金銀花抗炎免疫活性研究進(jìn)展

嚴(yán)雪龍，孟愛平，濮社班

(中國(guó)藥科大學(xué) 天然藥物活性組分與功效國(guó)家重點(diǎn)實(shí)驗(yàn)室，生藥學(xué)研究室，江蘇 南京 211198)

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金銀花抗炎免疫活性研究進(jìn)展

嚴(yán)雪龍，孟愛平，濮社班*

(中國(guó)藥科大學(xué) 天然藥物活性組分與功效國(guó)家重點(diǎn)實(shí)驗(yàn)室，生藥學(xué)研究室，江蘇 南京 211198)

摘要金銀花為忍冬科植物忍冬(Lonicera japonica Thunb.)的干躁花蕾及初開的花，具有清熱解毒，疏散風(fēng)熱的功效，主治熱性病，具有抗炎免疫的作用，為治一切內(nèi)癰外癰之要藥。金銀花提取物具有免疫抑制作用，通過抑制TNF-α, IL-1β, 和 IL-6等促炎細(xì)胞因子來抑制或減輕炎癥反應(yīng)。研究認(rèn)為金銀花的免疫調(diào)節(jié)作用是通過調(diào)節(jié)TH1/TH2的平衡實(shí)現(xiàn)的，機(jī)理主要是增加TH1細(xì)胞分泌的細(xì)胞因子或降低TH2細(xì)胞分泌的細(xì)胞因子，但物質(zhì)基礎(chǔ)及作用機(jī)制尚不明確。炎癥與免疫密不可分，研發(fā)具有抗炎和免疫調(diào)節(jié)作用的藥物意義重大。金銀花的臨床療效與藥理作用研究結(jié)果是相一致的，提示金銀花可用于研發(fā)抗炎免疫藥物，有待進(jìn)一步研究。

關(guān)鍵詞金銀花；抗炎；免疫

金銀花(LoniceraeJaponicaeFlos)為忍冬科植物忍冬(Lonicera japonicaThunb.)的干躁花蕾及初開的花，又名忍冬花、銀花、雙花等。藥理學(xué)研究表明，金銀花具有抗病毒、抗氧化、抗誘變、毒性[2]、抗炎止痛[3]、抗癌[4]、抗神經(jīng)毒性[5-6]、降血糖[7]、抗菌[8]、免疫調(diào)節(jié)、抗生育[1]等作用。目前從金銀花中已經(jīng)分離鑒定了140多種[1]化合物，含有有機(jī)酸類、黃酮類、三萜皂苷類和揮發(fā)油和環(huán)烯醚萜類等，綠原酸類化合物是金銀花的主要有效成分，包括綠原酸及異綠原酸，是金銀花藥材質(zhì)量控制的指標(biāo)性成分。另外，其他成分如黃酮、皂苷等，現(xiàn)代研究表明都具有一定活性。金銀花是一種傳統(tǒng)中藥，具有清熱解毒，涼散風(fēng)熱的功效，主治熱性病，如身熱、發(fā)疹、發(fā)斑、熱毒瘡癰、咽喉腫痛等癥，均效果顯著。

炎癥是機(jī)體對(duì)于刺激的一種防御反應(yīng)，表現(xiàn)為紅、腫、熱、痛和功能障礙。從免疫角度講，炎癥是機(jī)體免疫的表現(xiàn)形式，免疫過程中產(chǎn)生的細(xì)胞因子有很多就是促發(fā)炎癥的細(xì)胞因子，稱炎癥細(xì)胞因子。

