AAP延衰膠囊的藥效學(xué)研究

李　穎　舒　若

作者單位：昆明醫(yī)科大學(xué)第一附屬醫(yī)院　1.干療外科　2.胃腸與甲狀腺外科　650031

AAP延衰膠囊的藥效學(xué)研究

李穎1舒若2

作者單位：昆明醫(yī)科大學(xué)第一附屬醫(yī)院1.干療外科2.胃腸與甲狀腺外科650031

【摘要】目的觀察AAP對家蠶生長發(fā)育和生命周期的影響。方法將同種同齡且生長發(fā)育相似的三眠蠶200只隨機(jī)均分為4組。兩個(gè)組分別喂飼1%和2%的AAP溶液;另兩個(gè)組，一個(gè)喂飼1%的參茸丸溶液作藥物對照，另外一組喂飼同容積的蒸餾水作空白對照。藥和水均涂在桑葉上。給藥前及給藥后每隔4天分別稱體重和量身長1次。記錄幼蠶齡期(孵出至結(jié)繭)、蛹期(結(jié)繭后第三天至蛹羽化)以及蠶蛾壽期(蛹羽化至死亡時(shí)間)。最后計(jì)算各組的全生育期。結(jié)果AAP對家蠶的體重和身長無明顯影響，但能顯著延長家蠶各齡期的時(shí)間(P<0.01)，其中以延長蠶蛾壽期最顯著。此外，研究還發(fā)現(xiàn)AAP同時(shí)具有顯著提高紅細(xì)胞超氧化物歧化酶的活性和降低血漿脂質(zhì)的過氧化作用以及顯著提高實(shí)驗(yàn)動(dòng)物的非特異性(巨噬細(xì)胞的吞噬)和特異性(體液和細(xì)胞免疫)的免疫功能。參茸丸也具有上述相似的藥效。結(jié)論AAP能明顯延長家蠶各階段的生命周期、提高實(shí)驗(yàn)動(dòng)物體內(nèi)的抗氧化能力以及增強(qiáng)機(jī)體的免疫力。

【關(guān)鍵詞】AAP延緩衰老抗氧化免疫

doi:10.3969/j.issn.1672-4860.2015.06.016

【Abstract】ObjectivesTo observe the effect of AAP on the growth and life cycle of the silkworm, Bombyx mori. MethodsThe same age and the growth and development of the similar three sleep silkworm 200 randomly divided into four groups. Two groups were fed 1%and 2%of AAP solution; the other two groups, one fed 1%of ginseng pill solution for drug control, another group fed with the same volume of distilled water as blank control. Water and medicine are painted on mulberry leaves. Before and after administration were weighed every four days and the amount of a length of time. Records of juvenile instar stage (hatched to cocoon), pupa (cocoon after the three days to pupae and moth life (eclosion time to death). At last, the whole growth period of each group was calculated. ResultsAAP on silkworm’s weight and height without obvious effect, but can significantly prolong the time of Bombyx mori in each age (P<0.01), which to extend the life-span of the moth is the most significant. In addition, the study also found that the AAP also has significantly increased erythrocyte superoxide dismutase (SOD) activity and reduce plasma lipid oxidation and significantly improve the experimental animal nonspecific (macrophage phagocytosis) and specificity (humoral and cellular immune response of immune function. Ginseng pill also has the similar efficacy. ConclusionAAP can significantly prolong the life cycle of silkworm, improve the antioxidant capacity of the experimental animals and enhance the immunity of the body.

收稿日期：2015-11-3

Pharmacodynamics study of AAP extended decay capsule(LIYing1,SHURuo2.Thefirsthospitalofkunmingmedicaluniversity,Kunming650031,China.)

【Key words】AAP, anti-aging, antioxidant, immune

AAP是云南省馬剛強(qiáng)教授從彝家蔬菜花果中獲得的提取物，主要成分是多糖和生物堿。經(jīng)初步研究發(fā)現(xiàn)﹐其具有極強(qiáng)的抗氧化作用﹐效價(jià)是SOD的6~10倍。此外，AAP對腫瘤細(xì)胞也有一定的抑制作用，抑瘤強(qiáng)度與維甲酸相近。對實(shí)驗(yàn)動(dòng)物無論口服還是注射途徑給予﹐還顯示其防治肝損傷、抗心肌缺血、升高T細(xì)胞和血清補(bǔ)體C3水平，顯示出它的抗衰老、抗腫瘤、和提高機(jī)體免疫力的作用。本文主要對其延緩衰老作用進(jìn)行研究，現(xiàn)將研究結(jié)果報(bào)告如下。

1.實(shí)驗(yàn)與結(jié)果

1.1APP對家蠶生長發(fā)育的影響

1.1.1實(shí)驗(yàn)材料：APP由云南科泰生化制品公司提供。參茸丸(云南省騰沖制藥廠生產(chǎn)，批號：951108)。用時(shí)將APP配制成1%和2%的溶液，參茸丸配制成1%的溶液。二齡期蠶為浙蕾春曉品種(由楚雄農(nóng)校蠶桑專業(yè)提供)。

