磷酸化蛋白EBP50通過降低ERK1/2活性抑制乳腺癌細(xì)胞MCF-7增殖能力

網(wǎng)絡(luò)出版時(shí)間：2014-12-4 13:45網(wǎng)絡(luò)出版地址：http://www.cnki.net/kcms/doi/10.3969/j.issn.1001-1978.2015.01.013.html

磷酸化蛋白EBP50通過降低ERK1/2活性抑制乳腺癌細(xì)胞MCF-7增殖能力

劉虹，馬艷，邵榮光

(中國(guó)醫(yī)學(xué)科學(xué)院北京協(xié)和醫(yī)學(xué)院醫(yī)藥生物技術(shù)研究所，北京100050)

中國(guó)圖書分類號(hào)：R329.24；R341；R394.2；R737.9；R977.6

摘要:目的探討磷酸化蛋白EBP50對(duì)乳腺癌細(xì)胞MCF-7細(xì)胞增殖的影響及其潛在機(jī)制研究。方法使用pGPU6/Neo載體構(gòu)建穩(wěn)定敲除EBP50表達(dá)的MCF-7細(xì)胞株，使用Western blot檢測(cè)乳腺癌細(xì)胞中EBP50、c-myc、p-ERK1/2以及ERK1/2的表達(dá)，使用磺酰羅丹明B染色方法檢測(cè)乳腺癌細(xì)胞增殖。結(jié)果使用pGPU6/Neo載體可以穩(wěn)定地降低MCF-7細(xì)胞中EBP50的表達(dá)，敲除EBP50可以促進(jìn)乳腺癌細(xì)胞增殖，同時(shí)促進(jìn)c-myc的表達(dá)，上調(diào)ERK1/2的磷酸化水平，但不影響ERK1/2的表達(dá)。結(jié)論EBP50可以通過抑制ERK1/2活性，抑制MCF-7乳腺癌細(xì)胞增殖能力。

關(guān)鍵詞：EBP50； ERK1/2；MCF-7；乳腺癌；增殖；pGPU6/Neo

doi:10.3969/j.issn.1001-1978.2015.01.013

文章編號(hào)：

文獻(xiàn)標(biāo)志碼：A1001-1978(2015)01-0055-05

收稿日期:2014-09-23,修回日期:2014-11-04

基金項(xiàng)目：國(guó)家科技部“重大新藥創(chuàng)制”科技重大專項(xiàng)(No 2012ZX09301002-01);國(guó)家自然科學(xué)基金資助項(xiàng)目(No 31401186)；中央級(jí)公益性科研院所基本科研業(yè)務(wù)專項(xiàng)(No IMBF201407)

作者簡(jiǎn)介：劉虹(1985-)，女，博士，助理研究員，研究方向：分子生物學(xué)與腫瘤藥理學(xué)，Tel：010-83166673，E-mail：liuhong_1006@live.com；

通訊作者邵榮光(1957-)，男，博士，研究員，研究方向：抗腫瘤藥理學(xué)，,Tel：010-83166673， E-mail：shaor@imb.pumc.edu.cn

Abstract:Aim To investigate the relationship between phosphoprotein EBP50 and the proliferation of breast cancer in MCF-7 cells. MethodsThe qualified recombinant plasmid sh-EBP50-pGPU6/Neo was transfected into MCF-7 cells with EBP50 knocking down. The expression of EBP50, c-myc, p-ERK1/2, and ERK1/2 was detected by Western blot. The proliferation ability of cells was detected by sulforhodamine B assay. ResultsThe EBP50 knocking down plasmid was constructed successfully. MCF-7 cells with EBP50 knocking down had been established successfully. Knocking down of EBP50 increased the proliferation of MCF-7 significantly, and partially augmented the expression of c-myc and phosphorylation of ERK1/2. However, knocking down of EBP50 did not impact the expression of ERK1/2. ConclusionEBP50 suppresses the proliferation of breast cancer cell through inhibiting the activity of ERK1/2 in MCF-7 cell line.

