中藥抗膀胱癌實(shí)驗(yàn)研究進(jìn)展

劉生鋒， 劉泰榮， 殷嫦嫦， 宋樂(lè)明， 林思文， 施劍明

（1.江西省贛州市人民醫(yī)院泌尿外科，江西贛州341000；2.南昌大學(xué)研究生院醫(yī)學(xué)部，江西南昌330006；3.九江學(xué)院基礎(chǔ)醫(yī)學(xué)院，江西九江332000）

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中藥抗膀胱癌實(shí)驗(yàn)研究進(jìn)展

劉生鋒1，2， 劉泰榮1*， 殷嫦嫦3， 宋樂(lè)明1， 林思文2， 施劍明2

（1.江西省贛州市人民醫(yī)院泌尿外科，江西贛州341000；2.南昌大學(xué)研究生院醫(yī)學(xué)部，江西南昌330006；3.九江學(xué)院基礎(chǔ)醫(yī)學(xué)院，江西九江332000）

摘要：膀胱癌在我國(guó)泌尿外科腫瘤發(fā)病率最高，并具有易復(fù)發(fā)和轉(zhuǎn)移等特點(diǎn)。中藥因其取材廣、毒副作用小等優(yōu)點(diǎn)，已成為當(dāng)今國(guó)內(nèi)外用于抗膀胱癌研究的熱點(diǎn)，本文就近年來(lái)中藥抗膀胱癌實(shí)驗(yàn)研究作了綜述，主要從中藥抗膀胱癌的機(jī)制方面作以概述。

關(guān)鍵詞：中藥；膀胱癌；實(shí)驗(yàn)研究；分子機(jī)制；綜述

膀胱癌是人類(lèi)生命健康的一大殺手，發(fā)病率高、術(shù)后復(fù)發(fā)率高以及致死率高等特點(diǎn)使得膀胱癌在臨床治療上頗為棘手。世界各國(guó)膀胱癌發(fā)病率不盡相同，在美國(guó)，膀胱癌的發(fā)病率排在全身惡性腫瘤發(fā)病率的前5，2012年美國(guó)流行病學(xué)研究［1］報(bào)道新發(fā)膀胱癌患者有73 510例，因膀胱癌致死的患者高達(dá)14 880例；我國(guó)的膀胱癌發(fā)病率稍低于歐美國(guó)家［2］。但近年來(lái)發(fā)病率呈現(xiàn)不斷攀升的趨勢(shì)。

1 膀胱癌治療現(xiàn)狀

膀胱癌的發(fā)生是一個(gè)復(fù)雜、多因素相關(guān)的過(guò)程，其中影響較大的危險(xiǎn)因素主要有吸煙和長(zhǎng)期接觸某些化工材料等［3］。膀胱癌的組織類(lèi)型多樣，其中以尿路上皮癌為主，治療則以手術(shù)為主，術(shù)前、術(shù)后常輔助以化療［4］。盡管膀胱癌的治療方法多樣，但無(wú)論是早期手術(shù)治療，還是隨后進(jìn)一步放、化療的綜合治療手段都對(duì)患者身體傷害較大，預(yù)后往往不夠理想。中藥在抗腫瘤治療中應(yīng)用并不少見(jiàn)，尤其在晚期癌癥的治療上，目前，相比以往中醫(yī)藥對(duì)膀胱癌的預(yù)防以及治療的基礎(chǔ)研究和臨床治療方面都有著長(zhǎng)足進(jìn)步，在膀胱癌的治療方案中已經(jīng)成為了不可或缺的一環(huán)，對(duì)現(xiàn)代醫(yī)學(xué)起著揚(yáng)長(zhǎng)補(bǔ)短的作用，如預(yù)防術(shù)后的轉(zhuǎn)移、復(fù)發(fā)，減輕放、化療對(duì)機(jī)體的傷害性，改善生活質(zhì)量等。目前對(duì)中藥抗膀胱癌的基礎(chǔ)實(shí)驗(yàn)研究是國(guó)內(nèi)外學(xué)者的研究熱點(diǎn)，但對(duì)其作用機(jī)制的實(shí)驗(yàn)研究部分的文獻(xiàn)綜述較少報(bào)道。

