DC-CIK療法聯(lián)合化療治療晚期非小細胞肺癌

秦亞光，程傳耀，王亞秋，盧　紅

(河南大學淮河醫(yī)院腫瘤科，河南 開封 475000)

?

DC-CIK療法聯(lián)合化療治療晚期非小細胞肺癌

秦亞光，程傳耀，王亞秋，盧紅

(河南大學淮河醫(yī)院腫瘤科，河南 開封 475000)

[摘要]目的研究DC-CIK療法聯(lián)合化療治療晚期非小細胞肺癌的療效及安全性。方法52例晚期非小細胞肺癌患者(DC-CIK組)應用DC-CIK療法聯(lián)合化療治療，同期52例(對照組)僅給予化療,比較2組療效和安全性。結果DC-CIK組患者的有效率、疾病控制率分別為26.9%、82.7%，顯著高于對照組的9.6%、61.5%(P<0.05)；DC-CIK組和對照組中位生存期分別為12.5、11.3個月(P<0.05)。DC-CIK組患者的毒副反應明顯輕于對照組(P<0.05)。結論在晚期非小細胞肺癌的治療中，DC-CIK療法聯(lián)合相較于單純化療更安全、更有效。

[關鍵詞]DC-CIK療法；晚期非小細胞肺癌；過繼免疫細胞治療；化療

肺癌的發(fā)生率、死亡率漸漸增加，現(xiàn)成為全世界惡性腫瘤死亡的主要原因[1]。肺癌包括2大類，分別為非小細胞肺癌和小細胞肺癌，手術切除、化療和放療是現(xiàn)在的主要治療方式，其中治療肺癌仍然首先選擇手術切除，然而大多數(shù)肺癌患者診斷的時候已經(jīng)屬于病情晚期,失去手術的可能性，即便腫瘤能夠手術徹底切除的患者，也存在較高的復發(fā)率，加之肺癌對化療藥物的多重耐藥性和對放療的較低敏感性等因素，導致肺癌患者的5 a生存率仍只有10%～15%[2],傳統(tǒng)治療手段進展緩慢，探討新的治療模式尤為重要。免疫治療，尤其免疫細胞治療，其核心是激活腫瘤患者T細胞介導的殺傷腫瘤效應，以提高機體抗腫瘤能力。手術、放療、化療不能徹底清除腫瘤細胞，而免疫治療對腫瘤干細胞和其他處于非增殖期的腫瘤細胞的殺傷作用是對手術、放療、化療的重要補充手段[3-4]。樹突狀細胞(dentritic cell，DC)-細胞因子誘導的殺傷細胞(cytokine induced killer cells，CIKs)療法具有強大的體外增殖能力、高殺傷活性及低毒副反應,是目前常用的免疫細胞治療方法。應用回顧性隊列研究，DC-CIK療法聯(lián)合化療治療的晚期非小細胞肺癌病例得到統(tǒng)計，評估其治療晚期肺癌患者的有效性和安全性，以期為DC-CIK療法在晚期非小細胞肺癌治療的臨床應用中提供一定依據(jù)。

1資料與方法

1.1一般資料收集2011年1月至2013年1月河南大學淮河醫(yī)院收治的晚期非小細胞肺癌患者104例，均采用組織病理檢查，以確診為非小細胞肺癌，且每例患者表皮生長因子受體基因為野生型。其中52例設為DC-CIK組，另52例設為對照組。2組所有患者均未經(jīng)放療治療，僅給予一線含鉑兩藥化療方案。入組條件：1)血常規(guī):白細胞>3.5×109·L-1，血小板> 90×109·L-1；2)年齡范圍35～80歲；3)預期壽命>3個月；(4)ECOG評分0~2分；5)多于一個的可測量病變；6)肝臟和腎功能各種數(shù)據(jù)<正常上限的1.25倍。排除條件：心臟、肝臟或腎臟等功能受損，對于化療和生物治療不能夠耐受。2組患者性別、年齡、腫瘤病灶大小、遠處轉移情況、疾病分期、病理分型和化療次數(shù)等各項指標比較差異無統(tǒng)計學意義(P>0.05)，具有可比性。見表1。

