靶向PDGFR-α mRNA的RNA干擾抑制實(shí)驗(yàn)性增生性玻璃體視網(wǎng)膜病變

孟　竹，彭燕一，秦賢杰

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·實(shí)驗(yàn)論著·

靶向PDGFR-α mRNA的RNA干擾抑制實(shí)驗(yàn)性增生性玻璃體視網(wǎng)膜病變

孟竹1，彭燕一2，秦賢杰1

Inhibition of targeted platelet-derived growth factor receptor-α RNA interference into vitreous cavity for experimental proliferative vitreoretinopathy

Citation:Meng Z, Peng YY, Qin XJ.Inhibition of targeted platelet-derived growth factor receptor α RNA interference into vitreous cavity for experimental proliferative vitreoretinopathy.GuojiYankeZazhi(IntEyeSci) 2016;16(1):24-27

摘要

目的：觀察血小板源性生長(zhǎng)因子-α受體(platelet-derived growth factor receptor，PDGFR-α)mRNA的RNA干擾抑制實(shí)驗(yàn)性增生性玻璃體視網(wǎng)膜病變(proliferative vitreoretinopathy, PVR)的效果。

方法：選擇PDGFR-α shRNA/lip2000比值1∶1、1∶2、1∶3(其中PDGFR-α shRNA分別為2μg、3μg和4μg)制備復(fù)合物轉(zhuǎn)染至人視網(wǎng)膜色素上皮細(xì)胞(human retinal pigment epithelium，HRPE)中，24h后分別取0.1mL注射到家兔玻璃體腔。選取健康成年有色家兔40只隨機(jī)分為平衡鹽溶液(balanced salt solution, BSS)組(N組)，含lipofectamineTM2000的HRPE細(xì)胞稀釋液組(A組)，取最佳轉(zhuǎn)染效率的1.0、1.5與2.0μmol/L含PDGF-α受體的shRNA及l(fā)ipofectamineTM2000的HRPE細(xì)胞稀釋液組(B、C和D組)，每組8眼，右眼為實(shí)驗(yàn)眼。間接眼底鏡觀察PVR程度，免疫組織化學(xué)染色進(jìn)行切片著色情況觀察及組織病理學(xué)觀察眼底改變。

結(jié)果：PDGFR-α shRNA/lip2000比值1∶2時(shí)，HRPE細(xì)胞最佳轉(zhuǎn)染效率；B組、C組和D組PVR程度、組織病理學(xué)改變、免疫組織化學(xué)染色PDGFR-α濃度低于A組，D組比B組和C組更低。

結(jié)論：PDGF-α受體mRNA的RNA干擾對(duì)實(shí)驗(yàn)性PVR形成有抑制作用。

關(guān)鍵詞：視網(wǎng)膜色素上皮細(xì)胞；增生性玻璃體視網(wǎng)膜病變；PDGF-α受體；RNA干擾

引用：孟竹，彭燕一，秦賢杰.靶向PDGFR-α mRNA的RNA干擾抑制實(shí)驗(yàn)性增生性玻璃體視網(wǎng)膜病變.國(guó)際眼科雜志2016;16(1):24-27

0引言

增生性玻璃體視網(wǎng)膜病變(proliferative vitreoretinopathy，PVR)是在巨大視網(wǎng)膜裂孔、多發(fā)視網(wǎng)膜裂孔、眼外傷以及眼內(nèi)炎癥等因素作用下視網(wǎng)膜或玻璃體表面形成增殖纖維膜繼而收縮、牽拉引起視網(wǎng)膜脫離的一種嚴(yán)重眼病。近年來(lái)隨著玻璃體手術(shù)的普及，各種復(fù)雜的視網(wǎng)膜脫離雖然能達(dá)到解剖復(fù)位，但阻止其再發(fā)生卻很難。因此，如何有效診治PVR成為眼科醫(yī)生的難題。基因治療是日漸興起的一種行之有效的方法，RNA干擾(RNA interference，RNAi)技術(shù)的日趨成熟完善為PVR提供了基因治療的可能性。目前國(guó)內(nèi)甚少見(jiàn)到靶向血小板源性生長(zhǎng)因子-α(platelet-derived growth factor, PDGF-α)受體RNA干擾治療PVR的臨床和實(shí)驗(yàn)報(bào)道，因此我們擬構(gòu)建PDGF-α受體具有轉(zhuǎn)錄功能的短發(fā)卡RNA(shRNA)，觀察其對(duì)PVR發(fā)生、發(fā)展的抑制作用。

