生物活性肽—蛋氨酸腦啡肽免疫調(diào)節(jié)作用研究進(jìn)展

倪勝輝，單風(fēng)平

(1.中國(guó)醫(yī)科大學(xué)臨床醫(yī)學(xué)七年制93期，遼寧沈陽(yáng)110001;2.中國(guó)醫(yī)科大學(xué)基礎(chǔ)醫(yī)學(xué)院免疫學(xué)教研室，遼寧沈陽(yáng)110001)

腦啡肽(enkephalin，ENK)屬于內(nèi)啡肽，是一種具有生物活性的五肽。有2種天然腦啡肽存在于腦、脊髓和腸，兩者的區(qū)別僅在于C端分別是亮氨酸和甲硫氨酸，甲硫氨酸腦啡肽又稱蛋氨酸腦啡肽(methionine-enkephaIin，Met-ENK)。腦啡肽是神經(jīng)遞質(zhì)的一種，能改變神經(jīng)元對(duì)經(jīng)典神經(jīng)遞質(zhì)的反應(yīng)，起修飾經(jīng)典神經(jīng)遞質(zhì)的作用，故稱為神經(jīng)調(diào)質(zhì)(neuromodulator)。有研究表明Met-ENK的二聚體可以與δ-阿片受體結(jié)合，所以人們認(rèn)為δ-阿片受體是Met-ENK的受體［1］。阿片生長(zhǎng)因子(OGF，Met-ENK)進(jìn)入細(xì)胞是一種通過網(wǎng)格蛋白介導(dǎo)的細(xì)胞內(nèi)吞形式的主動(dòng)運(yùn)輸［2］。目前競(jìng)爭(zhēng)性毛細(xì)管電泳免疫分析激光誘導(dǎo)熒光法和毛細(xì)管電泳質(zhì)譜聯(lián)用(CE-MS)技術(shù)被用來Met-ENK的檢測(cè)［3-4］。Met-ENK的免疫調(diào)節(jié)作用受到國(guó)內(nèi)外學(xué)者的廣泛關(guān)注和研究［5］，并且取得了顯著地進(jìn)展。本文就Met-ENK對(duì)各種免疫細(xì)胞調(diào)控及其抗腫瘤作用等方面，對(duì)近年來相關(guān)研究進(jìn)展作一綜述。

1 Met-ENK對(duì)吞噬細(xì)胞調(diào)節(jié)

有研究表明Met-ENK對(duì)吞噬細(xì)胞的吞噬作用有明顯的調(diào)節(jié)作用，同時(shí)Met-ENK可以調(diào)節(jié)小鼠腹膜巨噬細(xì)胞H2O2的產(chǎn)生，并呈劑量依賴性［6］。Singh等［7］研究Met-ENK免疫調(diào)節(jié)機(jī)制時(shí)發(fā)現(xiàn)，濃度為10-9mol/L的Met-ENK對(duì)淡水魚鱧毛蟲脾吞噬細(xì)胞的吞噬作用起到最大的刺激作用，而對(duì)增加超氧化物的產(chǎn)生起到最小的效應(yīng)。Met-ENK對(duì)吞噬作用和超氧化物產(chǎn)生的效應(yīng)呈濃度相關(guān)而效應(yīng)相反的一種關(guān)系，當(dāng)Met-ENK濃度高于或低于10-9mol/L時(shí)MEK 對(duì)吞噬作用刺激減低而對(duì)超氧化物產(chǎn)生作用增加。進(jìn)一步研究發(fā)現(xiàn)Met-ENK對(duì)淡水魚鱧毛蟲脾吞噬細(xì)胞的吞噬作用的調(diào)節(jié)時(shí)通過δ-阿片受體完成的。

