• <tr id="yyy80"></tr>
  • <sup id="yyy80"></sup>
  • <tfoot id="yyy80"><noscript id="yyy80"></noscript></tfoot>
  • 99热精品在线国产_美女午夜性视频免费_国产精品国产高清国产av_av欧美777_自拍偷自拍亚洲精品老妇_亚洲熟女精品中文字幕_www日本黄色视频网_国产精品野战在线观看 ?

    清脈飲含藥血清對體外TNF-α損傷EAhy-926細(xì)胞的影響

    2016-01-26 03:25:15康浩浩1魏齊1魏彥寧1張偉芳2趙凱3寧夏醫(yī)科大學(xué)寧夏銀川750004寧夏醫(yī)科大學(xué)附屬回醫(yī)醫(yī)院寧夏吳忠751100寧夏醫(yī)科大學(xué)總醫(yī)院中醫(yī)科寧夏銀川750004
    中國民族民間醫(yī)藥 2015年5期
    關(guān)鍵詞:軟堅電鏡含藥

    康浩浩1魏 齊1魏彥寧1張偉芳2趙 凱3*1.寧夏醫(yī)科大學(xué),寧夏 銀川 750004; 2.寧夏醫(yī)科大學(xué)附屬回醫(yī)醫(yī)院,寧夏 吳忠 751100;3.寧夏醫(yī)科大學(xué)總醫(yī)院中醫(yī)科,寧夏 銀川 750004

    清脈飲含藥血清對體外TNF-α損傷EAhy-926細(xì)胞的影響

    康浩浩1魏齊1魏彥寧1張偉芳2趙凱3*
    1.寧夏醫(yī)科大學(xué),寧夏銀川750004; 2.寧夏醫(yī)科大學(xué)附屬回醫(yī)醫(yī)院,寧夏吳忠751100;
    3.寧夏醫(yī)科大學(xué)總醫(yī)院中醫(yī)科,寧夏銀川750004

    【摘要】目的:研究清脈飲含藥血清對腫瘤壞死因子α(TNF-α)誘導(dǎo)的人臍靜脈內(nèi)皮細(xì)胞(Ehay926)的影響.方法:制備含藥血清;將體外培養(yǎng)的EAhy-926細(xì)胞,隨機分為正常對照組、清法組、活血組、全方組、軟堅組、西藥組、TNF-α損傷組等;清脈飲含藥血清與TNF-α共同處理血管內(nèi)皮細(xì)胞24h后,光學(xué)顯微鏡(下稱光鏡)下觀察細(xì)胞的形態(tài)變化,電子顯微鏡(下稱電鏡)下觀察細(xì)胞的細(xì)胞器改變.結(jié)果:①光鏡下細(xì)胞大體形態(tài)變化:清脈飲含藥血清與TNF-α共同處理的細(xì)胞,各組損傷均較少,細(xì)胞數(shù)量多,活血組細(xì)胞數(shù)量相對較少;②電鏡下細(xì)胞結(jié)構(gòu)的改變:清脈飲含藥血清與TNF-α共同處理的細(xì)胞器損害較單純TNF-α損傷組的細(xì)胞小,其中以中劑清法組、軟堅組、西藥組對細(xì)胞器的損傷最少,細(xì)胞的超微結(jié)構(gòu)與正常對照組比較沒有明顯差異.結(jié)論:清脈飲含藥血清可一定程度上對TNF-α損傷的血管內(nèi)皮細(xì)胞保護作用,減少其對細(xì)胞器的損害,且含藥血清對細(xì)胞的保護作用存在血清濃度差異,其機制可能與抑制TNF-α的促炎作用以減少其對細(xì)胞器的損害有關(guān).

    【關(guān)鍵詞】清脈飲;含藥血清; TNF-α; EAhy-926

    The influence of qing mai yin ontaining serum on VECs injuried by TNF-α

    KANG Hao-hao1,WEI Qi,WEI Yan-ning1,ZHANG Wei-fang2,ZHAO Kai3
    1. Ningxia Medical University,Yinchuan 750004,China; 2. Ningxia medical university affiliated to the medical hospital of traditional Chinese medicine,Wuzhong 751100,China; 3. Ningxia medical university general hospital,Yinchuan 750004,China

    Abstract:Objective To research the influence of Qing Mai Yin medicated serum on human umbilical vein endothelial cells(EA-hy-926)by tumor necrosis factor alpha(TNF alpha).Methods Preparation of medicated serum; The EAhy-926 cells were incubated in vitro and divided into normal control group,the low dose Qing Fa group,the normal dose Qing Fa group,the high dose Qing Fa group,Huo Xue group,Quan Fang group,Ruan Jian group,medicine group,TNF-α injury group etc.The serum containing medicine and different concentrations of Qing Fa serum containing handle with the TNF-αendothelial cells 24 hours after,morphological changes of EAhy-926 cells were observed under light microscope; cell organelles change of EAhy-926 cells were observed under the electron microscope; Results①The changes in general morphological cells under light microscope compared with TNF-α injury group,the serum containing medicine was significantly increased the cell viability,each group damage less and cell number,cells of Huo Xue group are relatively few;②The changes in the structure cells under electron microscope.The damage compared with TNF-α injury group,the serum containing medicine was significantly pure TNF alpha cells of small injury group.The cell organelles was least damage in Qing Fa group,Ruan Jian group,medicine group and the cell ultrastructure was no significant difference compared with normal control group.Conclusion Qing Mai Yin medicated serum can be a certain level of TNF alpha injury of vascular endothelial cell protection,reduce the damage to the organelles,and serum medicated serum concentration differences of cell protection,its mechanism may be related to inhibition of TNF-α proinflammatory role,reduce the damage to the organelles.

    Key words:Qing mai yin; containing serum; TNF-α; EAhy-926

    動脈粥樣硬化閉塞癥(Atherosclerotic Occlusion,ASO)是指動脈粥樣硬化(Atherosclerotic,AS)累及周圍動脈并引起慢性閉塞的一種AS相關(guān)疾病.而AS與高血脂、高血壓、糖尿病、吸煙、年齡、遺傳的關(guān)系已基本確定,近年來證實感染因素亦是誘發(fā)原因之一.此類疾病病程較長、病情較重、病人痛苦、難以根治,嚴(yán)重危害著人類的健康.在對有關(guān)動脈粥樣硬化的發(fā)病機制理論研究中,Ross[1-2]早在1974年提出,Ross教授后來又較系統(tǒng)全面地綜述了多年文獻,以新的論據(jù)在損傷反應(yīng)學(xué)說的基礎(chǔ)上,明確提出“AS是一種炎癥性疾病”,認(rèn)為內(nèi)皮損傷,不論物理損傷還是更細(xì)微的細(xì)胞損害是動脈粥樣硬化中一個重要的早期事件.內(nèi)皮損傷不但是指內(nèi)皮剝脫,還包括內(nèi)皮功能變化及內(nèi)皮功能障礙[3].近年發(fā)現(xiàn)內(nèi)皮功能損害是動脈粥樣硬化發(fā)病的首要和最早環(huán)節(jié),且是導(dǎo)致其不斷進展的重要因素[4],所以AS的早期防治和開發(fā)新藥成為研究的重點.中藥治療AS相關(guān)疾病臨床療效顯著,并有一定預(yù)防作用,有良好的發(fā)展前景.目前此類研究多集中在活血化瘀方面,從清法藥物對動脈粥樣硬化進行研究的較少.因此,本實驗擬從中醫(yī)不同治法含藥血清對TNF-α損傷的EAhy-926細(xì)胞的影響進行研究,為進一步明確其保護血管內(nèi)皮的可能機制.