1材料和方法

1.1材料

1.1.1實(shí)驗(yàn)動(dòng)物與分組有色體健家兔40只，雄性，無(wú)眼疾史，體質(zhì)量2.0～2.5kg，桂林醫(yī)學(xué)院實(shí)驗(yàn)動(dòng)物中心提供。右眼為實(shí)驗(yàn)眼，常規(guī)飼養(yǎng)。隨機(jī)分為5組，每組8只：N組(正常對(duì)照組)玻璃體內(nèi)注射 0.1mL的平衡鹽溶液(balanced salt solution， BSS)；A組(空白對(duì)照組)玻璃體內(nèi)注射0.1mL含lipofectamineTM2000 HRPE細(xì)胞稀釋液的HRPE細(xì)胞；B、C、D組(實(shí)驗(yàn)組)玻璃體內(nèi)分別注射0.1mL的1.0、1.5、2.0μmol/L PDGFR-α shRNA及l(fā)ipofectamineTM2000 HRPE細(xì)胞稀釋液。

1.2方法

1.2.1細(xì)胞傳代與培養(yǎng)在37℃、CO2體積分?jǐn)?shù)為5%的培養(yǎng)箱中，HRPE細(xì)胞采用加10%血清及1%抗青霉素、鏈霉素的DMEM培養(yǎng)基傳代培養(yǎng)，倒置顯微鏡觀察，細(xì)胞貼壁后2d換液，每隔2～3d以2.5g/L胰酶消化、傳代。

1.2.2細(xì)胞轉(zhuǎn)染取對(duì)數(shù)生長(zhǎng)期細(xì)胞接種于6孔板中，調(diào)整細(xì)胞濃度至每孔0.5×106個(gè)，待細(xì)胞生長(zhǎng)至90%以上融合時(shí)轉(zhuǎn)染，具體轉(zhuǎn)染方法見(jiàn)參考文獻(xiàn)[1]，選取最佳PDGFR-α shRNA/lip2000轉(zhuǎn)染比值。細(xì)胞分為1.0、1.5和2.0μmol/L三個(gè)PDGFR-α shRNA濃度組及空白對(duì)照組，轉(zhuǎn)染4～6h后換液，1d后將6孔板置于熒光顯微鏡下觀察，轉(zhuǎn)染率達(dá)60%以上的細(xì)胞可用于注射。將上述細(xì)胞濃度調(diào)整為2.0×106個(gè)/mL，分別用一次性1mL無(wú)菌注射器取0.1mL HRPE細(xì)胞稀釋液于30min內(nèi)進(jìn)行玻璃體內(nèi)注射。

1.2.3動(dòng)物眼內(nèi)注射按1.1.1分組中方法注射，氯霉素滴眼液于術(shù)前3d滴眼，6次/d；托吡卡胺充分散瞳；愛(ài)爾卡因滴眼液滴眼進(jìn)行眼表面麻醉，在顳上象限角鞏膜緣后4～5mm處用一次性1mL注射器向玻璃體中央刺入，進(jìn)針深度約為5mm，分別注入不同濃度的HPRE細(xì)胞稀釋液或BSS 0.1mL，出針后無(wú)菌棉簽按壓針孔5～10s，術(shù)后及術(shù)后3d用妥布霉素地塞米松滴眼液點(diǎn)眼6次/d，防止感染。分別觀察術(shù)后1、2、3、4wk家兔實(shí)驗(yàn)眼玻璃體有無(wú)感染、出血等并發(fā)癥，若玻璃體內(nèi)出現(xiàn)絮狀增殖條帶，并且增多發(fā)生牽拉，甚至發(fā)生視網(wǎng)膜脫離則表明PVR形成。

