天冰調(diào)督膠囊對(duì)激怒應(yīng)激模型大鼠食欲口味、情感行為的影響

天冰調(diào)督膠囊對(duì)激怒應(yīng)激模型大鼠食欲口味、情感行為的影響

丁梅裴林1李胡廣1馬學(xué)偉1馬宗敏1苗文麗1

(唐山市第九醫(yī)院，河北唐山063000)

摘要〔〕目的觀察天冰調(diào)督膠囊對(duì)激怒應(yīng)激模型大鼠食欲口味、情感行為的影響。方法60只Wistar雄性大鼠隨機(jī)分6組，除正常組外，其余5組采用長(zhǎng)海綿鉗夾尾、捆綁及捆綁后合籠的綜合方法制造大鼠肝胃不和證模型，連續(xù)造模14 d。自造模第7天起藥物干預(yù)治療，并測(cè)量大鼠食量，兩瓶法測(cè)攝入液體總量。治療第7天開(kāi)始礦場(chǎng)實(shí)驗(yàn)和拒俘行為觀察，抬高迷宮試實(shí)驗(yàn)和Y迷宮測(cè)試。結(jié)果與模型組相比，各治療組食量上升、飲水量增多；各治療組曠場(chǎng)活動(dòng)性積分下降，拒俘反應(yīng)積分明顯改善；開(kāi)放臂中逃避時(shí)間減少；Y迷宮實(shí)驗(yàn)各治療組選擇錯(cuò)誤數(shù)明顯減少。結(jié)論天冰調(diào)督膠囊能改善大鼠焦慮抑郁狀態(tài)。

關(guān)鍵詞〔〕天冰調(diào)督膠囊；激怒應(yīng)激；肝胃不和；情感行為

中圖分類號(hào)〔〕R285.5〔

基金項(xiàng)目：國(guó)家中醫(yī)藥管理局科研

通訊作者：裴林(1961-)，男，主任醫(yī)師，碩士生導(dǎo)師，主要從事神經(jīng)精神疾病研究。

1河北省中醫(yī)藥研究院

第一作者：丁梅(1963-)，女，副主任醫(yī)師，主要從事臨床藥學(xué)研究。

隨著社會(huì)的發(fā)展，人們生活節(jié)奏的加快，壓力加大，精神情緒應(yīng)激引起的疾病逐年增多，天冰調(diào)督膠囊對(duì)精神情緒應(yīng)激引起的疾病具有很好的療效，本研究探討其可能的作用機(jī)制。

1材料與方法

1.1實(shí)驗(yàn)動(dòng)物清潔級(jí)雄性Wistar大鼠60只，購(gòu)于河北醫(yī)科大學(xué)動(dòng)物中心(合格證編號(hào)：2006140)，起始體重(200±20) g，適應(yīng)性喂養(yǎng)1 w，分為6籠，每籠10只。實(shí)驗(yàn)前自由飲食進(jìn)水，溫度控制在22℃～25 ℃，12 h光照/黑暗條件。

1.2藥物天冰調(diào)督膠囊組成為柴胡、桂枝、天麻、全蝎、黃連、絞股藍(lán)等。批準(zhǔn)文號(hào)為冀藥制字Z20050746，按照國(guó)家標(biāo)準(zhǔn)〔1〕配制。柴胡疏肝散各藥飲片由河北省中醫(yī)藥研究院飲片廠提供。黛力新：丹麥靈北醫(yī)藥公司(國(guó)藥準(zhǔn)字H20020474)，規(guī)格：糖衣片，含0.5 mg氟哌噻噸以及10 mg美利曲辛。各藥臨用時(shí)用10%阿拉伯膠配成懸濁液，灌胃時(shí)溫服。

1.3實(shí)驗(yàn)儀器交替電刺激Y迷宮(北京碩林苑科技有限公司)。礦場(chǎng)行為觀察箱：按文獻(xiàn)方法〔2，3〕自制，為無(wú)頂木盒規(guī)格為60 cm×60 cm×60 cm，箱底用墨線分成36個(gè)等份小方格。抬高迷宮〔4〕：由兩個(gè)開(kāi)放臂和兩個(gè)環(huán)繞臂相互垂直組成，環(huán)繞臂由15 cm高涂黑的臂環(huán)繞，每臂寬15 cm，長(zhǎng)50 cm，黑色橡膠覆蓋在儀器底部，此迷宮抬高距離地面70 cm。

