高脂飲食誘發(fā)的肥胖型高血壓大鼠增加脂肪肝以及血管重構

劉 馳，李 鵬，楊 蕓，李 暢，許 菲，孫 偉，孔祥清*

（南京醫(yī)科大學第一附屬醫(yī)院心臟科，江蘇 南京市 210000）

高脂飲食誘發(fā)的肥胖型高血壓大鼠增加脂肪肝以及血管重構

劉 馳，李 鵬，楊 蕓，李 暢，許 菲，孫 偉，孔祥清*

（南京醫(yī)科大學第一附屬醫(yī)院心臟科，江蘇 南京市 210000）

過度肥胖是心血管疾病主要的影響因素之一。目前的研究主要是確定高脂肪飲食誘發(fā)的肥胖型高血壓對肝疾病、血管重構以及血清中的脂肪因子表達的作用。四周雄性Sprague-Dawley （SD）喂養(yǎng)高脂飲食（HFD，45%脂肪）或對照飲食（12%脂肪）12周。與對照的飲食大鼠相比，HFD飲食大鼠的體重、收縮壓、血清甘油三酯水平以及腎周圍脂肪細胞都明顯升高。HFD大鼠的胸主動脈，心臟小動脈以及腸系膜動脈纖維化現顯著地增加。同時HFD大鼠的胸主動脈的壁血管中膜厚度（M）以及胸主動脈的中膜厚度/管腔直徑（M/L）出現顯著的增大。與對照飲食大鼠相比， HFD大鼠血清中的Endocan，leptin以及RANTES 水平顯著增加。Endocan，leptin以及RANTES在HFD誘發(fā)的肥胖性高血壓起著重要的作用。

肥胖；高血壓；脂肪因子；肝?。谎苤貥?/p>

代謝綜合征由糖尿病，高血壓，血脂異常構成，代謝綜合征與中心性肥胖發(fā)展有關。腹部的內臟對血壓有顯著性影響[1]。肥胖會增加患高血壓和心血管疾病的風險。在兒童中，肥胖會引起嚴重的并發(fā)癥，而且肥胖會增加心血管危險因素的患病率，這些心血管危險因素如：高血壓、高甘油三酯血癥、低高密度脂蛋白膽固醇，葡萄糖的新陳代謝。富含高脂肪的食物會引發(fā)交感激活以及高血壓，而且會誘發(fā)肥胖相關的代謝紊亂。高脂肪飲食被廣泛地用于誘導肥胖以及高血壓疾病模型。眾所周知，非乙醇性脂肪肝（NAFLD）是慢性肝病最為普通的形式，該病與肥胖以及胰島素抵抗密切相關[2]。在2型糖尿病，肥胖和肝臟疾病之間存在密切的相互作用。研究表明，比起普通喂食的老鼠組，在喂食高脂肪的大鼠組中，大鼠肝臟中出現了更顯著地脂肪細胞的滲透。而且高脂飲食提升了大鼠肝的重量以及肝臟三酰甘油含量。

1 材料與方法

1.1 動物

本實驗采用雄性Sprague-Dawley （SD）大鼠，4周齡，由南京醫(yī)科大學實驗動物中心提供，實驗操作均嚴格遵守美國國家衛(wèi)生機構發(fā)布的《實驗動物保護和使用指南》（NIH，Publication No.85-23，1996修訂版）。實驗大鼠在溫度22℃、濕度30～40%的環(huán)境中飼養(yǎng)，自由飲水和攝食。大鼠隨機分成2組：對照飲食組（12%脂肪）和HFD組（45%脂肪），喂養(yǎng)12周

1.2 體重以及血壓測試

對大鼠體重進行每周記錄，在第12周，采用無創(chuàng)尾動脈測壓系統系統（NIBP，ADInstruments， Australia）檢測清醒大鼠的尾動脈收縮壓。為了減小緊張導致的SBP波動，我們通過每天對大鼠進行SBP測試，至少要堅持10天。在測試之前，我們要把大鼠在28℃溫熱大鼠10～20 min，這主要是為了監(jiān)測尾動脈脈動，這是為了獲得穩(wěn)定的脈動。檢測8～10次，獲得SBP平均值。

1.3 油紅,蘇木精-伊紅和馬松染色

獲得肝臟，、腎周脂肪組織、心臟、胸主動脈和腸系膜動脈，然后固定、切片。使用油紅染色肝臟，蘇木精-伊紅染色腎周脂肪，馬松染色標記心、胸主動脈和腸系膜動脈。

1.4 統計學方法

采用SPSS 18.0軟件對數據進行統計分析。計量資料以“±s”表示，采用t檢驗，以P＜0.05為差異有統計學意義。

2 結 果

2.1 體重，血壓，以及生化參數

喂食12周HFD的大鼠的體重明顯高于對照飲食大鼠（見圖1A），比起控制飲食的老鼠；HFD大鼠的SBP也比較高（見圖1B）。在HFD大鼠中（見圖1C），血清TG含量明顯升高。但是HFD大鼠血清TCH，HDLC，LDLC含量與對照飲食大鼠無明顯區(qū)別（見圖1D，E，以及F）。

