淺析禾草內(nèi)生真菌育種研究進(jìn)展

楊鼎元，鐘 理，吳佳海，，羅 充，張文超

（1．貴州師范大學(xué)生命科學(xué)學(xué)院， 貴陽550003； 2．貴州草業(yè)研究所， 貴陽550006）

禾草內(nèi)生真菌（Grass Endophyte），是指在禾本科草類植物體內(nèi)完成其生活史的部分或全部，但又不引起任何病癥的微生物［1］。禾草內(nèi)生真菌普遍存在于在禾本科各類植株之中，它們一方面寄居在禾草的細(xì)胞間隙營寄生生活；另一方面又可通過促進(jìn)禾草的生長、增強禾草抗逆性來與寄生的禾草達(dá)成互惠共生關(guān)系［2］。目前關(guān)于禾草內(nèi)生真菌的相關(guān)研究主要集中在子囊菌門核菌綱肉座菌目麥角菌科香柱菌屬（Epichloё）及其無性型（Neotyphodium）之中［3－4］，其中無性型（Neotyphodium）禾草內(nèi)生真菌因其對禾草植物廣泛的侵染和特殊的作用，具有較高的科研價值［5－7］。

1 禾草內(nèi)生真菌的作用

1．1 提高宿主對生物脅迫的抗性

內(nèi)生真菌可以提高宿主對生物脅迫如家畜、害蟲取食及微生物源所致病害等的抗性。被內(nèi)生真菌侵染形成的禾草－內(nèi)生真菌共生體（EI）同未被內(nèi)生真菌侵染的禾草（EF）相比，可以通過內(nèi)生真菌分泌的震顫素（Lolitrem B）、波 胺 （Peramine）、麥 角 堿 （Ergot alkaloids）和飽和吡咯類（Pyrrolizidine）化合物表現(xiàn)出抗蟲性和抗采食特性［8］。早在上世紀(jì)40年代，新西蘭就針對家畜誤食帶內(nèi)生真菌的黑麥草引發(fā)的中毒事件進(jìn)行了報道［2］，80年代，國外研究發(fā)現(xiàn)EI型的多花黑麥草（Lolium perenne）對于阿根廷象甲（Listronotus bonariensis）采食的抑制［9］，目前，有大量研究證明，禾草－內(nèi)生真菌共生體對包括線蟲綱、昆蟲綱、蛛形綱等無脊椎動物取食具有抗性［9－20］。此外，禾草內(nèi)生真菌往往還會通過生態(tài)位競爭、誘導(dǎo)抗病性和抑菌活性物質(zhì)的分泌對病源微生物造成影響，進(jìn)而使宿主獲得相應(yīng)的抗病性［21－22］，已有報道的禾草內(nèi)生真菌所拮抗的病源菌主要有：鏈格孢屬、殼二孢屬、離蠕孢屬、鐮刀菌屬和德氏霉屬等［23］。

1．2 提高宿主對非生物脅迫的抗性

內(nèi)生真菌可以提高宿主抗旱、抗寒、耐鹽堿等非生物脅迫的能力。Karsten發(fā)現(xiàn)，內(nèi)生真菌的侵染可以提高宿主可溶性糖的含量，參與調(diào)節(jié)宿主植株體內(nèi)的滲透壓［24］；任安芝的實驗結(jié)果表明，內(nèi)生真菌的侵染可降低細(xì)胞膜通透性、脯氨酸的積累［25］。這些學(xué)者從生理生化的角度證實了內(nèi)生真菌的侵染可提高對干旱脅迫的抗性。另一些研究表明，內(nèi)生真菌的侵染能提高低溫條件下宿主種子的萌發(fā)情況此外，內(nèi)生真菌的侵染能提高低溫條件下宿主的種子萌發(fā)率、植株株高、分蘗數(shù)和葉片數(shù)，還能促進(jìn)地下生物量的積累，增強抗寒性，提高宿主的越冬能力［26－29］。王志偉［30］在一些高鹽堿地區(qū)采集的禾草植物中發(fā)現(xiàn)普遍存在內(nèi)生真菌，彭清青通過對不同酸堿條件下幾種禾草萌發(fā)情況的對比，發(fā)現(xiàn)內(nèi)生真菌的侵染可以顯著提高EI型禾草的發(fā)芽率，對胚芽和胚根生長也有顯著的促進(jìn)作用［31］。