與炎癥免疫有關(guān)的核因子主要有核因子(NuclearFactorofKappaB,NF-κB)、核因子GATA3、T細(xì)胞核因子(NFAT)。NF-κB是一種具有多向性調(diào)節(jié)作用的蛋白質(zhì)分子，廣泛參與基因轉(zhuǎn)錄的調(diào)節(jié)，特別是與機(jī)體免疫應(yīng)答反應(yīng)密切相關(guān)基因的轉(zhuǎn)錄調(diào)控。其進(jìn)入細(xì)胞核內(nèi)，可參與基因的轉(zhuǎn)錄和調(diào)控，誘導(dǎo)細(xì)胞合成TNF、IL-1β,和IL-6、IL-8、PLA2和iNOs等，參與炎癥反應(yīng)。很多抗炎藥的機(jī)理都是通過抑制炎癥細(xì)胞因子的釋放來實(shí)現(xiàn)的，也可以稱之為免疫抑制劑。

參與炎癥反應(yīng)的細(xì)胞因子主要有TNF-α、IL-1β、IL-6、IL-8、TGF-β等，TNF-α是炎癥反應(yīng)過程中出現(xiàn)最早、最重要的炎性介質(zhì)，能激活中性粒細(xì)胞和淋巴細(xì)胞，使血管內(nèi)皮細(xì)胞通透性增加，調(diào)節(jié)其他組織代謝活性并促使其他細(xì)胞因子的合成和釋放。IL-6能誘導(dǎo)B細(xì)胞分化和產(chǎn)生抗體，并誘導(dǎo)T細(xì)胞活化增殖、分化，參與機(jī)體的免疫應(yīng)答，是炎性反應(yīng)的促發(fā)劑。IL-8能刺激中性粒細(xì)胞、T淋巴細(xì)胞和嗜酸性粒細(xì)胞的趨化，促進(jìn)中性粒細(xì)胞脫顆粒，釋放彈性蛋白酶，損傷內(nèi)皮細(xì)胞，使微循環(huán)血流淤滯，組織壞死，造成器官功能損傷。

炎癥與免疫在組織、細(xì)胞分子水平上有不可分割的聯(lián)系，因此單純使用抗炎藥或者免疫抑制和免疫調(diào)節(jié)藥來治療疾病效果不理想，長(zhǎng)期用藥有可能起到反作用。金銀花提取物具有抗炎和免疫調(diào)節(jié)的雙重作用，具有很好的開發(fā)價(jià)值。

1抗炎和免疫抑制作用及機(jī)制

近年來，研究發(fā)現(xiàn)金銀花的抗炎作用與免疫抑制有密切聯(lián)系，其免疫抑制作用主要是通過抑制促炎癥細(xì)胞因子的表達(dá)來實(shí)現(xiàn)的。例如Tian[21]等從金銀花中分離得到一種多聚糖，分子量為1.8 × 105Da，主要由D-葡萄糖(D-glucose)和少量D-樹膠醛糖(D-arabinose)組成。他們?cè)谛∈蠖渖嫌每嗷?picrylchloride)誘導(dǎo)變態(tài)性接觸性皮炎(allergiccontactdermatitis)，并檢測(cè)該多聚糖的抗過敏活性，結(jié)果口服改多聚糖(20, 40and80mg/kg)能夠引起小鼠血清中IgE和組胺濃度降低，并且減少組織中TNF-α水平，該研究結(jié)果表明該多糖可能有效預(yù)防變態(tài)性接觸性皮炎；Eun[22]等從金銀花中分離得到13種酚類成分，并分析了他們的5-脂氧化酶(5-lipoxygenase)抑制活性，其中只有木犀草素(luteolin)具有顯著的抑制活性(IC50為0.8μM)。在眾多炎癥反應(yīng)分子中，白細(xì)胞三烯(leukotrienes)是一些過敏癥的中間傳遞物質(zhì)，而5-脂氧化酶是由花生四烯酸(arachidonicacid)合成白細(xì)胞三烯所需的酶，因此抑制5-脂氧化酶即是起到了抗過敏的作用。該研究說明金銀花抗過敏的物質(zhì)基礎(chǔ)之一為木犀草素，由于沒有對(duì)其他成分進(jìn)行檢測(cè)，因此金銀花中其他成分也有可能有抗過敏的活性，這有待進(jìn)一步研究。Kwang-Il[16]等人的研究也表明，金銀花的抗炎機(jī)制是金銀花中的多酚類物質(zhì)，通過細(xì)胞核因子(NF-κB)和有絲分裂激活蛋白酶(MAPKs)途徑，多酚類物質(zhì)能夠抑制COX-2、iNOS和TNF-α、IL-1β、和IL-6等促炎細(xì)胞因子。此外，Ok-Hwa[17]等人也證實(shí)了金銀花中的木犀草素(Luteolin)能夠抑制炎癥介質(zhì)釋放，主要機(jī)理是在HMC-1細(xì)胞中，通過NF-κB和MAPKs激活途徑，抑制腫瘤壞死因子TNF-a，IL-8，IL-6，巨噬細(xì)胞集落刺激因子(GM-CSF)等促炎細(xì)胞介質(zhì)的釋放，另外還降低了環(huán)氧化酶COX-2的表達(dá)和細(xì)胞內(nèi)Ca2+水平，說明木犀草素可能是金銀花能夠免疫調(diào)節(jié)肥大細(xì)胞引發(fā)的炎癥的物質(zhì)基礎(chǔ)。

