以蝴蝶蘭種子萌發(fā)的原球莖為受體的遺傳轉(zhuǎn)化體系構(gòu)建

張和臣，董曉宇，王利民，張 晶，孟月娥，符真珠，李艷敏(河南省農(nóng)業(yè)科學(xué)院 園藝研究所，河南 鄭州 450002)

以蝴蝶蘭種子萌發(fā)的原球莖為受體的遺傳轉(zhuǎn)化體系構(gòu)建

張和臣，董曉宇，王利民*，張 晶，孟月娥，符真珠，李艷敏
(河南省農(nóng)業(yè)科學(xué)院 園藝研究所，河南 鄭州 450002)

以蝴蝶蘭種子萌發(fā)的原球莖為試材，研究了蝴蝶蘭遺傳轉(zhuǎn)化過(guò)程中不同植物生長(zhǎng)調(diào)節(jié)劑、抗生素對(duì)蝴蝶蘭原球莖增殖和轉(zhuǎn)化效率的影響，并對(duì)轉(zhuǎn)基因后代進(jìn)行了檢測(cè)。結(jié)果表明，適用于蝴蝶蘭原球莖的增殖培養(yǎng)基，即蝴蝶蘭原球莖遺傳轉(zhuǎn)化的共培養(yǎng)培養(yǎng)基配方為：3.0 g/L花寶1號(hào)+2.0 g/L活性炭+2.0 g/L水解酪蛋白+15 g/L蔗糖+3.0 mg/L 6-BA+0.6 mg/L 2,4-D+6.5 g/L瓊脂，pH=5.5～5.6；適用于蝴蝶蘭遺傳轉(zhuǎn)化過(guò)程中的篩選培養(yǎng)基配方為：增殖培養(yǎng)基+8.0 mg/L 潮霉素+50 mg/L 頭孢霉素，pH值為5.5～5.6。蝴蝶蘭轉(zhuǎn)基因后代的PCR分子檢測(cè)及GUS活性組織化學(xué)檢測(cè)結(jié)果表明，外源基因成功整合到了蝴蝶蘭基因組中。

蝴蝶蘭； 原球莖； 遺傳轉(zhuǎn)化

蝴蝶蘭(Phalaenopsisspp.)花型奇特，花色亮麗，因花型似蝴蝶而得名，是重要的盆栽花卉種類(lèi)。在自然界中，目前尚未見(jiàn)具有藍(lán)色、香味等觀(guān)賞性狀的蝴蝶蘭資源。因此，育種者不能通過(guò)傳統(tǒng)的雜交手段獲得具有藍(lán)色、花香的品種。當(dāng)前，轉(zhuǎn)基因育種在作物抗病、抗蟲(chóng)、抗除草劑等性狀改良上已經(jīng)獲得了成功[1]；在月季、非洲菊、康乃馨等花卉的花色改良上也取得了重大突破[2]。因此，轉(zhuǎn)基因育種也是將來(lái)獲得具有香味、藍(lán)色等性狀蝴蝶蘭品種的優(yōu)先方法。

轉(zhuǎn)基因育種方法雖然具有育種目的明確、育種時(shí)間短等優(yōu)點(diǎn)，但是在一些植物轉(zhuǎn)基因具體實(shí)施中，經(jīng)常被受體材料所制約。適宜的受體材料有助于加快植物的遺傳轉(zhuǎn)化及轉(zhuǎn)基因植物的成功培育。針對(duì)蝴蝶蘭的轉(zhuǎn)基因育種，體細(xì)胞胚、類(lèi)原球莖及原球莖理論上都可以作為遺傳轉(zhuǎn)化的受體材料。但是，體細(xì)胞胚、類(lèi)原球莖的獲得方式主要通過(guò)莖尖、莖段、葉片、根尖、根段、腋芽等外植體的誘導(dǎo)[3-6]，而在誘導(dǎo)過(guò)程中，常存在褐變、誘導(dǎo)率低等問(wèn)題。因此，蝴蝶蘭轉(zhuǎn)基因育種實(shí)踐中，以體細(xì)胞胚或類(lèi)原球莖作為受體材料具有一定的局限性。另外，在以體細(xì)胞胚或類(lèi)原球莖為受體材料進(jìn)行轉(zhuǎn)基因操作時(shí)，還存在轉(zhuǎn)染率低的缺陷[7-8]。因此，找到一種適宜于蝴蝶蘭遺傳轉(zhuǎn)化的受體，即建立適用于蝴蝶蘭的遺傳轉(zhuǎn)化體系對(duì)于利用基因工程手段進(jìn)行蝴蝶蘭的遺傳改良具有重要意義。鑒于此，以蝴蝶蘭種子萌發(fā)的原球莖為受體材料，通過(guò)原球莖的增殖培養(yǎng)、抗生素篩選，并利用農(nóng)桿菌侵染法對(duì)受體材料進(jìn)行遺傳轉(zhuǎn)化，建立蝴蝶蘭的遺傳轉(zhuǎn)化體系，可為今后通過(guò)基因工程手段進(jìn)行蝴蝶蘭的遺傳改良提供借鑒。