1．3 促進(jìn)宿主生長

內(nèi)生真菌對宿主的生長具有促進(jìn)作用［32］：一方面內(nèi)生真菌可以分泌促進(jìn)植物生長的活性物質(zhì)如植物生長素、赤霉素以及細(xì)胞分裂激素等［33］，例如袁志林［34］篩選出一株廣譜內(nèi)生真菌，具有良好的促生作用，進(jìn)一步研究后發(fā)現(xiàn)該菌株可以分泌吲哚乙酸（IAA）；另一方面內(nèi)生真菌可促進(jìn)宿主對營養(yǎng)物質(zhì)（氮［35］、磷和礦質(zhì)元素［36］）的吸收，提高宿主的資源利用率，增加宿主葉面積、分蘗數(shù)、生長速度進(jìn)而促進(jìn)宿主植株的生長［37］。

圖1 禾草內(nèi)生真菌對宿主植株的作用

2 禾草內(nèi)生真菌的育種概況

目前，全世界的溫帶禾草中約有10%的種類帶有內(nèi)生真菌，早熟禾亞科有30%帶有香柱菌屬的內(nèi)生真菌［37－38］，利用內(nèi)生真菌進(jìn)行禾草育種特別是抗性育種是近年來國外草業(yè)育種的一個趨勢［39］，國內(nèi)尚未見育成品種的報道，但相關(guān)進(jìn)展良好［40］。這種育種方法借助內(nèi)生真菌對禾草各方面的增益和內(nèi)生真菌隨宿主種子垂直傳播的種傳特性［41］進(jìn)行。利用內(nèi)生真菌進(jìn)行的育種具有以下優(yōu)勢：首先，內(nèi)生真菌不產(chǎn)生子實體，缺乏有性繁殖，決定了內(nèi)生真菌的寄生特性不會造成種間、個體間的泛濫傳播［42－43］，對環(huán)境具備安全性；其次，通過內(nèi)生真菌介導(dǎo)的目的性狀可較穩(wěn)定的得到表達(dá)［44］，且目的性狀還可具有通過侵染植株形成的種子保留的可能性，對育種具備高效性。有國外學(xué)者以“下一代的分子育種”對內(nèi)生真菌育種進(jìn)行稱贊［45］。

2．1 牧草育種

EI宿主的植株會產(chǎn)生針對取食者的毒性，因此利用內(nèi)生真菌進(jìn)行牧草育種時，首先需要保證含內(nèi)生真菌的牧草對牲畜和人的安全性，其次才是目標(biāo)性狀的表達(dá)。

為達(dá)成這一育種目標(biāo)，利用內(nèi)生真菌培育牧草時，一方面可以從被內(nèi)生真菌侵染的禾草中篩選不產(chǎn)生毒害作用的內(nèi)生真菌菌株，再通過育種手段進(jìn)行飼用品質(zhì)培育。Latch［46］通過對黑麥草中存在的內(nèi)生真菌分離研究，篩選出了兼顧抗蟲和無毒特性的內(nèi)生真菌（Neotyphodium lolii）種類，并通過技術(shù)手段回接到了黑麥草中，獲得了具有抗蚜蟲特性的黑麥草牧草品種“AR 1”。Bluett［47］經(jīng)過多年的放牧試驗，證明了黑麥草牧草品種“AR 1”具有較優(yōu)秀的農(nóng)藝性狀，然后通過對只取食“AR 1”黑麥草的奶牛體內(nèi)相關(guān)指標(biāo)的檢測，證實該品種對家畜的安全性，目前該牧草已經(jīng)通過了歐盟的檢測進(jìn)入歐洲市場。此外，美國也培育出對家畜無毒害的EI型高羊茅牧草“AR 542”，該品種的高羊茅雖然未表現(xiàn)出抗蟲特性，但與EF型高羊茅相比較展現(xiàn)出卓越的農(nóng)藝性狀［48－49］，目前也已在美國推廣種植。另一方面可以先從被內(nèi)生真菌侵染的禾草中分析篩選可以提高宿主飼用品質(zhì)，但對牲畜可能具有潛在毒害作用的菌株，然后通過基因敲除、基因沉默等技術(shù)抑制內(nèi)生真菌的毒素合成基因表達(dá)［8］，現(xiàn)在已經(jīng)探明無性型禾草內(nèi)生真菌Neotyphodium coenophialum產(chǎn)生毒素麥角酸的是dmaW基因［19］。鑒于內(nèi)生真菌的這種遺傳特性，保證了這種育種方法的穩(wěn)定性、可靠性和安全性［50］，與傳統(tǒng)的分子育種相比，更容易被公眾所接受。

