• <tr id="yyy80"></tr>
  • <sup id="yyy80"></sup>
  • <tfoot id="yyy80"><noscript id="yyy80"></noscript></tfoot>
  • 99热精品在线国产_美女午夜性视频免费_国产精品国产高清国产av_av欧美777_自拍偷自拍亚洲精品老妇_亚洲熟女精品中文字幕_www日本黄色视频网_国产精品野战在线观看 ?

    超高效液相色譜法檢測(cè)藥桑椹中1-脫氧野尻霉素

    2015-12-21 08:12:56蒲俊松向仲懷楊光偉何寧佳
    食品科學(xué) 2015年20期
    關(guān)鍵詞:桑椹醋酸色譜法

    蒲俊松,陳 虎,向仲懷,楊光偉*,何寧佳*

    (家蠶基因組生物學(xué)國(guó)家重點(diǎn)實(shí)驗(yàn)室,重慶 400715)

    超高效液相色譜法檢測(cè)藥桑椹中1-脫氧野尻霉素

    蒲俊松,陳 虎,向仲懷,楊光偉*,何寧佳*

    (家蠶基因組生物學(xué)國(guó)家重點(diǎn)實(shí)驗(yàn)室,重慶 400715)

    建立超高效液相色譜測(cè)定新疆藥桑椹中1-脫氧野尻霉素(1-deoxynojirimycin,DNJ)含量的方法。藥桑椹粉經(jīng)0.05 mol/L鹽酸提取,在pH 8.5的硼酸鹽緩沖液條件下,氯甲酸-9-芴基甲酯(9-fluorenylmethyl chloroformate,F(xiàn)MOC-Cl)與DNJ反應(yīng)生成具有紫外吸收的絡(luò)合物(DNJ-FMOC),然后采用超高效液相色譜-紫外檢測(cè)器測(cè)定。液相色譜條件為CORTECSTMC18色譜柱(2.1 mm×100 mm,2.7 μm),流動(dòng)相為乙腈-0.5%醋酸(28∶72,V/V),在流速0.6 mL/min、柱溫28 ℃、檢測(cè)波254 nm條件下檢測(cè)。結(jié)果表明:DNJ與其他組分分離效果良好,方法檢出限為0.1 μg/mL(RSN=3),線性范圍在0.5~20 μg/mL,相關(guān)系數(shù)(r)為0.999 970,加標(biāo)回收率平均為106.4%。精密度實(shí)驗(yàn)、穩(wěn)定性實(shí)驗(yàn)、重復(fù)性實(shí)驗(yàn)以及回收率實(shí)驗(yàn)表明,該方法穩(wěn)定可靠,可作為測(cè)定藥桑椹中DNJ含量的有效方法。

    藥桑;1-脫氧野尻霉素;超高效液相色譜;紫外檢測(cè)

    藥桑(Morus nigra Linn.)屬桑科桑屬黑桑種。藥桑起源于伊朗,16世紀(jì)在我國(guó)新疆等地開(kāi)始栽培,是我國(guó)唯一的黑桑種。目前也主要分布于新疆阿克蘇、和田、吐魯番和喀什等地區(qū)[1-4]。藥桑桑椹是維吾爾族歷代的民間藥材,具有降低血糖、血脂的功效[5]?,F(xiàn)代藥理學(xué)研究證實(shí)藥桑椹具有降三高(高血糖、高血脂、高血壓)、抗氧化、抗腫瘤等藥理作用[6-8]。藥桑椹中含有黃酮、多糖、生物堿等多種活性成分[9-10],1-脫氧野尻霉素(1-deoxynojirimycin,DNJ)是一種主要存在于桑樹(shù)中的多羥基哌啶生物堿。其具有降血糖[11]、降血脂[12]、抗腫瘤[13]、抑制變形鏈球菌生長(zhǎng)[14]、抗病毒[15]等功效。

    作為降血糖的重要活性成分,DNJ含量可以作為桑制品降血糖效果的質(zhì)量指標(biāo),也是進(jìn)一步篩選富含DNJ的桑資源重要依據(jù)[16],因而需要開(kāi)發(fā)一種可靠的DNJ檢測(cè)方法。目前,DNJ的檢測(cè)方法主要分為兩類(lèi),一類(lèi)是碘-碘化鉀分光光度法[17],該方法步驟少,所需試劑易得,儀器要求不高,但是精確度不高;另一類(lèi)是色譜法,又分為氣相色譜法[18]和液相色譜法,高效液相色譜法為常用分析方法。按照配備的檢測(cè)器不同,高效液相色譜法分為蒸發(fā)光散射檢測(cè)法[19]、熒光檢測(cè)法[20]、紫外檢測(cè)法[16]和質(zhì)譜檢測(cè)法[21]。除蒸發(fā)光散射檢測(cè)法精確度相對(duì)較差,其他3 種方法檢測(cè)結(jié)果準(zhǔn)確、穩(wěn)定、可靠。