    1 材料和方法

    1. 1試劑、動物腫瘤壞死因子α(批號: 0607B25,美國PEPRO TECH公司); DMEM(Hyclone批號: NZH1209); PBS(Hyclone批號: NZH1195);胎牛血清(Hyclone批號: NZH1439);胰蛋白酶(Hyclone批號: J140028);二甲基亞颯(Sigma批號: BCBH2085V,美國Sigma公司).SD雄性大鼠60只,體重(250±50)g,普通級,由寧夏醫(yī)科大學(xué)動物中心提供[scxk(寧)2013-0035].

    1. 2藥物全方(清脈飲):垂盆草、大黃、昆布、煅牡蠣、丹參、蒲黃、姜黃、夏枯草、茵陳、澤瀉、海藻等;清法組:大黃、垂盆草、夏枯草、昆布等;軟堅組:昆布、煅牡蠣、海藻、夏枯草等;活血組:丹參、蒲黃、姜黃、大黃等;以上中藥均由寧夏古方大藥房提供,各組方藥分別按照傳統(tǒng)中藥煎煮方法,煎煮、濾液,根據(jù)大鼠的體重計算用藥量后,濃縮至需要濃度[5],用蒸餾水配制.西藥組:辛伐他汀片(批號: 110622,山東羅欣藥業(yè)股份有限公司)10mg/片.

    2 實驗方法

    2. 1含藥血清的制備

    2. 1. 1分組及給藥方法將56只雄性SD大鼠隨機分為八組(即正常對照組、低劑量清法方組、中劑量清法方組、高劑量清法方組、全方組、軟堅方組、活血組、辛伐他汀組),每組7只.按體型系數(shù)換算法[6]中人鼠等效藥量換算方法計算給藥劑量,全方組16. 9g/(kg· d),低劑清法方組2. 9g/(kg·d),中劑清法方組5. 99g/(kg·d),高劑清法方組12. 21g/(kg·d),軟堅方組2. 61g/(kg·d),活血方組1. 7g/(kg·d)(均為生藥量),辛伐他汀組0. 67mg,給大鼠灌胃,同時以等量生理鹽水灌飼正常對照組,每日一次.

    2. 1. 2動物采血及分離血清每天灌胃2次,連續(xù)3d后,當(dāng)夜禁食不禁水,第4d再給藥一次,中藥組在末次給藥后1. 5~2h,西藥組在給藥后1h心臟采血;加蓋靜置2h后,待血液固縮,無菌條件下分離血清,離心(3000r/min,15min);同組混合用0. 22μm的濾器過濾以消除個體差異,再水浴鍋滅活(56℃,30min),分裝1ml EP管中,-20℃保存?zhèn)溆?

    2. 2 TNF-α的溶解及配制①試劑開蓋前,將TNF-α凍干粉離心5min,3000~3500r/min;②用無菌水重懸至0. 1~1. 0mg/ml,用移液槍的槍頭輕吹幾下,即可使細(xì)胞因子完全溶解,不可振蕩,將重懸液靜置于室溫下2h以上;③用含10%胎牛血清的DMEM培養(yǎng)液稀釋成20ng/ml,分裝,-20℃保存?zhèn)溆?

    2. 3人臍靜脈內(nèi)皮細(xì)胞(EAhy-926)培養(yǎng)細(xì)胞由上海市中國科學(xué)院細(xì)胞庫提供,用含有10%胎牛血清的DMEM培養(yǎng)基,同時加入100U/ml青霉素和0. 1mg/ml鏈霉素,在37℃,體積分?jǐn)?shù)5% CO2的細(xì)胞培養(yǎng)箱中培養(yǎng)細(xì)胞;待細(xì)胞生長至近匯合狀態(tài)、鋪滿瓶壁80%以上時,進行傳代;將生長良好的人EAhy-926用0. 25%的胰蛋白酶1ml消化1~3min后,輕輕吹打制成細(xì)胞懸液,每周傳代2~3次;取對數(shù)生長期的細(xì)胞消化后以1× 105/ml,接種于96孔板中培養(yǎng),待細(xì)胞處于增殖期后分組實驗.

    2. 4細(xì)胞的分組及給藥方法取對數(shù)生長期的細(xì)胞,將其消化,以含10%胎牛血清的DMEM培養(yǎng)液制成細(xì)胞懸液以1×105/ml,200μl/孔接種于96孔板或4×105/ml接種于25cm培養(yǎng)瓶中,37℃,5% CO2培養(yǎng)24h,細(xì)胞貼壁,近乎融合,吸棄培養(yǎng)液,用含0. 2%胎牛血清的DMEM培養(yǎng)液靜止24h,使細(xì)胞同步化至G1期,然后隨機分為9組:正常對照組; TNF-α組;低劑清法組;中劑清法組;高劑清法組;全方組;軟堅組;活血組;西藥組.加入TNF-α及各濃度含藥血清,37℃,5%CO2,培養(yǎng)育24h,待測.

    2. 5實驗方法

    2. 5. 1光鏡觀察細(xì)胞的大體形態(tài)取對數(shù)生長期的細(xì)胞消化后以1×105/ml制備成細(xì)胞懸液,200μl/孔,種于96孔板,待細(xì)胞貼壁后,換用含0. 2%胎牛血清的DMEM孵育24h,使細(xì)胞同步化,同時加入各濃度不同含藥血清及TNF -α(20ng/ml)的混合液,200μl/孔,孵育24h后,光鏡下觀察細(xì)胞的大體形態(tài)變化[5].

