黃精及其炮制品的薄層鑒別研究

劉建軍劉　玲夏　澆敖　嬌鮑家科.貴陽中醫(yī)學(xué)院，貴州　貴陽　55000; .貴陽醫(yī)學(xué)院，貴州　貴陽　550004; 3.貴州省藥品審評認(rèn)證中心，貴州　貴陽　550004

黃精及其炮制品的薄層鑒別研究

劉建軍1劉玲2夏澆1敖嬌1鮑家科3*
1.貴陽中醫(yī)學(xué)院，貴州貴陽550002; 2.貴陽醫(yī)學(xué)院，貴州貴陽550004; 3.貴州省藥品審評認(rèn)證中心，貴州貴陽550004

【摘要】目的:以薯蕷皂苷元為對照品，建立黃精藥材及其炮制品的薄層色譜鑒別方法.方法:采用硅膠G高效預(yù)制板，以氯仿－乙酸乙酯(15∶1)為展開劑上行展開.結(jié)果:經(jīng)考察不同的提取方法，展開劑和不同的展開條件，確定了實驗方法.應(yīng)用本方法對10批藥材及其不同炮制品進(jìn)行試驗，斑點(diǎn)清晰，分離度好.結(jié)論:本鑒別方法操作簡便、靈敏度高，可用于黃精藥材及炮制品的定性鑒別.

【關(guān)鍵詞】黃精;薯蕷皂苷元;薄層鑒別

Studies on TLC identification of Polygonatum and its processed products

LIU Jian-jun1，LIU Ling2，XIA Jiao1，AO Jiao1，BAO Jia-ke3*
1. Guiyang University of Traditional Chinese Medicine，Guiyang 550002，China; 2. Guiyang University of Medicine，Guiyang 50004，China;
3. Guizhou Center for Drug Evaluation and Certification，Guiyang 550004，China

Abstract:Objective Using Diosgeni as reference substances to establish a TLC identification method for Polygonatum and its processed products．Methods The sample was separated by using chloroform-ethyl acetate(15∶1)and silica gel G high prefabricated plate．Rsults By studying the different extraction methods，developer and different deployment conditions，experiment method was confirmed．The application of this method to test 10 batches of medicinal herbs and its different processed products．The spots were clear and separated good．Conclusion This identification method had the advantages of simple operation，high sensitivity，which can be used for the qualitative identification of Polygonatum medicinal herbs and processed products．

Key words:Polygonatum sibiricum; Diosgenin; TLC identification

黃精為百合科黃精屬植物滇黃精Polygonatum kingianum Coll. et Hemsl、黃精Polygonatum sibiricum Red.或多花黃精Polygonatum cyrtonema Hua的干燥根莖，按形狀不同，習(xí)稱大黃精、雞頭黃精、姜形黃精[1].黃精味甘，性平，具有補(bǔ)氣養(yǎng)陰、健脾、潤肺、益腎的功效.據(jù)報道[2－3]，黃精主要含有多糖和皂苷類化合物，其中皂苷類化合物具有免疫調(diào)節(jié)、抗氧化、抗疲勞、降血糖、降血脂、抗腫瘤和改善學(xué)習(xí)記憶等作用.在2010版中國藥典中，黃精藥材的薄層鑒別以藥材為對照品，為了進(jìn)一步強(qiáng)化其定性鑒別的手段，本文以薯蕷皂苷元為對照，建立黃精藥材的薄層鑒別方法.

1　儀器和材料

1. 1儀器水浴鍋(DK－98－11A，天津市泰斯特儀器有限公司); METTLER TOLEDO XS205分析天平; KQ－300DE型數(shù)控超聲波清洗器.

1. 2材料硅膠G高效預(yù)制板(青島海洋化工廠分廠，批號: 20131212);硅膠G(青島海洋化工有限公司，批號: 0120246);薯蕷皂苷元(批號20130111);藥材樣品經(jīng)貴州省食品藥品檢驗所中藥檢測室鑒定為黃精藥材;所用試劑均為分析純.

2　藥材來源及炮制方法[4　]

2. 1藥材來源對主產(chǎn)地貴州省范圍內(nèi)的黃精進(jìn)行收集，由貴州省食品藥品檢驗所李楊老師鑒定為Polygonatum sibiricum Red、Polygonatum cyrtonema Hua.，來源見表1.

