PSCA rs2294008基因變異對膀胱癌分級、分期的影響

楊峻峰 余閆宏 肖民輝 章卓睿 楊茂林

·臨床研究·

PSCA rs2294008基因變異對膀胱癌分級、分期的影響

楊峻峰 余閆宏 肖民輝 章卓睿 楊茂林

目的研究PSCA rs2294008多態(tài)性是否與膀胱癌易感性相關(guān)。方法抽取235例膀胱癌患者和200例非膀胱癌患者的血樣，進(jìn)行基因型測定，確定患者血樣中PSCA rs2294008基因型，進(jìn)行病例對照研究。結(jié)果rs2294008的基因型CC、CT和TT在膀胱癌患者中出現(xiàn)的概率分別為42.1%、47.7%、10.2%，在對照組中分別為52.0%、40.0%、8.0%；合并的CT/TT和CC基因型對比，合并基因型使膀胱癌風(fēng)險顯著增加(CT/TT：OR=1.37，95%CI1.08～1.74)。結(jié)論P(yáng)SCA中rs2294008的基因多態(tài)性與膀胱癌的風(fēng)險相關(guān)。

膀胱腫瘤； 多態(tài)性,單核苷酸； 前列腺干細(xì)胞抗原

在中國，膀胱癌處于常見惡性腫瘤的第十位，2009年膀胱癌發(fā)病率為6.61/10萬(男性9.78/10萬，女性3.35/10萬)[1]。很多人均暴露于膀胱癌的危險因素中，但僅有部分人發(fā)展為膀胱癌，表明人群中不同的遺傳易感性與膀胱癌相關(guān)。全基因組研究表明前列腺干細(xì)胞抗原(prostate stem cell antigen, PSCA)的8q24.3為膀胱癌的易感位點(diǎn)[2]。rs2294008(C/T)位于PSCA啟動子前的第一個堿基，本研究擬驗證rs2294008的多態(tài)性與膀胱癌分級、分期的關(guān)系。

對象與方法

一、研究對象

收集2013年1月至2016年5月入住云南省第一人民醫(yī)院泌尿外科的235例膀胱癌(病理確診為尿路上皮細(xì)胞癌)患者的血樣作為實驗組，其中包括復(fù)發(fā)的膀胱癌患者，排除同時患有其他腫瘤、轉(zhuǎn)移癌及預(yù)先接受過放、化療的膀胱癌患者。另選取同時期200例非腫瘤患者(多為結(jié)石患者)的血樣作為陰性對照。所有患者均簽署入組同意書。

實驗組和對照組的基本情況見表1。兩組患者的年齡、性別差異均無統(tǒng)計學(xué)意義(P=0.802，P=0.705)。

表1 實驗組和對照組患者的基本情況[例(%)]

二、基因分型

隔離血樣中的淋巴細(xì)胞，離心后提取血樣DNA，使用PCR方法，PCR引物：正向引物5′-AAGTCACCTGAGGCCCTCTC-3′；反向引物5′-CTCACCCCTGCTCCCTTC-3′。反應(yīng)體系包括200 nmol/L PCR引物[生工生物工程(上海)股份有限公司]，1μmol/L SYTO9熒光染料(Invitrogen，USA)，0.5 U f-Taq聚合酶(Invitrogen，USA)，40 ng基因組DNA構(gòu)成10 μl的反應(yīng)體系。循環(huán)包括5 min 95 ℃，隨后40個循環(huán)：95 ℃ 5 s，69 ℃ 30 s，72 ℃ 10 s。使用ABI PRISM 3100型基因分析儀分析單核苷酸多態(tài)性(single nucleotide polymorphisms, SNPs)位點(diǎn)。

三、統(tǒng)計學(xué)方法

方差分析實驗組和對照組的基因變異值和rs2294008多態(tài)性分布，并使用邏輯回歸模型計算調(diào)整優(yōu)勢率(OR)和95%的可信區(qū)間(CI)，分析與膀胱癌的相關(guān)性。設(shè)CC基因型為風(fēng)險基線，預(yù)期頻率使用Hardy-weinberg平衡測試。以P<0.05為差異有統(tǒng)計學(xué)意義。統(tǒng)計軟件為SPSS 16.0。