Kim[23]等發(fā)現(xiàn)金銀花乙醇提取物能改善膿毒病的死亡率，增強(qiáng)細(xì)菌清除和延緩小鼠多器官的衰竭，其機(jī)理為減弱Toll樣受體 (TLR)4蛋白和mRNA的表達(dá)，并且能抑制肺部和肝臟中骨髓來源細(xì)胞主要應(yīng)答反應(yīng)蛋白88，p38和c-Jun氨基末端激酶(c-JunN-terminalkinase)的表達(dá)，還有β干擾素TIR結(jié)構(gòu)域銜接蛋白(TIR-domain-containingadapter-inducinginterferon-β)和干擾素調(diào)節(jié)因子3蛋白的表達(dá)，他們認(rèn)為，金銀花乙醇提取物通過TLR信號(hào)途徑來抑制膿毒病，因此金銀花乙醇提取物有望作為治療膿毒病的潛在治療藥物，值得進(jìn)一步研究。

崔曉燕[15]等發(fā)現(xiàn)金銀花提取物連續(xù)灌胃15天可顯著抑制小鼠單核-巨噬細(xì)胞的吞噬功能。該研究也顯示，金銀花提取物是通過抑制機(jī)體的免疫功能來發(fā)揮抗炎作用的，同時(shí)，對(duì)炎癥早期的腫脹有顯著抑制作用，對(duì)炎癥中期白細(xì)胞的趨化、游出有顯著的抑制作用，對(duì)炎癥晚期的纖維結(jié)締組織增生有較強(qiáng)的抑制作用，但是作用機(jī)理需進(jìn)一步研究。曾耀英[18]等發(fā)現(xiàn)金銀花提取物對(duì)刀豆蛋白(ConA)誘導(dǎo)下的小鼠淋巴細(xì)胞體外活化和增殖均有明顯抑制作用，是一種有潛在能力的免疫抑制劑，并且初步探索其免疫抑制機(jī)理為金銀花提取物降低了T淋巴細(xì)胞CD69、CD25及CD71的表達(dá)，即抑制了T淋巴細(xì)胞的活化，這種抑制程度與其藥物濃度呈正相關(guān)。

胡成穆[19]等研究了金銀花中總黃酮對(duì)卡介苗(BCG)聯(lián)合脂多糖(LPS)所致免疫性肝損傷小鼠的影響，發(fā)現(xiàn)金銀花總黃酮能提高免疫性肝損傷小鼠肝、脾臟器指數(shù)，改善免疫性肝損傷小鼠肝臟組織學(xué)改變，降低肝勻漿中NO、誘導(dǎo)型一氧化氮合酶(inducibleNOsynthase,iNOS)的水平，也能降低免疫性肝損傷小鼠TNF-a在肝臟中的強(qiáng)烈表達(dá)，說明金銀花能減少炎癥介質(zhì)的釋放，對(duì)免疫性肝損傷小鼠具有保護(hù)作用。

