肉雞專(zhuān)用新流二聯(lián)滅活疫苗的實(shí)驗(yàn)研究及臨床使用效果研究*

戴金寧，李富金，楊景晁，戰(zhàn)汪濤

（1.山東省畜牧總站，山東 濟(jì)南 250022；2.齊魯動(dòng)物保健品有限公司，山東 濟(jì)南 250105）

肉雞專(zhuān)用新流二聯(lián)滅活疫苗的實(shí)驗(yàn)研究及臨床使用效果研究*

戴金寧1，李富金2，楊景晁1，戰(zhàn)汪濤1

（1.山東省畜牧總站，山東 濟(jì)南 250022；2.齊魯動(dòng)物保健品有限公司，山東 濟(jì)南 250105）

利用新型101佐劑制備肉雞專(zhuān)用新流二聯(lián)滅活疫苗，與進(jìn)口白油佐劑新流二聯(lián)滅活疫苗進(jìn)行SPF雞、AA肉雞免疫比較，結(jié)果表明：試驗(yàn)一，SPF雞10日齡免疫，免疫后7d，肉雞專(zhuān)用新流組H9、ND抗體水平明顯優(yōu)于對(duì)照組；試驗(yàn)二，AA肉雞7日齡免疫，肉雞專(zhuān)用新流組禽流感H9抗體水平明顯優(yōu)于對(duì)照組，新城疫抗體對(duì)比不明顯；試驗(yàn)三，AA肉雞不同公司不同免疫日齡（1日齡、7日齡免疫）對(duì)比試驗(yàn)，23、30、37日齡檢測(cè)新城疫、禽流感H9抗體，齊魯肉雞專(zhuān)用新流禽組流感H9抗體產(chǎn)生速度比同類(lèi)產(chǎn)品及空白對(duì)照差異顯著，1日齡免疫效果對(duì)比更明顯；新城疫抗體對(duì)比差異不顯著；試驗(yàn)四，田間7日齡免疫對(duì)比試驗(yàn)，26日齡抽檢各舍抗體，齊魯肉雞專(zhuān)用新流H9抗體明顯優(yōu)于該公司新流，新城疫對(duì)比不明顯。結(jié)果表明，齊魯肉雞專(zhuān)用新流二聯(lián)滅活疫苗更適合于商品肉雞免疫，1日齡免疫對(duì)比更明顯。

肉雞；新流二聯(lián)；臨床使用；研究

新城疫、低致病性禽流感（H9）都是肉雞常見(jiàn)病毒性傳染病，也是肉雞養(yǎng)殖中危害最嚴(yán)重的疫病，藥物治療效果差，疫苗免疫預(yù)防發(fā)病是現(xiàn)在使用的有效方案。雞新城疫、禽流感（H9）二聯(lián)滅活疫苗是肉雞常用防控兩種疫病的疫苗，但是，肉雞生長(zhǎng)速度快，免疫系統(tǒng)不健全，傳統(tǒng)滅活苗效果在肉雞上應(yīng)用還有許多提高的方面。滅活疫苗臨床使用效果主要因素包括種毒毒株、佐劑、制苗工藝等。課題組人員優(yōu)選制苗毒株，免疫原性好，對(duì)目前國(guó)內(nèi)流行的新城疫、禽流感（H9）疾病有針對(duì)性的免疫效果；同時(shí)，為進(jìn)一步提高疫苗的免疫效果，課題組人員歷經(jīng)多年研究，篩選出一個(gè)高效佐劑用于商品肉雞專(zhuān)用滅活疫苗生產(chǎn)。經(jīng)大量試驗(yàn)和臨床使用跟蹤表明：優(yōu)選佐劑能快速激活免疫細(xì)胞，顯著提高機(jī)體免疫機(jī)能，抗體產(chǎn)生快，大幅縮短免疫空白期，更適用于肉雞低日齡免疫。在此基礎(chǔ)上，精確控溫滅活、高倍濃縮、均質(zhì)乳化等一系列科學(xué)的生產(chǎn)工藝以及嚴(yán)格的質(zhì)量控制體系，保證了產(chǎn)品質(zhì)量的安全、高效。為商品肉雞養(yǎng)殖業(yè)生產(chǎn)提供更有保障的高質(zhì)量的產(chǎn)品。