磷酸化蛋白50[ezrin/radixin/moesin (ERM)-binding phosphoprotein 50，EBP50]是一個(gè)多功能連接蛋白，可以通過PDZ-1結(jié)構(gòu)域、PDZ-2結(jié)構(gòu)域及EB結(jié)構(gòu)域與其他蛋白相互結(jié)合，參與細(xì)胞的多種生物活動(dòng)。近年來的研究表明，EBP50的表達(dá)與乳腺癌的增殖和轉(zhuǎn)移密切相關(guān)。EBP50在乳腺癌細(xì)胞MDA-MB-231中含量較低，而在乳腺癌細(xì)胞MCF-7中表達(dá)較高[1]；上調(diào)EBP50的表達(dá)可以降低乳腺癌細(xì)胞的增殖及侵襲能力[2]。而一項(xiàng)針對(duì)222例乳腺癌患者的研究表明，EBP50的低表達(dá)可導(dǎo)致患者存活率降低[3]。以上的文獻(xiàn)說明，在乳腺癌中，EBP50具有潛在的抗腫瘤能力，但抗腫瘤能力并未在上皮樣乳腺癌細(xì)胞MCF-7細(xì)胞中得到驗(yàn)證。

有絲分裂原激活激酶(mitogen-activated kinase，MAPK)信號(hào)通路在多個(gè)物種中高度保守，是重要的細(xì)胞增殖與分化的調(diào)節(jié)信號(hào)通路。細(xì)胞外調(diào)節(jié)蛋白激酶(extracellular regulated protein kinases，ERK)是MAPK信號(hào)通路中的主要作用分子，參與并調(diào)控多種腫瘤的發(fā)生發(fā)展進(jìn)程[4]。ERK持續(xù)活化可以促進(jìn)信號(hào)傳導(dǎo)與轉(zhuǎn)錄活化因子(signal transducers and activators of transcription，STAT1)降解，從而抑制其促凋亡、抗腫瘤能力[5]。

在本研究中，我們構(gòu)建了穩(wěn)定干擾EBP50表達(dá)的乳腺癌MCF-7細(xì)胞株，并對(duì)其增殖能力及潛在作用機(jī)制進(jìn)行探討。我們發(fā)現(xiàn)，EBP50可以抑制上皮樣乳腺癌細(xì)胞MCF-7的增殖，這種抑制增殖的能力可能是通過抑制ERK1/2的活性實(shí)現(xiàn)的。本研究補(bǔ)充了EBP50抑制乳腺癌細(xì)胞增殖的分子機(jī)制研究，為研究乳腺癌發(fā)生機(jī)制提供了一定的理論依據(jù)。

1材料

1.1實(shí)驗(yàn)細(xì)胞乳腺癌MCF-7細(xì)胞購(gòu)于中國(guó)醫(yī)學(xué)科學(xué)基礎(chǔ)醫(yī)學(xué)研究所細(xì)胞培養(yǎng)中心。MCF-7細(xì)胞使用 DMEM培養(yǎng)基，10% FBS培養(yǎng)。每隔2 d傳代1次，細(xì)胞培養(yǎng)條件為 37 ℃，5% CO2。

1.2主要試劑DMEM細(xì)胞培養(yǎng)基、進(jìn)口血清FBS和胰酶購(gòu)于美國(guó)Gibco公司；Lipofectamine 2000轉(zhuǎn)染試劑購(gòu)自美國(guó)Invitrogen公司；真核表達(dá)載體pGPU6/Neo為本實(shí)驗(yàn)室保存載體；磺酰羅丹明B試劑盒購(gòu)于美國(guó)Sigma公司；抗人β-actin、EBP50、p-ERK1/2及ERK1/2抗體購(gòu)自美國(guó)Cell Signaling Technology公司；RIPA裂解液、BCA蛋白濃度定量試劑盒購(gòu)于碧云天生物科技研究所。