1 材料和方法

1.1 供試材料

供試蝴蝶蘭品種為紅龍，種子由蝴蝶蘭自交獲得。所用重組農(nóng)桿菌菌株為GV3101，內(nèi)含有質(zhì)粒表達(dá)載體pCAMBIA1303-VwF3′5′H。三色堇藍(lán)色花瓣關(guān)鍵基因VwF3′5′H(收錄號(hào)：AB332097)的的克隆參照NCBI數(shù)據(jù)庫(kù)全長(zhǎng)序列，通過(guò)RT-PCR方法整合到pCAMBIA1303載體，并由CaMV35S啟動(dòng)子啟動(dòng)。

1.2 方法

1.2.1 蝴蝶蘭種子萌發(fā)及原球莖增殖培養(yǎng) 蝴蝶蘭種子萌發(fā)培養(yǎng)基為：3.0 g/L花寶1號(hào)+2.0 g/L活性炭+2.0 g/L水解酪蛋白+15 g/L蔗糖+2.0 mg/L 6-BA+0.2 mg/L NAA+6.5 g/瓊脂，pH=5.5～5.6。種子萌發(fā)60～90 d后形成的原球莖(0.3～0.5 cm)用于后續(xù)增殖培養(yǎng)試驗(yàn)。

原球莖增殖培養(yǎng)的基本培養(yǎng)基為：3.0 g/L花寶1號(hào)+2.0 g/L活性炭+2.0 g/L水解酪蛋白+15 g/L蔗糖。植物生長(zhǎng)調(diào)節(jié)劑選用2,4-D、6-BA和TDZ，設(shè)置12種配方組合進(jìn)行試驗(yàn)，具體處理組合如表1所示。每瓶培養(yǎng)基中接種10粒蝴蝶蘭原球莖，每個(gè)處理重復(fù)5瓶。統(tǒng)計(jì)指標(biāo)及計(jì)算公式為：增殖系數(shù)=增殖的切塊數(shù)/接種總數(shù)×100%，其中，增殖的切塊數(shù)為產(chǎn)生新原球莖或愈傷組織的切塊數(shù)。

進(jìn)一步對(duì)2,4-D和6-BA的質(zhì)量濃度進(jìn)行優(yōu)化。2,4-D質(zhì)量濃度分別設(shè)為0.4、0.6、0.8 mg/L，6-BA質(zhì)量濃度分別設(shè)為1.0、3.0、5.0 mg/L，共9個(gè)處理。統(tǒng)計(jì)指標(biāo)及計(jì)算公式如下：原球莖增殖率=增殖形成新原球莖的切塊數(shù)/接種總數(shù)×100%。

表1 不同植物生長(zhǎng)調(diào)節(jié)劑種類(lèi)及質(zhì)量濃度處理組合 mg/L

以上原球莖萌發(fā)及增殖培養(yǎng)的條件為：日溫25 ℃、夜溫17 ℃、光強(qiáng)3 000 lx、日光照16 h，培養(yǎng)時(shí)間60～90 d。

1.2.2 蝴蝶蘭原球莖增殖抗生素篩選培養(yǎng) 為了獲得蝴蝶蘭原球莖在遺傳轉(zhuǎn)化試驗(yàn)中最佳的抗生素種類(lèi)及質(zhì)量濃度，進(jìn)行硫酸卡那霉素(Kan)、潮霉素(Hyg)、頭孢霉素(Cef)的抗性篩選試驗(yàn)。Kan抗性篩選：將原球莖切塊后分別接入含Kan為0、10、50、100 mg/L的增殖培養(yǎng)基中進(jìn)行篩選。Hyg抗性篩選：將原球莖切塊后分別接入含Hyg為1.0、3.0、5.0、8.0、10.0 mg/L的增殖培養(yǎng)基中進(jìn)行篩選。Cef抗性篩選：將原球莖切塊后分別接入含Cef為50、100、200、300 mg/L的增殖培養(yǎng)基中進(jìn)行篩選，以獲得適宜的抑制農(nóng)桿菌生長(zhǎng)的Cef質(zhì)量濃度。