1 材料與方法

1.1 疫苗與血樣

1.1.1 疫苗 肉雞采用新流二聯(lián) （齊魯動(dòng)物保健品公司有限公司生產(chǎn)，肉雞佐劑）；齊魯新流二聯(lián)（自制試驗(yàn)樣，進(jìn)口白油佐劑）；國(guó)產(chǎn)Y公司制品（批號(hào)：2014020）；國(guó)產(chǎn) D公司制品 （批號(hào)：2014013）（同類(lèi)制品均為山東市場(chǎng)集團(tuán)專(zhuān)供公司）；田間試驗(yàn)肉雞專(zhuān)用新流二聯(lián)（批號(hào)：150316-1）；某公司新流二聯(lián)（批號(hào)：2015023）。

1.1.2 血樣 山東濰坊某養(yǎng)殖集團(tuán)對(duì)比試驗(yàn)各個(gè)雞舍26日齡肉雞血樣。

1.2 抗原 ND和AI-H9血凝抑制抗原均由山東某大型養(yǎng)殖公司提供（哈獸研生產(chǎn)）。

1.3 試驗(yàn)雞

1.3.1 10日齡SPF雞40只，購(gòu)自濟(jì)南斯帕法斯家禽有限公司。

1.3.2 1日齡AA肉雞270只，購(gòu)自山東和康源集團(tuán)。

1.4 1%雞紅細(xì)胞懸液制備 采集2～3只健康非免疫SPF公雞的血液，與等體積的阿氏液混合,用 pH7.2、0.01mol/L PBS液洗滌 3次，然后用pH7.2、0.01mol/LPBS配成 1%的紅細(xì)胞懸液，4℃保存?zhèn)溆谩?/p>

1.5 試驗(yàn)分組與免疫方法

1.5.1 試驗(yàn)一 10日齡SPF雞40只，隨機(jī)分成2組，每組20只。10日齡頸部皮下分別免疫，齊魯肉雞專(zhuān)用新流二聯(lián)（自制試驗(yàn)樣，新型101佐劑）；齊魯新流二聯(lián)（自制試驗(yàn)樣，進(jìn)口白油佐劑），免疫劑量均為0.2ml/羽。免疫后7、14、21d分別采血，分離血清，用血凝抑制（HI）試驗(yàn)方法測(cè)定ND和H9的HI抗體效價(jià)，比較佐劑活性差異。

1.5.2 試驗(yàn)二 AA肉雞，從雞群中挑選精神狀態(tài)良好、體況相近試驗(yàn)雞90只，隨機(jī)分成3組，每組30只。免疫程序：1日齡申貝點(diǎn)眼滴鼻，7日齡實(shí)驗(yàn)組免疫齊魯肉雞專(zhuān)用新流二聯(lián)（自制試驗(yàn)樣，新型101佐劑）；對(duì)照組免疫齊魯新流二聯(lián)（自制試驗(yàn)樣，進(jìn)口白油佐劑），空白組不免疫，同時(shí)新支120點(diǎn)眼滴鼻。免疫后7、14、21d分別采血，分離血清，用血凝抑制（HI）試驗(yàn)方法測(cè)定ND和H9的HI抗體效價(jià)，比較佐劑活性差異。

1.5.3 試驗(yàn)三 AA肉雞，從雞群中挑選精神狀態(tài)良好、體況相近試驗(yàn)雞180只，隨機(jī)分成6組，每組30只。免疫程序：1～3組，1日齡申貝點(diǎn)眼滴鼻，同時(shí)分別頸部皮下注射三個(gè)廠家新流二聯(lián)，0.15ml/只、7日齡新支120點(diǎn)眼滴鼻；4～6組，1日齡申貝點(diǎn)眼滴鼻，7日齡分別頸部皮下注射三個(gè)廠家新流二聯(lián)、新支120點(diǎn)眼滴鼻。免疫后23、30、37d分別采血，分離血清，用血凝抑制（HI）試驗(yàn)方法測(cè)定ND和H9的HI抗體效價(jià)，對(duì)比不同疫苗產(chǎn)品的免疫效果。