2方法

參考文獻(xiàn)2.1穩(wěn)定干擾EBP50表達(dá)載體構(gòu)建實(shí)驗(yàn)方法所示`([6])，在線設(shè)計(jì)針對(duì) EBP50的siRNA序列，逆轉(zhuǎn)錄合成有效靶序列的DNA，合成序列為：5′-CACCGACCAGAAACGCAGCAGCAAACTTCAAGAGA GTTTGCTGTGGTTTTTTTG-3′。將合成的小片段DNA經(jīng)酶切后與載體pGPU6/Neo相連接，用于構(gòu)建穩(wěn)定干擾EBP50的穩(wěn)轉(zhuǎn)細(xì)胞系。 2.2穩(wěn)定干擾EBP50細(xì)胞系的建立實(shí)驗(yàn)方法`([6])，具體步驟如下：預(yù)先在培養(yǎng)皿中培養(yǎng)細(xì)胞，使細(xì)胞在貼壁24 h后處于指數(shù)生長(zhǎng)期。將構(gòu)建好的載體經(jīng)大提質(zhì)粒試劑盒提純后，使用Lipofectamine 2000轉(zhuǎn)染試劑轉(zhuǎn)染進(jìn)入細(xì)胞中，待轉(zhuǎn)染后24 h更換為含有真核篩選抗性的培養(yǎng)基。培養(yǎng)約2周后，將細(xì)胞消化、重懸，經(jīng)梯度稀釋后接種于96孔板中，繼續(xù)培養(yǎng)。當(dāng)細(xì)胞在培養(yǎng)孔中形成單克隆集落時(shí)，轉(zhuǎn)移至48孔板中擴(kuò)大培養(yǎng)。2.3Western blot取適量培養(yǎng)細(xì)胞，加入RIPA裂解液后振蕩混勻，冰上放置30 min，間或振蕩；4 ℃、4 560×g，離心15 min。取上清，使用蛋白定量試劑盒測(cè)定蛋白濃度，其具體步驟參照說明書進(jìn)行。調(diào)節(jié)蛋白至相同濃度，分裝，加入5倍上樣緩沖液，96 ℃變性10 min，用于SDS電泳；使用Amersham顯色系統(tǒng)顯色，經(jīng)Western blot分析軟件測(cè)出各條帶的光密度值并分析`([6])。 2.4磺酰羅丹明B(sulforhodamine B，SRB)法檢測(cè)細(xì)胞增殖實(shí)驗(yàn)參考文獻(xiàn)方法`([7])，具體步驟如下：在每孔加入50 μL 4℃預(yù)冷的TCA溶液固定細(xì)胞，TCA溶液的終濃度為10%。靜置5 min移入4℃冰箱中固定1 h，取出，用去離子水沖洗5遍，室溫晾干。待96孔板室溫下晾干后，每孔加入0.4%的SRB染液70 μL，染色30 min后倒掉染液，用1%乙酸沖洗4次，去除未結(jié)合的染料，室溫晾干。用100 μL非緩沖Tris-base堿液溶解與細(xì)胞蛋白結(jié)合的染料，水平搖床上振蕩20 min，采用酶標(biāo)儀540 nm處測(cè)定光吸收值。2.5統(tǒng)計(jì)學(xué)處理實(shí)驗(yàn)結(jié)果以±s表示，兩樣本均數(shù)間比較采用t檢驗(yàn)。

3結(jié)果

3.1穩(wěn)定干擾EBP50的載體建立將合成的小片段DNA經(jīng)酶切后與載體pGPU6/Neo相連接，轉(zhuǎn)化進(jìn)大腸桿菌DH5α中進(jìn)行擴(kuò)增。然后分別提純空載體Mock以及sh-EBP50質(zhì)粒，進(jìn)行測(cè)序，結(jié)果如下圖所示(Fig 1A)，經(jīng)DNA-MAN軟件比對(duì)后證明測(cè)序結(jié)果正確(Fig 1B)，說明載體構(gòu)建成功。

Fig 1Construction of sh-EBP50 plasmid

A: The sequencing results of sh-EBP50 plasmid; B: The comparison results of sh-EBP50 plasmid with application of DNA-MAN.

3.2穩(wěn)定干擾EBP50的乳腺癌細(xì)胞株篩選鑒定在穩(wěn)定干擾EBP50細(xì)胞株形成的單克隆細(xì)胞中，挑選6個(gè)克隆細(xì)胞檢測(cè)其EBP50的蛋白表達(dá)水平，以確定其干擾效果。使用空載體Mock組作為空白對(duì)照，實(shí)驗(yàn)結(jié)果顯示，與Mock組相比，單克隆A1、A2、A3、B1、B2以及B3細(xì)胞株中的EBP50表達(dá)有所降低，其中A3以及B3中EBP50表達(dá)的降低差異具有顯著性(P<0.01)，而A1及 B1中EBP50的降低差異具有顯著性(P<0.01)，上述結(jié)果說明單克隆A1、A3、B1以及B3細(xì)胞株是可以穩(wěn)定干擾EBP50表達(dá)的乳腺癌細(xì)胞株(Fig 2)。在后續(xù)的研究中，我們選擇A1細(xì)胞株作為研究對(duì)象(簡(jiǎn)稱為sh-EBP50)。

A and B: The MCF-7 cells were stably transfected with sh-EBP50 plasmid. The expression of EBP50 was detected by Western blot.**P<0.01vsMock.

