松茸濃縮口服液的品質(zhì)評價*

么宏偉，佟立君，付婷婷**，謝晨陽，吳洪軍，趙鳳臣，馮 磊，張學(xué)義

（1.黑龍江省林副特產(chǎn)研究所黑龍江省非木質(zhì)林產(chǎn)品研發(fā)重點(diǎn)實驗室，黑龍江 牡丹江 157011；2.黑龍江省林業(yè)科學(xué)院，黑龍江 哈爾濱 150081）

〈貯運(yùn)加工〉

松茸濃縮口服液的品質(zhì)評價*

么宏偉1，佟立君2，付婷婷1**，謝晨陽1，吳洪軍1，趙鳳臣1，馮 磊2，張學(xué)義1

（1.黑龍江省林副特產(chǎn)研究所黑龍江省非木質(zhì)林產(chǎn)品研發(fā)重點(diǎn)實驗室，黑龍江 牡丹江 157011；2.黑龍江省林業(yè)科學(xué)院，黑龍江 哈爾濱 150081）

對松茸濃縮口服液的品質(zhì)做了初步的評價，對其感觀、相對密度、pH值、衛(wèi)生學(xué)指標(biāo)和營養(yǎng)成分含量進(jìn)行檢測。結(jié)果表明，松茸濃縮口服液呈澄明的黃褐色液體，無渾濁和沉淀，味甘，相對密度（1.10±0.05）g·mL－1，pH值為7.50±0.05，每支裝量為10 mL，棕色瓶包裝，衛(wèi)生學(xué)檢測符合標(biāo)準(zhǔn)，含有多糖（86.7±0.2）mg/100mL、維生素C（0.50±0.04）mg/100mL、黃酮（1.18±0.04）mg/100mL、蛋白質(zhì)（193.3±0.3）mg/100mL、多酚（0.19± 0.02）mg/100mL、三萜（38.3±0.1）mg/100mL，檢出了17種氨基酸，其品質(zhì)良好。本研究為松茸口服液的推廣及進(jìn)一步研究提供了數(shù)據(jù)基礎(chǔ)。

松茸；濃縮口服液；品質(zhì)評價

松茸Tricholoma matsutake(S.Ito et Imai)Sing.，又名松口蘑，與溫帶和寒溫帶的松林與櫟林共生生長，為共生菌[1]。野生松茸的生長環(huán)境極為苛刻，需要依賴柏樹、橡樹等闊葉林為其生長發(fā)育提供營養(yǎng)支持，只有這樣才能形成健康的子實體[2－3]。松茸含有豐富的氨基酸、維生素、脂肪、豐富的膳食纖維和多種活性酶，另含有3種珍貴的活性物質(zhì)，分別是雙鏈松茸多糖、松茸多肽和松茸醇[4－5]。松茸具有很多保健功能，如提高免疫力、抗腫瘤、治療糖尿病及心血管疾病、抗衰老養(yǎng)顏和促腸胃保肝臟等[6-8]。

口服液的質(zhì)量是其發(fā)揮功效的重要保證，而口服液的品質(zhì)評價則為判斷口服液質(zhì)量是否合格提供一定的依據(jù)。為了保證松茸濃縮口服液的質(zhì)量，對松茸濃縮口服液的外觀性質(zhì)、pH值、相對密度、澄明度、裝量差異、衛(wèi)生學(xué)等進(jìn)行了檢查，對松茸濃縮口服液的品質(zhì)進(jìn)行了初步評價。

1 材料與方法

1.1試驗材料

試驗所需松茸來自黑龍江省牡丹江市東寧縣。

1.2試驗試劑

檸檬酸、正丁醇、肉豆蔻酯、EDTA、檸檬酸鈉、纖維素酶、果膠酶、木瓜蛋白酶、碳酸鈉、氯化鈉、95%乙醇、葡萄糖、濃硫酸、苯酚、草酸、維生素C、偏磷酸、醋酸、氯酸銨、蘆丁、亞硝酸鈉、硝酸鋁、氫氧化鈉、牛血清白蛋白、考馬斯亮藍(lán)G-250、磷酸、沒食子酸、福林酚、熊果酸、香草醛、冰醋酸、高氯酸等試劑均為國產(chǎn)分析純。