2 實(shí)驗(yàn)研究

膀胱癌細(xì)胞源于正常細(xì)胞受很多因素影響后轉(zhuǎn)化而來(lái)，并具有了無(wú)限增殖的功能。不同組織類(lèi)型的膀胱癌細(xì)胞具有其獨(dú)特的生物學(xué)特征。不同的中藥單體或其天然提取物可通過(guò)不同機(jī)制達(dá)到抗膀胱癌作用，大體可概括為：①直接殺傷膀胱癌細(xì)胞；②抑制膀胱癌細(xì)胞增殖；③誘導(dǎo)膀胱癌細(xì)胞凋亡；④抑制腫瘤血管形成；⑤降低膀胱癌細(xì)胞轉(zhuǎn)移能力；⑥調(diào)節(jié)機(jī)體免疫功能。

2.1 直接殺傷膀胱癌細(xì)胞 杜永輝［5］應(yīng)用白術(shù)揮發(fā)油作用人膀胱腫瘤細(xì)胞T24，研究白術(shù)揮發(fā)油對(duì)T24細(xì)胞的生物學(xué)行為變化，發(fā)現(xiàn)有誘導(dǎo)細(xì)胞凋亡作用，研究顯示在50～200 mg/mL藥物濃度范圍內(nèi)，濃度越大凋亡現(xiàn)象越明顯；通過(guò)四甲基偶氮唑鹽法（MTT法）測(cè)得各組別的抑制率后算得其IC50值為100 mg/mL，其藥物濃度在IC50時(shí)透射電鏡下可觀察明顯的細(xì)胞破壞，說(shuō)明白術(shù)揮發(fā)油不僅可以通過(guò)誘導(dǎo)人膀胱腫瘤細(xì)胞T24凋亡，還可通過(guò)直接殺傷作用破壞膀胱腫瘤T24細(xì)胞。因此可知，細(xì)胞毒作用直接殺傷胱癌細(xì)胞可能是中藥抗膀胱癌機(jī)制之一。

2.2 抑制膀胱癌細(xì)胞增殖及相關(guān)機(jī)制 無(wú)限增殖是癌細(xì)胞有別與正常細(xì)胞的主要特點(diǎn)之一，并跟分化程度呈一定負(fù)相關(guān)，對(duì)機(jī)體造成很大危害。因此，抑制增殖是抗癌治療很重要的一環(huán)，其機(jī)制可以是發(fā)生細(xì)胞周期阻滯、調(diào)節(jié)細(xì)胞增殖相關(guān)基因表達(dá)等。細(xì)胞周期（Ce11Cyc1e）可分為四期，即DNA合成前期、合成期、合成后期及有絲分裂期（分別用G1期、S期、G2期、M期表示）。其中，在進(jìn)入細(xì)胞分裂后到達(dá)G1期前存在一個(gè)決定細(xì)胞是否繼續(xù)進(jìn)行分裂或者發(fā)生分化的相對(duì)靜止期，稱(chēng)為G0期。