A: The expression of EBP50 was reduced through stably transfecting the sh-EBP50 plasmid. The MCF-7 cells were stably transfected with sh-EBP50 plasmid. The expression of EBP50 was detected by Western blot; B: Silencing EBP50 promotes the proliferation of breast cancer in MCF-7 cell line. The proliferation of sh-EBP50 cells was detected by SRB assay; C: Silencing EBP50 increases the expression of c-myc. The MCF-7 cells were stably transfected with sh-EBP50 plasmid. The expression of c-myc was detected by Western blot.**P<0.01vsMock.

3.3干擾EBP50的表達(dá)促進(jìn)乳腺癌MCF-7細(xì)胞增殖 研究表明，EBP50與乳腺癌的增殖密切相關(guān)，上調(diào)EBP50的表達(dá)可以降低乳腺癌細(xì)胞MDA-MB-231的增殖能力[1]。因此，我們檢測(cè)了敲除EBP50后對(duì)MCF-7乳腺癌細(xì)胞增殖的影響。使用SRB實(shí)驗(yàn)結(jié)果顯示，敲除EBP50(Fig 3A)可以明顯地促進(jìn)乳腺癌細(xì)胞的增殖能力(Fig 3B)；而Western blot實(shí)驗(yàn)顯示，敲除EBP50可以促進(jìn)增殖信號(hào)標(biāo)志分子c-myc的表達(dá)(Fig 3C)。以上的實(shí)驗(yàn)結(jié)果顯示，在乳腺癌MCF-7細(xì)胞中敲除EBP50可以促進(jìn)其增殖能力。

3.4干擾EBP50的表達(dá)增加乳腺癌細(xì)胞中ERK1/2激酶活性ERK包括ERK1與ERK2兩種亞型，均可參與并調(diào)控多種腫瘤的發(fā)生發(fā)展進(jìn)程[4]。在本研究中，干擾EBP50表達(dá)后可以上調(diào)ERK1和ERK2激酶的磷酸化水平，同時(shí)不影響ERK1和ERK2激酶原型的蛋白表達(dá)量(Fig 4)，上述實(shí)驗(yàn)結(jié)果說明，敲除EBP50可以激活乳腺癌中ERK1/2的活性。

Fig 4Silencing EBP50 stimulates phosphorylation of

The MCF-7 cells were stably transfected with sh-EBP50 plasmid. The expression of phosphorylation of ERK1/2 and ERK1/2 was detected by Western blot.**P<0.01vsMock.

4討論

大量研究表明，EBP50參與了乳腺癌的增殖和轉(zhuǎn)移。上調(diào)EBP50的表達(dá)可以降低乳腺癌細(xì)胞的侵襲能力，敲除EBP50可以促進(jìn)T47D細(xì)胞的增殖[2]。此外，EBP50缺失還可以誘導(dǎo)上皮細(xì)胞發(fā)生上皮間質(zhì)轉(zhuǎn)化(epithelial-mesenchymal transition，EMT)[8]。而在原發(fā)性乳腺癌以及乳腺癌細(xì)胞系MDA-MD-231中，EBP50基因發(fā)生錯(cuò)義突變[2]。本研究中，我們發(fā)現(xiàn)了敲除EBP50可以促進(jìn)MCF-7細(xì)胞增殖，本文的研究結(jié)果與上述文獻(xiàn)報(bào)道相符，本研究補(bǔ)充了EBP50抑制乳腺癌增殖的研究。此外，也有文獻(xiàn)表明，EBP50具有一定的促進(jìn)腫瘤細(xì)胞生長(zhǎng)與轉(zhuǎn)移的能力。在胃癌細(xì)胞中，EBP50在胞質(zhì)和胞核中均高表達(dá)，其表達(dá)量與腫瘤的大小呈正相關(guān)[9]。在肝細(xì)胞癌中，EBP50主要分布于細(xì)胞核中，并且可以促進(jìn)肝細(xì)胞癌的生長(zhǎng)[10]。在腎細(xì)胞癌中，EBP50可以與Ezrin結(jié)合形成蛋白質(zhì)復(fù)合物，通過激活Rac1-ARHGEF7信號(hào)通路，促進(jìn)腎細(xì)胞癌轉(zhuǎn)移過程[11]。上述文獻(xiàn)表明，EBP50對(duì)于腫瘤的調(diào)控作用具有組織差異性，在乳腺癌中，EBP50主要發(fā)揮抑制腫瘤生長(zhǎng)和轉(zhuǎn)移的作用，提示EBP50可以作為研究治療乳腺癌發(fā)生發(fā)展機(jī)制的特異性靶點(diǎn)。