同時國外有報道［51］稱可通過給家畜注射抗寄生蟲藥物（伊維菌素），從而達(dá)到家畜誤食EI型有毒牧草的解毒功效，這提示了利用內(nèi)生真菌選育牧草時，可以通過研發(fā)配套的抗毒素物質(zhì)疫苗，通過藥理方法來消除或減輕家畜取食EI型牧草可能帶來的毒害作用，極大的拓展了育種思路，展現(xiàn)了利用內(nèi)生真菌進(jìn)行牧草育種的潛力。

2．2 草坪草育種

和牧草育種相比，利用內(nèi)生真菌進(jìn)行草坪草育種較為便捷，不需要考慮因禾草內(nèi)生真菌分泌產(chǎn)生的代謝產(chǎn)物如波胺（Peramine），麥角纈氨酸（Ergot）等可能造成的家畜食用中毒事件，草坪草育種多通過禾草內(nèi)生真菌對宿主的促生作用和抗性的增強，從而達(dá)到提升草坪草的農(nóng)藝性狀和抗逆性的育種目標(biāo)。高帶菌率的草坪草除了具有各種抵御生物／非生物脅迫的能力，往往對其他植物具有還有很強的他感作用［52］，這些優(yōu)勢可減少除草劑、殺蟲劑、化肥等的使用，節(jié)省了大量的管理、經(jīng)濟(jì)成本，更降低了環(huán)境的危害。

美國早在上世紀(jì)90年代就將EI型草坪草投入商業(yè)運營，這些商用品種包括了‘Advent’、‘Assure’、‘Dandy’、‘DasherⅡ’、‘Gettysburg’、‘Pinnacle’等［53－54］優(yōu)質(zhì)草坪草草種；此外在美國的部分機場已經(jīng)開始使用通過內(nèi)生真菌所分泌的次生代謝產(chǎn)物從而獲得抗鳥采食特性的新型草坪草種‘Avanex’，極大的降低了飛機在起飛、降落等過程中因為撞擊或引擎吸入飛鳥而導(dǎo)致的安全隱患及經(jīng)濟(jì)損失［55］。在國外商用的草坪草種子中，內(nèi)生真菌的侵染率是同種子發(fā)芽率、純凈度相提并論并出現(xiàn)在種子標(biāo)簽上的重要指標(biāo)［8，56］，據(jù)統(tǒng)計，每年約有6 000t的 EI型草坪草種子被應(yīng)用于歐美的足球場、城市綠化等項目中［54］。

3 存在問題

國外諸多實例表明，通過禾草內(nèi)生真菌來進(jìn)行優(yōu)良禾草的選育是可行的，但仍然存在諸如多問題尚未研究透徹，需要進(jìn)一步深入研究。

3．1 內(nèi)生真菌篩選較難

內(nèi)生真菌生物學(xué)特性研究是利用其進(jìn)行禾草育種研究的前期基礎(chǔ)研究，本質(zhì)上是通過體外培養(yǎng)（內(nèi)生真菌侵染組織塊表面消毒、接種到營養(yǎng)培養(yǎng)基、然后再分離純化）獲取內(nèi)生真菌菌株。但這種研究方法存在幾個問題：雖然禾草內(nèi)生真菌是一個多樣性豐富的群體［2］，但許多種類的內(nèi)生真菌生長緩慢，在分離過程中易被植株內(nèi)部的其他非目標(biāo)菌污染［57］，更有不能通過體外培養(yǎng)進(jìn)行分離鑒定的種類，分離得到非目標(biāo)菌機率較大。此外，在育種研究中可利用的內(nèi)生真菌活性物質(zhì)種類很多，但內(nèi)生真菌的分泌量卻很少，且這些活性物質(zhì)往往會隨著環(huán)境、生境的改變而不同［58］，這給禾草內(nèi)生真菌的鑒定、培養(yǎng)和開發(fā)利用帶來了很多難題。

3．2 回接技術(shù)尚需改進(jìn)

