巴戟天醇提物對(duì)大鼠腦缺血再灌注損傷組織TNF-αIL-6表達(dá)水平的影響

鄧 強(qiáng)河南駐馬店市中心醫(yī)院神經(jīng)外科 駐馬店 463000

巴戟天醇提物對(duì)大鼠腦缺血再灌注損傷組織TNF-αIL-6表達(dá)水平的影響

鄧 強(qiáng)
河南駐馬店市中心醫(yī)院神經(jīng)外科 駐馬店 463000

目的 探討巴戟天醇提物（RMOEE）對(duì)大鼠腦缺血再灌注損傷組織腫瘤壞死因子-α（TNF-α）、白介素-6（IL-6）表達(dá)水平的影響。方法 40只健康雄性SD大鼠隨機(jī)均分為假手術(shù)組、腦缺血再灌注損傷模型組、RMOEE 3.0g/（kg·d）組、RMOEE 1.5g/（kg·d）組4組，每組10只。RMOEE 3.0g/（kg·d）組、RMOEE 1.5g/（kg·d）組大鼠連續(xù)1周按相應(yīng)劑量進(jìn)行RMOEE灌胃，而假手術(shù)組和腦缺血再灌注損傷模型組大鼠僅進(jìn)行同體積生理鹽水灌胃。末次給藥1h后采用改良的Zea-Longa線栓法制備大鼠局灶性腦缺血再灌注損傷模型，測定各組大鼠腦組織含TNF-α、IL-6表達(dá)水平。結(jié)果 RMOEE 3.0g/（kg·d）組、RMOEE 1.5g/（kg·d）組腦組織TNF-α、IL-6表達(dá)水平較腦缺血再灌注損傷模型組低（P＜0.05）。RMOEE 3.0g/（kg·d）組、RMOEE 1.5g/（kg·d）組TNF-α、IL-6表達(dá)水平比較差異有統(tǒng)計(jì)學(xué)意義（P＜0.05）。結(jié)論 RMOEE可通過減少TNF-α、IL-6表達(dá)而減輕大鼠腦缺血再灌注損傷。

巴戟天醇提物；缺血再灌注損傷；腫瘤壞死因子-α；白介素-6

腦缺血再灌注損傷是顱腦外傷、腦部手術(shù)等過程中的常見損傷，其發(fā)病與炎癥反應(yīng)關(guān)系密切［1］。巴戟天醇提物（radix morindae officinalis ethanolic extracts，RMOEE）是從雙子葉植物茜草科植物巴戟天中提取出來的，其在心臟、腎臟缺血再灌注損傷過程中具有抗炎、抗氧化、抗凋亡等作用［23］。本文通過測定RMOEE對(duì)大鼠局灶性腦缺血再灌注損傷腦組織腫瘤壞死因子-α（tumor necrosis factor-α，TNF-α）、白介素-6（interleukin-6，IL-6）表達(dá)水平的影響，觀察其對(duì)這種損傷的保護(hù)作用。

1 材料與方法

1.1 藥品、試劑及儀器 巴戟天（一等品，廣東省德慶縣藥材公司，RMOEE的提取和鑒定由河南省食品藥品檢驗(yàn)所完成）；TNF-α、IL-6ELISA試劑盒（美國Peprotech公司，批號(hào)分別為：20130922、20131107）；全自動(dòng)酶聯(lián)免疫分析儀（北京中西遠(yuǎn)大科技有限公司）。

1.2 實(shí)驗(yàn)分組及處理 40只健康雄性SD大鼠，體質(zhì)量304～347g，由河南省實(shí)驗(yàn)動(dòng)物中心提供，給予適應(yīng)性喂養(yǎng)1周后，隨機(jī)均分為假手術(shù)組、腦缺血再灌注損傷模型組、RMOEE 3.0g/（kg·d）組、RMOEE 1.5g/（kg·d）組4組，每組10只。RMOEE 3.0g/（kg·d）組、RMOEE 1.5g/（kg·d）組大鼠連續(xù)1周按相應(yīng)劑量進(jìn)行RMOEE灌胃，而假手術(shù)組和腦缺血再灌注損傷模型組大鼠僅進(jìn)行同體積生理鹽水灌胃。末次給藥1h后采用改良的Zea-Longa線栓法［4-5］制備大鼠局灶性腦缺血再灌注損傷模型。

1.3 TNF-α、IL-6測定 造模結(jié)束后，各組大鼠常規(guī)取出右側(cè)大腦組織，稱取約0.5g腦組織塊，4℃預(yù)冷生理鹽水沖洗組織塊表面，濾紙吸干，精確稱質(zhì)量并以0.1g：0.9mL的比例制成生理鹽水腦組織勻漿，4 000r/min于4℃條件下離心10min，取上清液，然后按照ELISA試劑盒說明測定TNF-α、IL-6水平。

