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    水楊酸對(duì)鋅脅迫下茴香植株鋅吸收及精油組分的影響

    2015-12-23 12:39:04王丹張亞楠陳瑞瑩歐廣文肖艷輝
    江蘇農(nóng)業(yè)科學(xué) 2015年10期
    關(guān)鍵詞:生理指標(biāo)茴香水楊酸

    王丹 張亞楠 陳瑞瑩 歐廣文 肖艷輝

    摘要:采用營(yíng)養(yǎng)液培養(yǎng)的方式,研究10 mg/L鋅處理下0、50、100、200、300 μmol/L水楊酸對(duì)茴香植株生長(zhǎng)、生理生化指標(biāo)、鋅含量及精油成分的影響。結(jié)果表明:在鋅脅迫下,200 μmol/L水楊酸顯著促進(jìn)茴香植株的生長(zhǎng);在鋅脅迫下,不同水楊酸濃度處理不利于茴香植株地上部生物量的積累,對(duì)地下部生物量的積累也未見顯著影響,但會(huì)促進(jìn)茴香植株色素合成,提高茴香植株體內(nèi)的可溶性蛋白質(zhì)和可溶性糖含量,減弱SOD活性。在鋅脅迫下,一定濃度的水楊酸處理可促進(jìn)茴香植株地下部鋅吸收,且100 μmol/L水楊酸處理顯著高于對(duì)照;300 μmol/L水楊酸處理的地上部鋅含量顯著低于對(duì)照。在鋅脅迫下,不同濃度水楊酸處理茴香植株后,有利于檸檬烯含量的升高,但不利于反式-茴香腦的累積。

    關(guān)鍵詞:茴香;水楊酸;生理指標(biāo);鋅含量;精油;組分;品質(zhì)

    中圖分類號(hào): Q945.78;S573+.301 文獻(xiàn)標(biāo)志碼: A 文章編號(hào):1002-1302(2015)10-0316-04

    Zn是植物生長(zhǎng)發(fā)育過程中必需的營(yíng)養(yǎng)元素,環(huán)境中缺少Zn,植物便不能正常生長(zhǎng)。但近年來,隨著有機(jī)肥和城市垃圾的施入,土壤中Zn等元素不斷積累,全量增高[1]。當(dāng)土壤中Zn含量過高時(shí),植物會(huì)吸收、積累過量的Zn,從而導(dǎo)致植物減產(chǎn),嚴(yán)重時(shí)造成絕收。不同濃度的鋅處理也會(huì)影響植物的次生代謝。隨著鋅濃度的升高,蘆薈苷、蘆薈大黃素含量升高,但鋅濃度超過一定值時(shí),蘆薈苷、蘆薈大黃素含量反而下降[2]。在一定濃度(10 mg/L)鋅的脅迫下,茴香植株精油中的主要成分反式-茴香腦含量顯著高于對(duì)照[3]。

    水楊酸(SA)是植物體內(nèi)自身合成的酚類化合物,它能參與調(diào)節(jié)植物的許多生理過程。近年來的研究結(jié)果表明,水楊酸可緩解鋅對(duì)植物的毒害作用。在300 mg/L鋅脅迫下,小麥幼苗葉片的可溶性蛋白含量、根系活力顯著降低,而脯氨酸和丙二醛含量顯著升高;外施水楊酸能顯著提高小麥幼苗葉片的脯氨酸和可溶性蛋白含量,顯著增強(qiáng)根系活力,顯著降低膜脂過氧化產(chǎn)物丙二醛含量,并以14 mg/L 外源水楊酸緩解效果最好[4]。此外,水楊酸還會(huì)影響植物的次生代謝,可使萌發(fā)喜樹種子喜樹堿含量在初期下降、后期上升[5]。重金屬Pb的毒害能抑制迷迭香揮發(fā)物中萜烯類的釋放,而外源水楊酸的參與則使迷迭香揮發(fā)物中的萜烯類增加[6]。

    茴香作為一種芳香植物,植株中含有植物次生代謝產(chǎn)物精油。在水楊酸處理下,茴香植株對(duì)鋅的吸收量是增加還是減少以及水楊酸處理對(duì)茴香精油品質(zhì)的影響均未見報(bào)道。本試驗(yàn)以內(nèi)蒙古小茴香為材料,采用營(yíng)養(yǎng)液培養(yǎng)的方式,研究水楊酸對(duì)10 mg/L鋅脅迫下茴香植株生長(zhǎng)、鋅吸收和運(yùn)轉(zhuǎn)狀況、精油組分的影響,從而為水楊酸在緩解植物鋅毒害方面的應(yīng)用和芳香植物次生代謝方面的研究提供理論參考。