結(jié) 果

一、PSCA rs2294008和膀胱癌的風(fēng)險

rs2294008的等位基因、基因頻率和膀胱癌風(fēng)險的關(guān)系見表2。對照組中的基因頻率基本保持不變，符合哈迪-溫伯格定律(2=0.4，P=0.6)。我們利用CC基因型作為參照，發(fā)現(xiàn)CT而不是TT基因型與膀胱癌風(fēng)險提高更為相關(guān)(CT基因型：OR=1.38，95%CI1.05～1.77；TT基因型：OR=1.34，95%CI0.84～2.05)?？紤]到TT基因型相對較少且具有類似OR值，我們合并CT和TT基因型作為基因模型，用于隨后的統(tǒng)計，結(jié)果顯示合并基因型CT/TT與膀胱癌發(fā)病風(fēng)險顯著相關(guān)(CT/TT基因型：OR=1.37，95%CI1.08～1.74)。

表2 PSCA rs2294008基因型和等位基因頻次與膀胱癌風(fēng)險的關(guān)系[例(%)]

二、PSCA rs2294008與膀胱癌分級、分期的關(guān)系

PSCA rs2294008的基因型與膀胱癌的病理分級和臨床分期有相關(guān)性，統(tǒng)計結(jié)果見表3。在低級別乳頭狀尿路上皮癌(OR=1.44，95%CI1.02～1.97)、肌層浸潤性膀胱癌(OR=1.67，95%CI1.19～2.34)中，T堿基的出現(xiàn)大幅提高了膀胱癌風(fēng)險，并與肌層浸潤性膀胱癌相關(guān)。但在低度惡性潛能尿路上皮乳頭狀瘤、高級別乳頭狀尿路上皮癌和非肌層浸潤性膀胱癌中，尚未顯現(xiàn)T堿基與膀胱癌的重要聯(lián)系。

表3 PSCA rs2294008與膀胱癌進(jìn)展的關(guān)系[例(%)]

討 論

膀胱腫瘤是泌尿系最常見的惡性腫瘤，據(jù)估計，2012年世界范圍內(nèi)膀胱癌的新增病例約有330 400例，另有123 100例的死亡病例[3]。在我國，膀胱癌是泌尿系統(tǒng)病死率最高的腫瘤，其早期診斷及復(fù)發(fā)進(jìn)展監(jiān)測仍以有創(chuàng)的膀胱鏡和尿脫落細(xì)胞學(xué)檢測為重要方法，術(shù)后易復(fù)發(fā)及進(jìn)展是導(dǎo)致其預(yù)后不佳的重要因素，一旦進(jìn)展為肌層浸潤性膀胱癌(pT2～pT4)，其5年生存率分別為T2期84.3%、T3期43.9%、T4期10.2%[4]。膀胱癌已成為嚴(yán)重影響人類健康的常見惡性疾病，其發(fā)病機(jī)制未明，吸煙及化學(xué)致癌物的職業(yè)暴露是膀胱癌最主要的危險因素，而以往在基因水平上的研究也局限于環(huán)境因素和DNA修復(fù)等，或者集中于癌基因突變、抑癌基因失活等方面的研究[5]。

全基因關(guān)聯(lián)研究已經(jīng)發(fā)現(xiàn)眾多基因變異與多種腫瘤的相關(guān)性，這些發(fā)現(xiàn)可以幫助了解腫瘤的發(fā)病機(jī)制。PSCA為前列腺特性細(xì)胞表面抗原，PSCA在正常前列腺中有大量表達(dá)，在大部分前列腺癌中過量表達(dá)。同樣在前列腺外的正常組織中也有表達(dá)，例如膀胱、食管、胃、胰腺、腎臟等[6-8]。PSCA在其他非前列腺的惡性組織中呈現(xiàn)高表達(dá)，包括膀胱癌、腎透明細(xì)胞癌、滋養(yǎng)細(xì)胞癌和胰腺癌[9-10]。PSCA為糖基磷脂酰肌醇錨定于細(xì)胞表面的蛋白，在多種腫瘤中均有表達(dá)。它在正?；蚰[瘤組織中的生物學(xué)特性仍不清楚?；赑SCA抗體的免疫治療已用于前列腺癌和胰腺癌的治療中。我們通過對膀胱癌患者的血SNPs位點(diǎn)檢測，認(rèn)為PSCA有可能成為膀胱癌的治療靶點(diǎn)。