1.1.2實(shí)驗(yàn)方法：仿文獻(xiàn)方法[1,2]，稍加改進(jìn)，將齡期相同生長發(fā)育相似(體重、身長一致)的三眠蠶200只均分為4組，每組50只，分別喂養(yǎng)在經(jīng)嚴(yán)格消毒，直徑為60cm的圓竹篩內(nèi)。家蠶設(shè)兩個(gè)給藥組，分別給予APP的1%和2%溶液0.1ml/條，空白對照組給同體積的蒸餾水，陽性對照組給予1%參茸丸溶液0.1ml/條。給藥時(shí)分別將上述液涂于桑葉上，并使其涼干。實(shí)驗(yàn)蠶每天喂桑葉3次：上午8時(shí)和下午2時(shí)30分喂無藥桑葉，下午8時(shí)喂帶藥桑葉。第三、四、五每個(gè)齡期給藥3次，共9次，每次每條幼蠶喂桑葉0.5~0.8g，并按常規(guī)管理。給藥前及給后每隔4天稱體重和測身長1次。記錄幼蟲齡期(孵出至結(jié)繭)，蛹期(結(jié)繭后第三天致蛹羽化的時(shí)間)以及蠶蛾壽期(蛹羽化至死亡時(shí)間)。最后計(jì)算出各組的全生育期[1]。

1.1.3實(shí)驗(yàn)結(jié)果：見表1，表2。結(jié)果顯示：APP能顯著延長家蠶各齡期時(shí)間，其中以延長蠶蛾壽期最明顯。

表1　APP對家蠶幼蟲生長發(fā)育的影響±s)

注：以上實(shí)驗(yàn)結(jié)果經(jīng)統(tǒng)計(jì)學(xué)分析，各給藥組與對照組比較均無顯著差異(P<0.05)。

表2　SMS-JLYSJN對家蠶各期(壽命)影響

注：經(jīng)統(tǒng)計(jì)學(xué)分析，給藥組與對照組比較，*P<0.05，**P<0.01。

1.2APP對小鼠紅細(xì)胞超氧化物歧化酶(SOD)的活性和血漿脂質(zhì)過氧化作用的影響。

1.2.1實(shí)驗(yàn)材料：實(shí)驗(yàn)用昆明種老齡(15月齡)小鼠(由云南省天然藥物重點(diǎn)藥理實(shí)驗(yàn)室毒理室提供，動(dòng)物質(zhì)量合格證書號：川實(shí)動(dòng)管1996-70號)。體重35~40g，雌雄各半，均分4組，每組20只。APP由云南科泰生化制品公司提供，用時(shí)配制成50%和20%的混懸液。參茸丸(來源同上)用時(shí)配成20%的混懸液。

1.2.2實(shí)驗(yàn)方法：實(shí)驗(yàn)時(shí)APP高低劑量組小鼠分別灌胃50% 0.2ml/10g和20% 0.1ml/10g藥液(相當(dāng)于10g/kg，2g/kg的生藥粉)，空白照組合蒸餾水0.1ml/10g，陽性對照組給20%參茸丸溶液0.1ml/10g。每天給藥1次，連續(xù)15天。結(jié)束時(shí)，由股動(dòng)脈采血，肝素抗凝，仿文獻(xiàn)方法[3，4]分別測定各組小鼠紅細(xì)胞超氧化物歧化酶(SOD)的活性和血漿脂質(zhì)時(shí)氧化物的量。

1.2.3實(shí)驗(yàn)結(jié)果：見表3實(shí)驗(yàn)結(jié)果表明APP能顯著提高小鼠紅細(xì)胞SOD的活性，同時(shí)降低血漿脂質(zhì)的過氧化作用。

表3　APP對小鼠紅細(xì)胞SOD活性和血漿脂質(zhì)過氧化

注：經(jīng)統(tǒng)計(jì)學(xué)處理與對照組比較，**P<0.01。

1.3APP對小鼠免疫功能的影響

1.3.1APP對小鼠碳粒廓清功能的影響：小鼠條件、分組及給藥方法同前。于末次給藥后24小時(shí)，按文獻(xiàn)方法[5]從尾靜脈注射中華墨汁(市售、用時(shí)稀釋1倍)0.1ml/10g，分別于注后2分種和15分鐘眼框取血10μl，再分別注入盛有2ml 1%醋酸溶液的試管內(nèi)，充分搖勻。在680nm波長處比色，記錄光密度，計(jì)算碳粒廓清指數(shù)K：

(O.D1、D2分別長第一、第二次血樣的光密度。T1、T2分別為第一、第二次采血時(shí)間)

