胃癌及癌前病變中COX－2和VEGF－C蛋白表達(dá)及COX－2與H.pylori的相關(guān)性研究

陳美霓　郭巍　郭浩　郝琴　趙菊梅　魏曉麗　王愛(ài)紅　龐秋霞

胃癌及癌前病變中COX－2和VEGF－C蛋白表達(dá)及COX－2與H.pylori的相關(guān)性研究

陳美霓郭巍郭浩郝琴趙菊梅魏曉麗王愛(ài)紅龐秋霞

【摘要】目的研究COX－2蛋白和VEGF－C蛋白在胃癌及癌前病變中的表達(dá)，探討COX－2蛋白與幽門(mén)螺旋桿菌(H.pylori)的相關(guān)性。方法應(yīng)用免疫組化SP法檢測(cè)胃癌和其他非癌胃黏膜病變組織中COX－2、VEGF－C的陽(yáng)性表達(dá)情況;對(duì)所有病例采用甲苯胺藍(lán)染色法測(cè)定H.pylori感染狀況。結(jié)果COX－2、VEGF－C在胃癌中的陽(yáng)性表達(dá)率分別為64.4%，57.7%;胃癌組中H.pylori感染的COX－2表達(dá)率較未感染組顯著升高(P＜0.01)。在H.pylori感染的胃癌組與不典型增生組、慢性萎縮性胃炎組之間差異均有統(tǒng)計(jì)學(xué)意義(P＜0.01)。H.pylori感染的胃癌COX－2表達(dá)在高－中分化與低分化之間比較差異無(wú)統(tǒng)計(jì)學(xué)意義(P＞0.05)。結(jié)論COX－2、VEGF－C在胃癌組織中存在過(guò)度表達(dá); H.pylori感染導(dǎo)致胃癌組織中COX－2的表達(dá)上調(diào)，促進(jìn)其他非癌組織胃黏膜病變中COX－2的表達(dá)。

【關(guān)鍵詞】COX－2; VEGF－C;幽門(mén)螺旋桿菌;胃腫瘤;免疫組化

收稿日期:( 2015－03－17) ( 2015－01－09)

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【中圖分類號(hào)】R 735.2

【文獻(xiàn)標(biāo)識(shí)碼】A

【文章編號(hào)】1002－7386(2015)18－3735－03

doi:10.3969/j.issn.1002－7386.2015.18.004

【Abstract】Objective To investigate the expression of COX－2 and VEGF－C protein in gastric cancer and precancerous lesions，and to explore the relationship between COX－2 protein and Helicobacter pylori(H.pylori).Methods The expression levels of COX－2 and VEGF－C were detected by immunohistochemistry(SP)in gastric cancer and precancerous lesions.The H.pylori infection status was detected by Toluidine Blue Staining for all the subjects.Results The positive expression rates of COX－2 and VEGF－C in gastric cancer were 57.7%，64.4%，respecticvely.The positive expression rates of COX－2 in gastric cancer with H.pylori infection group were significantly increased，as compared with those in gastric cancer without H.pylori infection group(P＜0.01).Moreover there were significant differences between gastric cancer with H.pylori infection group and atypical hyperplasia group，chronic atrophic gastritis group(P＜0.01).However there were no significant differences in the expression levels of COX－2 in gastric cancer with H.pylori infection group between high－differentiation，median－differentiation and low－differentiation(P＞0.05).Conclusion There exists overexpression of COX－2 and VEGF－C in gastric cancer tissues.Moreover H.pylori infection can result in the up－regulation of COX－2 in gastric cancer tissue，and promot the expression of COX－2 in non cancer gastric mucosal lesions.