    近年來(lái)基于小顆粒填料、低系統(tǒng)體積及快速檢測(cè)等技術(shù)發(fā)展的超高效液相色譜法,具有快速高效、高分離度等特點(diǎn)[22],現(xiàn)已廣泛應(yīng)用于食品、藥物中各類(lèi)物質(zhì)的分析檢測(cè)。目前國(guó)內(nèi)外還沒(méi)有采用超高效液相色譜法檢測(cè)桑樹(shù)中DNJ的方法報(bào)道。本研究通過(guò)優(yōu)化反應(yīng)條件,確定最佳儀器分析條件,建立了超高效液相色譜-紫外檢測(cè)器法測(cè)定藥桑椹中DNJ的方法。

    1 材料與方法

    1.1 材料與試劑

    藥桑椹由新疆和田蠶研所提供,采自和田不同地區(qū);果桑椹采自西南大學(xué)桑樹(shù)品種資源圃。材料于60 ℃烘干至質(zhì)量恒定,粉碎機(jī)粉碎,過(guò)40 目篩,置干燥器中冷凍備用。

    DNJ(純度≥98%,CAS:19130-96-2) 北京恒元啟天化工技術(shù)研究院;氯甲酸-9-芴基甲酯(9-fluorenylmethyl chloroformate,F(xiàn)MOC-Cl,純度≥99.0%,色譜純)、甘氨酸(純度≥99%) 美國(guó)Sigma公司;乙腈、甲醇、醋酸(均為色譜純) 美國(guó)Thermo Fisher Scientifi c公司。

    1.2 儀器與設(shè)備

    DHG-9140A電熱恒溫鼓風(fēng)干燥箱 上海齊欣科學(xué)儀器有限公司;FA2004B電子天平 上海精天電子儀器有限公司;KQ-500DV數(shù)控超聲清洗器 昆山市超聲儀器有限公司;CT15RE冷凍離心機(jī) 日本Hitachi公司;ACQUITY超高效液相色譜、I-Class色譜儀(配紫外檢測(cè)器及Empower 3工作站) 沃特世科技(上海)有限公司;GX-03 150 g功能粉碎機(jī) 浙江高鑫工貿(mào)有限公司。

    1.3 方法

    1.3.1 樣品的提取

    精確稱(chēng)取待測(cè)桑椹粉1 g,加入50 mL 0.05 mol/L HCl溶液,混勻后30 ℃水浴超聲10 min,提取液在20 ℃條件下10 000×g離心5 min,收集上清液,沉淀物再按上述步驟重復(fù)提取1 次,合并上清液,超純水定容至100 mL,即得樣品提取液。

    1.3.2 DNJ標(biāo)準(zhǔn)液的配制

    取DNJ標(biāo)準(zhǔn)品一瓶(20 mg),用10 mL 0.05 mol/L HCl溶液溶解,搖勻配為2 mg/mL的DNJ標(biāo)準(zhǔn)液。用時(shí)將DNJ標(biāo)準(zhǔn)液配制成0.5、2、8、12、16、20 μg/mL備用。

    1.3.3 DNJ的衍生化

    取DNJ提取液(或DNJ標(biāo)準(zhǔn)液)100 μL于1.5 mL的離心管,加入0.4 mol/L硼酸鉀緩沖液(pH 8.5)100 μL,再加入5 mmol/L的FMOC-Cl(溶解于乙腈中)200 μL,混勻后,20 ℃水浴20 min,加入1 mol/L的甘氨酸100 μL中和剩余的FMOC-Cl終止反應(yīng),加入1%的醋酸溶液100 μL使衍生物穩(wěn)定,而后加入超純水400 μL稀釋?zhuān)?.22 μm針頭式過(guò)濾器過(guò)濾,即得測(cè)試液。

    1.3.4 色譜條件

    色譜柱:CORTECSTMC18(2.1 mm×100 mm,2.7 μm);紫外檢測(cè)器,檢測(cè)波長(zhǎng):254 nm;流動(dòng)相:乙腈-0.5%醋酸(28∶72,V/V);流速:0.6 mL/min;柱溫:28 ℃;進(jìn)樣量:1 μL。