    2. 5. 2電鏡觀察細(xì)胞超微結(jié)構(gòu)

    2. 5. 2. 1前固定①取對數(shù)生長期的細(xì)胞消化后種于25cm2培養(yǎng)瓶中,待細(xì)胞貼壁后,換用含0. 2%胎牛血清的DMEM孵育24h,使細(xì)胞同步化,同時加入各濃度不同含藥血清及TNF-α(20ng/ml)的混合液孵育24h,用0. 25%胰蛋白酶將其消化,離心800r/min,5min,收集細(xì)胞;②加入固定液1ml,重懸,4℃靜置10 min;③4℃離心800r/min,5min,去上清,盡量除凈;④加入固定液1ml,重懸,4℃靜置30min;⑤4℃離心r/min,5min,去上清;⑥加入0. 1M二甲砷酸鈉緩沖液1ml,重懸,4℃靜置1h;⑦4℃離心800r/min,5min,去上清;⑧重復(fù)操作步驟⑥兩次、⑦一次;⑨4℃保存,每周換一次0. 1M二甲砷酸鈉緩沖液.

    2. 5. 2. 2后固定①離心800r/min,5 min,去上清;②加入1ml 1%鋨酸,輕混勻,4℃靜置1h;③離心800r/min,5 min,去上清;④加入1ml 0. 1M二甲砷酸鈉緩沖液,混勻,4℃靜置15min;⑤離心800r/min,5min,去上清;⑥重復(fù)操作步驟④、⑤.

    2. 5. 2. 3脫水①依次加入30%、50%、70%冷乙醇,混勻,4℃靜置5 min,離心800 r/min,5 min,去上清;②依次加入80%、90%冷乙醇,混勻,室溫靜置5min,離心800r/min,5min,去上清;③加入100%常溫乙醇,混勻,室溫靜置3min,離心800r/min,5min,去上清;④重復(fù)操作步驟③;⑤加入環(huán)氧丙烷滲透,室溫靜置15h,離心800 r/min,5min,去上清;⑥重復(fù)操作步驟⑤;⑦1∶1不完全包埋液,室溫滲透1h.

    2. 5. 2. 4包埋①離心800 r/min,5min,去上清;②將細(xì)胞全部轉(zhuǎn)入膠囊中,加入完全包埋液;③離心800 r/min,5min,使細(xì)胞沉在膠囊底部;④加上標(biāo)簽,35℃溫箱6h; ⑤42℃溫箱6h;⑥60℃溫箱6h.

    2. 5. 2. 4切片觀察700及2500倍下觀察細(xì)胞超微結(jié)構(gòu)的改變.

    3 結(jié)果

    3. 1光鏡下細(xì)胞大體形態(tài)變化正常對照組內(nèi)皮細(xì)胞為單層,數(shù)量多,飽滿,互不重疊,呈鋪石狀鑲嵌排列,邊界清楚; TNF-α損傷組細(xì)胞數(shù)量少,細(xì)胞間隙增寬,細(xì)胞收縮,胞膜皺縮,細(xì)胞邊界不清; TNF-α與含藥血清共同處理的細(xì)胞,各組損傷均較少,細(xì)胞數(shù)量多,細(xì)胞間隙變窄,形態(tài)趨于正常,活血組細(xì)胞數(shù)量相對較少,見圖1~4.

    圖1 光鏡下正常對照組細(xì)胞形態(tài)(100x)

    圖2 光鏡下清法組細(xì)胞形態(tài)(100X)

    圖3 光鏡下TNF-α損傷組細(xì)胞形態(tài)(100X)

    圖4 光鏡下活血組細(xì)胞形態(tài)(100X)

    3. 2電鏡下細(xì)胞結(jié)構(gòu)的改變①體外正常培養(yǎng)的血管內(nèi)皮細(xì)胞,胞膜完整,連續(xù),雙層結(jié)構(gòu),表面可見微絨毛;細(xì)胞核圓形或橢圓形,染色質(zhì)均勻,無固縮;內(nèi)質(zhì)網(wǎng)無擴張,線粒體未見腫脹.②TNF-α損傷組,內(nèi)皮細(xì)胞損傷明顯,胞膜破損,不連續(xù),欠完整;核膜雙層結(jié)構(gòu)消失,核膜擴張,表面微絨毛減少;細(xì)胞核固縮、變形,甚至消失,核內(nèi)多個核仁,核染色質(zhì)不均勻、聚集明顯;內(nèi)質(zhì)網(wǎng)擴張,線粒體腫脹、變性,胞漿內(nèi)出現(xiàn)大量大小不等的空泡;鏡下見大量壞死的細(xì)胞碎片及凋亡小體.③TNF-α與含藥血清共同處理的內(nèi)皮細(xì)胞,其損害較單純TNF-α損傷組的細(xì)胞小,細(xì)胞膜較連續(xù)完整;細(xì)胞核變形較輕,核染色質(zhì)較均勻,聚集較少,核仁清晰可見;內(nèi)質(zhì)網(wǎng)及線粒體未見明顯擴張及腫脹、變性,胞漿內(nèi)空泡明顯縮小或減少;鏡下很少見壞死細(xì)胞碎片,未見凋亡小體.其中在TNF-α損傷實驗同時加入含藥血清的全方組、高、中、低劑清法組、軟堅組、西藥組較損傷組、活血組對細(xì)胞器的損傷最少,細(xì)胞的超微結(jié)構(gòu)與正常對照組比較沒有明顯差異(細(xì)胞膜較連續(xù)完整;細(xì)胞核變形較輕,核染色質(zhì)較均勻,聚集較少,核仁清晰可見;內(nèi)質(zhì)網(wǎng)及線粒體未見明顯擴張及腫脹、變性,胞漿內(nèi)空泡明顯縮小或減少).活血組對細(xì)胞器的損傷較多,細(xì)胞的超微結(jié)構(gòu)損傷較大(內(nèi)皮細(xì)胞損傷較明顯,胞膜不連續(xù),欠完整;部分核膜雙層結(jié)構(gòu)消失,核膜擴張,表面微絨毛減少;部分細(xì)胞核固縮、變形,甚至消失,核內(nèi)多個核仁,核染色質(zhì)不均勻、聚集明顯;內(nèi)質(zhì)網(wǎng)擴張,線粒體腫脹、變性,胞漿內(nèi)出現(xiàn)少量空泡;鏡下可見少量壞死的細(xì)胞碎片及凋亡小體).10%低劑清法組、10%中劑清法組、10%高劑清法三組細(xì)胞的超微結(jié)構(gòu)未見明顯差異.見圖5~22.

