腹膜透析液微生物培養(yǎng)病原學分析*

吳友偉，石 紅，劉萬靜，答 嶸(西安交通大學第一附屬醫(yī)院檢驗科，西安 710061)

腹膜炎是持續(xù)性不臥床腹膜透析(continuous ambulatory peritoneal dialysis，CAPD)的常見并發(fā)癥。快速準確的鑒定致病微生物對于正確診斷與選擇合理的抗感染治療至關(guān)重要[1，2]。腹膜透析液培養(yǎng)是目前臨床廣泛使用的獲得腹膜炎致病微生物的檢驗方法，本研究通過回顧性分析我院近年來腹膜透析液標本的病原菌鑒定結(jié)果與抗生素藥敏試驗結(jié)果，對CAPD相關(guān)腹腔感染的病原菌分布與耐藥性進行總結(jié)，從而為臨床抗感染治療提供實驗室依據(jù)。

1 材料與方法

1.1 研究對象 收集分析2012年11月～2016年3月西安交通大學醫(yī)學院第一附屬醫(yī)院臨床患者腹膜透析液標本中分離培養(yǎng)陽性結(jié)果的病原菌種類與藥敏試驗結(jié)果。

1.2 儀器與材料 血培養(yǎng)系統(tǒng)包括BacT/ALERT 3D全自動細菌/分枝桿菌培養(yǎng)監(jiān)測系統(tǒng)(生物梅里埃，法國)，BACTEC FX400全自動血培養(yǎng)系統(tǒng)(BD，美國)。微生物鑒定系統(tǒng)包括VITEK 2全自動微生物分析系統(tǒng)(生物梅里埃，法國)，VITEK 2 COMPACT全自動微生物分析系統(tǒng)(生物梅里埃，法國)，VITEK MS全自動快速質(zhì)譜微生物檢測系統(tǒng)(生物梅里埃，法國)。血培養(yǎng)瓶包括中和抗生素需氧瓶(生物梅里埃，法國；BD，美國)，中和抗生素厭氧瓶(生物梅里埃，法國；BD，美國)。其他包括血瓊脂平板(生物梅里埃，法國)，鑒定與藥敏卡(生物梅里埃，法國)。

1.3 方法 臨床醫(yī)生無菌操作采集腹膜透析液后注入血培養(yǎng)瓶，立即送檢至檢驗科。條碼掃描后，放入血培養(yǎng)儀內(nèi)進行培養(yǎng)。培養(yǎng)瓶內(nèi)如有微生物，其代謝產(chǎn)生CO2可滲透感應(yīng)器，檢測儀通過對感應(yīng)器顏色或熒光的檢測而判斷陽性。如果經(jīng)過一定時間培養(yǎng)后顏色或熒光沒有顯著變化，此標本即為陰性。陽性培養(yǎng)瓶轉(zhuǎn)種于血瓊脂平板，生長的菌株按照操作規(guī)程用全自動微生物分析儀進行鑒定，并檢測其對抗生素的敏感性。

1.4 統(tǒng)計學分析 采用世界衛(wèi)生組織細菌耐藥性監(jiān)測網(wǎng)提供的WHONET5.6軟件進行數(shù)據(jù)統(tǒng)計分析。

2 結(jié)果

2.1 腹膜透析液病原菌分布 見表1。研究中包括革蘭陽性細菌174株(84.47%)，革蘭陰性細菌28株(13.59%)，真菌4株(1.94%)。

表1 腹膜透析液標本病原菌分布和構(gòu)成

2.2 腹膜透析液標本病原菌藥敏試驗結(jié)果分析 見表2，表3。腹膜透析液標本中革蘭陽性細菌與革蘭陰性細菌均有不同程度的耐藥現(xiàn)象。葡萄球菌屬僅對利奈唑胺、萬古霉素敏感，敏感率為100%，耐甲氧西林金黃色葡萄球菌(methicillin-resistant staphylococcus aureus，MRSA)在檢出的金黃色葡萄球菌中比例為25%，而耐甲氧西林凝固酶陰性葡萄球菌(methicillin-resistant coagulase-negative staphylococcus，MRCNS)在檢出的凝固酶陰性葡萄球菌中比例為69.2%。大腸埃希菌僅對美羅培南、亞胺培南、哌拉西林-他唑巴坦敏感，敏感率為100%，產(chǎn)超廣譜β內(nèi)酰胺酶菌(ESBLs)比例為46.7%。