研究顯示，許多中藥單體或天然提取物能夠使膀胱癌細(xì)胞分裂停止在某一時(shí)期，從而抑制腫瘤細(xì)胞的增殖，并且不同的中藥單體抗癌機(jī)制可呈多樣性。方勇［6］等應(yīng)用不同劑量（5、10、20 μmo1/L）異丹葉大黃素（isorhapontigenin，ISO）作用膀胱癌UMUC3細(xì)胞24 h后，細(xì)胞DNA含有量檢測(cè)提示，當(dāng)藥物濃度在5 μmo1/L時(shí)即可使腫瘤細(xì)胞阻滯于G0/G1期，導(dǎo)致了細(xì)胞增殖抑制，并呈現(xiàn)出劑量依賴(lài)性；其機(jī)制可能為下調(diào)了細(xì)胞周期蛋白D1（Cyc1in D1）基因及蛋白水平有關(guān)，研究還顯示ISO同時(shí)影響了膀胱癌UMUC3細(xì)胞的遷移能力。張麗瑞［7］等使用含紫鉚因濃度為20、40、80 μmo1/L的10％胎牛血清的RPMI1640培養(yǎng)基培養(yǎng)膀胱移行細(xì)胞癌BLS細(xì)胞24 h后，行細(xì)胞DNA含有量檢測(cè)，結(jié)果發(fā)現(xiàn)當(dāng)藥物濃度達(dá)到40 μmo1/L時(shí)，細(xì)胞G2/M期發(fā)生顯著阻滯，提示紫鉚因可能通過(guò)阻滯細(xì)胞于G2/M期從而發(fā)揮抑制增殖作用。此次研究還發(fā)現(xiàn)，紫鉚因可通過(guò)阻斷膀胱癌細(xì)胞中細(xì)胞外信號(hào)調(diào)節(jié)激酶ERK1/2和核因子NF-κB信號(hào)通路，繼而使Cyc1in D1及COX2細(xì)胞增殖相關(guān)基因下調(diào)而起著顯著的抗膀胱癌增殖作用。白宇［8］在探討白黎蘆醇對(duì)膀胱癌T24細(xì)胞影響時(shí)，結(jié)果發(fā)現(xiàn)白藜蘆醇作用24、48 h后的IC50大約分別為180、160 μmo1/L，可顯著抑制T24細(xì)胞增殖，使G1期發(fā)生阻滯，并呈一定劑量依賴(lài)；深入研究阻滯機(jī)制發(fā)現(xiàn)：白藜蘆醇增強(qiáng)了T24細(xì)胞中WAF1/p21表達(dá)，降低了周期素依賴(lài)激酶（CDK4）及Cyc-1in D1的表達(dá)，并且這些作用呈顯著的濃度依賴(lài)性，說(shuō)明白黎蘆醇抑制T24細(xì)胞增殖的可能機(jī)制是上調(diào)WAF1/p21、下調(diào)CDK和Cyc1in D1基因表達(dá)，其中WAF1/p21為調(diào)控細(xì)胞周期素依賴(lài)激酶因子中的一員，為抑癌基因。蟾毒靈是中藥蟾酥主要有效成分之一，具有地高辛樣免疫活性。黃后寶［9］等研究發(fā)現(xiàn)用濃度為20 nmo1/L的蟾毒靈單體對(duì)人膀胱癌T24細(xì)胞處理24 h后可明顯下調(diào)Cyc1in D1 mRNA水平，使細(xì)胞發(fā)生G0/G1期阻滯，最終導(dǎo)致增殖抑制。閏元［10］等蓮心堿對(duì)膀胱癌細(xì)胞T24增殖及其周期的調(diào)控研究中顯示，膀胱癌細(xì)胞T24經(jīng)不同濃度的蓮心堿（1.562 5、 3.125 0、6.250 0、12.500 0、25.000 0 μg/m L）干預(yù)48 h后，細(xì)胞周期阻滯在S期，分別占的百分?jǐn)?shù)為（23.11± 0.57）％、（24.91±1.10）％、（32.10±5.18）％、（53.09 ±3.91）％、（55.97±0.45）％，導(dǎo)致增殖抑制，并呈明顯的劑量依賴(lài)性。初步探討其作用機(jī)制可能與p21基因水平上調(diào)有關(guān)。增殖細(xì)胞核抗原（Pro1iferating ce11nuc1ear antigen，PCNA）是對(duì)細(xì)胞周期的調(diào)節(jié)作用至關(guān)重要的核蛋白之一。正常情況下，PCNA在S期表達(dá)最強(qiáng)，PCNA在G2期平穩(wěn)表達(dá)，M期后PCNA表達(dá)將減少。倪曉辰［11］等分別用不同濃度的去甲氧基姜黃素（DMC）作用人膀胱癌T24細(xì)胞，當(dāng)藥物濃度在40 μmo1/L時(shí)，可明顯抑制其增殖，隨著藥物作用時(shí)間延長(zhǎng)，藥物濃度的增加，增殖抑制率呈一定程度的增加；其作用機(jī)制可能與下調(diào)PCNA及上調(diào)p27的表達(dá)量密切相關(guān)。