    1 材料與方法

    1.1 試驗(yàn)材料

    以內(nèi)蒙古小茴香(Foeniculum vulgare Mill.)為試驗(yàn)材料。茴香種子來源于中國(guó)茴香產(chǎn)區(qū)之一的內(nèi)蒙古托克托縣,種子生產(chǎn)時(shí)間為2012年。

    1.2 試驗(yàn)方法

    2013年10月21日于韶關(guān)學(xué)院塑料大棚中播種育苗。采用河沙作為育苗基質(zhì),選取大小均勻、飽滿的茴香種子播于育苗盤中,為防止水分蒸發(fā),育苗盤上覆蓋1層干草。11月15日,待茴香長(zhǎng)至2葉1心時(shí)選擇生長(zhǎng)健壯、大小一致、無病蟲害的植株移栽于水培箱(霍格蘭培養(yǎng)液,培養(yǎng)液30 L)的定植板上,每個(gè)水培箱培養(yǎng)24株茴香,確保茴香根系完全浸沒在營(yíng)養(yǎng)液中。培養(yǎng)茴香植株期間,使用空氣壓縮泵進(jìn)行不間斷供氧。每個(gè)培養(yǎng)箱均安裝2個(gè)通氣砂頭,以保證增氧均勻。茴香幼苗移栽初期使用1/2劑量的培養(yǎng)液培養(yǎng),待緩苗15 d后換成全營(yíng)養(yǎng)液進(jìn)行培養(yǎng),以后每15 d換1次培養(yǎng)液。12月16日開始進(jìn)行鋅和水楊酸處理,其中鋅處理(以硫酸鋅形式加入)濃度為10 mg/L,水楊酸處理濃度分別為0 (CK)、50、100、200、300 μmol/L,2014年1月12日開始取樣測(cè)定各項(xiàng)指標(biāo)。

    1.3 指標(biāo)的測(cè)定與方法

    每個(gè)處理分別隨機(jī)取樣10株,分別測(cè)定株高和葉片數(shù);每個(gè)處理分別隨機(jī)取5株測(cè)定地上部鮮質(zhì)量和干質(zhì)量、地下部鮮質(zhì)量和干質(zhì)量,并計(jì)算根冠比(地下部干質(zhì)量與地上部干質(zhì)量之比)。

    葉片中葉綠素含量用比色法測(cè)定[7];可溶性糖含量用蒽酮比色法測(cè)定[8];可溶性蛋白質(zhì)含量用考馬斯亮藍(lán)G-250法測(cè)定[8];POD和SOD活性采用試劑盒和分光光度計(jì)比色法。

    用原子吸收分光光度計(jì)(型號(hào)為AA7000,島津)測(cè)定鋅的含量。測(cè)定Zn的儀器參數(shù)為:波長(zhǎng)213.9 nm,狹縫寬為07 nm,工作燈電流為3 mA,預(yù)熱燈電流為2 mA,負(fù)高壓為 300 V,燃?xì)饬髁繛?.0 L/min,燃燒器高度為6.0 mm,燃燒器位置為4.0 mm。

    1.4 精油的提取與定量

    精油提取按照國(guó)家藥典委員會(huì)推薦的方法[9],并適當(dāng)改進(jìn):茴香植株用水洗凈,吹干表面水跡,切成0.5 cm左右的小段,混勻,準(zhǔn)確稱質(zhì)量35 g,置于1 000 mL的圓底燒瓶中,加入600 mL的水,用揮發(fā)油測(cè)定器進(jìn)行共水蒸餾,微沸蒸餾 3 h;蒸餾時(shí)用2 mL正己烷(色譜純)萃?。徽麴s結(jié)束后,回收正己烷,用無水硫酸鈉干燥,過濾,每個(gè)處理蒸餾3次;精油的正己烷溶液用棕色瓶封裝,于-20 ℃下保存。