1.2.4臨床PVR分級(jí)觀察用復(fù)方托吡卡胺滴眼液充分散瞳后，直接檢眼鏡分別于術(shù)前和術(shù)后1、2、3、4wk進(jìn)行檢查，記錄實(shí)驗(yàn)眼PVR的級(jí)別，PVRⅢ～Ⅴ級(jí)為發(fā)生牽拉性視網(wǎng)膜脫離(traction retinal detachment，TRD)，計(jì)算TRD發(fā)生率。按Fasternburg分級(jí)原則將PVR分為5個(gè)級(jí)別[2]：Ⅰ級(jí)：玻璃體內(nèi)可見(jiàn)增殖條帶；Ⅱ級(jí)： 局灶性牽拉等；Ⅲ級(jí)：髓線處的局部視網(wǎng)膜脫離及視網(wǎng)膜局部皺褶；Ⅳ級(jí)：髓線處視網(wǎng)膜完全脫離，視盤(pán)周?chē)暰W(wǎng)膜局部脫離；Ⅴ級(jí)：視網(wǎng)膜裂孔形成及全部脫離。

1.2.5 HE染色觀察視網(wǎng)膜病理形態(tài)學(xué)變化眼內(nèi)注射后4wk每組在耳緣靜脈注入空氣各處死2只家兔，迅速將眼球取出，于角鞏膜緣環(huán)形剪開(kāi)，流水沖洗，放入4%多聚甲醛溶液固定，乙醇脫水、二甲苯、石蠟包埋，作角膜至視乳頭的連續(xù)矢狀切片，石蠟切片脫蠟、水化后，HE染色，光學(xué)顯微鏡下觀察病理組織切片染色情況。

1.2.6免疫組織化學(xué)觀察PDGF-α的表達(dá)用上述方法制作眼球標(biāo)本，石蠟切片、烤片1h，常規(guī)脫蠟、水化，檸檬酸抗原修復(fù)液高壓修復(fù)，3% H2O2孵育10min，磷酸鹽緩沖液(phosphate buffered saline，PBS)沖洗3min×3次；棄PBS，滴入兔抗人PDGF-α多克隆抗體(1∶200)，孵育1h，PBS沖洗；滴入二抗，25℃環(huán)境下孵育20min，PBS沖洗；DAB顯色，流水充分沖刷，蘇木素復(fù)染，封片。光學(xué)顯微鏡下分析切片染色情況。

2結(jié)果

2.1 HRPE細(xì)胞轉(zhuǎn)染觀察PDGFR-α shRNA與陽(yáng)性脂質(zhì)體比值為1∶2(即3μg：6μL)時(shí)轉(zhuǎn)染率高于其他實(shí)驗(yàn)組(圖1①)；PDGFR-α shRNA能被lip2000成功轉(zhuǎn)染進(jìn)HRPE細(xì)胞(分為1.0、1.5和2.0μmol/L濃度組)，轉(zhuǎn)染1d后，熒光顯微鏡同一視野下熒光觀察及普通明場(chǎng)觀察細(xì)胞內(nèi)轉(zhuǎn)染情況，用染核染料統(tǒng)計(jì)細(xì)胞總數(shù)，選取4個(gè)視野，計(jì)算每一個(gè)視野轉(zhuǎn)染成功的細(xì)胞比例，取平均值，計(jì)算轉(zhuǎn)染率為65%～75%(圖1②)。

