添加丙氨酰谷氨酰胺血液保存液對(duì)儲(chǔ)存血液紅細(xì)胞影響的實(shí)驗(yàn)研究*

李大鵬，呂春雷，王鳳嬌，任 紅，鄭文哲

(解放軍88醫(yī)院a.中心實(shí)驗(yàn)室；b.醫(yī)務(wù)處；c.輸血科，山東泰安 271000)

儲(chǔ)存血液隨保存期延長(zhǎng)，因紅細(xì)胞生存條件變化及代謝廢物產(chǎn)生，以及部分保存紅細(xì)胞壽命縮短及損傷增加等因素，對(duì)紅細(xì)胞代謝、功能等造成不同程度影響，臨床輸注血液可能發(fā)生受血者血K+升高、非溶血性輸血反應(yīng)等[1～3]。筆者選擇在血液保存液Ⅲ中添加丙氨酰谷氨酰胺方式，結(jié)合采集血液儲(chǔ)存過(guò)程中監(jiān)測(cè)游離血紅蛋白(free hemoglobin,FHB)變化，探討其對(duì)紅細(xì)胞及儲(chǔ)存血液質(zhì)量的影響，現(xiàn)報(bào)告如下。

1 材料與方法

1.1 研究對(duì)象 選擇參與采供血機(jī)構(gòu)無(wú)償獻(xiàn)血人員10例，均為男性，年齡不限，符合獻(xiàn)血條件，采集未抗凝靜脈血。

1.2 儀器與試劑 測(cè)定FHB主要儀器包括722型光柵分光光度計(jì)(上海第三分析儀器廠，檢測(cè)波長(zhǎng)510 nm，1 cm光徑比色杯)、5415R臺(tái)式冷凍小型離心機(jī)、5810R臺(tái)式冷凍高速離心機(jī)(德國(guó)Eppendorf公司)等。FHB測(cè)定試劑盒購(gòu)自南京建成生物工程研究所。

1.3 血液保存液配制 選取臨床使用丙氨酰谷氨酰胺注射液(四川科倫，50 ml∶10 g)加入0.9 g/dl氯化鈉注射液50 ml稀釋，選取采供血機(jī)構(gòu)常規(guī)使用一次性使用塑料血袋中血液保存液Ⅲ[四川南格爾公司，生產(chǎn)批號(hào)150123，藥品批準(zhǔn)文號(hào)(國(guó)藥準(zhǔn)字H20045509)]，其配方主要為枸櫞酸鈉、枸櫞酸、無(wú)水葡萄糖等。丙氨酰谷氨酰胺稀釋液與血液保存液Ⅲ按1.8∶1比例混合均勻配成實(shí)驗(yàn)組血液保存液，對(duì)照組血液保存液為血液保存液Ⅲ。

1.4 實(shí)驗(yàn)方案 選取無(wú)菌試管20只均分為A，B組。A組為實(shí)驗(yàn)組，1～10管中均分別加入丙氨酰谷氨酰胺稀釋液0.756 ml及血液保存液Ⅲ0.42 ml；B組為對(duì)照組，1～10管均分別加入血液保存液Ⅲ0.42 ml。

按照一次性使用塑料血袋血液保存液采集全血要求，分別采集10例獻(xiàn)血者未抗凝靜脈血，對(duì)應(yīng)加入A，B兩組1～10試管中各3 ml，充分搖勻后放置到4～6℃冰箱保存。

1.5 指標(biāo)測(cè)定 血液采集后第10，21，35天分別檢測(cè)A，B兩組FHB含量。FHB測(cè)定采用分化比色法，嚴(yán)格按試劑盒操作說(shuō)明書(shū)要求進(jìn)行實(shí)驗(yàn)操作，510 nm波長(zhǎng)測(cè)各管吸光度A，檢測(cè)范圍為0～200 mg/L。

2 結(jié)果

采血后第10，21，35天分別檢測(cè)A，B兩組FHB含量，數(shù)據(jù)按檢測(cè)時(shí)間分組為T(mén)1，T2，T3，共AT1，AT2，AT3，BT1，BT2，BT36組，各組基本統(tǒng)計(jì)量見(jiàn)表1。由相同檢測(cè)時(shí)間同樣本A，B兩組檢測(cè)值取得配對(duì)樣本數(shù)據(jù)，配對(duì)t檢驗(yàn)結(jié)果見(jiàn)表2。其中AT1-BT1，AT2-BT2，AT3-BT3組總體均數(shù)均不為0(P值均<0.05)，各組間差異均有統(tǒng)計(jì)學(xué)意義(P<0.05)。

實(shí)驗(yàn)數(shù)據(jù)資料為重復(fù)測(cè)量資料(時(shí)間因素和組別因素)，對(duì)數(shù)據(jù)進(jìn)行球型檢驗(yàn)，取得ε校正系數(shù)進(jìn)行數(shù)據(jù)校正(Greenhouse-Geisser法)，檢驗(yàn)結(jié)果見(jiàn)表3；對(duì)重復(fù)效應(yīng)和交互效應(yīng)進(jìn)行方差分析(F檢驗(yàn))，結(jié)果表明各檢測(cè)時(shí)間之間差異具有統(tǒng)計(jì)學(xué)意義(F=68.031，P<0.001)，檢測(cè)組間差異有統(tǒng)計(jì)學(xué)意義(F=21.422，P<0.05)，時(shí)間與組別因素之間無(wú)顯著交互作用(F=1.924，P=0.194>0.05)。LSD法進(jìn)行各檢測(cè)時(shí)間之間多重比較，結(jié)果見(jiàn)表4。表明各檢測(cè)時(shí)間之間FHB含量差異均具有統(tǒng)計(jì)學(xué)意義(P<0.05)，相同檢測(cè)時(shí)間A，B兩組間差異均有統(tǒng)計(jì)學(xué)意義(P<0.05)，組間FHB含量A組均顯著低于B組。