2.3 誘導(dǎo)膀胱癌細(xì)胞凋亡及相關(guān)機(jī)制 細(xì)胞凋亡普遍存在于生物生長(zhǎng)發(fā)育的各個(gè)過(guò)程中，是指為了機(jī)體更好的生長(zhǎng)，細(xì)胞程性序的自主死亡。細(xì)胞凋亡是多個(gè)基因調(diào)控的結(jié)果，盡管誘導(dǎo)凋亡的信號(hào)可能不同，但結(jié)果往往通過(guò)激活半胱天冬氨酸酶（Caspase）導(dǎo)致不可逆的凋亡過(guò)程。某些中藥可通過(guò)影響凋亡相關(guān)基因的表達(dá)水平誘導(dǎo)細(xì)胞凋亡的發(fā)生。

水飛薊賓（si1ybin，SB）是水飛薊素內(nèi)主要有效成分，提取于乳薊植物種子，具有調(diào)節(jié)腫瘤細(xì)胞凋亡、增殖等作用［12］。遲慶龍［13］在通過(guò)MTT法檢測(cè)濃度分別為25、50、100、200、400 μmo1/L水飛薊賓組以及藥物空白對(duì)照組作用膀胱癌T24和5637細(xì)胞24、48、72 h后的影響，發(fā)現(xiàn)隨著藥物作用時(shí)間的推移和濃度的增加，細(xì)胞出現(xiàn)增殖抑制現(xiàn)象，并且趨勢(shì)越來(lái)越明顯，當(dāng)濃度在200 μmo1/L時(shí)，抑制增殖效果特別明顯；另外流式細(xì)胞術(shù)檢測(cè)上述濃度作用兩種細(xì)胞24 h后，可誘導(dǎo)細(xì)胞凋亡，呈現(xiàn)出一定的劑量依賴(lài)性；劃痕實(shí)驗(yàn)顯示，水飛薊賓同時(shí)也影響了上述細(xì)胞的遷移能力；其作用機(jī)制可能為水飛薊賓作用膀胱癌細(xì)胞后出現(xiàn)早期凋亡。Survivin［14］是一種抑制細(xì)胞凋亡蛋白，高表達(dá)于很多惡性腫瘤中，因此Survivin可作為一種腫瘤標(biāo)記物用于膀胱癌的診斷、治療及預(yù)后的判斷；該蛋白具有抗凋亡，促增殖，誘導(dǎo)/增強(qiáng)血管形成等功能，其凋亡作用主要是通過(guò)影響Caspase-3基因水平表達(dá)有關(guān)。曲更慶［15］用濃度為10、20、40 μmo1/L的土荊皮乙酸B（PAB）作用膀胱癌5637細(xì)胞24 h后出現(xiàn)明顯凋亡現(xiàn)象，免疫印跡檢測(cè)表明藥物組比空白組中Survivin蛋白表達(dá)顯著下降，而Caspase-3表達(dá)增高，并與劑量呈一定的正相關(guān)。提示土荊皮乙酸B能誘導(dǎo)5637細(xì)胞凋亡，機(jī)制可能是上調(diào)Caspase-3、下調(diào)Survivin基因表達(dá)水平有關(guān)，同時(shí)觀察到細(xì)胞出現(xiàn)明顯增殖抑制。張嫻［16］等在研究甘草苷（Liquiritin，LQ）對(duì)T24細(xì)胞增殖和凋亡影響時(shí)，發(fā)現(xiàn)濃度為20、50、100 μmo1/L的甘草苷作用膀胱癌T24細(xì)胞24、48、72 h后，可能通過(guò)增高Caspase-3表達(dá)使細(xì)胞發(fā)生凋亡，并具有明顯的時(shí)間和濃度依賴(lài)性。Bc1-2蛋白質(zhì)家族是較早被發(fā)現(xiàn)在細(xì)胞凋亡過(guò)程中起重要作用的蛋白之一，其中Bc1-2和Bax蛋白具有代表性，分別起抑制和促進(jìn)凋亡的作用。Caspase-3下游產(chǎn)物以多聚ADP-核糖聚合酶［po1y（ADP-ribose）po1ymerase，PARP］為主，PARP可進(jìn)一步誘導(dǎo)細(xì)胞凋亡。白宇［8］應(yīng)用不同濃度50、100、150、200 μmo1/L的白黎蘆醇作用于膀胱癌T24細(xì)胞24 h后能明顯誘導(dǎo)細(xì)胞凋亡，呈一定的劑量依賴(lài)性；行蛋白印跡檢測(cè)顯示藥物組的Caspase-3，Caspase-9，PARP和Bax表達(dá)顯著增高，Bc1-2，Bc1-xL則表達(dá)降低，Bax/Bc1-2的比例逐漸增高，呈顯著的劑量依賴(lài)性。人們發(fā)現(xiàn)，p53基因突變和表達(dá)增加與許多惡性腫瘤的發(fā)生密不可分［17］。Tang等［18］通過(guò)用4、8、16、40 μmo1/L卡瓦胡椒素（F1avokawain A）以及藥物空白組分別作用膀胱癌（RT4，T24，UMUC3，HT1376，5637，TCCSUP以及HT1197）細(xì)胞4、8、16、24 h，并設(shè)1 μmo1/L的紫杉醇和50 ng/m L的諾考達(dá)唑分別作用上述各細(xì)胞24 h作為陽(yáng)性對(duì)照組；發(fā)現(xiàn)卡瓦胡椒素不同程度的抑制各細(xì)胞的增殖，并誘導(dǎo)細(xì)胞凋亡現(xiàn)象，呈時(shí)間和劑量依賴(lài)性，其中作用48 h各膀胱癌細(xì)胞的卡瓦胡椒素IC50值分別為20.8、17.7、16.7、14.7、13.1、10.55、7.9 μmo1/L；研究進(jìn)一步用40 μmo1/L卡瓦胡椒素和藥物空白對(duì)照組（0.1％ DMSO組）分別作用各細(xì)胞，觀察4、8、16、24 h時(shí)間段各細(xì)胞中p53基因發(fā)生的改變，發(fā)現(xiàn)其可抑制CDK1蛋白質(zhì)激酶的表達(dá)，下調(diào)了p21/WAF1表達(dá)，導(dǎo)致G2/M期阻滯，并下調(diào)了突變型p53的表達(dá)，誘導(dǎo)細(xì)胞凋亡；隨著時(shí)間的推移，程度也越明顯。