國內(nèi)對內(nèi)生真菌回接到宿主的方法通常是采用較為便捷且容易操作的無菌幼苗感染［59］、無菌種子感染［60］和分蘗部位感染［61］等方法；國外多采用更為精細(xì)但要求較高的分生組織［46］、愈傷組織體或體細(xì)胞細(xì)胞胚［62］導(dǎo)入法。但這些方法不同程度上存在穩(wěn)定性差、成功率低等缺點。目前內(nèi)生固氮細(xì)菌的回接技術(shù)研究較多，鑒于內(nèi)生真菌和內(nèi)生細(xì)菌的相似性，或可借助這些技術(shù)進(jìn)行回接方法上的改進(jìn)［63］。

3．3 禾草－內(nèi)生真菌共生體性狀表達(dá)復(fù)雜

大量研究表明，禾草內(nèi)生真菌的侵染能夠提高宿主的抗性，但另有一些研究表明，在相同條件下，一種禾草內(nèi)生真菌可以提高某個宿主品種某方面的抗性，卻對這種宿主另一個品種沒有作用［64］；Gundel的研究表明，內(nèi)生真菌的侵染與種子萌發(fā)沒有關(guān)系［65］，而在國內(nèi)外類似的研究中卻不同程度的證明禾草內(nèi)生真菌的侵染可以提高侵染種子的萌發(fā)表現(xiàn)［1，5，8］。此外，Casler稱，禾草內(nèi)生真菌的侵染并沒有提高植株的抗寒性［66］，而從另一些研究結(jié)果［26－28］來看，禾草內(nèi)生真菌的侵染的確能增強宿主的抗寒性。針對這種差異，有學(xué)者進(jìn)行深入研究后推測，這很有可能是因為相同環(huán)境條件下被相同內(nèi)生真菌感染的植物，其宿主的反應(yīng)不僅隨宿主種、品種而且隨同一品種的不同基因型而各不相同［67－68］，與此同時，另一些研究表明，大多數(shù)的宿主也只接受單一基因型的內(nèi)生真菌侵染和共生［69－70］。進(jìn)一步借助分子系統(tǒng)發(fā)育方法構(gòu)建的系統(tǒng)發(fā)育樹，也明確地顯示禾草與內(nèi)生真菌有著協(xié)同分枝進(jìn)化關(guān)系［71］，這意味著內(nèi)生真菌同宿主具有一定的不完全相容性，每一種具有開發(fā)價值的內(nèi)生真菌很有可能只能應(yīng)用于特定的基因型宿主。

［1］Clay K．Fungal Endophytes of Grasses［J］．Annual Review of Ecology ＆ Systematics，1990，21（4）：293－315．

［2］金文進(jìn)，李春杰，王正鳳．禾草內(nèi)生真菌的多樣性及意義［J］．草業(yè)學(xué)報，2015（1）：168－175．

［3］White Jf，Morgan J G．Acremonium chisosum，a new species isolated from Stipa eminens in Texas［J］．Mycotaxon，1987，28：179－189．

［4］Schardl C L，Leuchtmann A，Spiering M J．Symbioses of grasses with seedborne fungal endophytes［J］．Annual Review of Plant Biology，2004，55（1）：315－340．

［5］Schardl C L．Epichlo festucae and related mutualistic symbionts of grasses［J］．Fungal Genetics ＆ Biology，2001，33（2）：69－82．

［6］Ren A，Clay K．Impact of a Horizontally Transmitted Endophyte，Balansia henningsiana，on Growth and Drought Tolerance of Panicum rigidulum［J］．International Journal of Plant Sciences，2009，170（5）：599－608．

［7］Schardl CL．The Epichloae，Symbionts of the Grass Subfamily Po ideae1［J］．Annals of the Missouri Botanical Garden，2010，97（4）：646－665．

［8］南志標(biāo)，李春杰．禾草－內(nèi)生真菌共生體在草地農(nóng)業(yè)系統(tǒng)中的作用［J］．生態(tài)學(xué)報，2004，24（3）：605－616．

［9］Prestidge RA，Gallagher R T．Endophyte fungus confers resistance to ryegrass：Argentine stem weevil larval studies［J］．Ecological Entomology，1988，13（13）：429－435．

［10］Siegel MR，Latch GCM，Bush LP，et al．Fungal endophyteinfected grasses：Alkaloid accumulation and aphid response［J］．Journal of Chemical Ecology，1990，16（12）：3 301－3 315．