在α=0.05置信水平下，各檢測(cè)時(shí)間之間FHB含量均存在顯著性差異，相同檢測(cè)時(shí)間組間FHB含量均存在顯著性差異，A組均顯著低于B組。

表1 各組血漿FHB檢測(cè)值(mg/L)

表2 各組FHB配對(duì)t檢驗(yàn)結(jié)果

注：各組間差異均有統(tǒng)計(jì)學(xué)意義(P<0.05)。

表3 球型檢驗(yàn)結(jié)果

表4 不同檢測(cè)時(shí)間之間LSD多重比較結(jié)果

注：各檢測(cè)時(shí)間之間FHB含量差異均具有統(tǒng)計(jì)學(xué)意義(P<0.05)；相同檢測(cè)時(shí)間A，B兩組間差異均有統(tǒng)計(jì)學(xué)意義(P<0.05)。

3 討論

血液離開(kāi)機(jī)體循環(huán)，受到儲(chǔ)存及保養(yǎng)條件限制會(huì)發(fā)生“保存損傷”，其各種功能指標(biāo)會(huì)發(fā)生改變，能保持穩(wěn)定的細(xì)胞內(nèi)、外環(huán)境，則紅細(xì)胞能存活且維持正常生理功能[4]。血液保存液是影響血液儲(chǔ)存的主要因素，科學(xué)、合理改良現(xiàn)有血液保存液，不斷提高儲(chǔ)存血液質(zhì)量及臨床輸注效果，已成為現(xiàn)階段重要研究課題[5～8]。

紅細(xì)胞隨保存時(shí)間延長(zhǎng)，其膜上脂蛋白和脂質(zhì)逐漸喪失，細(xì)胞內(nèi)鉀離子降低及鈉、鈣離子升高，致細(xì)胞變形能力減低及滲透脆性增加，受到外界因素影響會(huì)發(fā)生溶血致血紅蛋白逸出，致血漿FHB含量不斷升高，影響紅細(xì)胞攜氧能力及輸血效果。FHB含量是反映紅細(xì)胞膜穩(wěn)定性及代謝程度的主要標(biāo)志，也是檢測(cè)紅細(xì)胞溶血的主要指標(biāo)，在儲(chǔ)存血液中含量變化可體現(xiàn)血液保存液對(duì)紅細(xì)胞膜穩(wěn)定性的影響，也是判斷全血質(zhì)量和安全輸注的重要指標(biāo)[5，9]。

丙氨酰谷氨酰胺是腸外營(yíng)養(yǎng)的組成部分，適用于分解代謝和高代謝狀況等患者，以及對(duì)急性肺損傷患者的保護(hù)等[10]，在血液中可迅速分解為丙氨酸和谷氨酰胺(Glutamine Gln)，谷氨酰胺可減少和對(duì)抗自由基對(duì)機(jī)體組織器官的損傷，提高血漿中谷胱甘肽水平及機(jī)體抗氧化水平，其被酶解產(chǎn)生NH4可增加紅細(xì)胞膜的流動(dòng)性及對(duì)機(jī)械壓的抗性[11]。

本文實(shí)驗(yàn)數(shù)據(jù)表明：各檢測(cè)時(shí)間之間FHB含量均存在顯著性差異，同一檢測(cè)時(shí)間組間FHB含量均存在顯著性差異，A組均顯著低于B組，表明儲(chǔ)存血液隨保存時(shí)間延長(zhǎng)，各種因素導(dǎo)致紅細(xì)胞溶血率上升，造成血紅蛋白逸出使FHB含量顯著升高，F(xiàn)HB含量與保存時(shí)間呈正相關(guān)關(guān)系；同時(shí)，相同時(shí)間檢測(cè)血漿FHB含量A組均顯著低于B組，表明添加丙氨酰谷氨酰胺血液保存液Ⅲ可顯著降低紅細(xì)胞溶血率，對(duì)紅細(xì)胞膜保護(hù)作用優(yōu)于血液保存液Ⅲ，對(duì)紅細(xì)胞具有顯著保護(hù)作用，可增加紅細(xì)胞膜流動(dòng)性及降低外界因素造成紅細(xì)胞膜破裂溶血，減少因紅細(xì)胞生存條件變化等因素對(duì)紅細(xì)胞造成的影響，提高儲(chǔ)存血液質(zhì)量及輸注效果。

根據(jù)本文實(shí)驗(yàn)數(shù)據(jù)，在經(jīng)典血液保存液Ⅲ中按比例添加丙氨酰谷氨酰胺，對(duì)紅細(xì)胞膜保護(hù)作用優(yōu)于血液保存液Ⅲ，可對(duì)紅細(xì)胞產(chǎn)生十分顯著的保護(hù)作用，能顯著降低紅細(xì)胞溶血及血漿FHB含量，提高儲(chǔ)存血液質(zhì)量及臨床輸注效果，并提高受血者免疫功能和血紅蛋白含量，對(duì)危重病患者具有降低感染率等顯著治療作用[11]，充分體現(xiàn)其在血液采集、血液保存及臨床輸血工作中的良好價(jià)值[12]。

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