高濃度活性氧（Reactive oxygen species，ROS）環(huán)境中的細(xì)胞內(nèi)線粒體功能受損，活力也受到影響，導(dǎo)致細(xì)胞凋亡發(fā)生［19］。蘭海河［20］等在研究羥基喜樹(shù)堿（HCPT）對(duì)膀胱癌T24細(xì)胞影響時(shí)發(fā)現(xiàn)，羥基喜樹(shù)堿可誘導(dǎo)T24細(xì)胞凋亡發(fā)生，抑制的程度具有時(shí)間和劑量依賴(lài)性，根據(jù)MTT結(jié)果可知，算得其IC50為10 mg/L，作用時(shí)間在24 h時(shí)，已有明顯效果；活性氧檢測(cè)提示經(jīng)羥基喜樹(shù)堿作用后細(xì)胞內(nèi)活性氧的生成量增加，活性氧堆積，結(jié)果導(dǎo)致細(xì)胞凋亡發(fā)生。李佳青［21］等香菇多糖對(duì)人膀胱癌BIU-87細(xì)胞增殖的抑制作用的研究結(jié)果表明，不同濃度的香菇多糖（10、100、500、1 000、2 000 μmo1/L）均可以增加BIU-87細(xì)胞內(nèi)活性氧的量，并呈濃度依賴(lài)性，相比藥物空白對(duì)照組，各組細(xì)胞內(nèi)增加的活性氧量有統(tǒng)計(jì)學(xué)意義，但各濃度的香菇多糖并未引起腫瘤細(xì)胞明顯的凋亡現(xiàn)象；活性氧可加速細(xì)胞結(jié)構(gòu)的破壞，最后抑制了腫瘤細(xì)胞的增殖。Park［22］等研究了蘿卜硫素衍生的活性氧（ROS）是否會(huì)導(dǎo)致人膀胱癌5637細(xì)胞生長(zhǎng)停滯和凋亡的。結(jié)果表明，使用蘿卜硫素濃度20 μmo1/L作用24 h后可使5637細(xì)胞的增殖抑制，其原因是有絲分裂停滯，但不是阻滯G2期，而是與周期蛋白B1和磷酸化CDK1相關(guān)，使兩者復(fù)合物增加。蘿卜硫素誘導(dǎo)的細(xì)胞凋亡與激活外源性途徑啟動(dòng)子Caspase-8和內(nèi)源性啟動(dòng)子Caspase-9有關(guān)，最終通過(guò)活化Caspase-3執(zhí)行凋亡。本研究進(jìn)一步研究活性氧在蘿卜硫素對(duì)于5637細(xì)胞的有絲分裂停滯和誘導(dǎo)細(xì)胞凋亡中的作用，結(jié)果觀察到經(jīng)蘿卜硫素20 μmo1/L處理3 h后的ROS積累最多；并且使用活性氧清除劑（N-乙?；?L-半胱氨酸）后顯著地減弱了蘿卜硫素引起的細(xì)胞凋亡、有絲分裂停滯作用。綜上所述，蘿卜硫素經(jīng)由活性氧依賴(lài)性途徑誘導(dǎo)有絲分裂停滯和細(xì)胞凋亡。