    2 結(jié)果與分析

    2.1 流動(dòng)相的選擇及其比例的優(yōu)化

    實(shí)驗(yàn)比較乙腈和不同體積分?jǐn)?shù)醋酸溶液作為流動(dòng)相的分離效果,結(jié)果顯示較高的醋酸體積分?jǐn)?shù)能夠改善色譜峰的對(duì)稱(chēng)性,綜合考慮選擇乙腈-0.5%醋酸溶液作為色譜分析時(shí)的流動(dòng)相。DNJ衍生物為弱極性,隨著乙腈比例的降低,流動(dòng)相極性增加,洗脫能力變?nèi)?,目?biāo)物的保留時(shí)間也會(huì)隨之延長(zhǎng),這有助于目標(biāo)物與雜質(zhì)的分離。當(dāng)乙腈-0.5%醋酸(50∶50,V/V)時(shí),因雜質(zhì)干擾,目標(biāo)物不能有效的分離,最后逐漸降低乙腈的比例,能夠有效分離目標(biāo)物;當(dāng)乙腈-0.5%醋酸(28∶72,V/V)時(shí),目標(biāo)物的峰形良好,分離度為3.4。因此流動(dòng)相比例選用乙腈-0.5%醋酸(28∶72,V/V)。

    2.2 測(cè)試樣品的超高效液相色譜圖譜

    圖1 DNJ標(biāo)準(zhǔn)品及藥桑椹提取液色譜圖Fig.1 Chromatograms of DNJ standard and black mulberry fruit sample

    分別對(duì)DNJ標(biāo)準(zhǔn)品及桑椹提取液進(jìn)行超高效液相色譜分析。如圖1所示,圖1c中DNJ標(biāo)準(zhǔn)品有3 個(gè)主色譜峰,但在進(jìn)行衍生化反應(yīng)時(shí),若只加FMOC-Cl,不加Gly和DNJ,則僅出現(xiàn)FMOC-OH色譜峰(圖1a);只加Gly和FMOC-Cl進(jìn)行衍生化反應(yīng),則只出現(xiàn)FMOC-OH和Gly-FMOC色譜峰(圖1b);通過(guò)分析第1個(gè)色譜峰峰面積與DNJ標(biāo)準(zhǔn)品的質(zhì)量濃度,發(fā)現(xiàn)其呈線性關(guān)系。由此可以斷定,圖1c中3 個(gè)色譜峰依次分別為DNJ-FMOC、FMOC-OH、Gly-FMOC。

    2.3 DNJ的線性關(guān)系

    將DNJ標(biāo)準(zhǔn)溶液質(zhì)量濃度梯度按1.3.3節(jié)的方法進(jìn)行衍生化反應(yīng),反應(yīng)液在上述色譜條件下進(jìn)行超高效液相色譜-紫外檢測(cè)器分析,以色譜峰面積(y)與標(biāo)準(zhǔn)品質(zhì)量濃度(x)繪制標(biāo)準(zhǔn)曲線。結(jié)果表明,DNJ的質(zhì)量濃度與色譜峰面積呈良好的線性關(guān)系,經(jīng)回歸分析,二者的回歸方程為y=872x-13.1,相關(guān)系數(shù)r=0.999 970,方法檢出限為0.1 μg/mL(RSN=3)。

    2.4 精密度和重復(fù)性

    取同一供試品溶液,分別進(jìn)樣測(cè)定6 次,分別測(cè)定DNJ的峰面積值,計(jì)算相對(duì)標(biāo)準(zhǔn)偏差(relative standard deviation,RSD)為1.32%(n=6),說(shuō)明本測(cè)定方法精密度符合要求。按1.3節(jié)方法操作取桑椹粉6 份,進(jìn)行超高效液相色譜分析,根據(jù)峰面積值,并對(duì)照標(biāo)準(zhǔn)曲線計(jì)算樣品中的DNJ含量,如表1所示,6 次測(cè)定的平均含量為0.623 4 mg/g,其RSD為1.00%(n=6)。表明本方法的重復(fù)性良好。

    表1 重復(fù)性實(shí)驗(yàn)結(jié)果Table1 Results of repeatability test

    2.5 穩(wěn)定性實(shí)驗(yàn)結(jié)果

    取桑椹粉提取液進(jìn)行衍生化反應(yīng),分別間隔0、4、8、16、24、48 h進(jìn)樣,共進(jìn)樣6 次。測(cè)定結(jié)果表明,DNJ-FMOC的峰面積基本一致,計(jì)算DNJ峰面積的RSD為2.40%(n=6)。實(shí)際上在室溫條件放置一周后再次測(cè)定,DNJ-FMOC的峰面積也無(wú)顯著變化。