    圖5 電鏡下正常對照組細(xì)胞形態(tài)(700x)

    圖6 電鏡下正常對照組細(xì)胞形態(tài)(2500x)

    圖7 電鏡下TNF-α損傷組細(xì)胞形態(tài)(700X)

    圖8 電鏡下TNF-α損傷組細(xì)胞形態(tài)(2500X)

    圖9 電鏡下低清法組細(xì)胞形態(tài)(700X)

    圖10 電鏡下低清法組細(xì)胞形態(tài)(2500X)

    圖11 電鏡下中清法組細(xì)胞形態(tài)(700X)

    圖12 電鏡下中清法組細(xì)胞形態(tài)(2500X)

    圖13 電鏡下高清法組細(xì)胞形態(tài)(700X)

    圖14 電鏡下高清法組細(xì)胞形態(tài)(2500X)

    圖15 電鏡下全方組細(xì)胞形態(tài)(700X)

    圖16 電鏡下全方組細(xì)胞形態(tài)(2500X)

    圖17 電鏡下活血組細(xì)胞形態(tài)(700X)

    圖18 電鏡下活血組細(xì)胞形態(tài)(2500X)

    圖19 電鏡下軟堅組細(xì)胞形態(tài)(700X)

    圖20 電鏡下軟堅組細(xì)胞形態(tài)(2500X)

    圖21 電鏡下西藥組細(xì)胞形態(tài)(700X)

    圖22 電鏡下西藥組細(xì)胞形態(tài)(2500X)

    4 討論

    ASO屬中醫(yī)“脈痹”、“脫疽”范疇,多認(rèn)為是由于飲食不節(jié)、臟腑虧虛、外邪侵襲導(dǎo)致濕熱痰濁瘀血互結(jié),脈絡(luò)閉阻而成.傳統(tǒng)治療往往采用活血祛瘀消痰之法,各項研究也較集中在活血化瘀領(lǐng)域,較易忽視痰瘀皆為邪氣所致,所謂“虛邪賊風(fēng)”總是疾病之起因,而邪被認(rèn)為是導(dǎo)致各種脈管病的致病因子.由全國脈管病泰斗奚九一教授提出的“因邪致瘀”理論,首倡以軟堅清法為主治療ASO,療效滿意[7].趙凱教授在此基礎(chǔ)上提出“毒滯脈絡(luò)”,提出治療ASO法貴清通[8],臨床運用清脈飲治療動脈硬化相關(guān)疾病取得良好療效.

    現(xiàn)代研究表明,在AS的整個發(fā)生發(fā)展過程中,血管內(nèi)皮細(xì)胞損傷導(dǎo)致的內(nèi)皮功能障礙不僅是AS的一個始動環(huán)節(jié),還是導(dǎo)致其不斷進展的重要因素[9].血管內(nèi)皮細(xì)胞(vascular endothelial cell,VEC)是循環(huán)血液與血管平滑肌間的機械屏障,也是人體最大、最重要的內(nèi)分泌器官.血管內(nèi)皮細(xì)胞在各種刺激下產(chǎn)生促炎因子,在促炎因子作用下引起內(nèi)皮損傷.因此,在預(yù)防和治療動脈粥樣硬化過程中,預(yù)防內(nèi)皮細(xì)胞損傷的作用研究顯得尤為重要.本研究采用體外培養(yǎng)EAhy-926細(xì)胞細(xì)胞,探討清脈飲含藥血清對TNF-α誘導(dǎo)的EAhy-926細(xì)胞超微結(jié)構(gòu)的影響.

    TNF-α由活化的巨噬細(xì)胞、內(nèi)皮細(xì)胞和平滑肌細(xì)胞合成,在細(xì)胞因子級聯(lián)反應(yīng)中刺激其它細(xì)胞因子的合成,并且參與促進黏附分子的表達、炎癥細(xì)胞的募集和激活,是炎癥反應(yīng)的關(guān)鍵調(diào)節(jié)因子之一,還可通過影響脂質(zhì)代謝而促進AS[10-11].當(dāng)TNF-α誘導(dǎo)血管內(nèi)皮細(xì)胞損傷后,內(nèi)皮細(xì)胞的損傷又促進白細(xì)胞介素-1和TNF-α釋放,同時TNF-α對血管內(nèi)皮細(xì)胞再次產(chǎn)生細(xì)胞毒作用,進一步導(dǎo)致血管內(nèi)皮細(xì)胞的損傷,從而形成惡性循環(huán)[12].TNF-α是炎癥反應(yīng)的關(guān)鍵調(diào)節(jié)因子之一,可從多種炎癥細(xì)胞中釋放,在動脈粥樣硬化形成和發(fā)展過程中起著關(guān)鍵的作用;可抑制一氧化氮合酶的生成、誘導(dǎo)血管內(nèi)皮細(xì)胞凋亡、促進細(xì)胞的老化及刺激血管內(nèi)皮細(xì)胞表達粘附分子,導(dǎo)致內(nèi)皮細(xì)胞功能障礙,促使血栓形成[13-14];并且可以刺激炎癥因子的產(chǎn)生,直接發(fā)揮促炎作用[13-15].故在動脈粥樣硬化發(fā)生發(fā)展中TNF-α起著關(guān)鍵的作用[3].TNF-α是通過對內(nèi)皮細(xì)胞的損傷,促進動脈粥樣硬化的發(fā)生.因此,抑制TNF -α對內(nèi)皮細(xì)胞的刺激作用,改善和恢復(fù)血管內(nèi)皮功能已經(jīng)成為AS防治的重要目標(biāo)之一.

    實驗結(jié)果顯示,光鏡下,TNF-α與含藥血清共同處理的細(xì)胞,各組損傷均較少,細(xì)胞數(shù)量多,細(xì)胞間隙變窄,形態(tài)趨于正常,活血組細(xì)胞數(shù)量相對較少;電鏡下,全方組、高、中、低劑清法組、軟堅組、西藥組較損傷組、活血組對細(xì)胞器的損傷最少,細(xì)胞的超微結(jié)構(gòu)與正常對照組比較沒有明顯差異(細(xì)胞膜較連續(xù)完整;細(xì)胞核變形較輕,核染色質(zhì)較均勻,聚集較少,核仁清晰可見;內(nèi)質(zhì)網(wǎng)及線粒體未見明顯擴張及腫脹、變性,胞漿內(nèi)空泡明顯縮小或減少),而活血組對細(xì)胞器的損傷較多,細(xì)胞的超微結(jié)構(gòu)損傷較大(內(nèi)皮細(xì)胞損傷較明顯,胞膜不連續(xù),欠完整;部分核膜雙層結(jié)構(gòu)消失,核膜擴張,表面微絨毛減少;部分細(xì)胞核固縮、變形,甚至消失,核內(nèi)多個核仁,核染色質(zhì)不均勻、聚集明顯;內(nèi)質(zhì)網(wǎng)擴張,線粒體腫脹、變性,胞漿內(nèi)出現(xiàn)少量空泡;鏡下可見少量壞死的細(xì)胞碎片及凋亡小體.).低劑清法組、中劑清法組、高劑清法三組細(xì)胞的超微結(jié)構(gòu)未見明顯差異.證實了中醫(yī)不同治法含藥血清對TNF-α損傷的EAhy-926細(xì)胞有一定的保護作用,其機制可能與抑制TNF-α炎癥反應(yīng)有關(guān),其可能是治療動脈粥樣硬化的作用機制之一.