每瓶培養(yǎng)基中接種14粒蝴蝶蘭原球莖，每個(gè)處理重復(fù)5瓶。在日溫25 ℃、夜溫17 ℃、光強(qiáng)3 000 lx、日光照16 h的培養(yǎng)室中培養(yǎng)。培養(yǎng)30 d后，觀(guān)察統(tǒng)計(jì)各個(gè)處理的存活率。計(jì)算公式為：原球莖切塊存活率=存活的切塊數(shù)/接種總數(shù)×100%。

1.2.3 蝴蝶蘭原球莖的遺傳轉(zhuǎn)化 將直徑0.3～0.5 cm、長(zhǎng)勢(shì)優(yōu)良的原球莖切成塊，轉(zhuǎn)接入預(yù)培養(yǎng)培養(yǎng)基中(同原球莖增殖培養(yǎng)基)，預(yù)培養(yǎng)3 d后進(jìn)行農(nóng)桿菌侵染。本研究中重組農(nóng)桿菌菌株為GV3101，侵染步驟如下：(1)從-80 ℃冰箱中取出重組農(nóng)桿菌菌株，用接種針在含Kan(100 mg/L)、利福平(Rif,40 mg/L)的LB固體培養(yǎng)基上劃線(xiàn)，置于培養(yǎng)箱中，在28 ℃條件下培養(yǎng)2～3 d至單菌落出現(xiàn)。(2)用接種針從平板上挑取單菌落，接種于5 mL含Kan(100 mg/L)、Rif(40 mg/L)的LB液體培養(yǎng)基中，28 ℃、180 r/min振蕩過(guò)夜培養(yǎng)。(3)取上述菌液1 mL，添加到50 mL無(wú)抗生素的LB液體培養(yǎng)基中培養(yǎng)3～5 h，至菌液OD600=0.4～0.6；4 ℃條件下，2 500 r/min離心10 min，收集菌體；之后，用液體增殖培養(yǎng)基將菌體重新懸浮至OD600=0.4～0.6。(4)將蝴蝶蘭原球莖切塊，用懸浮的菌液侵染10～15 min；侵染完成后，將受體材料轉(zhuǎn)移到無(wú)菌濾紙上晾干；然后轉(zhuǎn)接入共培養(yǎng)培養(yǎng)基上(同增殖培養(yǎng)基)，置于25 ℃條件下暗培養(yǎng)3 d。(5)共培養(yǎng)完成后，在篩選培養(yǎng)基上(增殖培養(yǎng)基+抗生素)進(jìn)行篩選培養(yǎng)，期間每20 d左右更換一次培養(yǎng)基，直至增殖出現(xiàn)新的原球莖。

1.2.4 轉(zhuǎn)基因植株的分子檢測(cè)及GUS活性的組織化學(xué)檢測(cè) 抗性材料PCR檢測(cè)的上、下游引物分別為：5′-ACCTCAACTTCTCCAACCGC-3′、5′-GCTCCTTCACCATCTTCGTC-3′。PCR反應(yīng)體系及步驟參照天根生化科技有限公司TaqPCR Mastermix的試劑盒進(jìn)行。GUS活性的組織化學(xué)檢測(cè)參照J(rèn)efferson等[9]的方法進(jìn)行。以未經(jīng)侵染的蝴蝶蘭葉片為陰性對(duì)照(N)。

2 結(jié)果與分析

在接種60～90 d后，蝴蝶蘭種子多數(shù)長(zhǎng)成直徑為0.3～0.5 cm左右的原球莖，少數(shù)分化成芽(圖1)。選取長(zhǎng)勢(shì)一致、未分化成芽的優(yōu)良原球莖用于增殖試驗(yàn)。