2.2 PVR分級(jí)結(jié)果術(shù)前各組玻璃體、視網(wǎng)膜結(jié)構(gòu)均正常；A、B、C、D組注射后2～3d，玻璃體內(nèi)可見(jiàn)明顯的霧狀混濁，眼底隱約可見(jiàn)視網(wǎng)膜位置、顏色正常；7d后霧狀混濁部分消散，并出現(xiàn)灰白色條帶；注射后14d玻璃體內(nèi)出現(xiàn)不同程度的增粗條索狀物；注射后14～21d，依稀看到條帶狀增殖膜牽拉視網(wǎng)膜微凸出；注射28d后，正常對(duì)照組兔眼玻璃體、視網(wǎng)膜結(jié)構(gòu)未見(jiàn)變化；A組兔眼玻璃體內(nèi)可見(jiàn)大量絮狀物及視網(wǎng)膜脫離，B、C組和D組嚴(yán)重度低于A組(圖2)。注入后不同時(shí)間點(diǎn)各組PVR分級(jí)情況見(jiàn)表1，1wk后，A組形成PVR個(gè)數(shù)與B、C組和D組均無(wú)統(tǒng)計(jì)學(xué)差異(即均Pb1、Pc1、Pd1>0.05)；注射后2、3、4wk，A組形成PVR個(gè)數(shù)與B、C組和D組均有統(tǒng)計(jì)學(xué)差異(均P<0.05)。注射后4wk，B組TRD發(fā)生率(50.0%)、C組(37.5%)和D組TRD發(fā)生率(25%)與A組(100%)相比，有統(tǒng)計(jì)學(xué)差異(P=0.04)；D組與B、C組相比，無(wú)統(tǒng)計(jì)學(xué)差異(P>0.05)。

圖1熒光顯微鏡檢查①：質(zhì)粒與脂質(zhì)體不同比值時(shí)轉(zhuǎn)染效率(×100，比值為1∶2時(shí)轉(zhuǎn)染率最高)A：1∶1；B：1∶2；C：1∶3。②:轉(zhuǎn)染率達(dá)65%時(shí)同一視野下不同視場(chǎng)轉(zhuǎn)染效果(×200)A：熒光觀察細(xì)胞內(nèi)轉(zhuǎn)染情況；B：普通明視場(chǎng)觀察細(xì)胞內(nèi)轉(zhuǎn)染情況。

圖2注射4wk后，N組兔眼玻璃體、視網(wǎng)膜結(jié)構(gòu)正常；空白對(duì)照組兔眼玻璃體內(nèi)可見(jiàn)大量視網(wǎng)膜脫離(箭頭部分)；B、C和D組可見(jiàn)不同程度的絮狀物及視網(wǎng)膜牽拉脫離，嚴(yán)重程度低于A組N:正常對(duì)照組；A：空白對(duì)照組；B：1.0μmol/L PDGFR-α shRNA濃度組；C：1.5μmol/L PDGFR-α shRNA濃度組；D：2.0μmol/L PDGFR-α shRNA濃度組。

圖3HE染色示N組內(nèi)外核層、神經(jīng)節(jié)細(xì)胞排列整齊，全層結(jié)構(gòu)基本正常；空白對(duì)照組兔眼視網(wǎng)膜內(nèi)、外核層細(xì)胞排列雜亂，神經(jīng)節(jié)細(xì)胞數(shù)量減少，外叢狀層消失； B、C組和D組嚴(yán)重程度低于A組(×400)N：正常對(duì)照組；A：空白對(duì)照組；B：1.0μmol/L PDGFR-α shRNA濃度組；C：1.5μmol/L PDGFR-α shRNA濃度組；D：2.0μmol/L PDGFR-α shRNA濃度組。

圖4免疫組化示N組兔眼視網(wǎng)膜神經(jīng)節(jié)細(xì)胞隱約可見(jiàn)微量棕黃色PDGF-A陽(yáng)性顆粒；注射后4wk，空白對(duì)照組兔眼視網(wǎng)膜纖維組織可見(jiàn)大量棕黃色PDGF-α陽(yáng)性表達(dá)顆粒；B、C、D組兔眼視網(wǎng)膜纖維組織結(jié)構(gòu)清晰，陽(yáng)性表達(dá)顆粒較A組少，且B、C、D組隨著注入細(xì)胞濃度的增加其陽(yáng)性表達(dá)顆粒依次減少(×400)N：正常對(duì)照組；A：空白對(duì)照組；B：1.0μmol/L PDGFR-α shRNA濃度組；C：1.5μmol/L PDGFR-α shRNA濃度組；D：2.0μmol/L PDGFR-α shRNA濃度組。

2.3視網(wǎng)膜病理形態(tài)學(xué)變化注射后28d正常對(duì)照組兔眼視網(wǎng)膜完整，內(nèi)外核層、神經(jīng)節(jié)細(xì)胞分列有序，全層結(jié)構(gòu)未見(jiàn)明顯變化；A組兔眼視網(wǎng)膜內(nèi)、外核層細(xì)胞排列雜亂，神經(jīng)節(jié)細(xì)胞數(shù)量減少，外叢狀層消失；B、C組和D組嚴(yán)重度低于A組(圖3)。