    1.5 精油成分分析

    在吳玫涵等方法[10]的基礎(chǔ)上進(jìn)行適當(dāng)改進(jìn):取茴香精油的正己烷溶液稀釋10倍,進(jìn)行氣質(zhì)聯(lián)用儀(Gas Chromatograph / Mass Spectrometer,GC/MS)分析(Trace GC-2000/DSQ,Thermo Finnigan,USA)。GC條件:DB5石英毛細(xì)管柱(30 m × 0.25 mm × 0.25 μm);載氣為高純氦(99.999%);柱流量為1 mL/min,不分流;柱前壓100 kPa;進(jìn)樣口溫度為220 ℃;進(jìn)樣量為1 μL;程序升溫為柱溫40 ℃保持1 min,從10 ℃/min升高到200 ℃/min,保持3 min。MS條件:電離方式為EI;電子能量為70 eV;接口溫度為210 ℃;離子源溫度為200 ℃;流量掃描范圍為m/z 50~350;溶劑延遲4.0 min;發(fā)射電流為100 μA。在參考前人工作[11-13]的基礎(chǔ)上,計(jì)算成分的保留系數(shù),同時(shí)結(jié)合美國(guó)標(biāo)準(zhǔn)與技術(shù)研究院(NIST,2002)標(biāo)準(zhǔn)譜庫(kù)進(jìn)行精油成分鑒定,使用色譜峰面積歸一法確定精油成分的相對(duì)含量,每個(gè)樣品重復(fù)3次。endprint

    1.6 數(shù)據(jù)分析

    所得數(shù)據(jù)采用SPSS軟件包進(jìn)行方差分析,用Duncans 新復(fù)極差法進(jìn)行平均數(shù)的顯著性檢驗(yàn)。

    2 結(jié)果與分析

    2.1 不同濃度水楊酸對(duì)鋅脅迫下茴香植株形態(tài)指標(biāo)的影響

    由表1可以看出,在鋅脅迫下,不同濃度水楊酸處理的茴香植株株高均高于對(duì)照,但僅200 μmol/L水楊酸處理與對(duì)照差異顯著。不同濃度水楊酸處理的茴香植株葉片數(shù)與對(duì)照差異均不顯著,但100 μmol/L水楊酸與300 μmol/L水楊酸處理的茴香植株葉片數(shù)差異顯著。

    2.2 不同濃度水楊酸對(duì)鋅脅迫下茴香植株生物量的影響

    由表2可以看出,在鋅脅迫下,用不同濃度的水楊酸處理后,茴香植株的地上部鮮質(zhì)量和干質(zhì)量幾乎均低于對(duì)照,其中50、200 μmol/L水楊酸處理與對(duì)照差異顯著;茴香植株地下部鮮質(zhì)量和干質(zhì)量與對(duì)照差異均不顯著;根冠比高于或等于對(duì)照,且50、200 μmol/L水楊酸處理顯著高于對(duì)照。

    2.3 不同濃度水楊酸對(duì)鋅脅迫下茴香葉片色素含量的影響

    由表3可以看出,在鋅脅迫下,用不同濃度水楊酸處理的茴香植株色素含量均高于對(duì)照,其中葉綠素a、葉綠素b和葉綠素a+b含量均顯著高于對(duì)照;隨著水楊酸處理濃度的增加,葉綠素a、葉綠素b和葉綠素a+b含量大致呈先降低再升高的趨勢(shì),100 μmol/L水楊酸處理顯著低于其余濃度處理;僅50 μmol/L水楊酸處理的類胡蘿卜素含量與對(duì)照差異不顯著,其余處理的類胡蘿卜素含量均顯著高于對(duì)照;各濃度水楊酸處理葉綠素a/ b均低于對(duì)照,僅100 μmol/L水楊酸處理與對(duì)照差異不顯著。

    2.4 不同濃度水楊酸對(duì)鋅脅迫下茴香植株生理生化指標(biāo)的影響

    由表4可以看出,在鋅脅迫下,用不同濃度水楊酸處理的茴香植株的可溶性蛋白質(zhì)含量均高于對(duì)照,僅300 μmol/L水楊酸處理與對(duì)照差異不顯著;各濃度水楊酸處理的可溶性糖含量均顯著高于對(duì)照,且隨著水楊酸濃度的增加,可溶性糖含量呈先下降再上升的趨勢(shì);各濃度水楊酸處理的POD活性均弱于對(duì)照,但僅100 μmol/L水楊酸處理與對(duì)照差異顯著;各濃度水楊酸處理的SOD活性均顯著弱于對(duì)照。

