù)組Ⅰ和假手術(shù)組Ⅱ未見(jiàn)神經(jīng)功能缺損表現(xiàn)，模型組與各劑量特制牛肉湯組均出現(xiàn)不同程度的肢體癱瘓；術(shù)后2 h，6組的神經(jīng)功能評(píng)分比較，差異無(wú)統(tǒng)計(jì)學(xué)意義(P>0.05)；缺血后7 d，各劑量特制牛肉湯組神經(jīng)功能評(píng)分均較前下降，但6組的神經(jīng)功能評(píng)分比較，差異無(wú)統(tǒng)計(jì)學(xué)意義(P>0.05)。見(jiàn)表1。

2.2 各組大鼠腦梗死體積分?jǐn)?shù)比較 TTC染色顯示，正常腦組織為深紅色，梗死區(qū)為灰白色。缺血后7 d，假手術(shù)組Ⅰ和假手術(shù)組Ⅱ均未見(jiàn)梗死灶，模型組和各劑量特制牛肉湯組右側(cè)大腦中動(dòng)脈供血區(qū)的大腦皮質(zhì)、紋狀體等處可見(jiàn)明顯梗死灶，見(jiàn)圖1。模型組及低、中、高劑量湯組腦梗死體積分?jǐn)?shù)分別為(40.82±10.87)%、(33.95±8.09)%、(21.76±8.68)%、(21.19±13.46)%，與模型組相比，低、中、高劑量湯組腦梗死體積分?jǐn)?shù)下降16.83%、46.69%和48.09%。模型組、低、中、高劑量湯組的腦梗死體積分?jǐn)?shù)比較，差異有統(tǒng)計(jì)學(xué)意義(F=4.463，P=0.016)，其中中、高劑量特制牛肉湯組的腦梗死體積分?jǐn)?shù)明顯低于模型組(t=3.634，P=0.008；t=3.743，P=0.007)。2.3 各組大鼠外周血T淋巴細(xì)胞亞群(CD3+、CD4+、CD8+)及CD4+/CD8+值比較 腦缺血后7 d，與假手術(shù)組Ⅰ相比，假手術(shù)組Ⅱ外周血CD3+、CD4+、CD8+水平及CD4+/CD8+值差異無(wú)統(tǒng)計(jì)學(xué)意義(P>0.05)，模型組外周血的CD3+、CD4+水平及CD4+/CD8+值明顯下降(P<0.05)，CD8+水平有下降趨勢(shì)，但差異無(wú)統(tǒng)計(jì)學(xué)意義(P>0.05)。與模型組相比，高劑量特制牛肉湯組CD3+水平顯著升高(P<0.05)，低、中、高劑量特制牛肉湯組CD4+水平顯著上升(P<0.05)，各劑量特制牛肉湯組的CD8+水平及CD4+/CD8+值有上升趨勢(shì)，但差異無(wú)統(tǒng)計(jì)學(xué)意義(P>0.05)。見(jiàn)表2。

表1 各組大鼠神經(jīng)功能缺損評(píng)分比較[中位數(shù)(P25～P75)，分]