1.4實(shí)驗(yàn)方法

1.4.1造模方法60只Wistar雄性大鼠隨機(jī)分6組，即正常組、模型組、黛力新組、天冰調(diào)督低量組、天冰調(diào)督高量組。除正常組外，其他各組大鼠參考并綜合有關(guān)激怒刺激法〔5〕：①長(zhǎng)海綿鉗夾大鼠尾遠(yuǎn)端1/3處，令其暴怒，每次30 s刺激，隔3 h刺激1次，2次/d。為避免炎癥，控制感染，用0.5%強(qiáng)力碘涂擦受傷部位。②捆綁：將鼠兩前肢及后肢分別捆綁放置，每鼠每次30 min，1次/d；③捆綁松解后合籠，大鼠尋機(jī)與其他大鼠廝打，以激怒其他大鼠，30 min后取出，單籠飼養(yǎng)觀察，連續(xù)造模14 d。

1.4.2給藥方法于造模第7天開(kāi)始， 正常組和模型組給予蒸餾水灌胃(10 ml/kg)，柴胡疏肝組給以(0.6 g/kg)濃縮液，黛力新組用(5 mg/ml)混懸液,天冰調(diào)督低量組、高劑量組用0.4、0.8 g/kg混懸液。1次/d，持續(xù)至第14天。常規(guī)喂養(yǎng)，自由進(jìn)食飲水。

1.4.3大鼠進(jìn)食量的測(cè)定每日上午9:00各組發(fā)放一定量鼠食，次日同時(shí)稱量剩余鼠食，計(jì)算平均值。

1.4.4礦場(chǎng)實(shí)驗(yàn)觀察和抬高迷宮實(shí)驗(yàn)礦場(chǎng)實(shí)驗(yàn)：將各組大鼠置于觀察箱中央小方格內(nèi)，記錄30 s內(nèi)各組大鼠的行為活動(dòng)情況，并按文獻(xiàn)方法〔6〕記分，以此來(lái)了解其情感行為改變。抬高迷宮實(shí)驗(yàn)：大鼠放于開(kāi)放臂末端，面朝環(huán)繞臂方向，利用大鼠怕高而開(kāi)闊地特性，會(huì)主動(dòng)向環(huán)繞臂移動(dòng)。觀察并記錄各組大鼠5 min內(nèi)大鼠四足離開(kāi)開(kāi)放臂的時(shí)間及進(jìn)入的次數(shù)，作為大鼠情感行為變化指標(biāo)。

1.4.5交替電刺激Y迷宮試驗(yàn)以Ⅰ臂為目標(biāo)臂，Ⅱ臂為錯(cuò)誤臂，Ⅲ臂為起始臂，按此交替順序進(jìn)行30次嘗試，每次間隔均為30 s。第1天為學(xué)習(xí)訓(xùn)練階段，第2天為記憶保持階段，記憶保持階段操作與第1天相同，試驗(yàn)規(guī)定大鼠受電擊后從起始臂直接逃至安全臂(紅燈亮)為“正確反應(yīng)”，先進(jìn)入通電臂則為“錯(cuò)誤反應(yīng)”，并記錄為1次錯(cuò)誤，以動(dòng)物選擇錯(cuò)誤次數(shù)作為評(píng)價(jià)大鼠學(xué)習(xí)與記憶能力指標(biāo)，通過(guò)左右交替電刺激檢測(cè)大鼠學(xué)習(xí)記憶能力。

1.5統(tǒng)計(jì)學(xué)方法采用SPSS13.0進(jìn)行單因素方差分析。

2結(jié)果

2.1大鼠進(jìn)食量和液體攝入量造模期間正常組進(jìn)食量和液體攝入量比較穩(wěn)定，各模型組進(jìn)食量和液體攝入量均明顯下降；經(jīng)治療后第7天，各治療組進(jìn)食量和液體攝入量均明顯改善與模型組相比差異顯著(P<0.05)。見(jiàn)表1。