松茸濃縮口服液，試驗前期制備，10 mL·支-1，棕色瓶灌裝。

1.3試驗儀器與設(shè)備

主要試驗儀器見表1。

表1 主要試驗儀器Tab.1 Main laboratory apparatus

1.4試驗方法

1.4.1 松茸濃縮口服液的制法

原料預(yù)處理。

超聲波輔助水提?。簩⒔?jīng)預(yù)處理后的松茸在超聲波細(xì)胞破碎儀中進(jìn)行超聲提取，調(diào)節(jié)超聲功率125 W、超聲時間10 min、工作時間4 s、間隔時間1 s，用4 000 r·min-1的離心機(jī)離心10 min，得到提取液1和殘渣1。

弱堿鹽溶液提?。簩堅?浸漬在松茸質(zhì)量20倍體積含有0.3%碳酸氫鈉、0.5%氯化鈉溶液中，80℃恒溫提取120 min。然后4 000 r·min-1離心10 min，得到提取液2和殘渣2。

乙醇溶液提?。簩堅?浸漬在松茸質(zhì)量20倍體積含有80%乙醇溶液中，70℃恒溫水浴鍋中提取30 min，得到提取液3。

濃縮蒸餾：將3次提取液混合，然后進(jìn)行過濾，用100篩眼的尼龍66濾層過濾。利用旋轉(zhuǎn)蒸發(fā)裝置以50℃、60 r·min-1對上述混合溶液進(jìn)行蒸餾濃縮，蒸餾濃縮至總體積的1/10，滅菌灌裝。得到黃褐色澄清透明口服液。

1.4.2 品質(zhì)評價指標(biāo)

（1）感觀評價

取3批松茸濃縮口服液，由10位專業(yè)人士對其色澤、香味及組織狀態(tài)進(jìn)行評分，取平均值進(jìn)行評價。

（2）相對密度檢查

分別取3批松茸濃縮口服液樣品，用比重計測定其相對密度，每批樣品重復(fù)測定3次，取平均值。

（3）pH值檢查

分別取3批松茸濃縮口服液樣品，參照2010版國家藥典附錄ⅦG pH值測定法，用酸度計進(jìn)行測定，測定前用硼砂標(biāo)準(zhǔn)緩沖溶液校正，每批樣品重復(fù)測定3次，取平均值[63]。

（4）衛(wèi)生學(xué)檢查

參照《中國藥典》 （2010版一部）附錄IG合劑的微生物限度有關(guān)規(guī)定，依據(jù)附ⅫC微生物限度檢測法所述步驟，分別對松茸濃縮口服液中細(xì)菌數(shù)、霉菌和大腸埃希菌數(shù)進(jìn)行了檢測[63]。

（5）營養(yǎng)成分含量測定

多糖：采用苯酚硫酸法測定。準(zhǔn)確稱取葡糖標(biāo)準(zhǔn)品100 mg，蒸餾水定容至100 mL，得到濃度為1.0 mg·mL-1的標(biāo)準(zhǔn)溶液。精密吸取葡萄糖標(biāo)準(zhǔn)液0.1 mL、0.2 mL、0.4 mL、0.6 mL、0.8 mL、1.0 mL，補(bǔ)水至2.0 mL。加入50 g·L-1的苯酚溶液1.0 mL，濃硫酸5.0 mL，混勻，沸水浴2 min。冷卻后在495 nm處測吸光值，以多糖濃度（mg·mL-1）為橫坐標(biāo)，以吸光值（OD495）為縱坐標(biāo)，如圖1所示。