    2.6 加標(biāo)回收率

    取測(cè)定過(guò)DNJ含量的桑椹粉6 份,每份0.5 g,分別加入0.4 mg/mL標(biāo)準(zhǔn)品溶液1 mL,按1.3節(jié)方法制備樣品液和進(jìn)行衍生反應(yīng)。超高效液相色譜分析測(cè)定DNJ含量,計(jì)算加標(biāo)回收率。如表2所示,測(cè)定發(fā)現(xiàn)平均加標(biāo)回收率為106.4%,RSD為2.43%。此結(jié)果表明,本測(cè)定方法符合加標(biāo)回收率的要求。

    表2 加標(biāo)回收率實(shí)驗(yàn)結(jié)果Table2 Results of recovery rate test

    2.7 桑椹樣品DNJ含量測(cè)定

    表3 7 種桑椹樣品中DNJ含量測(cè)定Table3 The contents of DNJ in seven cultivars of mulberry fruit (x± s) mg/g

    表3 7 種桑椹樣品中DNJ含量測(cè)定Table3 The contents of DNJ in seven cultivars of mulberry fruit (x± s) mg/g

    桑椹于田(2012.8)于田(2014.8)策勒和田縣藥桑王和田市5801長(zhǎng)江一號(hào)DNJ含量0.610 3±0.011 0.672 9±0.010 1.038 3±0.014 1.384 5±0.013 1.501 9±0.019 2.524 7±0.026 1.138 8±0.013 0.792 0±0.009

    對(duì)7 種桑椹中DNJ含量進(jìn)行測(cè)定,結(jié)果如表3所示。前5 種都是藥桑椹,采自新疆不同地區(qū),其中包括了2012年和2014年8月采于于田的藥桑椹。藥桑王為單棵,因其栽培歷史悠久而得名。5801和長(zhǎng)江一號(hào)兩種是果桑,采自西南大學(xué)桑樹(shù)品種資源圃。從表3可以看出,產(chǎn)自于田2012年和2014年的藥桑椹中DNJ含量相差不大,初步表明同一地區(qū)不同時(shí)間的藥桑椹中DNJ含量穩(wěn)定。而不同地區(qū)藥桑椹中DNJ的含量差異較大,其中和田市的含量最高,是于田的4 倍。和田縣、藥桑王和和田市的藥桑椹中DNJ的含量均高于劉凡[23]、肖明[24]等檢測(cè)桑葉、桑葉茶中DNJ的含量。Kimura等[25]研究表明DNJ給藥劑量為60 kg人體質(zhì)量6 mg時(shí)能夠抑制高血糖,和田市產(chǎn)藥桑椹DNJ含量為2.524 7 mg/g干質(zhì)量,按藥桑椹含水量80%[1],每次食用12 g鮮果就能達(dá)到抑制高血糖的效果。

    3 結(jié) 論

    本實(shí)驗(yàn)建立了超高效液相色譜-紫外檢測(cè)器測(cè)定藥桑椹中DNJ含量的方法。 目前已有不少關(guān)于桑樹(shù)中DNJ檢測(cè)方法的報(bào)道,大多為高效液相色譜法。與傳統(tǒng)的高效液相色譜相比,超高效液相色譜具有更快的分離速率、更高的分辨率和靈敏度[26]。高效液相色譜的方法不能完全適用于超高效液相色譜的分析,其中流動(dòng)相的比例對(duì)物質(zhì)的分離起著重要的作用。在本實(shí)驗(yàn)中,DNJ衍生物為弱極性,隨著乙腈和0.5%醋酸溶液比例的降低,流動(dòng)相的極性增強(qiáng),洗脫能力減弱,分離能力變強(qiáng),利于目標(biāo)物與雜質(zhì)的分離,但是檢測(cè)時(shí)間也更長(zhǎng)。即是如此,本方法也能在8 min內(nèi)完成檢測(cè),相對(duì)于目前報(bào)道的最快速的DNJ檢測(cè)方法(12 min完成檢測(cè))[20],其檢測(cè)效率提高33%。當(dāng)流動(dòng)相比例為乙腈-0.5%醋酸(28∶72,V/V),DNJ峰形良好,分離度達(dá)到了3.4。且本方法流速低,能夠減少有機(jī)溶劑的消耗,進(jìn)樣量少,節(jié)省樣品。通過(guò)方法學(xué)驗(yàn)證,該方法具有良好的精密度、重復(fù)性和穩(wěn)定性,能夠滿(mǎn)足分析要求。