2.4 抑制腫瘤血管形成 腫瘤細(xì)胞具有無(wú)限增殖能力，必需有豐富的氧氣、營(yíng)養(yǎng)物質(zhì)等維持，血管形成減少導(dǎo)致瘤體生長(zhǎng)緩慢，甚至缺血壞死，因此減少腫瘤血管的形成可作為抗腫瘤治療有效手段，研發(fā)以此作為治療靶點(diǎn)的藥物意義重大。中藥在抑制腫瘤內(nèi)血管形成有一定成效，李娜［23］分別對(duì)六種不同類(lèi)型腫瘤細(xì)胞（包括膀胱癌EJ細(xì)胞）用含各質(zhì)量濃度陳皮多甲氧基黃酮培養(yǎng)基培養(yǎng)后發(fā)現(xiàn)各腫瘤細(xì)胞出現(xiàn)增殖抑制，其IC50值在10～20 μg/mL；濃度與增殖抑制率呈一定正相關(guān)性。為進(jìn)一步探討其抗腫瘤機(jī)理，以雞胚絨毛尿囊膜（chorioa11antoic membrane，CAM）模型以及S180小鼠肉瘤為研究對(duì)象，應(yīng)用不同藥物濃度作用后結(jié)果表明：大劑量200 mg/mL、中劑量100 mg/mL的陳皮多甲氧基黃酮可以明顯抑制CAM血管生成，血管內(nèi)皮生長(zhǎng)因子（VEGF）和堿性成纖維細(xì)胞生長(zhǎng)因子（bFGF）表達(dá)明顯下降，這可能是其抑制腫瘤血管形成，產(chǎn)生抗腫瘤作用的機(jī)制之一。