表1各組各觀察時(shí)間點(diǎn)形成PVR個(gè)數(shù)情況

±s，分)

注：注射后1wk，A組形成PVR個(gè)數(shù)與B、C和D組均無(wú)統(tǒng)計(jì)學(xué)差異(即Pb1、Pc1、Pd1均>0.05)；注射后2、3、4wk，A組與其他組均有統(tǒng)計(jì)學(xué)差異(P值均<0.05);A：空白對(duì)照組；B：1.0μmol/L PDGFR-α shRNA濃度組；C：1.5μmol/L PDGFR-α shRNA濃度組；D：2.0μmol/L PDGFR-α shRNA濃度組。

2.4免疫組織化學(xué)染色結(jié)果PDGF-α在視網(wǎng)膜及玻璃體的免疫組織化學(xué)染色陽(yáng)性表現(xiàn)為細(xì)胞內(nèi)棕黃色顆粒，正常對(duì)照組兔眼視網(wǎng)膜神經(jīng)節(jié)細(xì)胞隱約可見(jiàn)微量棕黃色PDGF-α陽(yáng)性顆粒；注射后4wk，A組兔眼視網(wǎng)膜纖維組織可見(jiàn)大量棕黃色PDGF-α陽(yáng)性表達(dá)顆粒；B、C、D組兔眼視網(wǎng)膜纖維組織結(jié)構(gòu)清晰，陽(yáng)性表達(dá)顆粒較A組少，且B、C、D組隨著注入細(xì)胞濃度的增加其陽(yáng)性表達(dá)顆粒依次減少(圖4)。

3討論

PVR形成的病理過(guò)程主要是由于RPE細(xì)胞、神經(jīng)膠質(zhì)細(xì)胞、肌纖維母細(xì)胞等在細(xì)胞外基質(zhì)及生長(zhǎng)因子的作用下，在PDGF、纖維連接蛋白或由于自分泌的PDGF等血漿中的成分作用下大量增殖、遷移，從而產(chǎn)生惡性循環(huán)導(dǎo)致PVR的形成。本次實(shí)驗(yàn)采用PDGF轉(zhuǎn)染過(guò)的HRPE細(xì)胞進(jìn)行兔玻璃體腔注射，術(shù)后觀察4wk，即出現(xiàn)顯著的PVR。

PVR動(dòng)物模型的建立是本次實(shí)驗(yàn)的關(guān)鍵，選擇簡(jiǎn)易可靠的方法顯得尤為重要。田苗等[2]研究發(fā)現(xiàn)通過(guò)Dispase和RPE細(xì)胞可以成功構(gòu)建的動(dòng)物PVR模型，是一種極為便捷可靠的方法。玻璃體注射時(shí)進(jìn)針位置的選定上，選在角鞏膜緣后2～3mm處進(jìn)針居多，但我們發(fā)現(xiàn)這個(gè)位置造模成功率低，因?yàn)橥醚劬铙w相對(duì)較大且呈球形，若從此處進(jìn)針易損傷晶狀體而發(fā)生白內(nèi)障，以致無(wú)法造模成功。本實(shí)驗(yàn)在角鞏膜緣后4～5mm處，沿玻璃體后部進(jìn)針5mm，減少了對(duì)晶狀體損害的同時(shí)，直接檢眼鏡觀察對(duì)視網(wǎng)膜也無(wú)損害，安全穩(wěn)當(dāng)。