a b c d e f

a為假手術(shù)組Ⅰ，b為假手術(shù)組Ⅱ，c為模型組，d為低劑量特制牛肉湯組，e為中劑量特制牛肉湯組，f為高劑量特制牛肉湯組

圖1 各組大鼠腦組織TTC染色結(jié)果

注：與假手術(shù)組Ⅰ相比，*P<0.05，**P<0.01；與模型組相比，#P<0.05。

3 討 論

肌肽是有效的免疫調(diào)節(jié)劑[11]，且具有腦保護(hù)作用[12-13]。本課題組前期研究表明，肌肽可減輕神經(jīng)功能缺損，減小腦梗死體積，升高外周血CD3+、CD4+水平及CD4+/CD8+值，改善腦缺血造成的外周免疫抑制狀態(tài)，是腦缺血后免疫調(diào)節(jié)的有效藥物[6]。但目前肌肽多為化學(xué)合成，反應(yīng)步驟多、收率低、成本高，且存在有害物質(zhì)殘留的風(fēng)險(xiǎn)。本課題組前期根據(jù)“藥食同源”理念，在朱丹溪“倒倉(cāng)法”基礎(chǔ)上，采用簡(jiǎn)單工藝制作食療方—特制牛肉湯，經(jīng)檢測(cè)發(fā)現(xiàn)其中肌肽含量豐富，占氨基酸總量的63.05%，是人類獲取肌肽較為合適的方式。

特制牛肉湯的主要原料為牛肉。牛肉自古即為補(bǔ)益佳品，朱丹溪《格致余論·倒倉(cāng)論》首次將牛肉湯入藥，可“治癱、癆、蠱、癩諸證”，且具有寓攻于補(bǔ)，攻邪而不傷正，扶正而不助邪的特點(diǎn)。現(xiàn)代營(yíng)養(yǎng)學(xué)研究也表明，牛肉，尤其是瘦牛肉，富含大量?jī)?yōu)質(zhì)蛋白、不飽和脂肪酸、B族維生素及礦物質(zhì)[14]，具有抗氧化、增強(qiáng)免疫力、促進(jìn)新陳代謝、增強(qiáng)肌力等作用。牛肉中的蛋白質(zhì)由人體必需的8種氨基酸組成，且比例均衡，熬制成湯后，水溶性氨基酸溶解到湯中，湯刺激胃酸分泌，更利于營(yíng)養(yǎng)吸收。腦卒中患者由于多種原因，易出現(xiàn)不同程度的蛋白質(zhì)-熱量缺乏性營(yíng)養(yǎng)不良和免疫功能低下，增加感染等并發(fā)癥的發(fā)生率，影響腦卒中預(yù)后，牛肉及牛肉湯可為腦卒中患者補(bǔ)充充足的蛋白質(zhì)和熱量，對(duì)改善腦卒中患者免疫功能低下?tīng)顟B(tài)有良好效果。另外，本研究顯示，與假手術(shù)組Ⅰ相比，給予高劑量特制牛肉湯治療的假手術(shù)組Ⅱ在神經(jīng)功能評(píng)分、腦梗死體積、T淋巴細(xì)胞亞群表達(dá)方面均無(wú)顯著差異(P>0.05)，說(shuō)明特制牛肉湯對(duì)正常大鼠無(wú)不良生理影響，這體現(xiàn)了特制牛肉湯作為常見(jiàn)食療方安全無(wú)毒的優(yōu)勢(shì)。

腦缺血主要由腦供血區(qū)的血栓或栓塞造成。腦組織缺血缺氧，啟動(dòng)一系列生理、病理變化過(guò)程，最終導(dǎo)致神經(jīng)元死亡和神經(jīng)功能受損。本研究結(jié)果顯示，假手術(shù)Ⅰ組及Ⅱ組的大鼠均無(wú)神經(jīng)功能缺損及腦梗死灶，而模型組和各劑量特制牛肉湯組均出現(xiàn)不同程度的肢體功能障礙和白色梗死灶，說(shuō)明腦缺血可造成腦組織及神經(jīng)功能損傷。 結(jié)果顯示，給予特制牛肉湯灌胃治療7 d后，腦缺血大鼠神經(jīng)功能缺損情況改善，但與模型組相比，3個(gè)劑量組的作用均不明顯(P>0.05)。分析其原因可能有以下幾方面：(1)實(shí)驗(yàn)樣本量較?。?2)本實(shí)驗(yàn)的神經(jīng)功能評(píng)分方法采用Longa的五級(jí)四分評(píng)分法，排除無(wú)腦損傷(0分)及損傷過(guò)重(4分)的大鼠，腦缺血大鼠的神經(jīng)功能缺損評(píng)分的差異性過(guò)??；(3)特制牛肉湯屬于食療方，作用效果比藥物弱，難以在短時(shí)間內(nèi)對(duì)神經(jīng)癥狀起到明顯的改善作用。但與模型組相比，各劑量特制牛肉湯不同程度地減小了腦缺血大鼠的梗死灶，其中中、高劑量效果明顯(P<0.05)，提示中、高劑量特制牛肉湯具有顯著的神經(jīng)保護(hù)作用。

