梗阻性黃疸大鼠膽道外引流術(shù)前術(shù)后肝臟中轉(zhuǎn)化生長因子β1表達(dá)

梗阻性黃疸大鼠膽道外引流術(shù)前術(shù)后肝臟中轉(zhuǎn)化生長因子β1表達(dá)

韓云秦偉楊生虎李曉峰楊立平

(青海大學(xué)附屬醫(yī)院腹部腔鏡外科，青海西寧810001)

摘要〔〕目的探討轉(zhuǎn)化生長因子(TGF)-β1在梗阻性黃疸大鼠膽道外引流術(shù)前后肝臟中的表達(dá)。方法監(jiān)測梗阻性黃疸大鼠膽道外引流術(shù)前及術(shù)后不同時間組及假手術(shù)組TGF-β1的表達(dá)強度。結(jié)果TGF-β1在梗阻性黃疸大鼠膽道外引流術(shù)前表達(dá)強度較高，術(shù)后3、6、9 d表達(dá)強度逐漸下降，與假手術(shù)組有明顯差異(P<0.05)。結(jié)論①TGF-β1在梗阻性黃疸大鼠膽道外引流術(shù)前術(shù)后肝臟中的表達(dá)存在顯著差異，術(shù)后不同時段差異不同，術(shù)后隨時間推移TGF-β1表達(dá)減弱。②膽道外引流術(shù)可改善梗阻性黃疸大鼠肝損傷，越早引流肝損傷恢復(fù)越快。

關(guān)鍵詞〔〕轉(zhuǎn)化生長因子(TGF)-β1;梗阻性黃疸;膽道外引流

中圖分類號〔〕R657.4+3〔

第一作者：韓云(1975-)，男，主治醫(yī)師，主要從事腹部腔鏡外科研究。

對重度梗阻性黃疸患者進行術(shù)前膽道外引流減黃是否可以提高手術(shù)耐受性及減黃后何時進行手術(shù)，選擇最佳的手術(shù)時機，目前尚存在爭議〔1〕。本實驗在不同時間點觀察梗阻性黃疸大鼠行膽總管外引流手術(shù)前后肝臟中轉(zhuǎn)化生長因子(TGF)-β1的表達(dá)，以此推斷膽道外引流減黃后的最佳手術(shù)時機。

1材料與方法

1.1梗阻性黃疸大鼠模型制作選擇健康雄性SD大白鼠120只，體重180～220 g〔蘭州大學(xué)實驗動物中心提供，動物合格證號：SCXK(甘)2009-004〕。隨機分成8組，每組15只(術(shù)后0、3、6、9 d假手術(shù)組，行膽道外引流術(shù)后0、3、6、9 d實驗組)。各組均于手術(shù)前晚禁食。均采用苯巴比妥鈉(50 mg/kg)行腹腔注射麻醉后，無菌條件下經(jīng)劍突下正中小切口2 cm進腹，提出十二指腸探及膽總管，假手術(shù)組僅游離膽總管，然后關(guān)腹。實驗組在接近十二指腸處游離出一段長約1 cm的膽總管。用0/3絲線結(jié)扎膽總管,然后腹腔注射醫(yī)用透明質(zhì)酸鈉(1 ml)，用0/3絲線縫合腹壁切口。術(shù)后常規(guī)喂養(yǎng)。膽總管結(jié)扎24 h后，實驗大鼠的尿液顏色逐漸變黃并加深，2～3 d后，皮毛開始逐漸轉(zhuǎn)黃，進食開始減少。經(jīng)膽道引流后尿液及皮毛顏色開始轉(zhuǎn)淺。實驗過程中實驗組共有6只意外死亡，假手術(shù)組無死亡。