myc基因家族是較早發(fā)現(xiàn)的一組癌基因，包括c-myc、n-myc、l-myc。myc基因家族及其產(chǎn)物可促進(jìn)細(xì)胞增殖、永生化、去分化和轉(zhuǎn)化，因而在多種腫瘤形成過程中處于重要地位；而c-myc參與了多種乳腺癌的發(fā)生發(fā)展進(jìn)程。腫瘤抑制因子(breast cancer susceptibility gene 1，BRCA1)可以抑制c-myc的轉(zhuǎn)錄活性以及其轉(zhuǎn)化活性，當(dāng)BRCA1缺失可以導(dǎo)致c-myc的過量表達(dá)，從而誘導(dǎo)乳腺癌的發(fā)生[12]。此外，c-myc還是雌激素受體(estrogen receptor，ER)以及表皮生長(zhǎng)因子受體(epidermal growth factor receptor，EGFR)信號(hào)通路的下游效應(yīng)分子，因而c-myc的高表達(dá)還是導(dǎo)致乳腺癌對(duì)輔助治療發(fā)生耐受的重要原因[13]。上述文獻(xiàn)表明，c-myc是乳腺癌細(xì)胞增殖過程中重要的生物學(xué)標(biāo)志物，直接反映了乳腺癌細(xì)胞的增殖能力，因此在本研究中，我們除了使用SRB染色方式評(píng)價(jià)乳腺癌細(xì)胞的細(xì)胞活力以外，還檢測(cè)了c-myc的蛋白表達(dá)量，共同評(píng)價(jià)EBP50缺失后對(duì)乳腺癌細(xì)胞增殖能力的影響。

EBP50還參與了其他多種分子介導(dǎo)的腫瘤增殖過程，例如EGFR[14]、Ⅱ型神經(jīng)纖維瘤分子(neurofibromatosisⅡ，NF2)[15]、血小板衍生生長(zhǎng)因子受體(platelet-derived growth factor receptor，PDGFR)[16]等。當(dāng)EGF刺激激活EGFR誘導(dǎo)MDA-MD-231細(xì)胞增殖，過量表達(dá)EBP50可以抑制ERK的激酶活性從而抑制MDA-MD-231細(xì)胞的增殖[4]，說明EBP50的抑制腫瘤作用可能是通過抑制ERK信號(hào)通路實(shí)現(xiàn)。此外，抑制ERK還可以降低腫瘤細(xì)胞的集落形成[17]，然而上調(diào)EBP50的表達(dá)可以通過抑制ERK的激酶活性，降低腫瘤細(xì)胞的集落形成[4]。上述研究表明，上調(diào)EBP50的表達(dá)可以通過降低ERK的活性，從而抑制腫瘤細(xì)胞的增殖與集落形成。在本研究中，我們發(fā)現(xiàn)EBP50缺失后可以促進(jìn)乳腺癌的增殖，同時(shí)上調(diào)ERK1/2的磷酸化水平，我們的實(shí)驗(yàn)結(jié)果從EBP50缺失的角度證明了EBP50可以通過抑制ERK的活性，繼而影響乳腺癌細(xì)胞的增殖，補(bǔ)充了EBP50對(duì)ERK活性調(diào)節(jié)的關(guān)系，及其對(duì)乳腺癌細(xì)胞增殖的影響。

綜上所述，本研究通過構(gòu)建穩(wěn)定干擾EBP50表達(dá)的MCF-7乳腺癌細(xì)胞株，探討EBP50對(duì)乳腺癌增殖的影響及潛在的機(jī)制。本研究的結(jié)果說明，EBP50可以抑制乳腺癌細(xì)胞MCF-7的增殖能力，這可能是通過抑制ERK1/2的活性實(shí)現(xiàn)的。本研究補(bǔ)充了EBP50抑制乳腺癌增殖的研究，為闡明乳腺癌的發(fā)生發(fā)展機(jī)制提供了一定的指導(dǎo)意義。

[1]Yao W, Feng D, Bian W, et al. EBP50 inhibits EGF-induced breast cancer cell proliferation by blocking EGFR phosphorylation [J].AminoAcids, 2012, 43(5): 2027-35.

[2]Pan Y, Wang L, Dai J L. Suppression of breast cancer cell growth by Na+/H+exchanger regulatory factor 1 (NHERF1) [J].BreastCancerRes, 2006, 8(6): R63.

[3]Paradiso A, Scarpi E, Malfettone A, et al. Nuclear NHERF1 expression as a prognostic marker in breast cancer [J].CellDeathDis, 2013, 4: e904.