    2.5 不同濃度水楊酸對(duì)鋅脅迫下茴香植株地上部和地下部鋅含量的影響

    由表5可以看出,在鋅脅迫下,用不同濃度水楊酸處理后的茴香植株地上部鋅含量均低于對(duì)照,但僅300 μmol/L水楊酸處理顯著低于對(duì)照;地下部鋅含量均高于對(duì)照,但僅100 μmol/L水楊酸處理與對(duì)照差異顯著。

    2.6 不同濃度水楊酸對(duì)鋅脅迫下茴香精油組分的影響

    由表6可以看出,在鋅脅迫下,用不同濃度水楊酸處理茴香植株后,茴香精油中相對(duì)含量大于1%的成分主要有α-水芹烯、檸檬烯、α-萜品烯、萜品油烯、順式-茴香腦、反式-茴香腦、肉豆蔻醚和蒔蘿芹菜腦,其中反式-茴香腦為第一主要成分,檸檬烯為第二主要成分。各處理的檸檬烯含量均顯著高于對(duì)照,以200 μmol/L處理最高;各處理的反式-茴香腦含量均顯著低于對(duì)照,并以200 μmol/L處理最低。

    按照分子結(jié)構(gòu),茴香精油成分可分為三大類,即單萜類化合物、含氧化合物和倍半萜類化合物,其中單萜類化合物包括α-蒎烯、β-蒎烯、α-水芹烯、α-萜品烯、檸檬烯、γ-萜品烯、萜品油烯和3,4-二甲基-2,4,6-辛三烯;含氧化合物包括小茴香酮、愛草腦、葑醇乙酸酯、反式-葑酮乙酸酯、順式-茴香腦、反式-茴香腦、蒔蘿芹菜腦;倍半萜類化合物包括古巴烯、合金歡烯和吉瑪烯D。在鋅脅迫下,隨水楊酸濃度的增加,含氧化合物與反式-茴香腦含量變化趨勢(shì)一致,倍半萜類呈先增加再降低的趨勢(shì),并以200 μmol/L水楊酸處理最高。

    3 結(jié)論與討論

    本研究結(jié)果表明,一定濃度(200 μmol/L)水楊酸處理可以緩解10 mg/L鋅脅迫對(duì)茴香植株生長(zhǎng)的抑制作用;不同濃度水楊酸處理不利于茴香植株地上部生物量的積累,對(duì)地下部生物量的累積沒有顯著影響。一定濃度的水楊酸處理可提高根冠比。

    葉綠體色素參與光合作用過程中光能的吸收、傳遞和轉(zhuǎn)化,其含量直接影響植物的光合能力[14]。根據(jù)本研究結(jié)果,在鋅脅迫下,用不同濃度水楊酸處理的茴香植株各色素含量均高于對(duì)照,并以50 μmol/L水楊酸處理的葉綠素合成促進(jìn)效果最明顯,說明在鋅脅迫下,不同濃度水楊酸處理可促進(jìn)茴香植株色素合成。這與張芬琴等在水楊酸對(duì)鎘脅迫下玉米幼苗生理特性的研究結(jié)果[15]一致。

    在鋅脅迫下,不同濃度水楊酸處理能提高茴香植株可溶性蛋白質(zhì)和可溶性糖的含量,減弱SOD的活性,該研究結(jié)果與宿越等的研究結(jié)果[16]一致。不同濃度水楊酸處理并未顯著增加茴香植株地上部對(duì)鋅的吸收,且300 μmol/L水楊酸處理顯著低于對(duì)照;茴香植株地下部鋅含量?jī)H以100 μmol/L水楊酸處理顯著高于對(duì)照,且鋅主要累積在茴香植株的地下部,這對(duì)利用茴香植株來修復(fù)鋅污染土壤時(shí), 適當(dāng)施用一定濃度 茴香精油中反式-茴香腦的含量是反映茴香精油品質(zhì)的主要指標(biāo),反式-茴香腦含量高表明精油品質(zhì)好。本研究結(jié)果表明,在鋅脅迫下,用不同濃度水楊酸處理茴香植株后,茴香精油的主要成分反式-茴香腦含量均顯著低于對(duì)照,檸檬烯含量均顯著高于對(duì)照。說明在鋅脅迫下,不同濃度水楊酸處理有利于檸檬烯的合成,不利于反式-茴香腦的合成。因此,在鋅脅迫下,用不同濃度水楊酸處理茴香植株后,茴香精油品質(zhì)會(huì)變差。

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