1.2膽道置管建模術(shù)后10 d，實驗組在原切口進腹，找到擴張的膽總管，并將靜脈輸液針導(dǎo)管(0.55 mm×19 mm)置入膽總管后用0/5絲線雙重結(jié)扎膽總管，將置入膽總管的引流管在右側(cè)腹壁皮下打隧道后，從隧道引出體外(在大鼠兩耳之間，用20#靜脈穿刺針穿刺，穿刺針在皮下潛行直達(dá)切口右側(cè)，然后自腹壁穿入腹腔內(nèi)，將穿刺針頭端套入膽總管引流管，逐漸退針后，將膽總管引流管通過皮下自大鼠頭部兩耳之間穿刺處引出體外)，并固定引流管，查看膽總管有無膽漏后，用生理鹽水將腹腔沖洗干凈，再用0/3絲線縫合腹壁切口。

1.3TGF-β1檢測各組于術(shù)后0、3、6、9 d采用脫頸法分別處死大鼠。剪取肝臟組織，包埋后制成蠟塊,然后制成切片(厚度5 μm), 分別行免疫組織化學(xué)染色和HE染色。再檢測TGF-β1(Envision法)。TGF-β1是以細(xì)胞質(zhì)著色為主，以細(xì)胞質(zhì)呈現(xiàn)棕色顆粒狀為陽性染色標(biāo)準(zhǔn)，并且細(xì)胞質(zhì)的著色高于背景〔2，3〕。按切片中細(xì)胞染色的強度計0、1、2、3分(0分：細(xì)胞無染色；1分：細(xì)胞呈淺黃色；2分：細(xì)胞呈棕黃色；3分：細(xì)胞呈褐色)；再按切片中顯色細(xì)胞比例計0、1、2、3分(每張切片隨機觀察5個高倍視野，并計500個細(xì)胞中陽性染色的細(xì)胞數(shù)。0分：細(xì)胞無陽性染色，1分：陽性染色細(xì)胞數(shù)<30%染色，2分：陽性染色細(xì)胞數(shù)在30%～70%，3分：陽性染色細(xì)胞數(shù)≥70%)。每張切片細(xì)胞染色積分=比例計分×強度計分。按積分的高低分為4個級別: 陰性(-)0分；弱陽性(+)1～3分；陽性(++)4～6分；強陽性(+++)7～9分〔4，5〕。

1.4統(tǒng)計學(xué)方法采用SPSS13.0統(tǒng)計軟件進行t檢驗。

2結(jié)果

2.1肝功能變化實驗組各時間點總膽紅素(TBIL)、直接膽紅素(DBIL)、谷丙轉(zhuǎn)氨酶(ALT)、谷草轉(zhuǎn)氨酶(AST)和γ-谷氨酰轉(zhuǎn)肽酶(GCT)水平與假手術(shù)組差異顯著(P<0.05),實驗組3，6，9 d上述指標(biāo)與引流0 d差異顯著(P<0.05)。見表1。

表1　兩組膽道梗阻外引流前后不同時間點肝功能變化 ± s, n=15)

與假手術(shù)組比較：1)P<0.05；與 引流0 d比較：2)P<0.05

2.2各組肝臟組織TGF-β1表達(dá)光度實驗組各時間點肝臟組織TGF-β1表達(dá)光度與假手術(shù)組差異顯著(P<0.05),實驗組3，6，9 d TGF-β1表達(dá)光度與引流0 d差異顯著(P<0.05)。見表2。

表2兩組術(shù)后各時間點肝臟組織TGF-β1表達(dá)光度

分組0d3d6d9d假手術(shù)組1.26±1.381.27±1.351.29±1.391.28±1.41實驗組5.94±2.311.42±1.561)3.19±2.161)5.67±2.281)P值0.0210.0360.0310.028

與引流0 d比較：1)P<0.05

3討論

梗阻性黃疸是肝、膽、胰外科疾病中較常見的一種臨床表現(xiàn)，又稱為外科黃疸，嚴(yán)重梗阻性黃疸病人外科手術(shù)并發(fā)癥的發(fā)生率和死亡率都較高，據(jù)報道〔6〕分別為40%～60%、15%～25%；目前術(shù)前減黃多采用經(jīng)皮肝穿刺置管引流(PTCD)及內(nèi)鏡下鼻膽管引流術(shù)(ENBD)，雖然術(shù)前膽道外引流能降低血液中膽紅素濃度, 減輕患者黃疸的程度，但并不能糾正電解質(zhì)紊亂，改善凝血功能，對個別肝細(xì)胞損害嚴(yán)重的黃疸病人減黃效果較差〔7〕。由于膽汁淤積，在腎小管、心肌和胃腸道黏膜下膽鹽的沉積直接損害這些臟器的功能，從而引起腎衰竭、心功能下降等一系列并發(fā)癥，導(dǎo)致特異性和非特異性細(xì)胞免疫功能的損害，反而可以增加并發(fā)癥的發(fā)生,如胰漏、膽道出血、膽漏、內(nèi)毒素血癥及術(shù)后感染等。