2.5 降低膀胱癌細(xì)胞轉(zhuǎn)移能力 具有侵襲性是惡性腫瘤的主要特點(diǎn)之一，分化程度越低，其侵襲能力越強(qiáng)，通過(guò)小塊腫瘤組織脫落、溶解和侵入周?chē)M織、血液、淋巴組織等方式，導(dǎo)致癌癥擴(kuò)散和轉(zhuǎn)移，因此降低癌細(xì)胞轉(zhuǎn)移能力可大大減輕其危害性；基質(zhì)金屬蛋白質(zhì)酶（MMP）家族與腫瘤侵襲和轉(zhuǎn)移密切相關(guān)，其中MMP-2與生存期的關(guān)系緊密。Liao［24］等研究柚皮素在對(duì)膀胱癌TSGH8301細(xì)胞遷移作用的中，發(fā)現(xiàn)25、50、100、200、300 μmo1/L柚皮素作用TSGH-8301細(xì)胞24 h后，均有不同程度的生長(zhǎng)抑制作用，MTT檢測(cè)其生長(zhǎng)能力對(duì)比藥物空白組分別為（94.38±0.93）％、（90.59±2.29）％、（89.92±1.98）％、（85.34±6.63）％、（74.09±8.27）％。進(jìn)一步研究提示，柚皮素處理后的細(xì)胞內(nèi)MMP-2表達(dá)下降，并抑制其活性，呈現(xiàn)出劑量依賴(lài)性，這可能為其機(jī)制所在。Peng［25］等發(fā)現(xiàn)用不同濃度的樟芝提取物10、20、30、50、100、150 μg/mL作用膀胱癌T24細(xì)胞24、48、72 h后，T24細(xì)胞均出現(xiàn)了增殖抑制，并呈現(xiàn)出時(shí)間和濃度依賴(lài)性；細(xì)胞的抑制程度至100 μg/mL呈線性相關(guān)增長(zhǎng)。研究還發(fā)現(xiàn)通過(guò)濃度為50、100 μg/mL樟芝提取物以及藥物空白對(duì)照組作用T24細(xì)胞24 h后，得知藥物組腫瘤細(xì)胞的侵襲力和遠(yuǎn)處轉(zhuǎn)移能力降低，濃度越大越明顯，深入研究其作用機(jī)理可能是通過(guò)降低MMP-9蛋白質(zhì)表達(dá)實(shí)現(xiàn)的。

2.6 對(duì)機(jī)體免疫調(diào)節(jié)作用 機(jī)體的免疫力是防治腫瘤的重要保障，提高或維持正常的免疫功能意義非凡?；熓欠乐伟螂装┺D(zhuǎn)移、復(fù)發(fā)的重要手段，但其毒副作用較大，損傷患者的免疫系統(tǒng)，導(dǎo)致機(jī)體的免疫功能下降甚至缺失，成為有效治療腫瘤的一大障礙。中醫(yī)藥的治療原則之一“扶正固本法”是其治療惡性腫瘤的一大亮點(diǎn)，通過(guò)辨證用藥，可調(diào)整機(jī)體的免疫功能。既往研究得知，某些中藥可增強(qiáng)或恢復(fù)已下降的機(jī)體免疫功能，比如通過(guò)影響其免疫器官或者免疫細(xì)胞等。四君子湯是經(jīng)典的健脾益氣、扶正祛邪的方劑，李傳剛［26］等在小鼠接種BTT739膀胱癌細(xì)胞建立的模型研究，探討中藥四君子湯與免疫功能是否有影響，此研究將中藥經(jīng)典方劑中的茯苓改為豬苓。結(jié)果發(fā)現(xiàn)，模型大鼠的淋巴細(xì)胞轉(zhuǎn)化率降低，NK細(xì)胞活性減弱，而使用四君子湯后可對(duì)抗這種改變，并增加了荷瘤小鼠脾臟重量，提高了血白細(xì)胞的水平，其中，大劑量的四君子湯組的淋巴轉(zhuǎn)化率及脾重最高，達(dá)到（41.2±4.2）％及（206.8±4.1）mg，與其他各組比較具有顯著性差異（P＜0.05）。因此可知，四君子湯對(duì)化療時(shí)期的荷瘤小鼠的機(jī)體免疫力有一定的提升作用。豬苓及豬苓多糖（PPS）被認(rèn)為能調(diào)節(jié)免疫功能和NF-κB過(guò)度活化，有效抑制膀胱腫瘤［27］；研究顯示［28］，NF-κB信號(hào)通路參與了自身免疫性疾病、腫瘤的發(fā)生與凋亡、炎癥反應(yīng)等，大部分腫瘤中NF-κB信號(hào)通路活化程度很高。一氧化氮（NO）為活化巨噬細(xì)胞釋放的細(xì)胞毒效應(yīng)分子，對(duì)腫瘤細(xì)胞有直接殺傷、免疫抑制作用，過(guò)度釋放則損傷正常細(xì)胞。李彩霞［29］等發(fā)現(xiàn)通過(guò)分別用終濃度為0.25 mg/mL的卡介苗（Baci11us Ca1mette-Guerin，BCG）、終濃度為0.25 mg/mL的豬苓多糖作用小鼠膀胱癌細(xì)胞株（BTT-T739），并以藥物空白組作為陰性對(duì)照組、革蘭氏陰性菌脂多糖100 μg/L作為陽(yáng)性對(duì)照組；觀察到卡介苗具有抗腫瘤作用，其機(jī)理不僅是通過(guò)免疫應(yīng)答，也可以直接殺傷膀胱癌細(xì)胞，并且可以通過(guò)TLR2/4-NF-κB通路提高相關(guān)免疫活化因子的表達(dá)，提高抗腫瘤的效果；豬苓多糖則可降低此通路的活化。因此兩者在臨床上聯(lián)合用藥可以減輕BCG導(dǎo)致的過(guò)度炎癥反應(yīng)副作用的機(jī)理所在；同時(shí)黃苓多糖可降低釋放NO量，也可降低BCG局部炎癥所造成組織損傷程度。因此可知，黃苓多糖具有對(duì)鼠T739細(xì)胞使用BCG化療過(guò)程中可通過(guò)調(diào)節(jié)免疫功能增強(qiáng)其化療效果并減輕毒副作用的功效。