維生素C：精確稱取草酸6.30 g，EDTA 0.0584 g，充分溶解后定容至100 mL，準(zhǔn)確稱取干燥的維生素C 5 mg，用草酸-EDTA溶液定容至500 mL，分別吸取0.8 mL、1.2 mL、1.6 mL、2.0 mL、2.4 mL、2.8 mL、3.2 mL的標(biāo)準(zhǔn)抗壞血酸溶液于50 mL的容量瓶中，然后加入草酸-EDTA溶液，使總體積達(dá)到10 mL。再加入1.0 mL的偏磷酸—醋酸溶液和5%的硫酸2.0 mL，搖勻加入4.0 mL鋁酸銨，在 705nm下測定吸光值，以維生素C濃度（μg·mL-1）為橫坐標(biāo)，以吸光值（OD705）為縱坐標(biāo)，如圖2所示。

圖1 葡萄糖標(biāo)準(zhǔn)曲線Fig.1 Glucose standard curve

圖2 維生素C標(biāo)準(zhǔn)曲線Fig.2 Vitamin C standard curve

黃酮：精確稱取20 mg蘆丁標(biāo)準(zhǔn)品，用50%乙醇溶液定容至100 mL，得0.2 mg·mL-1蘆丁標(biāo)準(zhǔn)溶液，量取標(biāo)準(zhǔn)溶液1.0 mL、3.0 mL、5.0 mL、7.0 mL、13.0 mL、17.0 mL、23.0 mL。分別置于100 mL容量瓶中，每個容量瓶中加入5%亞硝酸鈉溶液1.0 mL，放置6 min后，再分別加入10%硝酸鋁溶液1.0 mL，靜置6 min后分別加入4%氫氧化鈉溶液10 mL，使用50%乙醇溶液定容，靜置10 min后，于508 nm處測吸光值，以蘆丁濃度（μg·mL-1）為橫坐標(biāo)，以吸光值（OD508）為縱坐標(biāo)，如圖3所示。

蛋白質(zhì)：首先將牛血清白蛋白用0.15 mol·mL-1的氯化鈉溶液配成1.0 mg·mL-1的標(biāo)準(zhǔn)蛋白質(zhì)溶液。再準(zhǔn)確稱取100 mg考馬斯亮藍(lán)G-250，溶于50 mL95%的乙醇后，加入120 mL 85%的磷酸，用蒸餾水稀釋至1 L。取6支試管分別加入1.0 mg·mL-1的標(biāo)準(zhǔn)蛋白質(zhì)溶液0.1 mL、0.2 mL、0.3 mL、0.4 mL、0.5 mL、0.6 mL，然后用0.15 mol·mL-1氯化鈉溶液補(bǔ)充到1mL，最后試管分別加入5.0 mL考馬斯亮藍(lán)G-250試劑。每加完一管，立即在旋渦混合器上混勻。加完試劑2 min～5 min后，于595 nm處測吸光值。以牛血清白蛋白濃度（mg·mL-1）為橫坐標(biāo)，以吸光值（OD595）為縱坐標(biāo)，如圖4所示。

圖3 黃酮標(biāo)準(zhǔn)曲線Fig.3 Flavonoids standard curve

圖4 蛋白質(zhì)標(biāo)準(zhǔn)曲線Fig.4 Proteinstandard curve

多酚：精確稱取沒食子酸標(biāo)準(zhǔn)品25 mg，用水溶解并定容至250 mL，得到0.1 mg·mL-1L的標(biāo)準(zhǔn)溶液。精密吸取標(biāo)準(zhǔn)溶液0.1 mL、0.2 mL、0.3 mL、0.4 mL、0.5 mL、0.6 mL于100 mL容量瓶中，加入1 mL福林酚顯色劑，搖勻后再加入2 mL15%碳酸鈉溶液，定容至100 mL，室溫下反應(yīng)2 h后于760 nm處測吸光值，以沒食子酸濃度（μg·mL-1） 為橫坐標(biāo)，以吸光值（OD760）為縱坐標(biāo)，如圖5所示。