    隨著果汁類(lèi)飲料的風(fēng)行和以桑椹為原材料的功能性食品的開(kāi)發(fā),DNJ作為該類(lèi)產(chǎn)品的主要功能性成分,其含量直接影響該類(lèi)產(chǎn)品的品質(zhì)。藥桑是新疆乃至中東地區(qū)獨(dú)特稀貴的藥用果桑種質(zhì)資源[1],藥桑椹為維吾爾族歷代的民間藥材,具有很高的開(kāi)發(fā)價(jià)值,可作為新疆地區(qū)特有的果桑品種種植,對(duì)藥桑椹的開(kāi)發(fā)更能促進(jìn)新疆的經(jīng)濟(jì)發(fā)展。近幾年關(guān)于桑葉中DNJ的研究報(bào)道較多,針對(duì)桑椹的DNJ含量及差異研究較少,本研究填補(bǔ)了這一空白,所建立的超高效液相色譜檢測(cè)藥桑椹中DNJ的方法,快速、簡(jiǎn)便、定量準(zhǔn)確,適合桑椹樣品中DNJ的快速定量檢測(cè),為藥桑椹的開(kāi)發(fā)提供科學(xué)依據(jù)。

    [1] 買(mǎi)買(mǎi)提依明. 新疆藥桑的研究[J]. 北方蠶業(yè), 2007, 28(1): 1-3.

    [2] 張帆, 張剛, 陸承志. 維藥藥桑的研究與應(yīng)用[J]. 傳統(tǒng)醫(yī)藥, 2007, 16(20): 61.

    [3] 江巖. 新疆黑桑椹多糖超聲提取工藝優(yōu)選[J]. 中國(guó)釀造, 2009, 28(3): 138-140.

    [4] 江巖, 李斌, 郭曉軍. 新疆黑桑椹多糖的提取和測(cè)定[J]. 食品科學(xué), 2008, 29(8): 224-226.

    [5] 盧紅, 丁天龍, 吳曙光, 等. 新疆藥桑的藥用價(jià)值及在維吾爾醫(yī)藥中的應(yīng)用[J]. 蠶業(yè)科學(xué), 2011, 37(6): 1098-1101.

    [6] 楊小蘭, 毛立新, 張曉云. 黑桑椹的營(yíng)養(yǎng)成分和抗氧化作用的研究[J].食品科學(xué), 2006, 27(2): 248-250.

    [7] 楊小蘭, 毛立新, 張曉云. 黑桑椹對(duì)高脂血癥大鼠的降脂作用研究[J].食品科學(xué), 2005, 26(9): 509-5l0.

    [8] 龐宗然, 裴凌鵬. 藥桑不同提取物對(duì)2型糖尿病大鼠的治療作用[J].中國(guó)老年學(xué)雜志, 2009, 29(21): 2733-2735.

    [9] 蔣昊, 徐立, 劉峻池, 等. 藥桑的生物活性成分及藥理作用研究進(jìn)展[J].蠶業(yè)科學(xué), 2011, 37(1): 98-104.

    [10] 買(mǎi)買(mǎi)提依明, 盧紅, 木合達(dá)爾, 等. 新疆藥桑的有效成分測(cè)定及藥理作用的研究初報(bào)[J]. 北方蠶業(yè), 2006, 27(4): 16-18.

    [11] CHALUNTORN V, KIYOTAKA N, PHUMON S, et al. Development of high 1-deoxynojirimycin (DNJ) content mulberry tea and use of response surface methodology to optimize tea-making conditions for highest DNJ extraction[J]. Food Science and Technology, 2012, 45(2): 226-232.

    [12] KOJIMA Y, KIMURA T, NAKAGAWA K, et al. Effects of mulberry leaf extract rich in 1-deoxynojirimycin on blood lipid profiles in humans[J]. Journal of Clinical Biochemistry and Nutrition, 2010, 47(2): 155-161.

    [13] WANG R J, YANG C H, HU M L. 1-Deoxynojirimycin inhibits metastasis of B16F10 melanoma cells by attenuating the activity and expression of matrix metalloproteinases-2 and -9 and altering cell surface glycosylation[J]. Journal of Agriculture and Food Chemistry, 2010, 58(16): 8988-8993.

    [14] ISLAM B, KHAN S N, HAQUE I, et al. Novel anti-adherence activity of mulberry leaves: inhibition of Streptococcus mutans biofilm by 1-deoxynojirimycin isolated from Mours alba[J]. Journal of Antimicrobial Chemotherapy, 2008, 62(4): 751-757.

    [15] JACOB J R, MANSFIELD K, YOU J E, et al. Natural iminosugar derivatives of 1-deoxynojirimycin inhibit glycosylation of hepatitis viral envelope proteins[J]. Journal of Microbiology, 2007, 45(3): 431-440.