1.5.4 試驗(yàn)四 山東濰坊某集團(tuán)公司田間免疫對(duì)比試驗(yàn)，共10棟雞舍，兩個(gè)公司新流二聯(lián)各免疫5棟，免疫程序?yàn)椋?日齡威立克1倍量，傳支1倍量，7日齡某公司新流二聯(lián)0.35ml/只或齊魯肉雞專(zhuān)用新流二聯(lián)0.3ml/只；新支二聯(lián)1.2倍點(diǎn)眼滴鼻，21日齡1、3、4、5舍新城疫2倍量。免疫后26d采血，分離血清，用血凝抑制（HI）試驗(yàn)方法測(cè)定ND和H9的HI抗體效價(jià)，檢查不同公司疫苗產(chǎn)品的免疫效果。

2 試驗(yàn)結(jié)果

2.1 試驗(yàn)一 結(jié)果見(jiàn)表1。

表1 SPF雞免疫試驗(yàn)組（肉雞專(zhuān)用新流）與對(duì)照組（精品新流）免疫對(duì)比結(jié)果

結(jié)果顯示：疫苗中禽流感H9、新城疫效價(jià)相同，采用新型佐劑的肉雞專(zhuān)用新流比進(jìn)口白油佐劑的精品新流抗體產(chǎn)生快，免疫后7d，試驗(yàn)組禽流感HI抗體值達(dá)3.4，新城疫抗體達(dá)1.2，而對(duì)照組抗體滴度均小于1；免疫后14d，試驗(yàn)組H9-HI及ND-HI抗體比對(duì)照組高1個(gè)滴度；免疫后21d，兩組抗體水平差異不顯著，通過(guò)比較可以看出，試驗(yàn)組抗體產(chǎn)生速度明顯優(yōu)于對(duì)照組。

2.2 試驗(yàn)二 結(jié)果見(jiàn)表2。

表2 AA肉雞免疫試驗(yàn)組（肉雞專(zhuān)用新流）與對(duì)照組（精品新流）免疫對(duì)比結(jié)果

結(jié)果顯示：免疫后14d，空白對(duì)照組雞禽流感H9母源抗體均值下降為2.3log2，試驗(yàn)組禽流感H9抗體均值為 3.8log2，對(duì)照組為 3.0log2；免疫后21d，母源抗體均值下降為2.0log2；對(duì)照組為2.6 log2，試驗(yàn)組則高達(dá)4.6log2，免疫后28d，母源抗體持續(xù)下降到1.1log2，試驗(yàn)組均值比對(duì)照組高2個(gè)滴度，達(dá)5.1log2；免疫后14d、21d及28d，ND抗體母源抗體均值從1.4log2下降到0.8log2，免疫疫苗組抗體持續(xù)升高，但試驗(yàn)組比對(duì)照組差異不明顯，僅高0.5個(gè)滴度左右。通過(guò)比較可以看出，采用新型佐劑的肉雞專(zhuān)用新流的試驗(yàn)組比使用進(jìn)口白油佐劑的精品新流的對(duì)照組禽流感H9抗體產(chǎn)生快，抗體水平差異顯著；而新城疫抗體產(chǎn)生速度各日齡段對(duì)比不明顯。