2.2曠場(chǎng)試驗(yàn)和拒俘反應(yīng)治療7 d后各實(shí)驗(yàn)組與正常組相比，在礦場(chǎng)活動(dòng)性和拒俘反應(yīng)性均有顯著差異(P<0.01)；各治療組與模型組相比，曠場(chǎng)活動(dòng)性積分明顯改善(P<0.05或P<0.01)，且以黛力新組和天冰調(diào)督高量組改善尤為明顯(P<0.01)；拒俘反應(yīng)性積分柴胡疏肝散組和天冰調(diào)督高量組與模型組相比明顯改善(P<0.05)。見(jiàn)表2。

2.3抬高迷宮實(shí)驗(yàn)治療7 d后各實(shí)驗(yàn)組與正常組相比，均有顯著差異(P<0.01)；各治療組與模型組相比，開(kāi)放臂中逃避時(shí)間和進(jìn)入開(kāi)放臂次數(shù)均明顯改善，且以天冰調(diào)督高劑量組改善尤為明顯(P<0.05或P<0.01)。見(jiàn)表3。

2.4Y迷宮實(shí)驗(yàn)治療結(jié)束后進(jìn)行Y迷宮實(shí)驗(yàn)，正常組與模型組相比，在第1天和第2天選擇錯(cuò)誤數(shù)均有顯著差異(P<0.01)；各治療組選擇錯(cuò)誤數(shù)比模型組有所減少，且以天冰調(diào)督高劑量組改善尤為明顯(P<0.05)。見(jiàn)表4。

表1　各組大鼠進(jìn)食量和液體攝入量比較 ± s, n=10)

與模型組比較：1)P<0.05

表2　各組大鼠曠場(chǎng)活動(dòng)性和拒俘反應(yīng)性比較 ± s, n=10)

與模型組比較：1)P<0.05，2)P<0.01，下表同

表3　各組大鼠抬高迷宮實(shí)驗(yàn)比較

表4　各組大鼠Y迷宮實(shí)驗(yàn)比較

3討論

應(yīng)激致肝胃不和證的造模方法有夾尾激怒法、捆綁激怒法、頸部帶枷單籠飼養(yǎng)法和藥物注射法等〔5，7〕。采用綜合激怒刺激法制造肝胃不和證的理論基礎(chǔ)源于中醫(yī)“怒則傷肝”的理論，郁怒傷肝，肝木橫逆克脾犯胃，導(dǎo)致肝胃不和證。實(shí)驗(yàn)證明〔8，9〕，這種造模方法較好的人類肝胃不和證狀態(tài)。

交替電刺激Y迷宮通過(guò)用不同程度的電擊刺激大鼠足底，建立逃避性條件反射，使大鼠學(xué)會(huì)左右交替的工作記憶模式，從而測(cè)定其學(xué)習(xí)記憶并對(duì)完成空間記憶敏感。通過(guò)礦場(chǎng)活動(dòng)性、拒俘反應(yīng)性指標(biāo)比較大鼠面對(duì)新環(huán)境的刺激，其活動(dòng)水平、探索能力及焦慮狀況。抬高迷宮也是利用開(kāi)場(chǎng)和增高的區(qū)域刺激大鼠恐懼和焦慮，使動(dòng)物出現(xiàn)防護(hù)性情感反應(yīng)。礦場(chǎng)試驗(yàn)與抬高迷宮試驗(yàn)在量化與分析動(dòng)物恐懼、焦慮等方面已得到專家認(rèn)同〔10〕，并且在以往多的實(shí)驗(yàn)中得到了驗(yàn)證〔3，11，12〕。

本結(jié)果表明，夾尾刺激模型大鼠具有典型焦慮、恐懼防護(hù)性情感反應(yīng)，應(yīng)用不同劑量調(diào)督化濁方藥干預(yù)可改善大鼠的焦慮、恐懼狀態(tài)，改善活動(dòng)能力與警覺(jué)水平，結(jié)合中醫(yī)理論中有肝主疏泄，調(diào)暢情志，肝失疏泄，則出現(xiàn)焦慮、抑郁等情志異常，表明該方藥可能在一定程度上改善應(yīng)激模型大鼠的情感行為異常，對(duì)治療情感行為障礙具有積極作用。

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〔2012-12-10修回〕

(編輯趙慧玲/曹夢(mèng)園)