圖5 多酚標(biāo)準(zhǔn)曲線Fig.5 Polyphenols standard curve

三萜：精確稱取熊果酸標(biāo)準(zhǔn)品1.150 mg，溶于10 mL無水乙醇中，得0.115 mg·mL-1標(biāo)準(zhǔn)溶液。精確吸取0.1 mL、0.2 mL、0.4 mL、0.6 mL、0.8 mL、1.0 mL、1.2 mL標(biāo)準(zhǔn)溶液于10 mL試管中，水浴蒸干溶劑。分別向每支試管中加入5%香草醛-冰醋酸0.5 mL、高氯酸1 mL，密封。60℃水浴加熱15 min，取出置于冰水中冷卻。再向每支試管中加入5 mL冰醋酸溶液，搖勻。于548 nm處測吸光值，以熊果酸質(zhì)量（μg）為橫坐標(biāo)，以吸光值（OD548）為縱坐標(biāo)，如圖6所示。

圖6 三萜標(biāo)準(zhǔn)曲線Fig.6 Triterpenoids standard curve

氨基酸：利用氨基酸分析儀測定。

2 結(jié)果與分析

2.1感觀評價

口服液的感觀是消費(fèi)者對于口服液的第一認(rèn)識與評價，所以口服液的感觀直接影響了其品質(zhì)的好壞，本試驗由10位經(jīng)專業(yè)訓(xùn)練人士對松茸濃縮口服液的感觀進(jìn)行評價，結(jié)果如表2所示。

表2 松茸濃縮口服液性狀感官評價Tab.2 The sensory evaluation traits of Tricholoma matsutake condensed oral liquid

由表2可知，每批松茸濃縮口服液的性狀良好，感觀評價得分均在90分以上，制得的松茸濃縮口服液呈黃褐色，香氣濃郁，澄清。

2.2相對密度的檢測

松茸濃縮口服液3批樣品的相對密度為（1.10± 0.05） g·mL-1。

2.3pH值的檢測

分別檢測了松茸濃縮口服液3批樣品的pH值，制備松茸濃縮口服液的pH值為7.50±0.05。

2.4衛(wèi)生學(xué)檢測

經(jīng)檢測松茸濃縮口服液中細(xì)菌、霉菌和大腸埃希菌數(shù)符合國家標(biāo)準(zhǔn)，未檢測出致病菌。

2.5營養(yǎng)成分含量的檢測

營養(yǎng)成分的含量決定了口服液的品質(zhì)，本試驗對制得的松茸濃縮口服液中各營養(yǎng)成分含量進(jìn)行檢測，結(jié)果見表3和表4。

表3 松茸濃縮口服液各成分含量Tab.3 All ingredients content of Tricholoma matsutake condensed oral liquid

表4 松茸濃縮口服液氨基酸含量Tab.4 The amino acid content of Tricholoma matsutake condensed oral liquid

由表3可以看出，3批次口服液每支中各營養(yǎng)成分含量差異不大，其中多糖的含量為（86.7±0.2）mg/100mL、維生素C含量為（0.50±0.04）mg/100mL、黃酮為 （1.18±0.04） mg/100mL、蛋白質(zhì)含量為（193.3±0.3） mg/100mL、多酚含量為（0.19±0.02）mg/100mL、三萜含量為（38.3±0.1） mg/100mL。與松茸子實體相比，松茸濃縮口服液較全面地保留了其營養(yǎng)物質(zhì)與功能成分。

由表4可得，松茸濃縮口服液中除胱氨酸、蛋氨酸砜、半胱氨酸未檢測出，檢測出17種氨基酸。與文獻(xiàn)相比，檢測出的氨基酸種類與文獻(xiàn)報道基本一致，谷氨酸、蛋氨酸、異亮氨酸和賴氨酸的含量略小于文獻(xiàn)，其他13種氨基酸含量均高于文獻(xiàn)報首平均值。