表1　2組患者一般資料比較

1.2DC-CIK細胞制備提取患者的空腹情況下的外周血50 mL,給予肝素抗凝處理,應用淋巴分離液梯度離心法分離單核細胞,然后從云霧層吸取該細胞。分離得到的單核細胞在RPMI-1640中培養(yǎng)，該細胞經(jīng)過離心、洗滌3次后,非貼壁細胞被提取出來，調節(jié)單核細胞的分布密度約為106個/mL。第1天在培養(yǎng)基中加入干擾素-γ，每1 mL培養(yǎng)基加入1 000 u干擾素-γ(IFN-γ)。然后把細胞放入溫度37 ℃和體積分數(shù)5% CO2的培養(yǎng)箱中，第2天在該細胞中加入白介素-2(IL-2)和抗CD3單抗，其中IL-2加入數(shù)量為1 000 u·mL-1，抗CD3單抗為50~100 ng·mL-1。接著收集貼壁細胞置于含GM-CSF、rhIL-4的AIM-VG培養(yǎng)基中，其中該培養(yǎng)基中2種細胞因子的濃度均為1 000 u·mL-1，保持每3 d更換培養(yǎng)液1次。腫瘤壞死因子-α(TNF-α)1 000 u·mL-1在第5天加入該培養(yǎng)基中，第7天按照15的比例，把DC細胞加入CIK培養(yǎng)基中，一起培養(yǎng)5～7 d。第8天，吸取少量細胞用于檢測有無細菌和霉菌，在結果全部為陰性的條件下收集培養(yǎng)的細胞，然后把細胞置于在生理鹽水中，在第13天時，采用臺盼藍染色的方法計算該細胞的數(shù)目，并需要觀察該細胞的殺傷活性，DC-CIK細胞數(shù)目> 5×109·mL-1后采集細胞，懸浮在體積250 mL質量分數(shù)1%的白蛋白生理鹽水中。CIK細胞的質量控制標準：CIK 細胞的存活率≥80%；CD3+/CD56+>50.0%,CD3+/CD8+≥51.2%；菌檢和內毒素檢測結果均為陰性。

1.3治療方法DC-CIK組的患者應用一線化療的同時，接受DC-CIK療法治療。在每周期化療前抽取外周血用于DC-CIK培養(yǎng)，然后在化療停止的7～12 d后，給予患者DC-CIK療法治療，可以最多應用該治療方案1 a。對照組的患者只接受單純一線化療。在出現(xiàn)治療相關的不可耐受的毒副反應時終止治療。

1.4療效評價觀察2組患者的有效率、疾病控制率、生存期、毒副反應、生活質量等，作為評價指標，統(tǒng)計時間開始于患者首次治療至2014年1月。其中近期療效分為CR、PR、SD、PD，以CR+PR計算有效率，以CR+PR+SD計算疾病控制率。

1.5統(tǒng)計學處理采用SPSS 17.0進行統(tǒng)計學處理，計數(shù)資料以百分數(shù)表示，比較采用χ2檢驗，生存分析應用Kaplan-Meier生存曲線和logrank檢驗，檢驗水準α=0.05。

2結果

2.1臨床療效全部病例均獲得隨訪,隨訪率為100.0%。DC-CIK組有效率、疾病控制率均高于對照組，差異有統(tǒng)計學意義(P<0.05)(表2)。DC-CIK組6、12、18個月生存率分別為87%、60%、15%,對照組6、12、18個月生存率分別為87%、42%、0%。DC-CIK組和對照組中位生存期分別為12.5個月和11.3個月，DC-CIK組生存期明顯長于對照組，差異有統(tǒng)計學意義(P<0.05)(圖1)。DC-CIK組患者中，47例KPS評分提高，4例穩(wěn)定，1例下降，治療結束時體質量較治療前增加1～3 kg；對照組患者中33例KPS評分提高，10例穩(wěn)定，9例下降，體質量未見明顯增減。

表2　2組患者近期療效比較

圖1　2組非小細胞肺癌患者生存分析

2.2DC-CIK療法治療非小細胞肺癌患者的安全性評估DC-CIK組患者應用DC-CIK療法治療后未見Ⅲ、Ⅳ度毒副反應，未出現(xiàn)患者因為無法耐受毒副反應而終止治療的情況，DC-CIK療法治療后24 h期間出現(xiàn)寒戰(zhàn)、發(fā)熱4例，最高體溫39.1 ℃，經(jīng)對癥處理后緩解。見表3。