圖1 蝴蝶蘭種子萌發(fā)的原球莖

2.1 不同質(zhì)量濃度2,4-D、6-BA和TDZ組合對(duì)蝴蝶蘭原球莖增殖的影響

從表2和圖2可以看出，在12種組合中，處理1、2、9、10、11和12的原球莖切塊均在培養(yǎng)30 d時(shí)出現(xiàn)增殖現(xiàn)象。其中，處理9和10的原球莖增殖系數(shù)在30 d時(shí)已達(dá)到90%；而處理5、6、7、8不僅無(wú)愈傷組織及新的原球莖增殖發(fā)生，到60 d時(shí)甚至出現(xiàn)材料死亡現(xiàn)象。上述結(jié)果表明：原球莖增殖過(guò)程中2,4-D質(zhì)量濃度過(guò)大(大于1.0 mg/L)不僅不利于原球莖的增殖，甚至?xí)斐稍蚯o切塊的死亡。2,4-D質(zhì)量濃度為1.0 mg/L時(shí)，雖然在30 d的培養(yǎng)過(guò)程中也出現(xiàn)原球莖增殖現(xiàn)象，但增殖效率不及2,4-D質(zhì)量濃度為0.5 mg/L時(shí)。因此，初步判斷2,4-D質(zhì)量濃度小于1.0 mg/L時(shí)對(duì)蝴蝶蘭原球莖的增殖培養(yǎng)最有利。處理9、10中的組合為2,4-D+6-BA，在培養(yǎng)60 d后增殖系數(shù)達(dá)到95%；而處理11、12則是2,4-D和TDZ的組合，該組合雖然也具有較高的增殖系數(shù)(達(dá)到80%)，但對(duì)比前2個(gè)組合而言效果稍差。因此，6-BA的分化增殖效果比TDZ好。以上試驗(yàn)表明，適用于蝴蝶蘭原球莖增殖培養(yǎng)的植物生長(zhǎng)調(diào)節(jié)劑組合為2,4-D和6-BA。

表2 不同質(zhì)量濃度2,4-D、6-BA和TDZ組合對(duì)蝴蝶蘭原球莖增殖的影響

續(xù)表2 不同質(zhì)量濃度2,4-D、6-BA和TDZ組合對(duì)蝴蝶蘭原球莖增殖的影響

圖2 不同質(zhì)量濃度2,4-D、6-BA和TDZ組合下蝴蝶蘭原球莖的增殖情況

2.2 不同質(zhì)量濃度2,4-D和6-BA組合對(duì)蝴蝶蘭原球莖增殖的影響

根據(jù)2.1試驗(yàn)結(jié)果，進(jìn)一步對(duì)6-BA和2,4-D的質(zhì)量濃度進(jìn)行優(yōu)化。結(jié)果如表3所示，2,4-D質(zhì)量濃度為0.4 mg/L時(shí)，個(gè)別原球莖呈現(xiàn)出芽分化狀態(tài)，并且隨著6-BA質(zhì)量濃度的提高，增殖產(chǎn)生新原球莖的切塊數(shù)也隨之提高。當(dāng)2,4-D質(zhì)量濃度在0.6 mg/L時(shí)，增殖產(chǎn)生的原球莖以團(tuán)塊狀為主，組合6-BA的質(zhì)量濃度為3.0 mg/L時(shí)，原球莖切塊的增殖率達(dá)到最大。當(dāng)2,4-D質(zhì)量濃度達(dá)到0.8 mg/L時(shí)，團(tuán)塊原球莖的增殖受到抑制，并且隨著6-BA質(zhì)量濃度的提高增殖率隨之降低。因此，蝴蝶蘭原球莖增殖培養(yǎng)的最佳植物生長(zhǎng)調(diào)節(jié)劑組合為0.6 mg/L 2,4-D+3.0 mg/L 6-BA。根據(jù)以上試驗(yàn)結(jié)果，確定蝴蝶蘭原球莖增殖的培養(yǎng)基配方為：3.0 g/L花寶1號(hào)+2.0 g/L活性炭+2.0 g/L水解酪蛋白+15 g/L蔗糖+3.0 mg/L 6-BA+0.6 mg/L 2,4-D+6.5 g/L瓊脂，pH=5.5～5.6，該培養(yǎng)基配方適用于后續(xù)蝴蝶蘭原球莖遺傳轉(zhuǎn)化過(guò)程中的共培養(yǎng)。