本研究表明PSCA中rs2294008的基因多態(tài)性是膀胱癌的風(fēng)險因素，我們探索rs2294008 CT和TT基因型與肌層浸潤性膀胱癌的相關(guān)性，患者均來源于云南省第一人民醫(yī)院泌尿外科，這兩種基因型可增加罹患膀胱癌的概率。通過分析表明CT/TT基因型和腫瘤的分期、分級數(shù)據(jù)有助于識別不同浸潤程度的膀胱癌信號通路。分層分析表明rs2294008與肌層浸潤性膀胱癌有著密切聯(lián)系。

目前研究表明非肌層浸潤性膀胱癌和肌層浸潤性膀胱癌的作用通路不同，涉及了不同的病理機(jī)制、不同的遺傳和表觀遺傳缺陷[11]?？赡艿纳飳W(xué)機(jī)制表明rs2294008多態(tài)性與膀胱風(fēng)險相關(guān)，堿基T降低了PSCA的轉(zhuǎn)錄活性，PSCA被認(rèn)為是抑癌基因并與細(xì)胞黏附關(guān)系密切[12]。PSCA在正常和腫瘤細(xì)胞中的功能尚不清，本研究發(fā)現(xiàn)CT和混合基因CT/TT的基因型與膀胱癌風(fēng)險呈正相關(guān)?；旌匣蛐虲T/TT是一個優(yōu)勢基因模式，與增加膀胱癌風(fēng)險相關(guān)。rs2294008(C/T)是一個錯意突變位點(diǎn)，處于PSCA第一個外顯子，rs2294008中T堿基創(chuàng)造了一個新的翻譯密碼子在常規(guī)起始位點(diǎn)上游，引導(dǎo)PSCA蛋白的表達(dá)，PSCA的表達(dá)減少了啟動子的轉(zhuǎn)錄活性。有研究報道，膀胱癌中PSCA rs2294008帶有堿基T的mRNA的表達(dá)比正常組織高[13]。

本研究尚存在不足，因研究僅基于我院泌尿外科的病例，不能完全排除選擇性偏差。另外，樣本數(shù)量過少，還有待加大樣本量，進(jìn)一步全面驗證T堿基與膀胱癌分級、分期的關(guān)系。

PSCA rs2294008基因多態(tài)性與膀胱癌相關(guān)，在膀胱癌的發(fā)生、發(fā)展中起到了一定的作用，rs2294008或許能成為有用的膀胱癌診斷標(biāo)志物。

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(本文編輯：熊鈺芬)

Genetic variant as a selection marker in PSCA and bladder cancer susceptibility

YANGJun-feng,YUYan-hong,XIAOMin-hui,ZHANGZhuo-rui,YANGMao-lin.

DepartmentofUrology,FirstPeople′sHospitalofYunnanProvince,Kunming650032,ChinaCorrespondingauthor：YUYan-hong,E-mail:yyhkmyns@sina.com

Objective To investigate the association between the prostate stem cell antigen (PSCA) rs2294008 and bladder cancer. Methods We conducted a hospital-based case-control study of 235 cases and 200 controls. We genotyped the rs2294008 polymorphism and assessed its association with risk of bladder cancer. Results The genotype of rs2294008 is CC, CT, and TT. In case group, the occurrence probability is 42.1%, 47.7%, 10.2%, and in control group, the occurrence probability is 52.0%, 40.0%, 8.0%. A significant increased risk of bladder cancer was found for rs2294008 CT/TT genotypes (adjusted odds ratio, 1.37; 95% confidence interval, 1.08-1.74) compared with the CC genotype. Conclusions These results indicated that the rs2294008 polymorphism of PSCA gene may play a role in bladder cancer carcinogenesis and it could be served as a biomarker for genetic susceptibility to bladder cancer.

Urinary bladder neoplasms; Polymorphism, single nucleotide; Prostate stem cell antigen

國家自然科學(xué)基金地區(qū)基金項目(81260375)

650032 昆明，云南省第一人民醫(yī)院泌尿外科

余閆宏，E-mail:yyhkmyns@sina.com

10.3870/j.issn.1674-4624.2016.05.005

2016-09-01)