表3　2組毒副反應比較

3討論

腫瘤免疫缺陷是導致腫瘤發(fā)生、發(fā)展的主要原因[5]，無論手術、還是放療和化療都不是從改善患者免疫系統(tǒng)進行腫瘤治療的，而且化療無法徹底殺死靜止期腫瘤細胞，容易造成腫瘤的復發(fā)。生物治療作為惡性腫瘤的第4代治療模式，已經(jīng)廣泛受到腫瘤學界的重視，應用細胞因子誘導患者外周血中單核細胞形成的殺傷細胞治療惡性腫瘤是目前常用生物治療方法。CIK重要的有效細胞是CD3+CD56+T細胞，是通過多種細胞因子在體外刺激誘導患者的外周血單核細胞培養(yǎng)形成的一群特殊細胞,同時具有T細胞殺傷腫瘤細胞的能力和NK細胞非MHC限制性抑制、殺傷腫瘤細胞的特性。CIK對各類惡性腫瘤細胞具有廣泛的殺傷、抑制作用，包括實體腫瘤和血液系統(tǒng)惡性腫瘤[6-8]。DC是人體內重要的抗原呈遞細胞，通過把腫瘤細胞的表面抗原提呈給T細胞而激活T細胞，這種細胞具有特異殺傷腫瘤細胞的能力，而且能有通過產生INF-γ和IL-2等細胞活性因子非直接導致腫瘤細胞凋亡，激活T細胞的同時激活CD4+T細胞。DC和CIK共培養(yǎng)24 h后，IL-12的分泌量是CIK細胞單獨培養(yǎng)的6.93倍，可以高表達CD3+CD4+、CD3+CD8+、CD3+CD56+細胞，低表達CD4+CD25+細胞，盡管DC不具備直接殺傷腫瘤細胞作用，但DC可刺激CIK的增殖，分泌多種腫瘤殺傷細胞因子。把DC和CIK聯(lián)用既提升了對腫瘤細胞的殺傷能力，又提高了對腫瘤細胞殺傷的特異性，從而達到了滿意的近期和遠期效果[9]。近期相關文獻[10-11]報道DC-CIK療法聯(lián)合化療治療晚期非小細胞肺癌的臨床效果，DC-CIK聯(lián)合治療組患者的無進展生存期、總生存期及KPS評分均高于單純化療組，提示DC-CIK聯(lián)合化療可提高對非小細胞肺癌療效，改善非小細胞肺癌患者生活質量，降低化療的毒副反應。本研究中，將DC-CIK聯(lián)合化療用于晚期非小細胞肺癌患者的一線治療，根據(jù)本研究的隨訪數(shù)據(jù)和生存分析結果顯示，DC-CIK療法聯(lián)合化療對比單純化療，有效率分別為26.9%、9.6%，疾病控制率分別為82.7%、61.5%，前者明顯高于后者(P<0.05)；生存分析顯示，中位生存期分別為12.5個月和11.3個月，經(jīng)過Kaplan-Meier生存曲線和logrank檢驗統(tǒng)計學分析顯示，DC-CIK組生存期顯著長于對照組(P<0.05)；DC-CIK組KPS評分、體質量等指標好轉更明顯。DC-CIK組患者應用DC-CIK療法治療后未見Ⅲ、Ⅳ度毒副反應，未出現(xiàn)患者因為無法耐受毒副反應而終止治療的情況，DC-CIK療法治療后24 h期間出現(xiàn)寒戰(zhàn)、發(fā)熱4例，最高體溫39.1 ℃，經(jīng)對癥處理后緩解；DC-CIK組比對照組具有更低的乏力、腹瀉、惡心嘔吐、抑郁等發(fā)生率。

綜上所述，DC-CIK療法聯(lián)合化療用于晚期非小細胞肺癌患者的一線治療臨床療效優(yōu)于單純化療，且患者的化療毒副反應降低，生活質量改善更明顯。

參考文獻：

[1]Ferlay J，Shin HR，Bray F，et al． Estimates of worldwide burden of cancer in 2008:GLOBOCAN 2008[J]． Int J Cancer，2010，127(12):2893-2917．

[2]Gansler T，Ganz PA，Grant M，et al． Sixty years of CA:a cancer journal for clinicians[J]． CA Cancer J Clin，2010，60(6):345-350．

[3]Reck M.What future opportunities may immuno-oncology provide for improving the treatment of patients with lung cancer[J].Ann Oncol，2012，23 Suppl 8:viii28- viii34.