2.2 HFD對肝以及腎周脂肪組織影響

在HFD大鼠中，肝脂肪含量顯著地提高（見圖2B以及C）。于對照飲食大鼠來說，在HFD大鼠中腎周脂肪組織的直徑與面積顯著性增加（見圖2C，D以及E）。

2.3 蛋白質芯片

測定三十個脂肪因子，HFD老鼠血清中 Endocan，leptin以及RANTES含量增加。但是對照飲食以及HFD大鼠之間，在其他的27個脂肪因子中，沒有明顯的不同，這其中包括血管生成素樣蛋白3，趨化因子配體2（CCL2），集落刺激因子（CSF-1），delta類1同族體（DLK-1），二肽基肽酶4（DPP4），纖維母細胞生長因子21（FGF-21），肝細胞生長因子（HGF），抗細胞間粘附分子-1（ICAM-1），胰島素樣生長因子-1（IGF-1），類胰島素生長因子結合蛋白-1（IGFBP-1），IGFBP-2，IGFBP-3，IGFBP-5，IGFBP-6，白介素-1β（IL-1b），IL-6，IL-10，IL-11，白血病抑制因子（LIF），脂質運載蛋白-2，晚期糖化終產物受體（RAGE），抵抗素，絲氨酸肽酶抑制劑，進化枝E，成員1（serpin E1），組織基質金屬蛋白酶抑制物-1，腫瘤壞死因子-alpha（TNF-a），血管內皮生長因子（VEGF）。

3 討 論

在目前研究中，我們發(fā)現如下：與對照飲食大鼠相比，HFD大鼠的體重、血清TG含量以及SBP都顯著性。在HFD大鼠中，肝中的脂肪含量也顯著地提高。同時腎周脂肪細胞的直徑以及面積增加，而且胸主動脈，心臟小動脈以及腸系膜動脈纖維化顯著地增加。

肥胖問題是一個逐漸增加的負擔，由于在能量消耗與熱量攝入之間存在著不平衡，這是導致肥胖的基礎，這從而導致脂肪在白色脂肪組織儲存處的積累。肥胖以體重增加為特征，這從而導致過量脂肪的儲存，肥胖是發(fā)病和死亡較高的主要原因，它能夠引起許多疾病，這包括代謝綜合癥、糖尿病、心血管疾病、脂肪肝疾病以及癌癥。

眾所周知，肥胖會增加患高血壓以及心腦血管疾病的風險。HFD通常被廣泛地用于誘導肥胖與高血壓。Dobrian等發(fā)現HFD導致大約一半的SD大鼠出現肥胖。盡管如此，Nagae等人發(fā)現，比起喂食低脂肪食物的大鼠，所有喂食HFD的大鼠體重增加更多，而且在喂食低脂肪的以及HFD的大鼠之間，在血清的膽固醇、甘油三酯和游離脂肪酸并沒有出現明顯的不同。在喂食HFD初期，這種差異可能歸因于年齡的差異。在目前的研究中，平均體重為90g的大鼠被用于喂食HFD，3周之后，比起控制飲食的大鼠，HFD的大鼠體重較高。而且比起對照飲食的大鼠，HFD大鼠中SBP也比較高。在HFD大鼠中，血清TG水平也增加了。但是，在對照飲食以及HFD大鼠中，血清TCH.HDLC，LDLC水平并沒有明顯的差異。

在世界范圍之內，病態(tài)性肥胖是慢性肝疾病最普遍的誘因之一。在HFD后代中，肝三酰甘油增加了。用高脂肪食物喂食4周之后，SD大鼠會出現單純性脂肪肝，而且在低12周，它會演變成脂肪性肝炎。在目前的研究中，其中比起普通進食的大鼠來說，油紅染色顯示HFD飲食有大量脂肪浸潤。在HFD大鼠中，腎周脂肪細胞的直徑以及面積增加了。所得結果表明喂食HFD的大鼠被用于建立NAFLD模型。

中樞Endocan-nabinoid系統激活促進了食物的攝取。用HFD喂食的C5BL/6J小鼠血清中Leptin的水平明顯增加。RANTES以及其受體在肥胖的皮下脂肪組織中顯著地增加。在此研究中，檢測30種脂肪因子，與對照飲食的大鼠相比，肥胖大鼠血清中Endocan，leptin以及RANTES增加。所得結果表明在HFD誘發(fā)的肥胖型高血壓中，Endocan，leptin以及RANTES起著重要的作用。

總之，與對照飲食大鼠相比，HFD大鼠的體重、SBP以及血清TG含量都顯著性升高。在HFD的大鼠中，肝中的脂肪細胞的浸潤顯著地增加。比起對照飲食的大鼠，肥胖大鼠腎周脂肪細胞的直徑以及面積增加。在HFD大鼠中，胸主動脈，心臟小動脈和腸系膜動脈纖維化顯著地增加。在HFD大鼠中，血清中Endocan，leptin以及RANTES增加。而且這三個脂肪因子在HFD誘發(fā)的肥胖型高血壓中起著關鍵的作用。

[1]Fink GD： Does our fat tell our brain what to do? A sympathetic' appraisal,J Physiol 2010, 588：1389-1390

[2]Takeuchi M,Takino J,Sakasai-Sakai A,Takata T,Ueda T,Tsutsumi M,Hyogo H,Yamagishi S：Involvement of the TAGE-RAGE system in non-alcoholic steatohepatitis：Novel treatment strategies,World J Hepatol 2014, 6：880-893

本文編輯：李 豆

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ISSN.2095-6681.2016.36.143.02

中國國家自然科學基金支持（號：81400315）

孔祥清