［11］Potter D A，Patterson C G，Redmond C T．Influence of Turfgrass Species and Tall Fescue Endophyte on Feeding Ecology of Japanese Beetle and Southern Masked Chafer Grubs［J］．Journal of Economic Entomology，1992，85（3）：900－909．

［12］Clarke BB，White Jf Jr，Hurley RH，et al．Endophyte－Medi－ated Suppression of Dollar Spot Disease in Fine Fescues［J］．Plant Disease，2006，90（8）：994－998．

［13］Tian P，Nan Z，Li C，et al．Effect of the endophyte Neotyphodium lolii on susceptibility and host physiological response of perennial ryegrass to fungal pathogens［J］．European Journal of Plant Pathology，2008，122（4）：593－602．

［14］Kuldau G，Bacon C．Clavicipitaceous endophytes：Their ability to enhance resistance of grasses to multiple stresses［J］．Biological Control，2008，46（1）：57－71．

［15］Bultman TJ，Bell G，Martin WD．A fungal endophytemediates reversal of wound－induced resistance and constrains tolerance in a grass．Ecology，2004，85（3）：679－685．

［16］Bryant RH，Cameron NE，Edwards GR．Response of black beetle and red－h(huán)eaded pasture cockchafer larvae to loline alkaloids in meadow fescue roots［J］．New Zeal and Plant Protection，2010（63）：219－223．

［17］Shiba T，Sasaki T，Kasai E．Resistance to the rice leaf bug（Trigonotylus caelestialium）is conferred by Neotyphodiumendophyte infection of Italian ryegrass（Lolium multiflorum）［J］．Japanese Society of Grassland Science，2007（53）：205－209．

［18］Zhang XX，Li CJ，Nan ZB，Matthew C．Neotyphodiumendophyte increases Achnatherum inebrians（drunken horse grass）resistance to herbivores and seed predators［J］．Weed Research，2011（52）：70－78．

［19］Bacon CW，Richardson MD，White JF．Modification and usesof endophyte－enhanced turfgrasses：A role for molecular technology［J］．CropScience，1997，37（5）：1 415－1 425．

［20］Clarke B B，Jfjr W，Hurley R H，et al．Endophyte－Mediated Suppression of Dollar Spot Disease in Fine Fescues［J］．Plant Disease，2006，90（8）：994－998．

［21］謝鳳行，任安芝，王銀華，等．內(nèi)生真菌對草坪植物病原真菌抑制作用的比較［J］．生態(tài)學(xué)報，2008，28（8）：3 913－3 920．

［22］Li CJ，Gao JH，Nan ZB．Interactions of Neotyphodium gansuense，Achnatherum inebrians，and plant－pathogenic fungi［J］．Mycological Research，2007，111（10）：1 220－1 227．

［23］李秀璋，方愛國，李春杰，等．禾草內(nèi)生真菌對其它微生物的影響研究進(jìn)展［J］．生態(tài)學(xué)報，2015，35（6）：1 660－1 671．

［24］Karsten HD＆MacAdam JW．Effect of drought on grow th，carbohydra tes，and soil water use by perennial ryegrass，tallfescue，and white clover［J］．Crop Sci，2001，41：156－166．

［25］任安芝，高玉葆，李俠．內(nèi)生真菌感染對黑麥草若干抗旱生理特征的影響［J］．應(yīng)用與環(huán)境生物學(xué)報，2002，8（5）：535－539．

［26］陳娜．醉馬草遺傳多樣性及內(nèi)生真菌對其抗寒性影［D］．蘭州大學(xué)，2008．

［27］楊洋．中華羊茅內(nèi)生真菌及其對宿主抗寒性的影響［D］．蘭州大學(xué)，2010．

［28］彭清青．Neotyphodium內(nèi)生真菌對中華羊茅耐寒性的影響［D］．蘭州大學(xué)，2012．

［29］Clay K．Effects of fungal endophytes on the seed and seedling biology of Lolium perenne and Festuca arundinacea［J］．Oecologia，1987，73（3）：358－362．

［30］王志偉，王世梅，紀(jì)燕玲，等．中國禾本科植物內(nèi)生真菌研究——東營市鹽堿地區(qū)的禾本科植物內(nèi)生真菌的檢測與分布特征［J］．草業(yè)科學(xué)，2005，22（2）：60－64．