表3 不同質(zhì)量濃度6-BA和2,4-D組合對(duì)蝴蝶蘭原球莖增殖的影響

2.3 不同抗生素對(duì)蝴蝶蘭原球莖存活率的影響

從表4可以看出，隨著Kan質(zhì)量濃度的升高，原球莖切塊的存活率逐漸降低，當(dāng)Kan達(dá)到100 mg/L時(shí)，原球莖的增殖受到嚴(yán)重抑制，存活率只有7.1%。在培養(yǎng)基中添加Hyg時(shí)，蝴蝶蘭原球莖的切塊存活也受到明顯影響。當(dāng)Hyg為3.0 mg/L時(shí)，存活率已低至30%以下；當(dāng)Hyg為5.0～8.0 mg/L時(shí)，切塊呈現(xiàn)出嚴(yán)重的生長(zhǎng)受抑制現(xiàn)象；當(dāng)Hyg為10.0 mg/L時(shí)，無(wú)切塊存活?？股睾Y選結(jié)果表明，Kan和Hyg對(duì)原球莖的增殖均有抑制作用，但就抑制效果而言，Hyg優(yōu)于Kan。Hyg在較低的質(zhì)量濃度(5.0 mg/L)時(shí)即有很好的抑制效果，而Kan則需要較高的質(zhì)量濃度(100 mg/L)才能達(dá)到抑制增殖的效果。因此，在蝴蝶蘭的遺傳轉(zhuǎn)化上更適合以Hyg作為篩選劑。為了降低假陽(yáng)性出現(xiàn)的概率，在篩選培養(yǎng)過(guò)程中選用Hyg 8.0 mg/L較為適宜。

表4 不同抗生素類(lèi)型及質(zhì)量濃度對(duì)蝴蝶蘭原球莖存活率的影響

另外，由表4可知，在培養(yǎng)基中添加Cef時(shí)，蝴蝶蘭原球莖的存活率隨著Cef質(zhì)量濃度的升高逐漸降低。當(dāng)Cef達(dá)到200 mg/L時(shí)，對(duì)切塊的增殖產(chǎn)生少許的抑制效果；當(dāng)Cef為300 mg/L時(shí)，切塊存活率降低程度已較為明顯。由于抗生素的作用具有累加性，為了盡可能地減少Cef對(duì)切塊增殖的影響，可選用50 mg/L的Cef用于篩選過(guò)程中的培養(yǎng)。綜上，適合蝴蝶蘭原球莖篩選的培養(yǎng)基為：增殖培養(yǎng)基+8.0 mg/L Hyg+50 mg/L Cef，pH=5.5～5.6。

2.4 蝴蝶蘭轉(zhuǎn)基因后代的分子及GUS活性組織化學(xué)檢測(cè)

本研究利用蝴蝶蘭種子萌發(fā)的原球莖進(jìn)行遺傳轉(zhuǎn)化，共培養(yǎng)選用增殖培養(yǎng)基，篩選培養(yǎng)選用增殖培養(yǎng)基+8.0 mg/L Hyg+50 mg/L Cef，經(jīng)過(guò)持續(xù)篩選，最后獲得具有Hyg抗性的蝴蝶蘭分化植株11株，提取其基因組DNA，進(jìn)行PCR檢測(cè)。結(jié)果表明，用于PCR檢測(cè)的轉(zhuǎn)基因后代中(1～11)都能獲得與目的基因片段大小相同的條帶，而陰性對(duì)照不能獲得擴(kuò)增(圖3)。進(jìn)一步對(duì)轉(zhuǎn)基因后代進(jìn)行GUS活性組織化學(xué)檢測(cè)，以確定外源基因是否能夠正常表達(dá)。結(jié)果表明，轉(zhuǎn)基因后代都能檢測(cè)到GUS的活性。以上試驗(yàn)證明，外源基因VwF3′5′H已經(jīng)成功整合到了蝴蝶蘭基因組中。

圖3 蝴蝶蘭轉(zhuǎn)基因后代的分子鑒定(A)及GUS活性組織化學(xué)檢測(cè)(B)