    [16] 施新琴, 崔為正, 裘立群, 等. 用反相高效液相色譜-紫外檢測(cè)法測(cè)定1-脫氧野尻霉素的含量[J]. 蠶業(yè)科學(xué), 2006, 32(1): 146-149.

    [17] 楊海霞. 桑葉中DNJ分離純化及含量測(cè)定的研究[D]. 杭州: 浙江大學(xué), 2003.

    [18] 李宏, 錢(qián)永華, 王建芳, 等. 桑葉中1-脫氧野尻霉素(DNJ)的氣相法測(cè)定[J]. 北方蠶業(yè), 2006, 37(3): 31-32.

    [19] KIMURA T, NAKAGAWA K, SAITO Y, et al. Simple and rapid determination of 1-deoxynojirimycin in mulberry leaves[J]. Biofactors, 2004, 22(1/4): 341-345.

    [20] KIM J W, KIM S U, LEE H S, et al. Determination of 1-deoxynojirimycin in Morus alba L. leaves by derivatization with 9-fluorenylmethyl chloroformate followed by reversed-phase highperformance liquid chromatography[J]. Journal of Chromatography A, 2003, 1002: 93-99.

    [21] NUENGCHAMNONG N, INGKANINAN K, KAEWRUANG W, et al. Quantitative determination of 1-deoxynojirimycin in mulberry leaves using liquid chromatography-tandem mass spectrometry[J]. Journal of Pharmaceutical and Biomedical Analysis, 2007, 44(4): 853-858.

    [22] YU K, LITTLE D, PLUMB R, et al. High-throughput quantifi cation for a drug mixture in rat plasma-a comparison of ultra performance liquid chromatography/tandem mass spectrometry with highperformance liquid chromatography/tandem mass spectrometry[J]. Rapid Commun Mass Spectrom, 2006, 20(4): 544-552.

    [23] 劉凡, 李平平, 廖森泰, 等. 98 份不同桑樹(shù)品種資源的桑葉總生物堿及1-脫氧野尻霉素含量測(cè)定[J]. 蠶業(yè)科學(xué), 2012, 38(2): 185-191.

    [24] 肖洪, 黃先智, 沈以紅, 等. 響應(yīng)面法優(yōu)化提高發(fā)酵桑葉茶中1-脫氧野尻霉素含量工藝[J]. 食品科學(xué), 2014, 35(10): 46-51. doi: 10.7506/ spkx1002-6630-201410009.

    [25] KIMURA T, NAKAGAWA K, KUBOTA H, et al. Food-grade mulberry powder enriched with 1-deoxynojirimycin suppresses the elevation of postprandial blood glucose in humans[J]. Journal of Agricultural and Food Chemistry, 2007, 55: 5869-5874.

    [26] 郝桂明, 唐素芳. 超高效液相色譜在藥物分析中的應(yīng)用[J]. 天津藥學(xué), 2009, 21(6): 64-69.

    Determination of 1-Deoxynojirimycin in Black Mulberry Fruit by Ultra Performance Liquid Chromatography

    PU Junsong, CHEN Hu, XIANG Zhonghuai, YANG Guangwei*, HE Ningjia*
    (State Key Laboratory of Silkworm Genome Biology, Chongqing 400715, China)

    The contents of 1-deoxynojirimycin (DNJ) in the fruits of black mulberry (Morus nigra L.) were measured using ultra performance liquid chromatography (UPLC). Dried fruits were pulverized and extracted with 0.05 mol/L HCl, and then incubated with 9-fl uorenylmethyl chloroformate (FMOC-Cl) in pH 8.5 borate buffer to produce the complex DNJ-FMOC. The concentration of DNJ-FMOC was detected by UPLC coupled with UV detector. A CORTECSTMC18column was used and the column temperature was kept at 28 ℃. The mobile phase was acetonitrile-0.5% acetic acid solution (28:72, V/V) with a fl ow rate of 0.6 mL/min. The UV detection wavelength was 254 nm. The results indicated that DNJ was separated well with a linearity ranging from 0.5 to 20 μg/mL. The limit of detection (LOD) was 0.1 μg/mL and the correlation coeffi cient (r) between the peak area of DNJ-FMOC and DNJ concentration was 0.999 970 and the average recovery from spiked samples was 106.4%. The tests for precision, stability, reproducibility and recovery rate showed that the method was stable and reliable, and could be used as an effective method for the determination of DNJ content in black mulberry fruits.