2 Met-ENK對(duì)樹突狀細(xì)胞的調(diào)節(jié)

Liu等［8］研究發(fā)現(xiàn)，Met-ENK可以上調(diào)骨髓中DC的MHCⅡ和關(guān)鍵協(xié)同刺激分子的表達(dá)，同時(shí)DC表面的δ和κ受體的表達(dá)也相應(yīng)提高。Met-ENK也可以增加DC細(xì)胞分泌高水平的細(xì)胞因子IL-12p70和TNF-α。王寧等［9］應(yīng)用掃描電鏡技術(shù)、酸性磷酸酶活性檢測(cè)、流式細(xì)胞儀檢測(cè)技術(shù)、酶聯(lián)免疫吸附試驗(yàn)檢測(cè)樹突狀細(xì)胞(DC)表型和功能的各種指標(biāo)，使用小鼠髓系DC 2.4細(xì)胞株，電鏡觀察DC的超微結(jié)構(gòu)，可見10-12mol/L Met-ENK處理組DC突起增多，形態(tài)上更加成熟;DC表面MHcⅡ、CD86和CD40的表達(dá)增加;酸性磷酸酶活性降低;DC白細(xì)胞介素12(IL-12)的表達(dá)增加(P＜0.05)，實(shí)驗(yàn)證明了適宜濃度的Met-ENK促進(jìn)小鼠髓系DC 2.4的表型及功能的成熟。吳乃剛等［10］研究Met-ENK對(duì)小鼠脾源的DC分化成熟的影響，發(fā)現(xiàn)Met-ENK可顯著刺激DC表達(dá)CDllc(+)、CD80，提高IL-12的分泌水平，在30 ng/mL時(shí)達(dá)到最大值，研究表明適當(dāng)濃度的Met-ENK對(duì)DC的增殖有明顯的促進(jìn)作用，并可高效誘導(dǎo)DC成熟。

3 Met-ENK對(duì)T淋巴細(xì)胞的調(diào)節(jié)作用

Shan等［11］研究發(fā)現(xiàn)Met-ENK是樹突細(xì)胞與CD4+T細(xì)胞之間的通路上的一種正性免疫調(diào)節(jié)劑。他們研究了樹突細(xì)胞關(guān)鍵表面分子變化、酸性磷酸酶的活性、IL-12的產(chǎn)生，并分別研究了Met-ENK、Met-ENK+IL-2和Met-ENK+IFN-γ對(duì)小鼠CD4+T細(xì)胞擴(kuò)增和細(xì)胞因子產(chǎn)生的影響。結(jié)果發(fā)現(xiàn)Met-ENK可以顯著誘導(dǎo)樹突細(xì)胞的成熟，通過添加鼠樹突細(xì)胞表面分子如MHCⅡ、CD86和CD40，能促進(jìn)IL-12的生產(chǎn)，和下調(diào)樹突細(xì)胞內(nèi)的酸性磷酸酶。同時(shí)發(fā)現(xiàn)在體內(nèi)和體外Met-ENK單獨(dú)使用或結(jié)合IL-2或IFN-γ可以明顯上調(diào)CD4+T細(xì)胞擴(kuò)增和CD4分子表達(dá)，Met-ENK單獨(dú)或Met-ENK+IL-2可以增強(qiáng)CD4+T細(xì)胞產(chǎn)生IFN-γ。此外，Met-ENK單獨(dú)或Met-ENK+IFN-γ可以提高IL-2從CD4+T細(xì)胞的生產(chǎn)。

章旭等［12］使用6～8周齡BALB/c雌性小鼠進(jìn)行體內(nèi)、外不同濃度Met-ENK刺激研究。采用RT-PCR技術(shù)檢測(cè)CD4+T細(xì)胞mRNA，所得不同濃度Met-ENK刺激的CD4+T細(xì)胞mRNA和βactin條帶密度比值作為相對(duì)表達(dá)強(qiáng)度，所得數(shù)據(jù)采用SPSS11.5軟件進(jìn)行統(tǒng)計(jì)分析。結(jié)果發(fā)現(xiàn)4 mg/mL Met-ENK體內(nèi)刺激及10-9～10-12mol/mL的Met-ENK體外刺激促進(jìn)小鼠CD4+T細(xì)胞mRNA轉(zhuǎn)錄;10-5～10-8mol/mL的Met-ENK抑制小鼠CD4+T細(xì)胞mRNA的轉(zhuǎn)錄。10-13～10-14mol/mL的Met-ENK對(duì)小鼠CD4+T細(xì)胞mRNA的轉(zhuǎn)錄無(wú)明顯變化。另外國(guó)外有學(xué)者研究發(fā)現(xiàn)，Met-ENK可以通過OGF-OGFr軸來調(diào)節(jié)T淋巴細(xì)胞的增殖，并且呈劑量依賴性［13］。