項(xiàng)目來(lái)源:陜西省衛(wèi)生廳科學(xué)研究項(xiàng)目(編號(hào): 2014D32);延安市科學(xué)技術(shù)研究發(fā)展計(jì)劃項(xiàng)目(編號(hào): 2013－KW15);陜西省高水平大學(xué)建設(shè)專項(xiàng)資金資助項(xiàng)目(編號(hào): 2013SXTSO2)

作者單位: 716000陜西省延安市，延安大學(xué)醫(yī)學(xué)院實(shí)驗(yàn)中心(陳美霓、郝琴、趙菊梅、魏曉麗、王愛(ài)紅、龐秋霞);延安大學(xué)醫(yī)學(xué)院附屬醫(yī)院(郭巍、郭浩)

通訊作者:郭浩，716000陜西省延安市，延安大學(xué)醫(yī)學(xué)院附屬醫(yī)院;

E－mail: fir07@ hotmail.com

Study on the expression and significance of COX－2，VEGF－C protein in gastric carcinoma and precancerous lesion

CHENMeini*，GUO Wei，GUO Hao，et al.*Medical Experiment Center，Yan’an Medical College of Yanan University，Shanxi，Yan’an 7160050，China

【Key words】COX－2; VEGF－C; H.pylori; gastric carcinoma; immunohistochemistry

研究顯示，胃癌是全球最常見(jiàn)腫瘤第四名，我國(guó)的胃癌發(fā)病率仍有上升趨勢(shì)［1］。中國(guó)胃癌的防治刻不容緩，幽門(mén)螺旋桿菌(H.pylori)感染導(dǎo)致慢性炎癥的發(fā)生是胃癌產(chǎn)生、發(fā)展的重要因素［2］。本實(shí)驗(yàn)對(duì)不同胃黏膜病變采用免疫組織化學(xué)SP染色法檢測(cè)中COX －2、VEGF－C的表達(dá)，探討COX－2、VEGF－C在胃癌及癌前病變表達(dá)的差異;結(jié)合COX－2在非癌組織及胃癌中H.pylori感染的關(guān)系，分析COX－2與H.py-

lori之間可能的致癌機(jī)制。

1　材料與方法

1.1材料收集2008年1月至2009年12月延安大學(xué)醫(yī)學(xué)院附屬醫(yī)院病理科胃癌根治術(shù)胃癌標(biāo)本45例和胃鏡活檢癌前病變標(biāo)本107例，其中慢性淺表性胃炎28例、慢性萎縮性胃炎25例、不典型增生54例，包括23例輕度不典型增生，31例中至重度不典型增生。其中胃癌標(biāo)本男26例，女19例;病理高－中分化30例、低分化15例;無(wú)淋巴轉(zhuǎn)移13例，有淋巴轉(zhuǎn)移32例;臨床早期29例，晚期16例。

1.2試劑與檢測(cè)方法兔抗人COX－2多克隆抗體、兔抗人VEGF－C多克隆抗體購(gòu)于北京中杉生物科技有限公司; SP(含DAB染色液)試劑盒購(gòu)于武漢博士德生物科技有限公司。采用SP免疫組織化學(xué)法，染色步驟嚴(yán)格按試劑盒說(shuō)明書(shū)進(jìn)行。抗原修復(fù)采用枸櫞酸鈉緩沖液高壓熱修復(fù)。COX－2、VEGF－C均為1∶100稀釋，以PBS代替一抗作為陰性對(duì)照。H.pylori感染采用甲苯胺藍(lán)染色法。

1.3結(jié)果判定由兩位病理科醫(yī)生診斷結(jié)果，以試劑公司提供的陽(yáng)性切片為陽(yáng)性對(duì)照。COX－2、VEGF－C主要為細(xì)胞漿著色，以出現(xiàn)棕黃色顆粒為陽(yáng)性表達(dá)。細(xì)胞染色強(qiáng)度等級(jí)判斷標(biāo)準(zhǔn):無(wú)著色為陰性，淡黃色為弱陽(yáng)性，棕黃色為中等陽(yáng)性，深棕色為強(qiáng)陽(yáng)性。H.pylori感染陽(yáng)性以鏡下見(jiàn)到染成藍(lán)紫色典型的螺旋形細(xì)菌為準(zhǔn)。

1.4統(tǒng)計(jì)學(xué)分析應(yīng)用SPSS 16.0統(tǒng)計(jì)軟件，計(jì)數(shù)資料比較采用χ2檢驗(yàn)，P＜0.05為差異有統(tǒng)計(jì)學(xué)意義。