2金銀花免疫調(diào)節(jié)作用及其機(jī)制

金銀花的免疫調(diào)節(jié)作用，很多研究認(rèn)為主要是通過調(diào)節(jié)TH1/TH2的平衡實(shí)現(xiàn)的，病理狀態(tài)時(shí)的增強(qiáng)免疫其實(shí)是使得TH1/TH2平衡向TH1漂移，機(jī)理主要是增加TH1細(xì)胞分泌的細(xì)胞因子或降低TH2細(xì)胞分泌的細(xì)胞因子。輔助性T淋巴細(xì)胞根據(jù)分泌的細(xì)胞因子的不同分為TH1和TH2兩種，其中TH1主要分泌IL-2、INF-γ和TNF-a，稱TH1型細(xì)胞因子，以INF-γ為代表，具有促炎性的作用；TH2主要分泌IL-4、IL-5、IL-6、IL-10 等，稱為TH2型細(xì)胞因子，以IL-4為代表，具有抗炎性作用。INF-γ和IL-4分別是TH1和TH2型細(xì)胞應(yīng)答強(qiáng)度的重要衡量指標(biāo)，正常情況下TH1和TH2處于相輔相成又相互抑制的平衡狀態(tài)，維持正常細(xì)胞免疫和體液免疫功能，在某些因素下，平衡被打破時(shí)，出現(xiàn)TH1和TH2型優(yōu)勢(shì)反應(yīng)，引發(fā)免疫應(yīng)答異常，造成病理狀態(tài)。TH1/TH2平衡漂移是機(jī)體免疫反應(yīng)調(diào)節(jié)的基本方式，TH1占優(yōu)勢(shì)時(shí)感染收到抑制，TH2占優(yōu)勢(shì)時(shí)，感染會(huì)擴(kuò)散。

根據(jù)這一原理，況玲[12]等設(shè)計(jì)了金銀花水煎劑(0.01kg/L)對(duì)感染大腸桿菌小鼠的保護(hù)作用實(shí)驗(yàn)，結(jié)果顯示金銀花水煎液能有效保護(hù)感染模型小鼠，使得TH1/TH2平衡向TH1方向漂移，說明金銀花能增強(qiáng)小鼠免疫功能，并且該實(shí)驗(yàn)表明TH1/TH2向TH1方向漂移，主要是以降低IL-4濃度為主的TH1漂移。此外，金銀花水提液對(duì)過敏反應(yīng)也有作用，例如，李斐[13]等人研究了金銀花水提物對(duì)卵清蛋白(OVA)致敏小鼠的免疫調(diào)控作用，發(fā)現(xiàn)100mg/100ml、50mg/100ml劑量的金銀花水提物可緩解過敏小鼠小腸絨毛炎癥，減輕肥大細(xì)胞聚集和脫顆粒，提高固有層完整肥大細(xì)胞比率，減輕過敏小鼠腸道組胺釋放，降低過敏小鼠體內(nèi)IL-4、OVA-sIgE水平及IL-4/IFN-γ比值，抑制淋巴組織單個(gè)核細(xì)胞(PLNMC)中IL-12mRNA表達(dá)，說明金銀花可緩解卵清蛋白介導(dǎo)的小鼠足墊遲發(fā)性超敏反應(yīng)，該試驗(yàn)證實(shí)了金銀花水提物可參與卵清蛋白致敏小鼠的免疫調(diào)控，對(duì)緩解卵清蛋白介導(dǎo)的小鼠IgE及細(xì)胞介導(dǎo)的變態(tài)反應(yīng)有利，用于食物過敏治療具有潛在研究?jī)r(jià)值。并且指出，其機(jī)理是金銀花水提物降低了高水平的IL-4，從而逆轉(zhuǎn)了TH1/TH2比值，糾正TH2細(xì)胞高功能狀態(tài)，恢復(fù)了TH1/TH2平衡，維持了免疫功能。