[4]Rangachari D，Brahmer JR． Targeting the immune system in the treatment of non-small-cell lung cancer[J]． Curr Treat Options Oncol，2013，14 (4):580-594．

[5]Ramalingam S,Belani C.Systemic chemotherapy for advanced non-small cell lung cancer:recent advances and future directions[J].Oncologist,2008,13 Suppl 1:5-13.

[6]Na D，Liu FN，Miao ZF，et al.Astragalus extract inhibits destruction of gastric cancer cells to mesothelial cells by anti-apoptosis[J]．World J Gastroenterol，2009，15(5):570-577．

[7]Xu X，Liu Y，Wang L，et al． Gambogic acid induces apoptosis by regulating the expression of Bax and Bcl-2 and enhancing caspase-3 activity in human malignant melanoma A375 cells[J].Int J Dermatol，2009，48(2):186-192．

[8]Weng DS,Zhou J,Zhou QM,et al.Minimally invasive treatment combined with cytokine-induced killer cells therapy lower the short-term recurrence rates of hepatocel-lular carcinomas[J].J Immunother,2008,31(1):63-71.

[9]高岱清,劉淑貞,趙鵬,等.惡性腫瘤術后DC聯(lián)合CIK治療的臨床觀察[J].中華腫瘤防治雜志,2009,16(3):222-225.

[10]Zheng YW,Li RM,Zhang XW,et al.Current adoptive immunotherapy innon-small cell lung cancer and potential influence of therapy outcome[J]Cancer invest,2013,31(3):197-205.

[11]Kobayashi K,Hagiwara K.Epidermal growth factor receptor (EGFR)mutation and personalized therapy in advanced nonsmall cell lung cancer (NSCLC)[J]Target Oncol,2013,8(1)：27-33.

Curative Effect of DC-CIK Therapy Combined with Chemotherapy in the

Treatment of Patients with Advanced Non-small Cell Lung Cancer

Qin Yaguang,Cheng Chuanyao,Wang Yaqiu,Lu Hong

(DepartmentofOncology，HuaiheHospitalofHenanUniversity，Kaifeng475000,China)

[Abstract]ObjectiveTo evaluate the curative effect and safety of DC-CIK therapy combined with chemotherapy in the treatment of patients with advanced non-small cell lung cancer．MethodsFifty-two patients with advanced non-small cell lung cancer (the DC-CIK group)received the DC-CIK therapy combined with chemotherapy,Another 52 patients with advanced non-small cell lung cancer (the control group)were treated with chemotherapy alone during the same period．The effect and safety were compared between the two groups.ResultsThe response rate and the disease control rate of the DC-CIK group were higher than those of the control group (26.9% vs 9.6%,82.7% vs 61.5%,P<0.05); the middle survival time of the DC-CIK group and the control group were 12.5 and 11.3 months respectively (P<0.05).Compared with the control group,the DC-CIK group had less toxicities (P<0.05).ConclusionDC-CIK therapy combined with chemotherapy is safe and effect in the treatment of patients with advanced non-small cell lung cancer.

[Key words]DC-CIK therapy; advanced non-small cell lung cancer; adoptive immune cell therapy; chemotherapy

收稿日期：(2015-01-07)

[中圖分類號]R734.2；R730.58

[文獻標識碼]A

[文章編號]1673-5412(2015)06-0497-04

通信作者：盧紅(1973-)，女，博士，副教授，副主任醫(yī)師，主要從事惡性腫瘤的綜合治療工作。E-mail:hhyyluhong@126.com

作者簡介：秦亞光(1980-)，男，碩士，主治醫(yī)師，主要從事腫瘤的基礎與臨床研究工作。E-mail:13523787916@163.com

DOI:10.3969/j.issn.1673-5412.2015.06.012