3 問(wèn)題

雖然近年來(lái)中藥抗膀胱癌方面的實(shí)驗(yàn)研究取得了一定的成績(jī)，但仍有一些問(wèn)題亟需解決：目前實(shí)驗(yàn)研究發(fā)現(xiàn)很多中醫(yī)藥具有抗腫瘤作用，其中體外細(xì)胞實(shí)驗(yàn)研究占大部分。但實(shí)際應(yīng)用于臨床治療的只有少部分，而效果明顯的又是少之又少。其中一個(gè)主要原因是，實(shí)驗(yàn)中有效藥物濃度過(guò)高，而在臨床中，機(jī)體的細(xì)胞間隙要達(dá)到如此高的有效藥物濃度幾乎不可能實(shí)現(xiàn)；由于中藥品種多，成分復(fù)雜，因此尚且沒(méi)有系統(tǒng)全面的分子機(jī)制研究；目前研究較多的主要是中藥單體或者其天然提取物，研究中大部分只考慮了單個(gè)靶點(diǎn)，比如凋亡、增殖、細(xì)胞毒性等，并不能全面的評(píng)價(jià)是否為有效的抗腫瘤藥物；大部分研究未重視中藥對(duì)機(jī)體整體的調(diào)節(jié)方面，不能體現(xiàn)出中藥的整體調(diào)節(jié)的優(yōu)勢(shì)，缺乏說(shuō)服力。

4 展望

中醫(yī)藥在我國(guó)應(yīng)用于臨床歷史久遠(yuǎn)，但對(duì)中醫(yī)藥抗腫瘤方面的機(jī)制研究起步仍較晚，水平有待提高。隨著人們對(duì)膀胱癌生物學(xué)行為的分子和基因水平上的更加深入了解，以及實(shí)驗(yàn)研究技術(shù)的提高，研究發(fā)現(xiàn)高效低毒性、多靶點(diǎn)、多途徑、多種方式作用于膀胱癌細(xì)胞的中藥將指日可待。新世紀(jì)以來(lái)，基礎(chǔ)研究向臨床治療方面的轉(zhuǎn)化受到前所未有的重視，將來(lái)中藥勢(shì)必在膀胱癌的綜合治療上起著越來(lái)越關(guān)鍵的作用。

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［科研報(bào)道］

*通信作者：劉泰榮，男，博士，碩士生導(dǎo)師，副主任醫(yī)師，主要從事泌尿外科疾病方面的研究。Te1：18007079772，E-mai1：tttrong @126.com

作者簡(jiǎn)介：劉生鋒（1989—），男，碩士，研究方向?yàn)榍荤R泌尿外科。Te1：15297759736，E-mai1：15297759736@163.com

收稿日期：2015-01-12

doi：10.3969/j.issn.1001-1528.2016.01.034

中圖分類(lèi)號(hào)：R285.5

文獻(xiàn)標(biāo)志碼：A

文章編號(hào)：1001-1528（2016）01-0151-05

網(wǎng)絡(luò)出版時(shí)間：2015-05-14

網(wǎng)絡(luò)出版地址：http：//www.cnki.net/kcms/detai1/31.1368.R.20150514.1238.001.htm1