基于類似TH1/TH2的平衡原理，另有學(xué)者[14]研究了金銀花對(duì)于梗阻性黃疽模型大鼠菌群失調(diào)及內(nèi)毒素血癥的調(diào)整作用，實(shí)驗(yàn)表明，金銀花能調(diào)整腸道菌群扶植以雙歧桿菌和乳酸桿菌為主的厭氧菌，抑制需氧菌的腸桿菌生長(zhǎng)，減少內(nèi)毒素的產(chǎn)生，提高sIgA含量，維持其免疫屏障功能，金銀花與麗珠腸樂聯(lián)合使用時(shí)，這種效果更顯著。梗阻性黃疽伴有腸道菌群失調(diào)，腸道屏障破壞是腸源性內(nèi)毒素血癥的主要原因，該實(shí)驗(yàn)說明金銀花能調(diào)整腸道菌群失調(diào)，維持腸道免疫屏障功能，用于防治內(nèi)毒素血癥具有良好的效果，具有臨床指導(dǎo)意義。

此外，金銀花還能通過增強(qiáng)淋巴細(xì)胞的增值轉(zhuǎn)化功能來實(shí)現(xiàn)免疫調(diào)節(jié)。T淋巴細(xì)胞是重要的免疫細(xì)胞，可以調(diào)節(jié)機(jī)體的免疫功能，參與特異性免疫。例如，周秀萍[9]等用金銀花水煎液對(duì)健康Wistar大鼠灌胃兩周后，分別檢測(cè)其巨噬細(xì)胞吞噬功能，該試驗(yàn)說明在一定濃度范圍內(nèi)，金銀花對(duì)大鼠脾淋巴細(xì)胞增值轉(zhuǎn)化具有較好的提高作用，并且能增強(qiáng)體內(nèi)與TH1細(xì)胞有關(guān)的細(xì)胞因子IF-2、TNF-a、IFN-γ的分泌表達(dá)，Thl細(xì)胞主要分泌IFN-γ、IL-2、TNF-ɑ等細(xì)胞因子，與TDTH細(xì)胞和TC細(xì)胞的增殖、分化、成熟有關(guān)，主要介導(dǎo)細(xì)胞免疫應(yīng)答，該試驗(yàn)說明金銀花在一定范圍內(nèi)對(duì)機(jī)體介導(dǎo)細(xì)胞免疫應(yīng)答的Thl型細(xì)胞有明顯的促進(jìn)作用，從而增強(qiáng)機(jī)體的細(xì)胞免疫功能，增強(qiáng)機(jī)體的抗病毒，抗胞內(nèi)菌感染的能力，但是增強(qiáng)免疫能力的分子機(jī)制尚不清楚。

劉玉紅[10]等也研究了金銀花多糖對(duì)脾淋巴細(xì)胞的增殖作用，觀察測(cè)定了濃度范圍在10～250μg/mL的金銀花多糖對(duì)BALB/c小鼠脾淋巴細(xì)胞的增殖，結(jié)果在濃度為100μg/mL時(shí)作用最強(qiáng)，增殖指數(shù)為1.172，說明金銀花具有一定的免疫促進(jìn)作用，并預(yù)測(cè)金銀花多糖的免疫調(diào)節(jié)作用可能為抑制小鼠S180腫瘤生長(zhǎng)的作用機(jī)制之一。

此外，胡克杰[11]通過綠原酸體外誘生白細(xì)胞a干擾素(a-IFN)試驗(yàn)，發(fā)現(xiàn)金銀花中氯原酸能夠在體外誘生人外周血白細(xì)胞中a干擾素，并隨藥物濃度的降低，其誘生的能力逐漸降低。該研究表明金銀花中的主要有效成分綠原酸除具有抗病毒作用外，還能通過誘生a-IFN，達(dá)到多種免疫調(diào)節(jié)作用，協(xié)同其抗病毒、抗菌作用。