卒中不僅改變中樞神經(jīng)系統(tǒng)功能，也同時(shí)影響免疫系統(tǒng)功能，在外周主要表現(xiàn)為腦缺血后數(shù)小時(shí)至數(shù)周的免疫抑制[15]，這是腦卒中后感染的主要原因[16]。嚴(yán)重、持久的淋巴細(xì)胞數(shù)量減少和功能改變是其主要表現(xiàn)之一。淋巴細(xì)胞主要指B淋巴細(xì)胞和T淋巴細(xì)胞，T淋巴細(xì)胞亞群的數(shù)量和活性直接反映細(xì)胞免疫功能，其主要標(biāo)志有兩大類，一類是T淋巴細(xì)胞所共有的CD3標(biāo)志，反映T淋巴細(xì)胞的總體水平，另一類為亞群特有標(biāo)志，成熟T淋巴細(xì)胞可分為功能相異的兩大亞群：CD4+T淋巴細(xì)胞(輔助性T淋巴細(xì)胞)和CD8+T淋巴細(xì)胞(抑制性T淋巴細(xì)胞)，CD4+輔助細(xì)胞及體液免疫功能，相反，CD8+抑制細(xì)胞及體液免疫功能，故CD4+/CD8+值能初步評(píng)估機(jī)體免疫狀態(tài)，比值下降提示免疫功能受損，是機(jī)體病變程度和預(yù)后不良的重要標(biāo)志之一，而比值增加提示免疫應(yīng)答的正調(diào)節(jié)占優(yōu)勢(shì)[17-18]。本課題組前期研究顯示，腦缺血后24 h和72 h，大鼠外周血CD3+、CD4+水平及CD4+/CD8+值明顯下降(P<0.05)，CD8+水平則顯著上升(P<0.05)，說(shuō)明卒中后1～3 d，機(jī)體T淋巴細(xì)胞亞群免疫活性降低，呈現(xiàn)外周免疫抑制狀態(tài)[6]。本研究結(jié)果顯示，腦缺血后7 d，和假手術(shù)組Ⅰ相比，模型組外周血CD3+、CD4+水平及CD4+/CD8+值明顯降低(P<0.05)，CD8+水平雖有下降趨勢(shì)，但差異無(wú)統(tǒng)計(jì)學(xué)意義(P>0.05)，說(shuō)明腦缺血后外周免疫抑制狀態(tài)可持續(xù)至腦缺血后7 d。這與既往研究結(jié)果一致[19-20]。與模型組相比，高劑量特制牛肉湯組大鼠腦缺血后7 d，外周血CD3+水平顯著上升(P<0.05)，而3個(gè)劑量特制牛肉湯均能顯著提高外周血CD4+水平(P<0.05)，但外周血CD8+水平和CD4+/CD8+值雖有上升趨勢(shì)，但差異無(wú)統(tǒng)計(jì)學(xué)意義(P均>0.05)，考慮特制牛肉湯可能主要通過(guò)調(diào)節(jié)CD4+T淋巴細(xì)胞，而非CD8+T淋巴細(xì)胞，以改善免疫抑制狀態(tài)，而在3個(gè)劑量中，高劑量特制牛肉湯作用效果最佳。由于前期研究顯示肌肽具有明顯的免疫調(diào)節(jié)作用，而特制牛肉湯中富含肌肽，故推測(cè)特制牛肉湯中的肌肽在其免疫調(diào)節(jié)作用中發(fā)揮主要作用[6]。