大量研究證實(shí)PDGF與PVR形成關(guān)系緊密。司艷芳等[3]研究發(fā)現(xiàn)PDGF促進(jìn)色素上皮細(xì)胞的增生和移行，說(shuō)明PDGF可能對(duì)PVR的形成有一定的影響。同時(shí)，許迅等[4]研究發(fā)現(xiàn)PDGF在PVR患者視網(wǎng)膜中呈較強(qiáng)濃度。并且PDGF只有與其受體結(jié)合后，才能發(fā)揮相應(yīng)的生物學(xué)作用。因此，阻斷 PDGF受體也能抑制PVR的發(fā)展。PDGF受體有α和β兩種，熊蕾等[5]研究發(fā)現(xiàn)特異性地阻斷PDGF-α受體的表達(dá)比阻斷PDGF-β受體的表達(dá)在抑制兔視網(wǎng)膜脫離的形成中更為顯著，提示PDGFR-α與PVR更具關(guān)聯(lián)性。彭燕一等[6]研究發(fā)現(xiàn)PDGF參與了PVR的全過(guò)程，同時(shí)在眾多因子中被證實(shí)是最有前景的一種方法。PDGFR-α在視網(wǎng)膜增生性疾病治療中有可能成為新的研究方向，阻斷 PDGF-α受體的表達(dá)可能為治療PVR提供一條新思路。

目前RNAi技術(shù)在視網(wǎng)膜增殖性疾病的基因治療方面已獲得了較好的進(jìn)展[7]。秦賢杰等[8]通過(guò)研究證實(shí)PDGFR-α shRNA可抑制人視網(wǎng)膜色素上皮細(xì)胞增生。周?chē)?guó)義等[9]采用向小鼠PVR模型玻璃體腔注射PKCα siRNA的方法，研究其對(duì)PVR形成的抑制作用。結(jié)果證實(shí)，PKCα siRNA對(duì)PVR的發(fā)生確實(shí)有一定的抑制作用。劉矯連[10]通過(guò)往小鼠玻璃體腔注入構(gòu)建慢病毒介導(dǎo)的靶向Netrin-1的小發(fā)夾狀RNA，研究表明靶向Netrin-1的shRNA可明顯控制視網(wǎng)膜新生血管形成，為視網(wǎng)膜增殖性病變的基因診治提供了新的方向。目前很多學(xué)者已致力于抑制PVR的研究，國(guó)外有研究表明，核心蛋白聚糖，一種天然的TGF-β1抑制劑，Nassar等[11]在PVR兔眼模型中應(yīng)用它輔助玻璃體切割手術(shù)，發(fā)現(xiàn)可阻礙纖維增殖和視網(wǎng)膜脫離的進(jìn)展。此外，法舒地爾可通過(guò)抑制TGF-β下游的Rho激酶顯著地抑制PVR發(fā)展[12]。由此可見(jiàn)，更多抑制PVR發(fā)生、發(fā)展的臨床研究是不可缺少的。

前已述及PDGF在PVR形成中起著關(guān)鍵作用，RPE細(xì)胞亦可誘導(dǎo)小鼠PVR模型，同時(shí)RNAi技術(shù)已較成熟地用于眼科疾病治療中。本研究通過(guò)RNAi技術(shù)沉默PDGF-α受體，將其注入兔眼玻璃體腔內(nèi)，免疫熒光檢查顯示PDGFR-α shRNA脂質(zhì)體成功轉(zhuǎn)染至RPE細(xì)胞內(nèi)，直接檢眼鏡檢查顯示玻璃體內(nèi)注射RPE細(xì)胞能導(dǎo)致PVR發(fā)生，當(dāng)細(xì)胞轉(zhuǎn)入了PDGFR-α shRNA脂質(zhì)體時(shí)PVR顯著減輕，降低了TRD的發(fā)生率，并在一定范圍內(nèi)隨濃度的增加，病變減輕。免疫組織化學(xué)染色結(jié)果說(shuō)明PDGF-α在PVR中高表達(dá)，對(duì)其RNA進(jìn)行干擾從而抑制PVR形成，并在一定范圍內(nèi)隨其濃度增加，抑制作用增強(qiáng)。