實(shí)驗(yàn)重復(fù)1次，兩次數(shù)據(jù)合并作統(tǒng)計(jì)學(xué)處理，結(jié)果見表4。結(jié)果表明，APP兩個(gè)劑量組均顯著提高小老鼠碳粒廓清功能。

表4　APP對小鼠碳粒廓清功能的影響±s)

注：與對照組比較，**P<0.01。

1.3.2APP對小鼠體液免疫功能的影響：小鼠條件、分組及給藥途徑和方法同上述試驗(yàn)。實(shí)驗(yàn)時(shí)仿改良的血清溶血素測定法[6],用5%雞紅細(xì)胞免疫各組小鼠。免疫后分別灌胃給藥(空白對照組給蒸餾水，藥量同上實(shí)驗(yàn))。免疫7天后，股動(dòng)脈采血并離心，取血清用生理鹽水液稀釋100倍，再取上述稀釋血清1ml與5%雞紅細(xì)胞懸液0.5ml混合，按文獻(xiàn)實(shí)驗(yàn)程序測出各組小鼠血清溶血素的O.D值，并以此讀數(shù)作為血清溶血素含量的指標(biāo)，結(jié)查見表5。結(jié)果表明APP能提高免疫小鼠血清溶血素的值，對小鼠體液免疫功能有明顯促進(jìn)作用，與空白對照組比較有顯著性差異(P<0.01)。

表5　APP對小鼠體液免疫功能的影響

1.3.3APP對小鼠細(xì)胞免疫功能的影響：小鼠條件及分組同上述試驗(yàn)。于實(shí)驗(yàn)前仔細(xì)剪去頸背部皮膚毛，滴涂50%2，4-二硝基氯化苯(DNCB)丙酮液20μl/只，使小鼠致敏[7]。于致敏當(dāng)天開始灌胃給藥(途徑和劑量同上實(shí)驗(yàn))，每天1次，共12天。12天后，在小鼠原涂藥處重滴涂上0.025g/ml的DNCB丙酮液20μl/只。24小時(shí)后各尾靜脈注身1%伊文恩藍(lán)0.1ml/10g。30分鐘后處死小鼠，取下頸背部藍(lán)染皮膚(部位及面積一致)。剪碎后置試管內(nèi)，再用1:1丙酮生理鹽水混合液浸泡24小時(shí)，過濾浸泡液，濾液進(jìn)行比色，測出光密度值，作統(tǒng)計(jì)學(xué)處理，結(jié)果見下表6。實(shí)驗(yàn)結(jié)果顯示，APP能增強(qiáng)小鼠DNCB所致遲發(fā)型過敏反應(yīng)，表明它對小鼠細(xì)胞免疫功能有顯著的促進(jìn)作用。

表6　APP對小鼠DNCB遲發(fā)型過敏反應(yīng)的影響

2.小結(jié)和討論

AAP是馬剛強(qiáng)教授從彝家蔬果中提取的活性成分(為淺褐色的不規(guī)則結(jié)晶體)，其主要成分是多糖和生物堿，經(jīng)上海藥物研究所李曉玉教授課題組研究發(fā)現(xiàn)﹐它其具有極強(qiáng)的抗氧化活性﹐效價(jià)是SOD的6~10倍。AAP對腫瘤細(xì)胞也有一定的抑制作用，抑瘤強(qiáng)度與維甲酸相近。無論口服還是注射途徑﹐均有明顯的防治肝損傷、抗心肌缺血、升高T細(xì)胞和血清補(bǔ)體C3水平，顯示了它的抗衰老、抗腫瘤、和提高免疫的作用[8]。昆明醫(yī)科大學(xué)舒曄教授課題組對AAP的抗衰老作用做了較系統(tǒng)地研究，除發(fā)現(xiàn)AAP能明顯延長家蠶壽命、抗氧化和提高機(jī)體免疫功能外，還對中樞神經(jīng)系統(tǒng)也有影響：它能降低B型單胺氧化酶的活性、減少腦內(nèi)單胺類遞質(zhì)的損耗以及提高實(shí)驗(yàn)動(dòng)物的學(xué)習(xí)和記憶能力。人體預(yù)實(shí)驗(yàn)顯示，AAP對SOD活性有顯著的調(diào)節(jié)作用：對SOD活性偏低而MDA偏高的人，它能提高SOD的活性，降低MDA的值。因AAP是從天然食品中提取的活性物質(zhì)，性質(zhì)穩(wěn)定，各種給予途徑均易于吸收，并顯示較強(qiáng)的生物活性[9]。動(dòng)物實(shí)驗(yàn)中，既使給予超大劑量也未發(fā)現(xiàn)有何毒副作用。AAP的許多藥理作用又與破壁靈芝孢子粉相似[10]。故本研究從藥效學(xué)層面為進(jìn)一步開發(fā)利用這個(gè)具有醫(yī)用價(jià)值的新資源食品提供了切實(shí)的理論依據(jù)。

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