［31］彭清青，李春杰，南志標(biāo)，等．不同酸堿條件下內(nèi)生真菌對三種禾草種子萌發(fā)的影響［J］．草業(yè)學(xué)報，2011，20（5）：72－78．

［32］Rahman M H，Saiga S．Endophytic fungi（Neotyphodium coenophialum）affect the growth and mineral uptake，transport and efficiency ratios in tall fescue （Festuca arundinacea）［J］．Plant ＆ Soil，2005，272（12）：163－171．

［33］Latch G C M．Physiological interactions of endophytic fungi and their hosts．Biotic stress tolerance imparted to grasses by endophytes［J］．Agriculture，Ecosystems＆Environment，1993，44（14）：143－156．

［34］袁志林．一株廣譜內(nèi)生真菌B3對水稻生長及生理影響研究［D］．南京師范大學(xué)，2005．

［35］Lyons P C，Evans J J，Bacon C W．Effects of the Fungal Endophyte Acremonium coenophialum on Nitrogen Accumulation and Metabolism in Tall Fescue［J］．Plant Physiology，1990，92（3）：726－732．

［36］Rahman M H，Saiga S．Endophytic fungi（Neotyphodium coenophialum）affect the growth and mineral uptake，transport and efficiency ratios in tall fescue （Festuca arundinacea）［J］．Plant ＆ Soil，2005，272（12）：163－171．

［37］楊松．禾草內(nèi)生真菌共生體對草坪草及其病原真菌的影響［D］．蘭州大學(xué)，2011．

［38］Bacon C W，Porter J K，Robbins J D，et al．Epichlo typhina from toxic tall fescue grasses［J］．Applied ＆ Environmental Microbiology，1977，34（5）：576－581．

［39］Easton H S，Rosellini D，Veronesi F．Grass breeding and Neotyphodium endophytes．［C］／／Breeding and seed production for conventional and organic agriculture．Proceedings of the XXVI meeting of the EUCARPIA fodder crops and amenity grasses section，XVI meeting of the EUCARPIA Medicago spp group，Perugia，Italy，2006．

［40］李秀璋，姚祥，李春杰，等．禾草內(nèi)生真菌作為生防因子的潛力分析［J］．植物生態(tài)學(xué)報，2015，39（6）：621－634．

［41］申靖，陶文文，王志偉，等．禾本科植物內(nèi)生真菌研究9——Epichloёyangzii的種傳特性及其在宿主體內(nèi)的分布［J］．草業(yè)科學(xué)，2009，26（6）：146－151．

［42］郭良棟．內(nèi)生真菌研究進(jìn)展［J］．菌物系統(tǒng)，2001，20（1）：570－573．

［43］Siegel M R，Latch G C，Johnson M C．Fungal endophytes of grasses［J］．Annual Review of Phytopathology，1987，25：293－315．

［44］Siegel M R，And G C M L，Johnson M C．Fungal Endophytes of Grasses［J］．Shock，1999，11（6）：20－20．

［45］Easton H S．Grasses and Neotyphodium endophytes：co－adaptation and adaptive breeding［J］．Euphytica，2007，154（3）：295－306．

［46］Spangenberg G．Next Generation Molecular Breeding of Grass－Endophyte Symbiota［C］／／International Plant and Animal Genome Conference XXI，San Diego，CA，2013：11－16．

［47］Latch G C M．Plant improvement using endophytic fungi［C］／／Proceedings of the XVI international grassland congress．Nice，F(xiàn)rance．1989：345－346．

［48］Bluett SJ，Thom ER，Clark DA，et al．Effects of perennial ryegrass infected with either AR 1or wild endophyte on dairy production in the Waikato［J］．New Zealand Journal of Agricultural Research，2005（2），48：197－212．

［49］Bouton J H，Latch G C M，Hill N S，et al．Reinfection of Tall Fescue Cultivars with Non－Ergot Alkaloid－Producing Endophytes［J］．Agronomy Journal，2002，94（3）：567－574．

［50］Hunt M G，Newman J A．Reduced herbivore resistance from a novel grass－endophyte association［J］．Journal of Applied Ecology，2005，42（4）：762－769．