針對能夠進行手術(shù)治療的惡性梗阻性黃疸患者，手術(shù)前通過膽道外引流改善肝功能及全身狀況，為手術(shù)創(chuàng)造良好條件的時機選擇難度較大〔8，9〕。本研究顯示： TGF-β1在梗阻性黃疸大鼠模型肝臟中的表達(dá)較高，而膽道外引流術(shù)后隨著時間的推移肝臟中的表達(dá)明顯降低。尤其以膽道外引流早期TGF-β1的表達(dá)下降趨勢較明顯。發(fā)生梗阻性黃疸不及時外引流干預(yù)，肝臟水腫程度逐漸加重，功能受損，膽汁停止分泌，到后期可能產(chǎn)生不可逆的損害〔10，11〕。因此，對梗阻性黃疸診斷明確后，越早進行減黃干預(yù)，效果越好〔12〕。

4參考文獻(xiàn)

1Lillemoe KD，Mehon GB,Cameron JD，etal.Postoperative bile duct strictures：management and out come in the 1990s〔J〕.Ann Surg，2000;23(2)：430-1.

2Zhu YF，Wu JF，Ma W，etal.Expression of TGF-β1，Snail，E-cadherin and N-cadherin in gastric cancer and its significance〔J〕.Chin J Clin Oncol,2007;4(6):384-9.

3唐仕芳，朱洪春，李華強，等.轉(zhuǎn)化生長因子β1在新生大鼠高濃度氧致肺損傷中的作用研究〔J〕.重慶醫(yī)學(xué),2009; 38(4)：438-40.

4王國輝，蔣桂星，崔云甫，等.TGF-β1在大鼠膽管損傷修復(fù)過程中的表達(dá)〔J〕.世界華人消化雜志,2010;18(5)：502-5.

5羅斌，王俊利，黃重敏，等.轉(zhuǎn)化生長因子B1 基因單核苷酸多態(tài)性與乙型肝炎后肝硬化的相關(guān)性研究〔J〕.中華醫(yī)院感染學(xué)雜志，2010；20(10)：1389-92.

6董家鴻,曾永毅.梗阻性黃疸減黃研究熱點與難點〔J〕.中國實用外志,2007;10(27)：768-9.

7裘正軍，李寶華.梗阻性黃疸對宿主細(xì)胞免疫功能的影響〔J〕.國際外科學(xué)雜志，1991;5(7):269-71.

8黃立高，張永杰，俞文隆，等.膽道閉合性損傷后手術(shù)時機選擇的實驗研究〔J〕.中華肝膽外科雜志，2001；13(11)：760-3.

9詹國情，董家鴻，王槐志，等.損傷性膽管狹窄手術(shù)時機探討〔J〕.第三軍醫(yī)大學(xué)學(xué)報，2002；24(9)：1120-1.

10李冰.TGF-β1在梗阻性黃疸大鼠膽道外引流術(shù)后膽總管中的表達(dá)〔J〕.西寧：青海大學(xué)碩士論文，2012.

11李曉峰，張杰，郭俊武，等.TGF-β1在梗阻性黃疸大鼠膽總管中的表達(dá)〔J〕.青海醫(yī)藥雜志，2012；42(6)：4-6.

12Patsenker E，Popov Y，Stickel F，etal.Inhibition of integdn alphavbeta on cholangiocytes blocks transforming growth factor-beta activation and retards biliary fibrosis progression〔J〕.Gastroenterology，2008;135：660-70.

〔2013-12-13修回〕

(編輯苑云杰)