4 Met-ENK對(duì)NK細(xì)胞的調(diào)節(jié)作用

Hsueh等［14］研究阿片肽對(duì)BALB/c小鼠中樞NK細(xì)胞活性影響時(shí)，對(duì)小鼠小腦延髓池直接注射Met-ENK(0.02 mg/只或1 mg/kg)，結(jié)果發(fā)現(xiàn)Met-ENK可以明顯增加NK細(xì)胞的活性。然而另有學(xué)者發(fā)現(xiàn)，對(duì)小鼠進(jìn)行Met-ENK慢性治療會(huì)使小鼠體內(nèi)NK細(xì)胞活性略有下降［15］。Burger等［16］給感染流感病毒的小鼠使用Met-ENK處理，結(jié)果發(fā)現(xiàn)Met-ENK不僅可以增加T細(xì)胞的含量，還可明顯增加NK細(xì)胞的含量。

5 Met-ENK對(duì)中性粒細(xì)胞的調(diào)節(jié)作用

有學(xué)者研究發(fā)現(xiàn)，Met-ENK可以顯著提高中性粒細(xì)胞的活性［17］。有研究表明Met-ENK可以上調(diào)中性粒細(xì)胞表面的CD11b和CD18顆粒［18］。Haberstock等［19］研究發(fā)現(xiàn)，Met-ENK是一種人中性粒細(xì)胞調(diào)節(jié)劑，Met-ENK可以促進(jìn)中性粒細(xì)胞超氧化物()的產(chǎn)生，對(duì)炎癥反應(yīng)過程具有顯著意義。

6 Met-ENK抗腫瘤作用及其免疫調(diào)節(jié)機(jī)制

有研究表明Met-ENK與α-促腎上腺皮質(zhì)激素1-13聯(lián)合使用具有治療免疫介導(dǎo)性疾病和惡性腫瘤的作用［20］。Glavas-Obrovac等［21］研究發(fā)現(xiàn)Met-ENK可以明顯抑制喉表皮樣癌細(xì)胞(HEp-2)和人結(jié)腸癌細(xì)胞(SW620)的生長(zhǎng)。Wang等［22］用固相合成法合成Met-ENK，制備成注射液，對(duì)經(jīng)放化療后免疫系統(tǒng)受到傷害的晚期腫瘤志愿者進(jìn)行治療，經(jīng)靜脈滴注15 d。志愿者免疫系統(tǒng)指標(biāo)全面迅速恢復(fù)，淋巴細(xì)胞亞群同比例趨于合理，證明Met-ENK可以用于癌癥患者免疫系統(tǒng)的恢復(fù)治療。孟靜娟等［23］應(yīng)用動(dòng)物移植性腫瘤的體內(nèi)試驗(yàn)法，分別觀察Met-ENK、IFN-γ和Met-ENK+IFN-γ對(duì)腫瘤的抑瘤作用及小鼠生命延長(zhǎng)率情況。Met-ENK組、IFN-γ組和Met-ENK+IFN-γ組的抑瘤作用與生理鹽水對(duì)照組比較均有顯著差異(P＜0.001);而生命延長(zhǎng)率Met-ENK組與生理鹽水對(duì)照組比較有顯著差異(P＜0.001)，IFN-γ組與生理鹽水對(duì)照組比較無(wú)顯著差異(P＞0.001)，Met-ENK+IFN-γ組與生理鹽水對(duì)照組比較有顯著差異(P＜0.001)?？梢姡琈et-ENK、IFN-γ和Met-ENK+IFN-γ都對(duì)小鼠移植性瘤有一定的抑制作用，Met-ENK和Met-ENK+IFN-γ能夠延長(zhǎng)小鼠生命。同時(shí)有研究發(fā)現(xiàn)Met-ENK聯(lián)合白細(xì)胞介素-2同樣具有很明顯的抗腫瘤作用［24］。