3 小結(jié)

松茸中的醇溶性成分（多酚和三萜）最佳提取工藝為乙醇濃度80%，提取時間30 min，提取溫度70℃，此時多酚和三萜的得率分別為1.16 mg/100g和0.23 g/100g。

[1]Byeon SE,Lee J,Lee E,et al.Functional activation of macrophages,monocytes and splenic lymphocytes by polysaccharide fraction from Tricholoma matsutake[J].Archives of pharmacal research,2009,32(11):1565-1572.

[2]Ding X,Tang J,Cao M,et al.Structure elucidation and antioxidant activity of a novel polysaccharide isolated from Tricholoma matsutake[J].International Journal of Biological Macromolecules,2010,47(2):271-275.

[3]Kim SS,Lee JS.Process development formycelial growth and polysaccharide production in Tricholoma matsutake liquid culture[J].Journalof Bioscienceand Bioengineering,2010(3): 351-355.

[4]YinXL,YouQH.Immunomodulatory activities of different solvent extracts from Tricholoma matsutake(S.Ito et S.Imai) Singer(Higherbasidiomycetes)on normal mice[J].International Journal of Medicinal Mushrooms,2012,14:547-554.

[5]YouQH,YinXL.Pulsed counter-current ultrasound-assistedextraction and characterization of polysaccharides from Boletus edulis[J].Carbohydrate Polymers,2014(101):379-385.

[6]YouQH,YinXL.Extraction purification and antioxidant activities of polysaccharides from Tricholoma mongolicum Imai[J]. Carbohydrate Polymers,2014,99:1-10.

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[8]劉培貴，袁明生，王向華.松茸群生物資源及其合理利用與保護(hù)[J].自然資源學(xué)報，1999（3）：245-252.

The Quality Evaluation of Tricholoma matsutake Condensed Oral Liquid

YAO Hong-wei1,TONG Li-jun2,FU Ting-ting1,XIE Chen-yang1, WU Hong-jun1,ZHAO Feng-chen1,FENG Lei1,ZHANG Xue-yi1
(1.Heilongjiang Forest By－Product and Speciality Research Institute,Heilongjiang Provincial Key Laboratory of Non－wood Forest Product Development,Mudanjiang 157011,China;2.Heilongjiang Academy of Forestry,Harbin 150081,China)

A preliminary assessment of Tricholoma matsutake condensed oral liquid was made,and their senses,relative density, pH,hygiene indicators and nutrient content were detected.The results showed that the clarity of the mushroom was brown liquid,no turbidity and precipitation,sweet,and the relative density was (1.10±0.05)g·mL－1,pH value was 7.50±0.05,the amount of each device was 10 mL,hygiene testing was up to standard.It contained polysaccharide (86.7±0.2)mg/100mL,vitamin C (0.50±0.04)mg,flavonoids (1.18±0.04)mg/100mL,protein (193.3±0.3)mg/100mL,polyphenol(0.19±0.02) mg/100mL,triterpenoids(38.3±0.1)mg/100mL,and 17 kinds of amino acids were detected with good quality.The study provided a data base for promotion of oral matsutake and further research.

Tricholoma matsutake;condensed oral liquid;quality evaluation

S646.9

A

1003-8310（2015）03-0061-05

10.13629/j.cnki.53－1054.2015.03.015

黑龍江省森林工業(yè)總局科技攻關(guān)項目（sgzjY2012022）。

么宏偉（1981－），男，在讀碩士研究生，助理研究員，研究方向：從事林產(chǎn)化學(xué)加工學(xué)。E－mail:meme917@163.com

**通信作者：付婷婷（1985－），女，碩士，研究實習(xí)員，主要從事林產(chǎn)化學(xué)加工學(xué)方面研究。E－mail:futingting115@126.com

2015－03－02