綜上所述，特制牛肉湯可減小腦缺血大鼠梗死灶，改善肢體功能障礙，調(diào)節(jié)外周血T淋巴細(xì)胞亞群免疫活性以改善免疫功能，這可能與其富含肌肽有關(guān)。特制牛肉湯取材方便，制作工藝簡(jiǎn)單，作為一種簡(jiǎn)單食療方可納入臨床腦卒中患者的飲食方案，幫助改善免疫功能，防止感染等并發(fā)癥的發(fā)生。但特制牛肉湯的最佳干預(yù)時(shí)間及除肌肽以外的其他成分是否也在其腦保護(hù)及免疫調(diào)節(jié)功能中發(fā)揮作用還需進(jìn)一步探討。

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Effects of different doses of special beef decoction on protecting neurologic function and peripheral blood T-lymphocyte subsets in rats with cerebral ischemia

MAQian,WANGXin,ZHUJie,WANGAi-hong

(SchoolofNursing,NanjingUniversityofChineseMedicine,Nanjing210023,China)

Objective To explore the effects of different doses of special beef decoction(BD) on protecting the neurologic function and the levels of peripheral blood T lymphocyte subsets in rats with cerebral ischemic injury.Methods Forty-eight male SD rats were divided into sham Ⅰ group,sham Ⅱ group,model group,low-dose BD group,moderate-dose BD group and high-dose BD group,with 8 rats in each group.The permanent right middle cerebral artery occlusion model was established by suture method in the model group and each BD group.After modeling,the rats in the low-,moderate- and high-dose BD groups were lavaged with BD at the dose of 200,400,600 mg/(kg·d),respectively,in the sham Ⅱ group were lavaged with BD of 600 mg/(kg·d),and in the sham Ⅰ group and model group were lavaged with the same volume of normal saline.At 2 hours and 7 days after operation,the neurologic impairment was assessed with Longa Scale,the levels of peripheral blood T-lymphocyte subsets(CD3+,CD4+and CD8+) were detected by flow cytometry,and ratio of CD4+/CD8+was calculated.The infarct volume fractions were measured by 2,3,5-triphenyltetrazolium chloride staining at 7 days after operation.Results At 2 hours and 7 days after operation,there was no significant difference in the neurologic impairment score among 6 groups(P>0.05).At 7 days after operation,infarction was not observed in the brain tissues of rats in the sham Ⅰ group and sham Ⅱ group,but was observed in the model group and each BD group,and moderate- and high-dose BD groups had significantly lower infarct volume fractions compared to model group(P<0.05).The peripheral blood CD3+and CD4+levels and CD3+/CD8+ratio in the model group were significantly lower than those in the sham Ⅰ group(P<0.05).Compared to model group,high-dose BD group obtained higher level of peripheral blood CD3+(P<0.05),and low-,moderate- and high-dose BD groups obtained higher levels of peripheral blood CD4+(P<0.05).There was no significant difference in the infarct volume or the levels of peripheral blood T-lymphocyte subsets between two sham groups(P>0.05).Conclusion BD could improve the neurologic function and regulate the peripheral immune suppression in rats with cerebral ischemia,and the mechanism may be related with peripheral blood CD3+and CD4+elevation.

Cerebral ischemia,Special beef decoction,T-lymphocyte subsets,Infarct volume,Neurologic impairment score,Rat

教育部人文社會(huì)科學(xué)一般項(xiàng)目(10YJCZH145)

馬茜(1990～)，女，在讀碩士研究生，研究方向：心腦血管疾病基礎(chǔ)與臨床研究。

王愛(ài)紅(1971～)，女，博士，副教授，研究方向：心腦血管疾病基礎(chǔ)與臨床研究，E-mail：370010@njucm.edu.cn。

R 743.3

A

0253-4304(2016)02-0152-05

10.11675/j.issn.0253-4304.2016.02.02

2015-10-29

2016-01-04)