表2 腹膜透析液標本葡萄球菌屬藥敏試驗結(jié)果(%)

注：R.耐藥；I.中敏；S.敏感。

表3 腹膜透析液標本大腸埃希菌藥敏試驗結(jié)果(%)

3 討論

CAPD是腹膜透析治療的重要方法，由于其能夠在家進行，大大方便了患者，但是也對患者與家屬的自我管理提出了更高要求。CAPD患者治療依從性欠佳，會導致并發(fā)癥的發(fā)生，尤其是感染性腹膜炎不僅造成患者痛苦，而且增加治療費用。因而，及時診斷與正確進行目標性抗感染治療，選擇合理的抗感染治療至關(guān)重要。腹膜透析液培養(yǎng)是目前臨床廣泛使用的獲得腹膜炎致病微生物的檢驗方法，本研究通過回顧性分析我院近年來腹膜透析液標本的病原菌鑒定結(jié)果與抗生素藥敏試驗結(jié)果，對CAPD相關(guān)腹腔感染的病原菌分布與耐藥性進行總結(jié)，從而為臨床抗感染治療提供實驗室依據(jù)。

研究結(jié)果表明腹膜透析液標本分離培養(yǎng)菌種中，細菌為主要病原菌占98.06%(其中以革蘭陽性細菌為主占84.47%)，而真菌僅見酵母菌占1.94%。研究結(jié)果與其他研究相似，均以革蘭陽性細菌為主[3，4]。研究報道對腹膜炎病原菌進行檢測，致病菌排前3位的細菌為葡萄球菌、鏈球菌、大腸埃希菌[5]。革蘭陽性菌中最常見為凝固酶陰性葡萄球菌，革蘭陰性菌最常見的為大腸埃希菌[3，4]。本研究結(jié)果顯示革蘭陽性細菌中最常見的是表皮葡萄球菌及其他凝固酶陰性的葡萄球菌，革蘭陰性細菌中最常見的是大腸埃希菌，與報道結(jié)果相同。表皮葡萄球菌、腸球菌等系皮膚正常寄生菌，感染率如此高，分析與腹膜透析系侵入性操作，破壞了腹腔的密閉性，以及患者免疫力低下等因素，正常寄生菌趁虛而入造成感染。

本研究對檢出率最高的細菌進行藥敏試驗結(jié)果的分析，發(fā)現(xiàn)具有不同程度的耐藥。凝固酶陰性葡萄球菌中MRCNS檢出率為69.2%，而金黃色葡萄球菌中MRSA檢出率為25%。大腸埃希菌中產(chǎn)ESBLs菌檢出率為46.7%。與研究報道相似[4]。本研究結(jié)果顯示革蘭陽性球菌對萬古霉素、利奈唑胺均敏感，大腸埃希菌對亞胺培南、美羅培南均敏感，對氨芐西林耐藥率高達80%。均與其他學者研究結(jié)果相似[3，4]。耐藥菌株的產(chǎn)生分析與臨床廣泛應(yīng)用抗生素、免疫抑制劑等有關(guān)。

盡管傳統(tǒng)的培養(yǎng)鑒定方法仍廣泛適用于臨床微生物實驗室中，但是對于生長緩慢的細菌或目前商品化試劑盒菌株庫中未包括的菌種很難鑒定[6]。另外對于一些未培養(yǎng)細菌與苛養(yǎng)菌，或者近期使用過抗生素的患者更難檢測到[7，8]。研究者利用聚合酶鏈式反應(yīng)對腹膜透析液標本直接進行檢測，效果理想，能夠用于培養(yǎng)方法的補充檢測手段[9]。另有研究者對于腹膜透析液中白細胞計數(shù)、微量蛋白水平進行監(jiān)測作為早期腹膜炎發(fā)生的預警指標，能夠為盡早診斷及時干預提供有效的實驗室輔助[10]，因此，兩者聯(lián)合應(yīng)用是否可為診斷和治愈贏得一定的治療時間，有待進一步的研究證實。

腹膜透析相關(guān)性腹膜炎病原菌以細菌為主，最常見的是革蘭陽性細菌中的葡萄球菌和革蘭陰性細菌中的大腸埃希菌。提高腹膜透析液培養(yǎng)陽性率與鑒定速度，針對病原菌給予正確目標性抗感染治療是腹膜透析相關(guān)性腹膜炎治療的重中之重。

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