1.4 統(tǒng)計(jì)學(xué)處理 采用SPSS 11.0處理數(shù)據(jù)，計(jì)量資料以±s表示，多組間比較采用單因素方差分析，組間比較采用LSD-t檢驗(yàn)，檢驗(yàn)水準(zhǔn)α=0.05。

2 結(jié)果

腦缺血再灌注損傷模型組TNF-α、IL-6表達(dá)水平較假手術(shù)組高（P＜0.05）。RMOEE 3.0g/（kg·d）組、RMOEE 1.5g/（kg·d）組腦組織TNF-α、IL-6表達(dá)水平較腦缺血再灌注損傷模型組低（P＜0.05）。RMOEE 3.0g/（kg·d）組、RMOEE 1.5g/（kg·d）組TNF-α、IL-6表達(dá)水平比較差異有統(tǒng)計(jì)學(xué)意義（P＜0.05）。見表1。

表1 各組大鼠小腦組織中TNF-α、IL-6水平比較 （±s，pg/g）

表1 各組大鼠小腦組織中TNF-α、IL-6水平比較 （±s，pg/g）

注：與假手術(shù)組比較，＊P＜0.05；與腦缺血再灌注損傷模型組比較，＃P＜0.05；與RMOEE1.5g/（kg·d）組比較，※P＜0.05

組別 TNF-αIL-6假手術(shù)組254.31±28.61 89.33±11.25腦缺血再灌注損傷模型組 697.27±56.89＊205.74±22.84＊RMOEE1.5g/（kg·d）組 505.84±38.06＃149.60±17.34＃RMOEE3.0g/（kg·d）組 398.35±42.11?！?14.23±12.55＃※F值89.568 107.257 P值 ＜0.001 ＜0.001

3 討論

目前，關(guān)于巴戟天的研究主要集中于缺血、缺血再灌注損傷、衰老、腎陽虛等病癥的防治方面，本文所用RMOEE是從巴戟天中提取而來，已被證實(shí)具有抗氧化、抗炎、抗衰老、補(bǔ)腎壯陽等功效［2-3，6］。由于炎癥反應(yīng)已被證實(shí)參與了機(jī)體缺血再灌注損傷的發(fā)生發(fā)展過程，在這一過程中包括TNF-α、IL-6在內(nèi)的眾多炎癥因子表達(dá)水平發(fā)生了變化。TNF-α是一種生物學(xué)功能多樣的細(xì)胞因子，包括內(nèi)皮細(xì)胞、免疫細(xì)胞、平滑肌細(xì)胞在內(nèi)的多種細(xì)胞均能夠分泌合成TNF-α，正常機(jī)體內(nèi)存在微量的TNF-α，能夠維持機(jī)體的正常生物學(xué)功能，若其表達(dá)水平異常升高，則會(huì)導(dǎo)致一系列機(jī)體異常，目前，已被證實(shí)其在惡性腫瘤、心腦血管疾病、衰老、風(fēng)濕等多種疾病患者體內(nèi)存在異常高表達(dá)［3，7］。IL-6來源于內(nèi)皮細(xì)胞、巨噬細(xì)胞和T淋巴細(xì)胞，能夠通過與其他細(xì)胞因子或其受體結(jié)合促進(jìn)炎癥反應(yīng)的進(jìn)展，在缺血再灌注損傷的進(jìn)展過程中起促進(jìn)作用［3，8］。

本文結(jié)果顯示，腦缺血再灌注損傷模型組TNF-α、IL-6表達(dá)水平較假手術(shù)組高（P＜0.05），提示缺血再灌注損傷模型成功建立；RMOEE 3.0g/（kg·d）組、RMOEE 1.5g/（kg·d）組腦組織TNF-α、IL-6表達(dá)水平較腦缺血再灌注損傷模型組低（P＜0.05），證明RMOEE能夠改善其損傷；RMOEE 3.0g/（kg·d）組、RMOEE 1.5g/（kg·d）組TNF-α、IL-6表達(dá)水平比較差異有統(tǒng)計(jì)學(xué)意義，且前者優(yōu)于后者，提示RMOEE的作用可能與藥物劑量有一定關(guān)系?？傊?，RMOEE可通過減少TNF-α、IL-6的表達(dá)而減輕大鼠腦缺血再灌注損傷，值得進(jìn)一步深入探討具體機(jī)制。

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（收稿2015-02-15）

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1673-5110（2015）13-0074-02