Kuniyasu等［25］研究發(fā)現(xiàn)Met-ENK可以明顯抑制大腸癌細(xì)胞的生長(zhǎng)、侵襲和存活。他們給接種了大腸癌細(xì)胞的小鼠使用Met-ENK進(jìn)行治療，發(fā)現(xiàn)小鼠肝中Met-ENK表達(dá)增加。使用膽固醇的共軛反義S-寡核苷酸抑制肝Met-ENK表達(dá)后出現(xiàn)明顯的大腸癌肝轉(zhuǎn)移。研究發(fā)現(xiàn)Met-ENK其抗腫瘤機(jī)制是激活δ-阿片受體降低表皮生長(zhǎng)因子受體和細(xì)胞外信號(hào)調(diào)節(jié)激酶磷酸化，增加p38-依賴的細(xì)胞凋亡。Ohmori等［26］對(duì)Met-ENK作為大腸癌的免疫調(diào)節(jié)劑的作用進(jìn)行了研究。發(fā)現(xiàn)Met-ENK可以抑制MOLT-4 T淋巴母細(xì)胞的生長(zhǎng)并呈劑量依賴性，Met-ENK可以增加c-Jun N-末端激酶磷酸化水平和誘導(dǎo)Molt-4細(xì)胞凋亡，Met-ENK的這種特性可以使機(jī)體免于免疫反應(yīng)。

7 Met-ENK對(duì)免疫疾病的治療

Xu等［27］研究Met-ENK對(duì)感染猴免疫缺陷病毒72 h后的CEM×174細(xì)胞存活能力、細(xì)胞周期、細(xì)胞凋亡和凋亡相關(guān)基因表達(dá)影響，實(shí)驗(yàn)數(shù)據(jù)表明Met-ENK可以維持長(zhǎng)期感染免疫缺陷病毒細(xì)胞的存活。通過進(jìn)一步研究發(fā)現(xiàn)Met-ENK維持細(xì)胞存活是通過抑制病毒誘導(dǎo)的半胱氨酸天冬氨酸蛋白酶-3過度表達(dá)完成的，他們的研究表明Met-ENK可以用于臨床艾滋病的治療。Zagon等［28］研究發(fā)現(xiàn)T淋巴細(xì)胞數(shù)與阿片生長(zhǎng)因子-阿片生長(zhǎng)因子受體軸有緊密聯(lián)系，Met-ENK作為阿片生長(zhǎng)因子可以明顯抑制T淋巴細(xì)胞數(shù)量，并且呈劑量依賴性。阿片生長(zhǎng)因子-阿片生長(zhǎng)因子受體軸具有免疫抑制作用，可以用來治療自身免疫疾病。有研究表明風(fēng)濕性關(guān)節(jié)炎病人的免疫細(xì)胞中的Met-ENK和感覺神經(jīng)末梢中Met-ENK受體明顯高于關(guān)節(jié)創(chuàng)傷和骨關(guān)節(jié)炎病人。機(jī)體在長(zhǎng)期和強(qiáng)化的炎癥下，免疫和外周神經(jīng)系統(tǒng)上調(diào)感覺神經(jīng)阿片受體和配體的表達(dá)，來調(diào)節(jié)疼痛和炎癥的平衡［29］。

8 展望

目前Met-ENK的免疫調(diào)控和生理作用機(jī)制已經(jīng)得到深入的研究，研究發(fā)現(xiàn)Met-ENK除了前文提到的對(duì)免疫系統(tǒng)的調(diào)控作用外，Met-ENK對(duì)內(nèi)分泌系統(tǒng)和酶也具有相應(yīng)的調(diào)節(jié)作用［30-31］。并且有學(xué)者發(fā)現(xiàn)Met-ENK與肝炎疾病的發(fā)生發(fā)展［32-33］和神經(jīng)系統(tǒng)中的多巴胺受體［34-35］以及阿片受體［6，36］有著密切的聯(lián)系。目前其藥理作用也受到人們的廣泛關(guān)注，有研究表明Met-ENK是一種低毒性安全可靠的藥物［37］，其臨床治療作用的研究已經(jīng)取得了相應(yīng)的成果，其中包括Met-ENK

對(duì)哮喘的治療［38］，調(diào)節(jié)心肌細(xì)胞生長(zhǎng)保護(hù)心肌［39-40］，和作為一種鎮(zhèn)痛劑的應(yīng)用［41-42］。特別是Met-ENK的抗腫瘤作用目前倍受學(xué)者關(guān)注，也將是Met-ENK臨床應(yīng)用研究的重要方向。希望人們對(duì)Met-ENK的研究更加透徹深入，Met-ENK能夠廣泛的應(yīng)用于臨床，為病人解除病痛的折磨。

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