2.3 試驗(yàn)三 結(jié)果見(jiàn)表3。

表3 齊魯肉雞專(zhuān)用新流與其它公司新流疫苗免疫AA肉雞的對(duì)比結(jié)果

結(jié)果顯示：隨著日齡增長(zhǎng)，空白對(duì)照組雞禽流感H9、新城疫母源抗體持續(xù)下降，30日齡左右降到1.0log2左右。不同公司新流二聯(lián)免疫AA肉雞后新城疫、禽流感H9的HI抗體比空白對(duì)照都有顯著提高，齊魯肉雞專(zhuān)用新流禽流感H9-HI抗體產(chǎn)生速度比同類(lèi)產(chǎn)品及空白對(duì)照高1～3個(gè)滴度，差異顯著，1日齡免疫比7日齡免疫效果對(duì)比更明顯；其中1日齡免疫，23日齡、30日齡、37日齡分別檢測(cè)抗體，Y公司、D公司疫苗抗體上升趨勢(shì)不明顯，而齊魯肉雞專(zhuān)用新流可以明顯檢測(cè)到抗體上升，37日齡齊魯肉雞專(zhuān)用新流抗體達(dá)4.2log2，比對(duì)Y、D公司高3個(gè)多滴度，差異顯著；7日齡免疫效果對(duì)比雖然沒(méi)有1日齡免疫對(duì)比這么顯著，37日齡，也有2個(gè)多滴度差異。新城疫HI抗體三個(gè)公司，7日齡免疫抗體走勢(shì)相同，對(duì)比差異不顯著 （新城疫有活疫苗免疫因素存在），1日齡免疫，齊魯肉雞專(zhuān)用新流抗體逐日上升趨勢(shì)明顯，其他2個(gè)公司抗體走勢(shì)與空白對(duì)照趨同。

2.4 試驗(yàn)四 結(jié)果見(jiàn)表4。

表4 山東濰坊某集團(tuán)公司田間免疫對(duì)比試驗(yàn)結(jié)果

結(jié)果顯示：7日齡免疫新流，26日齡抽檢各舍抗體，5個(gè)雞舍齊魯新流H9抗體平均值為 5.0 log2，5個(gè)雞舍某公司新流 H9抗體平均值為 3.8 log2，齊魯肉雞新流H9抗體明顯優(yōu)于該公司新流；5個(gè)雞舍齊魯新流ND抗體平均值為5.5log2，5個(gè)雞舍某公司新流ND抗體平均值為5.8log2，無(wú)明顯差異。

3 小結(jié)與討論

3.1 新型佐劑新流二聯(lián)在SPF雞、商品AA肉雞上免疫，免疫效果明顯優(yōu)于傳統(tǒng)進(jìn)口白油佐劑疫苗。

3.2 齊魯肉雞專(zhuān)用新流二聯(lián)（新型佐劑苗）抗體產(chǎn)生快，日齡越小，對(duì)比結(jié)果越明顯。

3.3 田間試驗(yàn)對(duì)比結(jié)果顯示，齊魯肉雞專(zhuān)用新流二聯(lián)禽流感免疫效果優(yōu)于Y公司及D公司，新城疫防疫效果差異不大。

3.4 肉雞生長(zhǎng)快，免疫系統(tǒng)不健全，傳統(tǒng)滅活疫苗抗體產(chǎn)生慢，一般免疫后21～28d才能出現(xiàn)高峰，肉雞發(fā)病早，疫苗抗體產(chǎn)生不足，不能完全滿(mǎn)足客戶(hù)疫病防控需求，齊魯肉雞專(zhuān)用新流二聯(lián)篩選的佐劑能快速激活免疫細(xì)胞，顯著提高機(jī)體免疫機(jī)能，抗體產(chǎn)生快，大幅縮短免疫空白期，更適用于肉雞低日齡免疫。

3.5 為了提高養(yǎng)殖效率，很多地方更換為籠養(yǎng)肉雞，養(yǎng)殖場(chǎng)希望雛雞上籠前就完成新流二聯(lián)免疫，傳統(tǒng)進(jìn)口白油佐劑7日齡免疫尚可，1日齡免疫檢測(cè)不到疫苗效果，不適用于1日齡商品肉雞。

S858.312.5

B

1673-1085（2016）09-0010-04

2016-08-20

山東省財(cái)政支持農(nóng)業(yè)技術(shù)推廣項(xiàng)目“肉雞標(biāo)準(zhǔn)化健康養(yǎng)殖技術(shù)推廣”；山東省農(nóng)業(yè)重大應(yīng)用技術(shù)創(chuàng)新項(xiàng)目“山東省肉雞業(yè)公共衛(wèi)生模式建立與示范”。

戴金寧（1969-），男，助理畜牧師，大專(zhuān)，主要從事畜牧科技推廣工作，154741270@qq.com。