晚發(fā)型子癇前期患者血清、尿液2-甲氧雌二醇水平及胎盤COMT蛋白表達(dá)及意義

黃麗瓊，張?jiān)? 1咸寧市中心醫(yī)院同濟(jì)咸寧醫(yī)院，湖北咸寧437000;武漢大學(xué)中南醫(yī)院)

晚發(fā)型子癇前期患者血清、尿液2-甲氧雌二醇水平及胎盤COMT蛋白表達(dá)及意義

黃麗瓊1，2，張?jiān)?
( 1咸寧市中心醫(yī)院同濟(jì)咸寧醫(yī)院，湖北咸寧437000;2武漢大學(xué)中南醫(yī)院)

摘要:目的探討2-甲氧雌二醇( 2-ME)、兒茶酚胺氧位甲基轉(zhuǎn)移酶( COMT)蛋白在晚發(fā)型子癇前期( PE)發(fā)病中的作用。方法選取孕周＞34周的晚發(fā)型PE患者25例(觀察組)，同期正常單胎妊娠孕婦35例(對照組)。采用全自動(dòng)酶標(biāo)儀檢測血清及尿液2-ME水平，Western blotting法檢測胎盤組織COMT蛋白相對表達(dá)量。結(jié)果觀察組血清、尿液2-ME分別為( 595.3±21.8)、( 407.8±16.3) pg/mL，對照組分別為( 407.8±23.9)、( 298.4±18.1) pg/mL;兩組比較，P均＜0.05。觀察組胎盤COMT蛋白相對表達(dá)量為1.48±0.66，對照組為1.39±0.58;兩組比較，P＞0.05。結(jié)論晚發(fā)型PE患者血清、尿液2-ME水平升高，胎盤COMT蛋白表達(dá)無明顯變化; 2-ME可能是其發(fā)病過程中的一種代償性保護(hù)因子，而COMT蛋白可能與晚發(fā)型PE的發(fā)生關(guān)系不大。

關(guān)鍵詞:晚發(fā)型子癇前期;兒茶酚胺氧位甲基轉(zhuǎn)移酶; 2-甲氧雌二醇

子癇前期( PE)是一種以血壓升高及蛋白尿?yàn)榕R床特征的疾病，早期妊娠時(shí)滋養(yǎng)細(xì)胞的淺植入導(dǎo)致胎盤功能不良是早發(fā)型PE的發(fā)病機(jī)制之一，而關(guān)于晚發(fā)型PE的發(fā)病機(jī)制尚不明確［1，2］。兒茶酚胺氧位甲基轉(zhuǎn)移酶( COMT)是一種甲基化酶，17β雌二醇經(jīng)細(xì)胞色素P450酶羥基化后，經(jīng)COMT甲基化，繼而形成2-甲氧雌二醇( 2-ME)。近期研究表明，早發(fā)型重度PE患者血清2-ME水平及胎盤COMT蛋白表達(dá)明顯低于正常妊娠孕婦［3］，但是其在晚發(fā)型PE發(fā)生中作用的研究相對較少。為此，我們進(jìn)行了如下研究。

1　資料與方法

1.1臨床資料選擇2013年1月～2014年1月咸寧市中心醫(yī)院同濟(jì)咸寧醫(yī)院收治的孕周＞34周的晚發(fā)型PE［4］患者25例(觀察組)，同期正常單胎妊娠孕婦35例作為對照組，兩組均為單胎孕晚期、剖宮產(chǎn)分娩，排除合并慢性高血壓、肝腎疾病、心臟病、糖尿病及甲狀腺功能亢進(jìn)或減退者。觀察組年齡( 30.3±3.2)歲，孕周( 35.3±1.6)周，孕前BMI ( 23.0±2.8) kg/m2，收縮壓( 172.8±13.5) mmHg、舒張壓( 110.3±8.2) mmHg;對照組年齡( 30.4± 4.3)歲，孕周( 38.2±1.2)周，孕前BMI( 21.9± 2.8) kg/m2，收縮壓( 115.8±12.4) mmHg、舒張壓( 75.3±7.8) mmHg。兩組基本資料除血壓外均具有可比性。

1.2血清及尿液2-ME水平檢測兩組均于剖宮產(chǎn)術(shù)前30 min用EDTA抗凝管采集外周肘靜脈血3 mL，1 000 r/min離心15 min，取上層血漿置于－80℃冰箱保存待測。無菌容器留取新鮮尿液5 mL，1 500 r/min離心20 min，取上清液置－80℃冰箱保存待測。采用全自動(dòng)酶標(biāo)儀檢測血清及尿液2-ME，標(biāo)本均同批測定，批內(nèi)變異＜5%。

