實時反轉(zhuǎn)錄聚合酶鏈反應(yīng)對豬水泡診斷樣本中賽尼卡谷病毒的檢測
2016-01-31 02:40:29
豬業(yè)科學 2016年2期
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實時反轉(zhuǎn)錄聚合酶鏈反應(yīng)對豬水泡診斷樣本中賽尼卡谷病毒的檢測
Senecavirus A(SV-A)原名賽尼卡谷病毒(SVV)，被認為與豬原發(fā)性皰疹病(SIVD)相關(guān)，SIVD是一種缺乏特定病原體的皰疹疾病綜合癥。SIVD的臨床表現(xiàn)類似于更具傳染性和經(jīng)濟破壞性的水泡性疾病，如口蹄疫(FMD)、豬水皰病(SVD)和水泡性口炎(VS)，通常需要立即做出診斷，以解除對動物的檢疫、運動和貿(mào)易的限制。該研究提出了一個適用于診斷豬樣本中SV-A的檢測方法：SYBR Green RT-qPCR(實時反轉(zhuǎn)錄定量聚合酶鏈式反應(yīng))。用RT-qPCR對出現(xiàn)水泡疾病臨床癥狀的50頭豬只樣品進行檢測，引物序列設(shè)計根據(jù)Genbank中SV-A高度保守的VP1編碼區(qū)：SV-A-qF(5'-GGGTAACACTGACACCGATTT)和SV-A-qR(5'-TCGAGATCGATCAAACAGGAAC)，擴增產(chǎn)物長度為87 bp，以β-Actin為內(nèi)參，目的基因擴增條件為：48 ℃5 min；95 ℃ 10 min；接下來40個循環(huán)的95 ℃ 5 s，60 ℃ 1 min。結(jié)果顯示：以35頭未患水泡病的豬為對照組，在50頭豬中，44頭豬(88%)被檢測到患有SV-A。
SV-A RT-qPCR是一種快速、特異、靈敏度高的定量分析方法，可檢測來自于病變蹄中的拭子和組織、口腔和鼻黏膜上皮、口腔拭子、痂和內(nèi)部器官如肝臟和淋巴結(jié)組織中的SV-A RNA。
(編譯自：http：//journals.plos.org/plosone/ article？id=10.1371/journal.pone.0146211)
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