    參考文獻

    [1]Ross R,Glomset F,Kariya B,et al.A platelet dependent serum factor that stimulates the proliferation of arterial smooth muscle cells in vitro[J].Pr Natl Acad Sci USA,1974,71: 1207-1210.

    [2]Ross R.Atherosclerosis-an inflammatory disease[J].N Engl J Med,1999,31(1): 115-126.

    [3]喻卓,陳鵬,楊桂梅,等.20(R)-人參皂苷Rg3對腫瘤壞死因子-α誘導(dǎo)血管內(nèi)皮細(xì)胞損傷的保護作用[J].嶺南心血管病雜志,2011,17(3): 199.

    [4]Olkkonen VW,Lehto M.Oxysterols and oxysterol binding proteins: role in lipid metabolism and atherosclerosis[J].Ann Med,2004,36(8): 562 -572.

    [5]張偉芳,黃鑫,趙凱.清脈飲及其拆方含藥血清對TNF-α損傷的Ealy -926細(xì)胞的保護作用[J].寧夏醫(yī)科大學(xué)學(xué)報,2013,6(3): 635.

    [6]陳奇.中藥藥理實驗方法[M].北京:人民衛(wèi)生出版社,1994: 206.[7]王健,奚九一,趙兆琳.軟堅清脈方對肢體動脈硬化性閉塞主證的臨床研究[J].中國中西醫(yī)結(jié)合外科雜志,2004,10(2): 67.

    [8]陳凱偉,錢月慧,黃鑫,等,清脈飲及其拆方對動脈粥樣硬化閉塞癥兔主動脈I-kB及NF-kB mRNA表達的變化的影響[J].寧夏醫(yī)科大學(xué)學(xué)報,2014,7(3): 720.

    [9]繆薇,朱榆紅.動脈粥樣硬化發(fā)病機制和藥物干預(yù)的研究現(xiàn)狀[J].臨床醫(yī)學(xué),2009,16(3): 401.

    [10]居峰,吳劍,吳文宏,等.高甘油三酯血清對人臍靜脈內(nèi)皮細(xì)胞的損傷作用[J].實驗與研究,2011,8(12): 27.

    [11]金惠銘,劉清行,曹翔,等.TNF-α引起的微血管內(nèi)皮細(xì)胞功能障礙及其細(xì)胞分子機制[J].微循環(huán)學(xué)雜志,2000,10(3): 5.

    [12]林蓉,劉俊田,甘偉杰.槲皮素TNF-α損傷的血管內(nèi)皮細(xì)胞的保護作用[J].中藥材,2004,27(8): 598.

    [13]Kleemann R,ZadelaarS,KooistraT.Cytokines and atherosclerosis: a comprehensive review of studies in mice[J].Cardiovasc Res,2008,79(3): 360-376.

    [14]Zhang H,Park Y,Wu J,et al.Role of TNF-alpha in vascular dysfunction[J].C lin Sci(Lond),2009,116(3): 2129-2130.

    [15]Popa C,NeteaMG,van Riel PL,et al.The role of TNF alpha in chronic inflammatory conditions,intermediarym etabolism and cardiovascular risk[J].J Lipid Res,2007,48(4): 751-762.

    收稿日期:( 2014. 12. 10)

    通信作者:趙凱(1969-),男(滿族),北京人,教授,主任醫(yī)師,醫(yī)學(xué)博士,碩士研究生導(dǎo)師.主要從事中西醫(yī)結(jié)合臨床、教學(xué)工作,以及風(fēng)濕性疾病、周圍血管病和內(nèi)分泌代謝性疾病的臨床及基礎(chǔ)研究,E-mail: exkl@163. com

    作者簡介:康浩浩(1988-),男,在讀碩士研究生,主要從事風(fēng)濕性疾病、動脈粥樣硬化的研究.

    基金項目:國家自然科學(xué)基金(81160432).