2　結(jié)果

2.1 COX－2、VEGF－C蛋白在胃癌、非胃癌病變中的表達(dá)COX－2、VEGF－C在胃癌中的陽(yáng)性表達(dá)率分別為29/45(64.4%)、26/45(57.7%)。COX－2表達(dá)在胃癌與慢性淺表性胃炎、慢性萎縮性胃炎、輕度不典型增生間差異均有統(tǒng)計(jì)學(xué)意義(P＜0.05)，胃癌與重－中度不典型增生之間差異無(wú)統(tǒng)計(jì)學(xué)意義(P＞0.05)。VEGF －C表達(dá)在胃癌與其他非癌胃黏膜病變組織之間差異均有統(tǒng)計(jì)學(xué)意義(P＜0.05)。見(jiàn)圖1，表1。

圖1　COX－2、VEGF－C在胃癌中的陽(yáng)性表達(dá)(SP×400)

2.2 H.pylori感染情況與COX－2蛋白表達(dá)的關(guān)系

2.2.1不同疾病COX－2表達(dá)比較:慢性淺表性胃炎與慢性萎縮性胃炎組、不典型增生組、胃癌組間相比，H.pylori感染率差異有顯著性(P＜0.05)。在不同胃組織中，COX－2陽(yáng)性表達(dá)在H.pylori感染與未H.pylori感染之間比較(慢性淺表性胃炎因例數(shù)少不進(jìn)行統(tǒng)計(jì)學(xué)分析)，慢性萎縮性胃炎組、不典型增生組和胃癌組間差異均有統(tǒng)計(jì)學(xué)意義(χ2分別為1.103、1.174、

表1　COX－2、VEGF－C蛋白在胃癌、非胃癌病變中的表達(dá)例(%)

6.774，P＜0.05)。在H.pylori感染的不同胃組織中(慢性淺表性胃炎因例數(shù)少不進(jìn)行統(tǒng)計(jì)學(xué)分析)，慢性萎縮性胃炎、不典型增生與胃癌之間比較，差異有統(tǒng)計(jì)學(xué)意義(χ2分別為7.456、7.323，P＜0.01);慢性萎縮性胃炎、不典型增生組間差異無(wú)統(tǒng)計(jì)學(xué)意義(χ2= 0.236，P＞0.05)。見(jiàn)表2。

表2　H.pylori感染與胃癌、非胃癌病變中COX－2表達(dá)的關(guān)系例

2.2.2不同分化程度COX－2表達(dá)比較: H.pylori感染的胃癌COX－2表達(dá)在高－中分化與低分化之間比較差異無(wú)統(tǒng)計(jì)學(xué)意義(P =0.675，P＞0.05)。高－中分化胃癌及低分化胃癌中COX－2表達(dá)在有無(wú)H.pylori感染間比較差異無(wú)統(tǒng)計(jì)學(xué)意義(P =0.132，P＞0.05)。見(jiàn)表3。

3　討論

胃癌的演變過(guò)程是多因素、多步驟的，從慢性淺表性胃炎→慢性萎縮性胃炎→腸上皮化生→異型增生→胃癌。COX－2為可誘導(dǎo)型，一般正常組織較少表達(dá)，但可在炎癥中高水平表達(dá)。有研究證實(shí)，在癌前病變組織中可檢測(cè)到VEGF－C與COX－2表達(dá)［2，3］。COX－2在乳腺癌［4］、結(jié)腸癌［5］等組織中高表達(dá)。本實(shí)驗(yàn)結(jié)果顯示，VEGF－C與COX－2表達(dá)在癌前病變中的表達(dá)相對(duì)較少，在胃癌組織中呈高表達(dá)。VEGF－C在慢性淺表性胃炎，萎縮化生性病變中無(wú)表達(dá)，在輕度不典型增生組、中－重度不典型增生組、胃癌組呈逐步上升的趨勢(shì)。在慢性淺表性胃炎，萎縮化生性病變，不典型增生組、胃癌組中COX－2表達(dá)呈逐步上升的趨勢(shì)。除COX－2胃癌組與中－重度不典型增生外，VEGFC、COX－2其余各組與胃癌組相比均有統(tǒng)計(jì)學(xué)意義(P ＜0.05)。提示VEGF－C與COX－2在癌前病變中有重要作用，VEGF－C、COX－2異常表達(dá)很可能是胃癌的發(fā)生、發(fā)展中的重要危險(xiǎn)因素。