綜上所述，PDGF-α受體的RNA干擾對(duì)PVR的發(fā)生、發(fā)展有明顯抑制作用。本次實(shí)驗(yàn)選擇不同濃度梯度，實(shí)驗(yàn)結(jié)果顯示，1～2μmol/L的濃度范圍對(duì)PVR的抑制程度隨著濃度升高而增強(qiáng)，但是要確定最佳濃度范圍還需進(jìn)一步的研究，以保證最低的濃度達(dá)到最好的抑制效果。然而PDGFR-α shRNA在玻璃體內(nèi)的應(yīng)用是否具有視網(wǎng)膜毒性，與PVR的發(fā)生是否有一定關(guān)聯(lián)，尚缺乏實(shí)驗(yàn)研究，有待繼續(xù)深層次的研究。本研究針對(duì)PDGF-α受體shRNA設(shè)計(jì)研究PVR的治療方法，為今后臨床基因治療PVR提供良好的實(shí)驗(yàn)基礎(chǔ)。

參考文獻(xiàn)

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Zhu Meng1, Yan-Yi Peng2, Xian-Jie Qin1

Foundation items:Natural Science Foundation of Guangxi Zhuang Autonomous Region (No.2012GXNSFAA053103);the Open Project of Guangxi Medical Scientific Experiment Center (No.KFJJ2011-11)

1Guilin Medical University, Guilin 541004,Guangxi Zhuang Autonomous Region,China;2Department of Ophthalmology, Affiliated Hospital of Guilin Medical University, Guilin 541001,Guangxi Zhuang Autonomous Region, China

Correspondence to:Yan-Yi Peng.Department of Ophthalmology, Affiliated Hospital of Guilin Medical University, Guilin 541001,Guangxi Zhuang Autonomous Region, China.yypeng_7@hotmail.com

Received：2015-09-14Accepted：2015-12-10

Abstract

?AIM:To observe the therapeutic effect of platelet-derived growth factor receptor-α RNA interference on inhibiting experimental proliferative vitreoretinopathy(PVR).

?METHODS:Different concentrations of PDGFR-α shRNA were blended with lip2000,and the final scale of PDGFR-α shRNA/lip2000 complex was 1∶1， 1∶2 and 1∶3 respectively(the concentration of PDGFR-α shRNA was respectively 2μg， 3μg and 4μg)．All the complexes were cultivated in human retinal pigment epithelium(HRPE) for 24h after transfection and then respectively injected 0.1mL to rabbit vitreous cavity．Forty healthy adult rabbits were seleceted in this study and randomly divided into colored balanced salt solution (BSS) group (N), comprising lipofectamineTM2000 HRPE cell dilution group (group A). The highest transduction efficiency of 1.0, 1.5 and 2.0μmol/L containing PDGFR-α receptors shRNA, lipofectamineTM2000 of HRPE cell dilution were selected (respectively group B, C and D) with 8 eyes each, the right eyes as the experimental eye. The extent of PVR was observed by indirect ophthalmoscope;and slice staining situation was observed by immunohistochemistry．The fundus changes were observed by histopathology.

?RESULTS:The highest transduction efficiency of PDGFR-αshRNA/lip2000 ratio was 1∶2.The extent of PVR， the histopathology changes and the immunohistochemistry of PDGFR-α in group B，C and group D were significantly lower than that in group A， while group D was much lower than those of group B and C.

?CONCLUSION:PDGFR-αRNA interference could inhibit the formation of experimental PVR.

KEYWORDS:?retinal pigment epithelium cell;proliferative vitreoretinopathy;platelet-derived growth factor receptor-α;RNA interference

DOI:10.3980/j.issn.1672-5123.2016.1.06

收稿日期：2015-09-14 修回日期： 2015-12-10

通訊作者：彭燕一，教授，主任醫(yī)師，研究方向：白內(nèi)障、眼底病.yypeng_7@hotmail.com

作者簡(jiǎn)介：孟竹，女，在讀碩士研究生，研究方向：眼底病。

基金項(xiàng)目：廣西自然科學(xué)基金項(xiàng)目(No.2012GXNSFAA053103)；廣西醫(yī)學(xué)科學(xué)實(shí)驗(yàn)中心開(kāi)放課題項(xiàng)目(No.KFJJ2011-11)
作者單位：`1(541004)中國(guó)廣西壯族自治區(qū)桂林市，桂林醫(yī)學(xué)院；`2(541001)中國(guó)廣西壯族自治區(qū)桂林市，桂林醫(yī)學(xué)院附屬醫(yī)院