    【文章編號】1007-8517(2015)05-0019-04

    【文獻標(biāo)志碼】A

    【中圖分類號】R285. 5

    猜你喜歡
    軟堅電鏡含藥
    乳痛軟堅片抗炎鎮(zhèn)痛及調(diào)節(jié)免疫藥效作用的實驗研究*
    二甲軟堅膠囊聯(lián)合恩替卡韋分散片對乙肝肝硬化代償期患者肝纖維化指標(biāo)及炎性因子的影響
    急救含藥姿勢要正確
    乳病消片含藥血清對MCF-7細(xì)胞增殖的抑制作用
    中成藥(2018年10期)2018-10-26 03:40:44
    竹斑蛾觸角感器電鏡掃描觀察
    電鏡成像方式對數(shù)字散斑相關(guān)方法結(jié)果的影響
    “拔伸松動手法”對兔膝骨性關(guān)節(jié)炎電鏡下軟骨超微結(jié)構(gòu)的影響
    鮑世平
    冠心II號含藥血清對心肌缺血再灌注樣損傷的保護作用
    提高電子顯微鏡使用效率的方法探討
    久久婷婷成人综合色麻豆| 亚洲 欧美一区二区三区| 亚洲狠狠婷婷综合久久图片| 18禁黄网站禁片午夜丰满| 亚洲国产看品久久| 女同久久另类99精品国产91| 免费久久久久久久精品成人欧美视频| 母亲3免费完整高清在线观看| 国产一区二区在线av高清观看| 久久香蕉精品热| 精品卡一卡二卡四卡免费| 校园春色视频在线观看| 免费在线观看亚洲国产| 国产国语露脸激情在线看| 亚洲七黄色美女视频| 一区福利在线观看| 欧美+亚洲+日韩+国产| 国语自产精品视频在线第100页| 精品一区二区三区av网在线观看| 99久久国产精品久久久| 久久亚洲真实| 午夜福利,免费看| 欧美日韩黄片免| 婷婷丁香在线五月| 人人妻人人澡人人看| 长腿黑丝高跟| 婷婷六月久久综合丁香| 精品人妻1区二区| 天天躁夜夜躁狠狠躁躁| 日本黄色视频三级网站网址| 欧美 亚洲 国产 日韩一| 欧美最黄视频在线播放免费| av天堂久久9| svipshipincom国产片| 日韩高清综合在线| 久久久水蜜桃国产精品网| 无遮挡黄片免费观看| 两个人视频免费观看高清| 黄色a级毛片大全视频| 一级,二级,三级黄色视频| 老汉色av国产亚洲站长工具| 一进一出抽搐gif免费好疼| 亚洲专区国产一区二区| 亚洲专区国产一区二区| 又黄又爽又免费观看的视频| 亚洲中文日韩欧美视频| 精品一区二区三区av网在线观看| 伦理电影免费视频| 亚洲精品国产一区二区精华液| 久9热在线精品视频| cao死你这个sao货| 久久久精品欧美日韩精品| 日韩欧美三级三区| 国产av一区二区精品久久| 日本 av在线| 最好的美女福利视频网| 精品人妻1区二区| 一级a爱片免费观看的视频| 手机成人av网站| 日日爽夜夜爽网站| 女性被躁到高潮视频| 亚洲熟女毛片儿| 在线观看免费视频日本深夜| 国产视频一区二区在线看| 国产精品98久久久久久宅男小说| 曰老女人黄片| 美女扒开内裤让男人捅视频| 欧美色欧美亚洲另类二区 | 亚洲欧美一区二区三区黑人| 90打野战视频偷拍视频| 精品国产美女av久久久久小说| 国产真人三级小视频在线观看| 日本五十路高清| 神马国产精品三级电影在线观看 | cao死你这个sao货| 午夜亚洲福利在线播放| 国产精品自产拍在线观看55亚洲| 久久精品人人爽人人爽视色| 国产三级黄色录像| 亚洲精品国产精品久久久不卡| 亚洲熟妇中文字幕五十中出| 长腿黑丝高跟| 国产av精品麻豆| 两个人视频免费观看高清| 色综合站精品国产| 久久香蕉国产精品| av有码第一页| 国产日韩一区二区三区精品不卡| 欧美中文综合在线视频| 亚洲天堂国产精品一区在线| 欧美日韩亚洲国产一区二区在线观看| 精品久久蜜臀av无| 亚洲一区高清亚洲精品| 国产精品亚洲av一区麻豆| 国产单亲对白刺激| 精品欧美一区二区三区在线| 自拍欧美九色日韩亚洲蝌蚪91| 国产片内射在线| 久久国产精品人妻蜜桃| 啦啦啦观看免费观看视频高清 | 成人av一区二区三区在线看| 久久久久久免费高清国产稀缺| 国产精品免费视频内射| 亚洲色图av天堂| 亚洲国产日韩欧美精品在线观看 | 99国产精品一区二区蜜桃av| 性色av乱码一区二区三区2| 国产精品爽爽va在线观看网站 | 久久国产精品影院| 色老头精品视频在线观看| 国产精品乱码一区二三区的特点 | 一二三四社区在线视频社区8| 天堂动漫精品| 日韩欧美三级三区| 国产一区二区在线av高清观看| 久久精品人人爽人人爽视色| 久久久久久久午夜电影| 欧美激情高清一区二区三区| 欧美日韩亚洲综合一区二区三区_| 免费高清在线观看日韩| 中文字幕另类日韩欧美亚洲嫩草| 极品教师在线免费播放| 日本a在线网址| 嫩草影院精品99| 久久人妻熟女aⅴ| 男人的好看免费观看在线视频 | 亚洲中文字幕一区二区三区有码在线看 | 美女高潮喷水抽搐中文字幕| 一区福利在线观看| 欧美av亚洲av综合av国产av| 村上凉子中文字幕在线| 国产野战对白在线观看| 嫩草影视91久久| 午夜视频精品福利| 欧美精品亚洲一区二区| 999久久久精品免费观看国产| 黑人巨大精品欧美一区二区mp4| 欧美精品亚洲一区二区| 欧美亚洲日本最大视频资源| 日本五十路高清| 涩涩av久久男人的天堂| 久久久国产欧美日韩av| 国产精品久久久久久精品电影 | 黄片小视频在线播放| 日韩欧美三级三区| 1024香蕉在线观看| 在线免费观看的www视频| 欧美老熟妇乱子伦牲交| 日韩欧美三级三区| 亚洲精品美女久久av网站| 亚洲激情在线av| 最近最新免费中文字幕在线| 国产精品香港三级国产av潘金莲| 日韩欧美一区视频在线观看| 1024香蕉在线观看| 国产一区二区在线av高清观看| 51午夜福利影视在线观看| 亚洲五月天丁香| 一区二区三区精品91| 热99re8久久精品国产| 大码成人一级视频| 人妻丰满熟妇av一区二区三区| 色综合婷婷激情| 美国免费a级毛片| 老熟妇乱子伦视频在线观看| 精品不卡国产一区二区三区| 少妇 在线观看| 亚洲精品在线观看二区| 国产又爽黄色视频| 两个人免费观看高清视频| 18禁国产床啪视频网站| АⅤ资源中文在线天堂| 19禁男女啪啪无遮挡网站| av免费在线观看网站| 欧美精品亚洲一区二区| 日本黄色视频三级网站网址| 妹子高潮喷水视频| 日韩免费av在线播放| 神马国产精品三级电影在线观看 | 