表3　H.pylori感染對(duì)不同分化程度胃癌COX－2陽(yáng)性表達(dá)的影響例

H.pylori感染是引起胃黏膜炎癥重要病因之一。在有H.pylori感染的胃癌中，腫瘤細(xì)胞容易發(fā)生細(xì)胞的遷移和淋巴轉(zhuǎn)移。COX－2在胃癌的發(fā)生、發(fā)展中密不可分。有學(xué)者將胃癌細(xì)胞株與H.pylori一同孵育，發(fā)現(xiàn)該組胃癌細(xì)胞中的COX－2及PGE2表達(dá)水平比胃癌細(xì)胞株與大腸桿菌共孵育組高［6］。另學(xué)者對(duì)小鼠制造H.pylori感染模型，再對(duì)小鼠進(jìn)行抗H.pylori治療，發(fā)現(xiàn)小鼠胃黏膜COX－2表達(dá)水平與動(dòng)物體內(nèi)H.pylori感染狀態(tài)具有一致的波動(dòng)［7］。目前H.pylori影響COX－2的機(jī)制尚不清楚，可能原因:(1)在H.pylori相關(guān)胃癌中，H.pylori導(dǎo)致的胃上皮細(xì)胞COX－2啟動(dòng)子甲基化喪失導(dǎo)致細(xì)胞凋亡和增殖平衡失調(diào)來(lái)促進(jìn)此類胃癌發(fā)生［8］;(2)H.pylori與COX－2基因－1195G＞A多態(tài)位點(diǎn)的作用復(fù)雜，可直接導(dǎo)致COX－2蛋白水平的表達(dá)［9］。本實(shí)驗(yàn)結(jié)果顯示，全部病例H.pylori感染率為53.9%，胃癌前病變組H.pylori的檢出率最高，下來(lái)為胃癌組，其次為淺表性胃炎，說(shuō)明H.pylori參與了胃癌前病變和胃癌的發(fā)展過(guò)程。各組感染率與淺表性胃炎組相比較均有統(tǒng)計(jì)學(xué)意義(P＜0.05)。本次實(shí)驗(yàn)結(jié)果顯示，不同的胃黏膜病變中COX－2陽(yáng)性表達(dá)率與有無(wú)H.pylori感染之間差異具有統(tǒng)計(jì)學(xué)意義(P＜0.05)，胃癌COX－2陽(yáng)性表達(dá)與有無(wú)H.pylori感染之間具有顯著地統(tǒng)計(jì)學(xué)差異(P＜0.01)，提示H.pylori感染促進(jìn)不同胃黏膜COX －2的表達(dá)。實(shí)驗(yàn)還發(fā)現(xiàn)，不同分化程度的胃癌COX －2陽(yáng)性表達(dá)與有無(wú)H.pylori感染無(wú)統(tǒng)計(jì)學(xué)差異(P ＞0.05)，認(rèn)為H.pylori感染對(duì)不同分化程度胃癌的COX－2表達(dá)無(wú)相關(guān)。提示H.pylori感染誘導(dǎo)不同胃黏膜病變中COX－2的表達(dá)，但與胃癌分化程度無(wú)關(guān)?？傊琀.pylori感染誘發(fā)多種致炎因子導(dǎo)致胃部的炎癥發(fā)生［10］，使COX－2表達(dá)的增加。H.pylori通過(guò)促進(jìn)不同胃黏膜病變中COX－2的表達(dá)上調(diào)，致胃黏膜慢性活動(dòng)性炎癥的加重，促進(jìn)胃癌的發(fā)生，是胃癌的重要致病因素之一。

綜上所述，COX－2、VEGF－C共同促進(jìn)胃癌的淋巴轉(zhuǎn)移，可作為臨床判斷腫瘤的侵襲性及轉(zhuǎn)移潛能的參考指標(biāo)。H.pylori與COX－2的復(fù)雜交互作用在惡性轉(zhuǎn)化過(guò)程中發(fā)揮了重要的作用。H.pylori感染可導(dǎo)致胃癌組織中COX－2的表達(dá)水平上調(diào)，并胃癌發(fā)展具有促進(jìn)的作用。根除H.pylori可抑制胃黏膜病變COX－2表達(dá)，是降低胃癌潛在危險(xiǎn)的一個(gè)重要途徑。

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