3討 論

一般認(rèn)為，若抗體與組織中抗原互相作用，主要募集中性粒細(xì)胞，導(dǎo)致急性炎癥反應(yīng)，組織中抗原使T淋巴細(xì)胞激活，主要驀集T淋巴細(xì)胞和單核吞噬細(xì)胞，引起慢性炎癥反應(yīng)。因此，炎癥和免疫在組織和細(xì)胞分子水平上是緊密聯(lián)系不可分割的過程，故單獨(dú)應(yīng)用抗炎藥或免疫抑制藥或免疫增強(qiáng)藥治療慢性炎癥性疾病療效均不理想，長(zhǎng)期應(yīng)用還可能加重病理過程，研究開發(fā)既有抗炎活性又有免疫調(diào)節(jié)活性的藥物即抗炎免疫調(diào)節(jié)藥將是抗炎免疫藥理學(xué)發(fā)展的主要方向之一。

近年來，由于療效顯著且副作用小的優(yōu)點(diǎn)，植物藥的研發(fā)備受關(guān)注。金銀花甘寒，能清熱解毒，散癰消腫，為治一切內(nèi)癰外癰之要藥。癰分為內(nèi)癰、外癰，發(fā)于體表者為外癰，發(fā)于臟腑或胸腔、腹腔內(nèi)者統(tǒng)稱內(nèi)癰，肝膿腫，肺膿腫、腎膿腫等均屬中醫(yī)“內(nèi)癰”范疇，從現(xiàn)代醫(yī)學(xué)的角度上來講，癰是致病菌入侵在局部引起的炎癥反應(yīng)，從而導(dǎo)致紅、腫、熱、痛。臨床報(bào)道也證實(shí)金銀花能夠治療一些慢性炎癥如前列腺炎[20]等。藥理研究證明，金銀花提取物具有抗炎、免疫調(diào)節(jié)和免疫抑制等活性，充分地說明了金銀花的藥效與藥理活性是相一致的，這為尋找金銀花有效活性成分，開發(fā)新的抗炎免疫藥物提供了理論依據(jù)和方向。

致謝: 感謝江蘇高校優(yōu)勢(shì)學(xué)科建設(shè)工程資助項(xiàng)目(PAPD) 和江蘇省高校優(yōu)秀中青年教師和校長(zhǎng)境外研修計(jì)劃的支持。

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收稿日期：2015-09-25

作者簡(jiǎn)介：嚴(yán)雪龍(1989—)，男，從事藥用植物資源及生藥學(xué)研究。E-mail:yanxuelong54@126.com *通訊作者：濮社班。E-mail:pusheban@126.com

doi：10.3969/j.issn.1006-9690.2016.02.012

中圖分類號(hào)：R285

文獻(xiàn)標(biāo)識(shí)碼：A

文章編號(hào)：1006-9690(2016)-02-0041-004

ResearchProgressonActivitiesofAnti-inflammationandImmunityfromtheflowerofLonicera japonicaThunb.

YanXuelong,MengAiping,PuSheban*

(StateKeyLaboratoryofNaturalMedicines,ResearchDepartmentofPharmacognosy,ChinaPharmaceuticalUniversity,Nanjing211198,China)

AbstractLonicerae Japonicae Flos(LJF) is the dry bud and early opening flower from Lonicera japonica Thunb., with the efficacy of heat-clearing and detoxifying, as well as the function of dispelling wind and heat from the body, which have the effects of anti inflammation and immunity. As an important medicine to treat all visceral carbuncle and carbuncle over the body surface, the extractive from LJF had the function of immunosuppression to reduce or suppress inflammation through inhibiting the expression of proinflammatory cytokines, such as TNF-α, IL-1β, IL-6et al. According to current researches, by regulating the equilibrium of TH1/TH2, LJF regulated immune response. But the material basis and mechanisms of the action were not clear. These results indicated that Lonicera japonica was a potential medicinal plant that be used to research and development new anti-inflammatory and immune drugs.

Key wordsLonicera japonica Thunb.; anti- inflammation; immunity