[4]Zheng J F, Sun L C, Liu H, et al. EBP50 exerts tumor suppressor activity by promoting cell apoptosis and retarding extracellular signal-regulated kinase activity [J].AminoAcids, 2010, 38(4): 1261-8.

[5]Soond S M, Townsend P A, Barry S P, et al. ERK and the F-box protein betaTRCP target STAT1 for degradation[J].JBiolChem, 2008, 283(23): 16077-83.

[6]花芳，余嬌嬌，孫巍，等. TGF-β/ Smad3信號(hào)參與介導(dǎo)TRB3的促腫瘤作用[J]. 中國(guó)藥理學(xué)通報(bào), 2013, 29(3):323-7.

[6]Hua F, Yu J J, Sun W, et al. TGF-β/ Smad3 signaling participates in and mediates tumor progression of TRB3 [J].ChinPharmacolBull, 2013, 29(3): 323-7.

[7]張彩霞, 劉虹, 宮玉艷, 等. SphK1抑制劑SKI II抑制肝癌HepG2細(xì)胞周期及細(xì)胞侵襲[J]. 藥學(xué)學(xué)報(bào), 2014, 49(2): 204-8.

[7]Zhang C X, Liu H, Gong Y Y, et al. Inhibitions of SphK1 inhibitor SKI II on cell cycle progression and cell invasion of hepatoma HepG2 cells [J].ActaPharmSin, 2014, 49(2): 204-8.

[8]Clapéron A, Guedj N, Mergey M, et al. Loss of EBP50 stimulates EGFR activity to induce EMT phenotypic features in biliary cancer cells [J].Oncogene, 2012, 31(11): 1376-88.

[9]Lv XG1, Lei X F, Ji M Y, et al. Clinical significance of EBP50 overexpression assessed by quantum dot analysis in gastric cancer [J].OncolLett, 2013, 5(6): 1844-8.

[10]Shibata T, Chuma M, Kokubu A, et al. EBP50, a beta-catenin-associating protein, enhances Wnt signaling and is over-expressed in hepatocellular carcinoma [J].Hepatology, 2003, 38(1): 178-86.

[11]Hsu Y H, Lin W L, Hou Y T,et al. Podocalyxin EBP50 ezrin molecular complex enhances the metastatic potential of renal cell carcinoma through recruiting Rac1 guanine nucleotide exchange factor ARHGEF7 [J].AmJPathol, 2010, 176(6): 3050-61.

[12]Wang Q, Zhang H, Kajino K, et al. BRCA1 binds c-Myc and inhibits its transcriptional and transforming activity in cells [J].Oncogene, 1998, 17(15): 1939-48.

[13]Butt A J, McNeil C M, Musgrove E A, et al. Downstream targets of growth factor and oestrogen signalling and endocrine resistance: the potential roles of c-Myc, cyclin D1 and cyclin E [J].EndocrRelatCancer, 2005, 12 Suppl 1: S47-59.

[14]Goel A, Prasad A K, Parmar V S, et al. 7,8-Dihydroxy-4-methylcoumarin induces apoptosis of human lung adenocarcinoma cells by ROS-independent mitochondrial pathway through partial inhibition of ERK/MAPK signaling [J].FEBSLett, 2007, 581(13): 2447-54.

[15]James M F, Beauchamp R L, Manchanda N, et al. A NHERF binding site links the betaPDGFR to the cytoskeleton and regulates cell spreading and migration [J].JCellSci, 2004, 117(Pt 14): 2951-61.

[16]Maudsley S, Zamah A M, Rahman N, et al. Platelet-derived growth factor receptor association with Na(+)/H(+) exchanger regulatory factor potentiates receptor activity [J].MolCellBiol, 2000, 20(22): 8352-63.

[17]Bessard A, Frémin C, Ezan F, et al. RNAi-mediated ERK2 knockdown inhibits growth of tumor cellsinvitroandinvivo[J].Oncogene, 2008, 27(40): 5315-25.

Phosphoprotein EBP50 suppresses proliferation of breast cancer

by inhibiting activity of ERK1/2 in MCF-7 cell line

LIU Hong, MA Yan, SHAO Rong-guang

(DeptofOncology,InstituteofMedicinalBiotechnology,ChineseAcademyofMedicalSciences&

PekingUnionMedicalCollege,Beijing100050,China)

Key words: EBP50; ERK1/2; MCF-7; breast cancer; proliferation; pGPU6/Neo