表1　黃精樣品信息表

2. 2蒸黃精取原藥材，除去雜質(zhì)，洗凈，大小分開，略泡，潤透，置適宜容器內(nèi)蒸8～12h，?；?，置容器內(nèi)悶過夜，取出，切厚片，干燥.

2.3酒黃精取原藥材，除去雜質(zhì)，洗凈，略泡，潤透，置適宜容器內(nèi)蒸8～12h，切厚片，晾至半干;加酒拌勻，悶透，照酒蒸法(附錄一炮制通則)反復(fù)蒸至表面棕黑色，內(nèi)部深褐色，切厚片，干燥;或取蒸黃精片，照酒蒸法(附錄一炮制通則)反復(fù)蒸至表面棕黑色，內(nèi)部深褐色，干燥.

3　方法與結(jié)果

3. 1溶液制備方法

3. 1. 1供試品溶液取黃精藥材粉末(過二號篩)約2g，置錐形瓶中，加入50ml乙醇，超聲處理(功率160W，頻率40kHz)40min，搖勻，過濾.精密量取續(xù)濾液25ml，加石油醚(60～90℃)25ml，加鹽酸9ml，回流水解2h，冷卻，繼以石油醚(60～90℃)振搖提取3次，每次30ml，合并提取液，回收溶劑至干，殘渣加乙醇溶解并轉(zhuǎn)移至5ml量瓶中，加乙醇至刻度，即得.

3. 1. 2對照品溶液取薯蕷皂苷元對照品適量，精密稱定，制成濃度為0. 04mg/ml的溶液.

3. 2色譜條件的優(yōu)化

3. 2. 1展開劑及展開條件的考察和比較通過一系列預(yù)試驗，確定基本操作方法:分別吸取對照品溶液和供試品溶液，點(diǎn)于同一硅膠G薄層板上，將展開劑倒于展缸中預(yù)飽和30min，薄層板預(yù)飽和20min展開后，上行展開，展距8cm.取出，晾干，噴以5%硫酸香草醛溶液顯色.

考察三氯甲烷－甲醇(4∶1)、石油醚－三氯甲烷(1∶1)、三氯甲烷－乙酸乙酯(4∶1)三種展開系統(tǒng)，實驗表明，只有三氯甲烷－乙酸乙酯(4∶1)可以達(dá)到將黃精藥材薄層色譜斑點(diǎn)展開和分離的結(jié)果.經(jīng)進(jìn)一步對三氯甲烷－乙酸乙酯展開系統(tǒng)的有關(guān)比例進(jìn)行調(diào)整，結(jié)果表明以三氯甲烷－乙酸乙酯(15∶1)展開后，薯蕷皂苷元的Rf值合適且兩點(diǎn)能很好分離.結(jié)果見表2.

表2　展開劑考察結(jié)果

3.2.2點(diǎn)樣方式和點(diǎn)樣量的比較考察點(diǎn)狀點(diǎn)和條帶狀點(diǎn)兩種方式，結(jié)果顯示，點(diǎn)條帶狀點(diǎn)比較容易出現(xiàn)拖尾且斑點(diǎn)分離不明顯，點(diǎn)狀點(diǎn)斑點(diǎn)比較清晰.在點(diǎn)樣量為5μl時，薯蕷皂苷元溶液與供試品溶液斑點(diǎn)都過淺且日光下無法查看.當(dāng)點(diǎn)樣量增加到10μl時，薯蕷皂苷元溶液與供試品溶液分離效果明顯，斑點(diǎn)清晰.故確定薯蕷皂苷元與供試品溶液點(diǎn)樣量各為10μl.

3. 2. 3薄層板的考察分別考察了硅膠G預(yù)制板與硅膠G(批號: 0120246)自制板兩種薄層板.結(jié)果表明:兩種薄層板上供試品與對照品的色譜行為基本一致，斑點(diǎn)清晰且能較好的分離.結(jié)果見圖1、2.

圖1　自制版色譜圖

圖2　預(yù)制版色譜圖

3. 2. 4溫度影響的考察分別在高溫(40℃)和低溫(4℃)進(jìn)行了考察:結(jié)果表明供試品和對照品在高溫和低溫時的色譜行為一致，各斑點(diǎn)能較好的分離，說明在高溫和低溫條件下本方法具有良好的適應(yīng)性，結(jié)果見圖3、圖4.