3 結(jié)論與討論

本研究將蝴蝶蘭種子萌發(fā)的直徑大小為0.3～0.5 cm的原球莖進(jìn)行切塊，通過(guò)農(nóng)桿菌進(jìn)行介導(dǎo)轉(zhuǎn)染，然后通過(guò)共培養(yǎng)、篩選培養(yǎng)，建立了以蝴蝶蘭種子萌發(fā)原球莖為受體材料的遺傳轉(zhuǎn)化體系及相應(yīng)的檢測(cè)體系。適宜原球莖增殖的培養(yǎng)基，即遺傳轉(zhuǎn)化共培養(yǎng)培養(yǎng)基配方為：3.0 g/L花寶1號(hào)+2.0 g/L活性炭+2.0 g/L水解酪蛋白+15 g/L蔗糖+3.0 mg/L 6-BA+0.6 mg/L 2,4-D+6.5 g/L瓊脂，pH=5.5～5.6。適用于蝴蝶蘭遺傳轉(zhuǎn)化過(guò)程中的篩選培養(yǎng)基配方為：增殖培養(yǎng)基+8.0 mg/L Hyg+50 mg/L Cef，pH=5.5～5.6。

該體系相比現(xiàn)有的蝴蝶蘭轉(zhuǎn)化體系，有較為明顯的技術(shù)優(yōu)勢(shì)。首先，該體系在獲得受體材料方式上更加快捷。其次，本研究建立的原球莖增殖體系，與通過(guò)莖尖、莖段、葉片等方式誘導(dǎo)原球莖相比，具有材料性能穩(wěn)定、來(lái)源廣泛的特點(diǎn)。另外，該遺傳轉(zhuǎn)化體系對(duì)抗生素敏感性較好，有利于抗性轉(zhuǎn)基因材料的篩選。

但是，通過(guò)轉(zhuǎn)基因手段將外源基因整合到受體植物基因組中只是最終轉(zhuǎn)基因成功與否的第一步，外源基因能否正常表達(dá)并行使功能，與受體本身遺傳系統(tǒng)也有關(guān)系。另外，植物的表型性狀一般是由多個(gè)基因控制的，例如，影響植物藍(lán)色花瓣表型的因子中有細(xì)胞內(nèi)各種色素的累計(jì)比、pH環(huán)境、花色素的金屬離子螯合特性等，控制這些因子形成的基因都會(huì)影響花瓣的最終呈色。因此，就蝴蝶蘭通過(guò)轉(zhuǎn)基因手段創(chuàng)建藍(lán)色花種質(zhì)而言，本研究只是將藍(lán)色花關(guān)鍵基因VwF3′5′H整合到了蝴蝶蘭基因組中，能否獲得具有藍(lán)色花瓣的蝴蝶蘭表型還需要后續(xù)功能鑒定。

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Establishment of Genetic Transformation System for HybridPhalaenopsisBased on Protocorm from Geminated Seed

ZHANG Hechen,DONG Xiaoyu,WANG Limin*,ZHANG Jing,MENG Yue’e,FU Zhenzhu,LI Yanmin
(Horticulture Research Institute,Henan Academy of Agricultural Sciences,Zhengzhou 450002,China)

We studied the effects of different hormones,antimicrobial agent on protocorms propagation and transformation efficiency in genetic transformation by targeting protocorms bodies germinated from seeds ofPhalaenopsis,and we also identified the transformed offspring.The results showed that the appropriate medium for protocorms propagation was: 3.0 g/L Hyponex No.1+2.0 g/L activated carbon+2.0 g/L casein hydrolysate+15 g/L sucrose+3.0 mg/L 6-BA+0.6 mg/L 2,4-D+6.5 g/L agar, pH=5.5—5.6,and the selective culture-medium for transformation was: the propagation medium+8.0 mg/L Hyg+50 mg/L Cef, pH=5.5—5.6. GUS histochemical identification and PCR detection results showed that the exogenous gene had been successfully integrated into thePhalaenopsisgenome.

Phalaenopsis; protocorm; genetic transformation

2016-01-20

河南省農(nóng)業(yè)科學(xué)院科研發(fā)展專(zhuān)項(xiàng)資金項(xiàng)目(20148407)；河南省留學(xué)回國(guó)人員專(zhuān)項(xiàng)經(jīng)費(fèi)項(xiàng)目(2015-10)

張和臣(1979-)，男，河南范縣人，副研究員，博士，主要從事植物花瓣呈色的分子基礎(chǔ)及花色性狀相關(guān)的分子育種研究。E-mail:zhc5128@126.com

*通訊作者:王利民(1971-)，男，河南溫縣人，副研究員，博士，主要從事園林花卉育種及栽培生理相關(guān)研究。 E-mail:wanglimin923@126.com

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