    Morus nigra L.; 1-deoxynojirimycin; ultra performance liquid chromatography; UV detection

    TS207.5

    A

    1002-6630(2015)20-0207-04

    10.7506/spkx1002-6630-201520040

    2015-01-09

    國(guó)家高技術(shù)研究發(fā)展計(jì)劃(863計(jì)劃)項(xiàng)目(2013AA100605);國(guó)家農(nóng)業(yè)部公益性行業(yè)2003科研專(zhuān)項(xiàng)(201403064)

    蒲俊松(1990—),男,碩士,研究方向?yàn)橹参锘瘜W(xué)。E-mail:466342842@qq.com

    *通信作者:楊光偉(1958—),男,研究員,博士,研究方向?yàn)橹参锷怼-mail:yanggw@swu.edu.cn

    何寧佳(1971—),女,教授,博士,研究方向?yàn)楣δ芑蚪M與分析生物學(xué)。E-mail:hejia@swu.edu.cn

    猜你喜歡
    桑椹醋酸色譜法
    桑椹
    醋酸鈣含量測(cè)定方法的對(duì)比與優(yōu)化
    云南化工(2021年11期)2022-01-12 06:06:20
    高效液相色譜法測(cè)定水中阿特拉津
    桑椹(外一首)
    鴨綠江(2021年17期)2021-10-13 07:06:14
    桑椹
    反相高效液相色譜法測(cè)定食品中的甜蜜素
    圖說(shuō)醋酸
    廣州化工(2020年8期)2020-05-19 06:23:56
    桑椹提取物對(duì)胰蛋白酶的抑制作用及對(duì)小鼠胰腺組織的損傷
    中成藥(2017年5期)2017-06-13 13:01:12
    醋酸甲酯與合成氣一步合成醋酸乙烯
    反相高效液相色譜法快速分析紫脲酸
    中国美白少妇内射xxxbb| 国产精品av视频在线免费观看| 国产精品99久久久久久久久| 亚洲精华国产精华液的使用体验| kizo精华| 亚洲精品亚洲一区二区| 国产男人的电影天堂91| 婷婷色综合www| 国产单亲对白刺激| 国产激情偷乱视频一区二区| 亚洲国产高清在线一区二区三| 日韩精品有码人妻一区| 久久韩国三级中文字幕| 91精品国产九色| 中文字幕av在线有码专区| 欧美三级亚洲精品| 亚洲av免费在线观看| 六月丁香七月| 如何舔出高潮| 久久久久久久久久成人| 哪个播放器可以免费观看大片| 嫩草影院精品99| 亚洲成人久久爱视频| 国产日韩欧美在线精品| 在线天堂最新版资源| 亚洲欧美成人综合另类久久久| 搡老妇女老女人老熟妇| 国产精品蜜桃在线观看| 色综合色国产| 草草在线视频免费看| 国产高清有码在线观看视频| 中文字幕免费在线视频6| 久久精品国产亚洲av涩爱| 汤姆久久久久久久影院中文字幕 | 成人av在线播放网站| 观看免费一级毛片| 欧美xxⅹ黑人| xxx大片免费视频| 国产在视频线精品| 亚洲av成人精品一区久久| 成人亚洲欧美一区二区av| 最新中文字幕久久久久| 国产精品久久视频播放| 亚洲精品乱码久久久v下载方式| 看免费成人av毛片| 26uuu在线亚洲综合色| 乱人视频在线观看| 国产精品久久久久久av不卡| 91精品国产九色| 欧美人与善性xxx| 神马国产精品三级电影在线观看| 色综合站精品国产| 青春草国产在线视频| 亚洲人成网站在线观看播放| 久久99精品国语久久久| 国产精品精品国产色婷婷| 亚洲精品成人av观看孕妇| 免费av观看视频| 精品一区二区三区人妻视频| 国产极品天堂在线| 国产成人91sexporn| 天堂影院成人在线观看| 亚洲国产精品国产精品| 特级一级黄色大片| 黄色一级大片看看| 国产午夜福利久久久久久| 国产黄片美女视频| 日韩欧美精品v在线| 狂野欧美激情性xxxx在线观看| 亚洲精品国产av成人精品| 日韩一区二区三区影片| 80岁老熟妇乱子伦牲交| 人妻夜夜爽99麻豆av| 