圖3　4℃時色譜圖

圖4　40℃時色譜圖

3.2.5濕度影響的考察分別在高濕(72 %)、中濕(50 %)和低濕(18 %)條件下進(jìn)行考察，濕度以不同濃度的硫酸溶液進(jìn)行控制.將點(diǎn)樣后的薄層板放入展開缸，另一側(cè)的展開槽里放一定濃度的硫酸，密閉15～30min后再加展開劑展開.當(dāng)硫酸－水(100∶95.5，V/V)時，相對濕度為72%;當(dāng)硫酸－水(50∶100，V/V)時，相對濕度為50%;當(dāng)硫酸－水(27.5 ∶100，V/V);時，相對濕度為18%.結(jié)果表明供試品和對照品在高濕、中濕和低濕環(huán)境各斑點(diǎn)均能實現(xiàn)較好的分離，說明本方法具有良好的環(huán)境適應(yīng)性，結(jié)果見圖5－7.

圖5　高濕色譜圖

圖6　中濕色譜圖

圖7　低濕色譜圖

3. 2. 6色譜條件的確定取供試品溶液與對照品溶液各10μl，分別點(diǎn)于同一薄層板上，以氯仿－乙酸乙酯(15∶1)為展開劑，展開，取出，晾干，噴以5%硫酸香草醛試液，105℃下顯色后置日光下檢視.

4　樣品的測定

4. 1生黃精的測定結(jié)果取10批黃精藥材，按“3. 1. 1項”下制備的供試品溶液后，按“3. 2. 6”確定的色譜條件進(jìn)行檢測，結(jié)果見圖8.

圖8　黃精藥材的鑒定

4. 2蒸黃精的測定結(jié)果取10批蒸黃精，按“3. 1. 1項”下制備的供試品溶液后，按“3. 2. 6”確定的色譜條件進(jìn)行檢測，結(jié)果見圖9.

圖9　蒸黃精的鑒定

4. 3酒黃精的鑒定取10批酒黃精，按“3. 1. 1項”下制備的供試品溶液后，按“3. 2. 6”確定的色譜條件進(jìn)行檢測，結(jié)果見圖10.

圖10　酒黃精的鑒定

5　結(jié)論與討論

以薯蕷皂苷元為對照品的黃精藥材薄層鑒別方法曾有文獻(xiàn)報道[5]，但其所使用的展開劑為苯與丙酮，因苯的毒性大，出于對試驗人員安全和減少試驗對環(huán)境污染考慮，本研究采用氯仿與乙酸乙酯作為展開劑.該方法操作簡單、分離度好、斑點(diǎn)清晰、經(jīng)對10批藥材及其不同炮制品進(jìn)行試驗，均表明本薄層色譜鑒別方法重現(xiàn)性好，靈敏度高，可用于黃精藥材及炮制品的定性鑒別.

參考文獻(xiàn)

[1]國家藥典委員．中華人民共和國藥典(一部)[S]．北京:中國醫(yī)藥科技出版社，2010: 154．

[2]龐玉新，趙致，袁璦，等．黃精的化學(xué)成分及藥理作用[J]．山地農(nóng)業(yè)生物學(xué)報，2003，22(6): 547－550．

[3]祝凌麗，徐維平．黃精總皂苷和多糖的藥理作用及其提取方法的研究進(jìn)展[J]．安徽醫(yī)藥，2009，13(7): 719－722．

[4]貴州省食品藥品監(jiān)督管理局．貴州省中藥飲片炮制規(guī)范(2005年版)[M]．貴陽:貴州科技出版社，2005: 223．

[5]陳麗娜，高艷坤，都述虎．黃精質(zhì)量標(biāo)準(zhǔn)的研究[J]．中藥材，2006，36(12): 1367－1369．

收稿日期:( 2014. 12. 05)

通信作者:鮑家科，男，教授，主任藥師，從事中藥民族藥質(zhì)量標(biāo)準(zhǔn)化研究，E－mail: bik2005@163. com

作者簡介:劉建軍，男，碩士，從事中藥質(zhì)量控制及新藥研發(fā)，E－mail: 58375221@ qq. com

基金項目:貴陽市科技計劃項目[族科合同(2011204)25號].

【文章編號】1007－8517(2015)05－0014－03

【文獻(xiàn)標(biāo)志碼】A

【中圖分類號】R282. 5