1.3胎盤COMT蛋白表達(dá)檢測采用Western blotting法。兩組胎盤娩出5 min內(nèi)，避開鈣化、壞死及出血區(qū)，于胎盤中央母體面取0.5 cm×0.5 cm×0.5 cm的組織，立即置于液氮冷凍，－80℃低溫冰箱保存待測。取適量組織樣品采用RIPA裂解液充分勻漿，12 000 r/min離心5 min后取上清，提取組織總蛋白。BCA法測定蛋白濃度，SDS PAGE電泳后將目的蛋白和內(nèi)參蛋白( GAPDH)轉(zhuǎn)移到PVDF膜上( 4℃，100 V，120 min)，洗膜后5%脫脂奶粉封閉1 h。加入一抗4℃孵育過夜充分洗膜，加入二抗37℃孵育1 h。再次洗膜后加ECL化學(xué)發(fā)光液，暗室曝光顯影。目的蛋白相對表達(dá)量以目的蛋白與GAPDH的條帶灰度值的比值表示。

1.4統(tǒng)計(jì)學(xué)方法采用SPSS17.0統(tǒng)計(jì)軟件。計(jì)量資料以珋x±s表示，組間比較采用t檢驗(yàn)。P＜0.05為差異有統(tǒng)計(jì)學(xué)意義。

2　結(jié)果

兩組血清及尿液2-ME水平、胎盤COMT蛋白表達(dá)比較見表1。

表1　兩組血清及尿液2-ME水平、胎盤COMT蛋白表達(dá)比較(珔x±s)

3　討論

目前多數(shù)國內(nèi)外學(xué)者認(rèn)為，胎盤血管形成不良導(dǎo)致胎盤缺氧是PE發(fā)病的關(guān)鍵因素。2-ME是17β雌二醇的代謝產(chǎn)物之一，主要由胎盤COMT甲基化產(chǎn)生，大量研究證實(shí)其具有抗增殖、促進(jìn)凋亡及抗血管生長等作用［5，6］。新近研究顯示，2-ME在缺氧情況下可通過促進(jìn)絨毛滋養(yǎng)細(xì)胞浸潤生長和血管生成來改善胎盤血液循環(huán)，并影響胚胎生長［3，7］?？扇苄匝軆?nèi)皮生長因子受體1( sFlt-1)是參與PE發(fā)病的重要因子，可導(dǎo)致促血管生成因子下降、內(nèi)皮細(xì)胞損傷以及滋養(yǎng)層侵襲不足等。缺氧誘導(dǎo)因子1a ( HIF-1a)在缺氧狀態(tài)下上調(diào)sFlt-1表達(dá)，而2-ME可以通過抑制HIF-1a的活化來改善胎盤缺氧狀態(tài)［8］。

研究發(fā)現(xiàn)，重度PE患者胎盤組織中COMT表達(dá)降低［9］。有研究將孕鼠的COMT基因敲除后發(fā)現(xiàn)，孕鼠血清2-ME水平降低、HIF-1a升高，產(chǎn)生類似PE的表現(xiàn);而補(bǔ)充2-ME后，HIF-1a水平降低，PE樣癥狀減輕，表明COMT/2-ME缺陷在PE的發(fā)病中起重要作用［3］。本研究中，觀察組血清、尿液2-ME水平均顯著高于對照組，而兩組胎盤COMT蛋白相對表達(dá)量比較則無統(tǒng)計(jì)學(xué)差異。表明晚發(fā)型PE患者血清中2-ME水平升高不是由于腎臟排泄減少而引起的，推測2-ME是晚發(fā)型PE發(fā)病過程中的一種代償保護(hù)因子，而COMT蛋白可能與晚發(fā)型PE的發(fā)生關(guān)系不大。

COMT/2-ME如何參與PE的發(fā)病目前尚不明確。研究發(fā)現(xiàn)，2-ME可能通過抑制HIF-1a和sFlt1以外的機(jī)制保護(hù)血管并維持其正常功能［10］，其內(nèi)皮血管舒張作用可能對高血壓、肺動(dòng)脈高壓、腎病、缺血性腦損傷的防治均有積極意義［11］。研究發(fā)現(xiàn)，胎盤COMT表達(dá)降低與妊娠期高血壓疾病的發(fā)生有關(guān)聯(lián)。Lee等［12］研究發(fā)現(xiàn)，COMT缺乏可能是PE發(fā)生的啟動(dòng)因素。Hertig等［13］研究發(fā)現(xiàn)，PE孕婦孕早期時(shí)伴有血清2-ME水平下降，孕32～34周時(shí)與正常妊娠孕婦比較無明顯差異，而晚發(fā)型PE患者血清2-ME水平高于正常妊娠孕婦。Palmer等［14］和Seol等［15］研究發(fā)現(xiàn)，重度PE患者胎盤COMT表達(dá)與正常足月妊娠孕婦比較無統(tǒng)計(jì)學(xué)差異。以上研究結(jié)果與本研究存在差異，可能與研究人群的種族、孕齡及檢測方法不同有關(guān)。

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收稿日期:( 2015-01-07)

文章編號(hào):1002-266X( 2015) 32-0070-02

文獻(xiàn)標(biāo)志碼:B

中圖分類號(hào):R714.244

doi:10.3969/j.issn.1002-266X.2015.32.029