［51］Popay A J，Hume D E，Baltus J G，et al．Ryegrass endophyte：an essential New Zealand symbiosis［C］／／Proceedings of a New Zealand Grassland Association Symposium，New Zealand Grassland Association，Auckland，1999：113－122．

［52］Bacon CW，Richardson MD，White JF．Modification and uses of endophyte－enhanced turfgrasses：a role for molecular technology［J］．Crop Science，1997，37（37）：1 415－1 425．

［53］Funk CR，Belanger FC，Murphy JR．Role of endophytes in grasses used for turf and soil conservation［J］．Biotechnology of Endophytic Fungi of Grasses，1994，33（4）：201－209．

［54］Funk CR，White RH，Breen JP．Importance of Acremonium endophytes in turf－grass breeding and management［J］．Agriculture Ecosystems ＆ Environment，1993，44（93）：215－232．

［55］Pennell CGL，Rolston M P，Bonth A D，et al．Development of a bird－deterrent fungal endophyte in turf tall fescue［J］．New Zealand Journal of Agricultural Research，2010，53（2）：145－150．

［56］Rolston MP，Lloyd WC，Hume DE．Novel perennial ryegrass－Neotyphodium endophyte associations：Relationships between seed weight，seedling vigour and endophyte presence［J］．Symbiosis，2014，62（1）：1－12．

［57］Chun jie Li，Zhibiao Nan，F(xiàn)ei Li．Biological and physiological characteristics of Neotyphodium gansuense symbiotic with Achnatherum inebrians［J］．Microbiological Research 2008，163（4）：431－440．

［58］高嘉卉，南志標(biāo)．禾草內(nèi)生真菌生物堿的研究進(jìn)展［J］．生態(tài)學(xué)報，2007，27（6）：2 531－2 546．

［59］崔春曉．東營濱海鹽地堿蓬內(nèi)生中度嗜鹽菌的分離、鑒定和回接［D］．山東師范大學(xué)，2010．

［60］車瑾瑜．植物種子接種禾草內(nèi)生真菌的方法 ［P］．CN，201310339584，2015－2－11．

［61］王瑤瑤．幾種野生羊茅屬（F．ovina、F．stapfii）植物內(nèi)生真菌研究［D］．北京林業(yè)大學(xué)，2009．

［62］Kearney JF，Parrott WA，Hill NS，et al．Infection of Somatic Embroys of Tall Fescue with Acremonium coenophialum［J］．Crop Science，1991（4）：979－984．

［63］李倍金．禾草內(nèi)生固氮菌的分離及固氮促生效能研究［D］．新疆農(nóng)業(yè)大學(xué)，2008．

［64］Hill N S，Stringer W C，Rottinghaus G E，et al．Growth，Morphological，and Chemical Component Responses of Tall Fesue to Acremonium coenophialum ［J］．Crop Science，1990，30（1）：156－161．

［65］Gundel P E，Maseda P H，Ghersa C M，et al．Effects of the Neotyphodium endophyte fungus on dormancy and germination rate of Lolium multiflorum seeds．［J］．Austral Ecology，2006，31（6）：767－775．

［66］Casler M D，Santen EV．Fungal Endophyte Removal Does Not Reduce Cold Tolerance of Tall Fescue［J］．Crop Science，2008，48（5）：2 033－2 039．

［67］Hill NS，Pachon JG，Bacon CW．Acremonium coenophialum－mediated short and long－term drought acclimation in tall fescue［J］．Crop Sci，1996，13（36）：665－672．

［68］P．X．Kover，T．E．Dolan，K．Clay．Potential versus actual contribution of vertical transmission to pathogen fitness［J］．Royal Society of London Proceedings，1997，264（13）：903－909．

［69］Meijer G，Leuchtmann A．Multistrain infections of the grass Brachypodium sylvaticum by its fungal endophyte Epichlo sylvatica［J］．New Phytologist，2002，141（2）：355－368．

［70］Siegel M R，J rlfors U，Latch G C M，et al．Ultrastructure of Acremonium coenophialum，Acremonium lolii，and Epichloe typhina endophytes in host and nonhost Festuca and Lolium species of grasses［J］．Canadian Journal of Botany，2011，65（11）：2 357－2 367．

［71］Craven K D，Schardl C L．Multigene Phylogeny of Epichloe Species，F(xiàn)ungal Symbionts of Grasses［J］．Annals of the Missouri Botanical Garden，2001，88（1）：14－34．