日本a在线网址| cao死你这个sao货| 日韩大码丰满熟妇| 给我免费播放毛片高清在线观看| 99riav亚洲国产免费| 麻豆国产av国片精品| 成人三级做爰电影| 国产精品电影一区二区三区| 天天一区二区日本电影三级 | 夜夜爽天天搞| 一级,二级,三级黄色视频| 精品国产一区二区久久| 人人妻人人澡人人看| 日本三级黄在线观看| 啦啦啦观看免费观看视频高清 | 变态另类丝袜制服| 日本免费a在线| 电影成人av| 国产成人欧美在线观看| 黄色a级毛片大全视频| 国产免费男女视频| 18禁观看日本| 国产又色又爽无遮挡免费看| 日本精品一区二区三区蜜桃| 国产精品一区二区三区四区久久 | 麻豆成人av在线观看| 麻豆久久精品国产亚洲av| 午夜影院日韩av| 国产一区在线观看成人免费| 嫩草影院精品99| 欧美日本中文国产一区发布| 国产亚洲av嫩草精品影院| 国产激情久久老熟女| av电影中文网址| 一区二区三区高清视频在线| 日韩精品青青久久久久久| 1024香蕉在线观看| 美女高潮到喷水免费观看| 久久久久国内视频| 欧美成人免费av一区二区三区| 女人爽到高潮嗷嗷叫在线视频| 国产精品免费视频内射| 最好的美女福利视频网| www.999成人在线观看| 狠狠狠狠99中文字幕| 久99久视频精品免费| 法律面前人人平等表现在哪些方面| 可以在线观看毛片的网站| 亚洲午夜精品一区,二区,三区| 999精品在线视频| av欧美777| 成人亚洲精品一区在线观看| 亚洲精品久久国产高清桃花| 国产麻豆成人av免费视频| 亚洲国产精品久久男人天堂| 亚洲av成人一区二区三| 国产亚洲av高清不卡| 99国产极品粉嫩在线观看| 在线观看免费视频网站a站| 日韩三级视频一区二区三区| 午夜亚洲福利在线播放| 亚洲精华国产精华精| 在线观看免费午夜福利视频| 国产单亲对白刺激| 免费在线观看日本一区| 欧美日韩瑟瑟在线播放| 免费在线观看影片大全网站| 国产一区在线观看成人免费| 亚洲精品美女久久av网站| 亚洲一码二码三码区别大吗| 国产精品美女特级片免费视频播放器 | 99re在线观看精品视频| 99精品欧美一区二区三区四区| 制服丝袜大香蕉在线| 欧美乱妇无乱码| 久久草成人影院| 成人永久免费在线观看视频| 国产高清视频在线播放一区| 99热只有精品国产| 十八禁人妻一区二区| 亚洲第一电影网av| 亚洲最大成人中文| 精品久久久久久,| 极品教师在线免费播放| 日韩一卡2卡3卡4卡2021年| 国内精品久久久久精免费| 一二三四在线观看免费中文在| 欧美日本亚洲视频在线播放| 日韩三级视频一区二区三区| 亚洲五月婷婷丁香| 亚洲一区高清亚洲精品| 国产亚洲精品综合一区在线观看 | av视频在线观看入口| 波多野结衣一区麻豆| 91大片在线观看| 91在线观看av| bbb黄色大片| 成人18禁在线播放| 亚洲专区字幕在线| 好男人电影高清在线观看| 国产免费av片在线观看野外av| 久久久国产精品麻豆| 午夜精品在线福利| 高清在线国产一区| 久久久久国产精品人妻aⅴ院| 老熟妇仑乱视频hdxx| 国产成年人精品一区二区| 国产精华一区二区三区| 久久影院123| 夜夜看夜夜爽夜夜摸| 长腿黑丝高跟| 国产精品秋霞免费鲁丝片| 国产精品亚洲美女久久久| 99久久久亚洲精品蜜臀av| 亚洲男人天堂网一区| 亚洲中文av在线| 给我免费播放毛片高清在线观看| 国产av一区在线观看免费| 国产精品国产高清国产av| 99国产极品粉嫩在线观看| 久久久久久国产a免费观看| 精品欧美国产一区二区三| 日韩欧美国产在线观看| 9热在线视频观看99| 欧美在线黄色| 18禁美女被吸乳视频| 欧美成人免费av一区二区三区| 国产精品永久免费网站| 色婷婷久久久亚洲欧美| 婷婷精品国产亚洲av在线| 久久久久久大精品| 免费在线观看黄色视频的| 人人澡人人妻人| 亚洲人成网站在线播放欧美日韩| 搡老岳熟女国产| 制服丝袜大香蕉在线| 欧美色欧美亚洲另类二区 | 免费在线观看影片大全网站| 色综合亚洲欧美另类图片| 51午夜福利影视在线观看| 女人精品久久久久毛片| 亚洲中文日韩欧美视频| 色哟哟哟哟哟哟| 欧美激情 高清一区二区三区| 午夜福利在线观看吧| 国产亚洲欧美精品永久| 久久精品亚洲精品国产色婷小说| www.自偷自拍.com| 久久久水蜜桃国产精品网| 午夜精品在线福利| 国产日韩一区二区三区精品不卡| 又紧又爽又黄一区二区| av欧美777| 高清黄色对白视频在线免费看| 女人被狂操c到高潮| 精品国产国语对白av| 99久久久亚洲精品蜜臀av| 免费在线观看完整版高清| 母亲3免费完整高清在线观看| 色av中文字幕| 亚洲专区字幕在线| 涩涩av久久男人的天堂| 91成年电影在线观看| 美女 人体艺术 gogo| 麻豆一二三区av精品| 国产一级毛片七仙女欲春2 | 男女下面进入的视频免费午夜 | 每晚都被弄得嗷嗷叫到高潮| 国产精品二区激情视频| tocl精华| 人妻丰满熟妇av一区二区三区| 夜夜看夜夜爽夜夜摸| 99热只有精品国产| 欧美成狂野欧美在线观看| 午夜久久久久精精品| 免费无遮挡裸体视频| 中文字幕人成人乱码亚洲影| 一夜夜www| 人妻久久中文字幕网| 色婷婷久久久亚洲欧美| 搡老岳熟女国产| 精品免费久久久久久久清纯| 中文字幕色久视频| 搞女人的毛片| 精品国产一区二区三区四区第35| 日韩av在线大香蕉| 一卡2卡三卡四卡精品乱码亚洲| 欧美精品亚洲一区二区| 欧美午夜高清在线| tocl精华| 精品卡一卡二卡四卡免费| 国产男靠女视频免费网站| 91av网站免费观看| 色综合欧美亚洲国产小说| 欧美日韩精品网址| 在线免费观看的www视频| 男人操女人黄网站| 精品高清国产在线一区| 女人高潮潮喷娇喘18禁视频| 丝袜美腿诱惑在线| 可以免费在线观看a视频的电影网站| 少妇熟女aⅴ在线视频| 在线观看免费视频网站a站| 国产精品 国内视频| 九色国产91popny在线| 12—13女人毛片做爰片一| 久久久久久久午夜电影| 热99re8久久精品国产| 精品久久久精品久久久| 一区福利在线观看| 热99re8久久精品国产| 好看av亚洲va欧美ⅴa在| 日韩精品免费视频一区二区三区| 一级,二级,三级黄色视频| 亚洲欧美日韩高清在线视频| 久久人人97超碰香蕉20202| 日本免费a在线| 多毛熟女@视频| 亚洲第一青青草原| 中国美女看黄片| 国产精品电影一区二区三区| 日韩欧美国产一区二区入口| 久久精品国产亚洲av高清一级| 国产亚洲欧美精品永久| 精品少妇一区二区三区视频日本电影| 91精品三级在线观看| 精品一区二区三区四区五区乱码| 一本大道久久a久久精品| 精品一品国产午夜福利视频| 如日韩欧美国产精品一区二区三区| 国产精品电影一区二区三区| 999久久久国产精品视频| 国产黄a三级三级三级人| 老司机午夜十八禁免费视频| 亚洲国产高清在线一区二区三 | 亚洲最大成人中文| 十八禁网站免费在线| 女人精品久久久久毛片| 欧美成人午夜精品| 国产三级黄色录像| 欧美中文综合在线视频| 伊人久久大香线蕉亚洲五| 国产精品久久视频播放| 亚洲国产欧美网| 日韩欧美一区视频在线观看| 成年人黄色毛片网站| 超碰成人久久| 一二三四社区在线视频社区8| 狂野欧美激情性xxxx| 在线观看免费视频日本深夜| 国产精品爽爽va在线观看网站 | 国产精品九九99| www国产在线视频色| 亚洲精品中文字幕在线视频| 黄频高清免费视频| 亚洲色图综合在线观看| 久久国产精品男人的天堂亚洲| 18美女黄网站色大片免费观看| 久久 成人 亚洲| 久久亚洲精品不卡| 好男人在线观看高清免费视频 | 久久精品亚洲精品国产色婷小说| 人人妻人人爽人人添夜夜欢视频| 18禁黄网站禁片午夜丰满| 超碰成人久久| 男女床上黄色一级片免费看| 91av网站免费观看| 国产av一区二区精品久久| 视频在线观看一区二区三区| 日日爽夜夜爽网站| 日本 av在线| 欧美色视频一区免费| 国产精品亚洲美女久久久| 国产免费av片在线观看野外av| 亚洲一卡2卡3卡4卡5卡精品中文| 成人永久免费在线观看视频| 亚洲激情在线av| 两人在一起打扑克的视频| 欧美绝顶高潮抽搐喷水| 亚洲熟妇中文字幕五十中出| 久久草成人影院| 老司机靠b影院| 一个人观看的视频www高清免费观看 | 欧美精品亚洲一区二区| 91精品三级在线观看| 人妻久久中文字幕网| 亚洲熟女毛片儿| av在线天堂中文字幕| 欧美中文综合在线视频| 韩国精品一区二区三区| 日本 欧美在线| 国产伦一二天堂av在线观看| 视频区欧美日本亚洲| svipshipincom国产片| 伊人久久大香线蕉亚洲五| 日韩大码丰满熟妇| 欧美国产精品va在线观看不卡| 国产精品日韩av在线免费观看 | 美女免费视频网站| 99在线视频只有这里精品首页| 亚洲午夜精品一区,二区,三区| 啦啦啦 在线观看视频| 中文字幕最新亚洲高清| 国产在线观看jvid| 国产极品粉嫩免费观看在线| 国产精品亚洲一级av第二区| 俄罗斯特黄特色一大片| 久久人人爽av亚洲精品天堂| 亚洲国产精品999在线| 精品熟女少妇八av免费久了| 亚洲专区国产一区二区| 亚洲av成人av| 国产精品 欧美亚洲| 精品人妻1区二区| 99久久国产精品久久久| 国产99白浆流出| cao死你这个sao货| 国产亚洲精品综合一区在线观看 | 亚洲国产精品久久男人天堂| 欧美日本亚洲视频在线播放| 午夜精品久久久久久毛片777| 亚洲欧美精品综合一区二区三区| 国产精品av久久久久免费| 99精品在免费线老司机午夜| 中文字幕人妻丝袜一区二区| 自拍欧美九色日韩亚洲蝌蚪91| 黄色成人免费大全| 黄频高清免费视频| 在线观看舔阴道视频| 淫秽高清视频在线观看| 欧美一级a爱片免费观看看 | 首页视频小说图片口味搜索| 99久久久亚洲精品蜜臀av| 中亚洲国语对白在线视频| 天天一区二区日本电影三级 | 老司机在亚洲福利影院| 黄片小视频在线播放| 午夜久久久在线观看| 在线观看免费视频网站a站| 亚洲第一电影网av| 在线观看免费视频网站a站| 校园春色视频在线观看| 国产三级在线视频| 久久久国产成人免费| 不卡一级毛片| 黄频高清免费视频| 国产成人精品久久二区二区免费| 午夜a级毛片| 久99久视频精品免费| 手机成人av网站| 视频区欧美日本亚洲| 校园春色视频在线观看| 好男人电影高清在线观看| 亚洲精品久久国产高清桃花| 国产亚洲精品综合一区在线观看 | 欧美黄色淫秽网站| 欧美+亚洲+日韩+国产| 国产精华一区二区三区| 亚洲色图av天堂| 亚洲精品中文字幕一二三四区| 看黄色毛片网站| 日韩欧美三级三区| 久久热在线av| 搡老岳熟女国产| av福利片在线| 久久国产精品影院| 一个人观看的视频www高清免费观看 | 日韩三级视频一区二区三区| 久久国产精品人妻蜜桃| 精品国产美女av久久久久小说| 日韩一卡2卡3卡4卡2021年| 妹子高潮喷水视频| 久久性视频一级片| 老汉色∧v一级毛片| 可以在线观看的亚洲视频| 91字幕亚洲| 久久久精品国产亚洲av高清涩受| 亚洲 国产 在线| 亚洲人成伊人成综合网2020| 纯流量卡能插随身wifi吗| 国产欧美日韩综合在线一区二区| 黄网站色视频无遮挡免费观看| 视频在线观看一区二区三区| 国产亚洲av高清不卡| 日韩高清综合在线| 日韩中文字幕欧美一区二区| 久久久久九九精品影院| 精品一区二区三区视频在线观看免费| 国产成人影院久久av| 日韩精品中文字幕看吧| 国产精品av久久久久免费| 窝窝影院91人妻| 深夜精品福利| 中文字幕最新亚洲高清| 女生性感内裤真人,穿戴方法视频| 国产伦一二天堂av在线观看| 免费人成视频x8x8入口观看| 亚洲人成网站在线播放欧美日韩| 一边摸一边抽搐一进一小说| 国产一级毛片七仙女欲春2 | 高清毛片免费观看视频网站| 精品一区二区三区视频在线观看免费| 久久久国产成人免费| 999久久久国产精品视频| 两人在一起打扑克的视频| 中文字幕人成人乱码亚洲影| 色尼玛亚洲综合影院| 欧美激情 高清一区二区三区| 亚洲 欧美一区二区三区| 亚洲人成77777在线视频| 91九色精品人成在线观看| 叶爱在线成人免费视频播放| 亚洲国产日韩欧美精品在线观看 | 国产精品免费视频内射| 国产精华一区二区三区| 999精品在线视频| 久久九九热精品免费| 999久久久精品免费观看国产| 精品欧美国产一区二区三| 女人被躁到高潮嗷嗷叫费观| 在线观看免费午夜福利视频| 老汉色∧v一级毛片| 国产欧美日韩综合在线一区二区| 伊人久久大香线蕉亚洲五| 99久久综合精品五月天人人| 精品国产美女av久久久久小说| xxx96com| 国产三级黄色录像| 一级毛片高清免费大全| 亚洲无线在线观看| 美女国产高潮福利片在线看| 国产色视频综合| 好男人电影高清在线观看| 亚洲欧美精品综合久久99| 午夜免费观看网址| 久久 成人 亚洲|