国产精品综合久久久久久久免费| 精品人妻偷拍中文字幕| 亚洲av国产av综合av卡| 亚洲精品久久久久久婷婷小说| 免费观看a级毛片全部| 国产 一区精品| 成人综合一区亚洲| 99久久精品一区二区三区| 尾随美女入室| 日韩一区二区视频免费看| 尾随美女入室| 白带黄色成豆腐渣| 三级经典国产精品| 国产午夜福利久久久久久| 成年女人看的毛片在线观看| 中文字幕av成人在线电影| 亚洲熟女精品中文字幕| 久久久久久伊人网av| xxx大片免费视频| 国产高清国产精品国产三级 | 午夜免费男女啪啪视频观看| 久久亚洲国产成人精品v| 免费看a级黄色片| 一级毛片久久久久久久久女| 18禁动态无遮挡网站| 精品酒店卫生间| 久久这里只有精品中国| 精品欧美国产一区二区三| 美女被艹到高潮喷水动态| 男女啪啪激烈高潮av片| 国产高清有码在线观看视频| 欧美97在线视频| ponron亚洲| 夫妻午夜视频| 中文字幕制服av| 一个人看的www免费观看视频| 热99在线观看视频| 亚洲国产色片| 人妻一区二区av| 国产成人精品久久久久久| 午夜免费男女啪啪视频观看| 韩国av在线不卡| 国内精品宾馆在线| 日本黄色片子视频| 熟妇人妻不卡中文字幕| 赤兔流量卡办理| 欧美激情国产日韩精品一区| 白带黄色成豆腐渣| 成人亚洲精品一区在线观看 | 日本黄大片高清| 午夜视频国产福利| 日日摸夜夜添夜夜添av毛片| 免费无遮挡裸体视频| 国产免费一级a男人的天堂| 亚洲真实伦在线观看| 菩萨蛮人人尽说江南好唐韦庄| www.色视频.com| 欧美zozozo另类| 亚洲人成网站在线播| 网址你懂的国产日韩在线| 免费播放大片免费观看视频在线观看| 好男人视频免费观看在线| 国产亚洲av片在线观看秒播厂 | 亚洲精品影视一区二区三区av| 国产在线一区二区三区精| 插逼视频在线观看| 国产亚洲最大av| 麻豆乱淫一区二区| 欧美激情国产日韩精品一区| 高清日韩中文字幕在线| 麻豆成人午夜福利视频| 精品少妇黑人巨大在线播放| 国产精品人妻久久久影院| 成人av在线播放网站| 久久亚洲国产成人精品v| 男女下面进入的视频免费午夜| 国产综合精华液| 久久午夜福利片| 一区二区三区高清视频在线| 国产精品一区二区三区四区免费观看| h日本视频在线播放| 夫妻性生交免费视频一级片| 大话2 男鬼变身卡| 亚洲美女视频黄频| 亚洲国产欧美在线一区| 一级二级三级毛片免费看| 久久久色成人| 成人午夜精彩视频在线观看| 国产黄频视频在线观看| 日日摸夜夜添夜夜爱| 丝瓜视频免费看黄片| 久久久久久久久久人人人人人人| 一边亲一边摸免费视频| 99久久精品国产国产毛片| 蜜桃久久精品国产亚洲av| 国产精品一区二区三区四区免费观看| 少妇被粗大猛烈的视频| 日本欧美国产在线视频| 成人高潮视频无遮挡免费网站| 亚洲美女视频黄频| 最近的中文字幕免费完整| 久久久久久久久久成人| 亚洲精品色激情综合| 秋霞在线观看毛片| 成人亚洲精品一区在线观看 | 亚洲最大成人中文| 亚洲18禁久久av| 三级毛片av免费| 久久久久国产网址| 欧美精品国产亚洲| 国产乱来视频区| av福利片在线观看| 成人特级av手机在线观看| 亚洲人成网站在线播| 国产一级毛片七仙女欲春2| 噜噜噜噜噜久久久久久91| 欧美 日韩 精品 国产| 高清午夜精品一区二区三区| 亚洲欧洲日产国产| 久久精品国产亚洲av天美| 1000部很黄的大片| 国产精品女同一区二区软件| 精品久久久噜噜| 国产黄频视频在线观看| 国产亚洲精品久久久com| 久久亚洲国产成人精品v| 国产精品一及| 成年免费大片在线观看| 插逼视频在线观看| 亚洲aⅴ乱码一区二区在线播放| 日本一本二区三区精品| av国产免费在线观看| 久久久久网色| 国产白丝娇喘喷水9色精品| 国产精品人妻久久久影院| 成人二区视频| ponron亚洲| 亚洲欧美日韩卡通动漫| 18+在线观看网站| 美女主播在线视频| 国产片特级美女逼逼视频| 精品少妇黑人巨大在线播放| 亚洲av成人av| 精品亚洲乱码少妇综合久久| 亚洲熟女精品中文字幕| 最近2019中文字幕mv第一页| 免费观看av网站的网址| 日日干狠狠操夜夜爽| 国产日韩欧美在线精品| 成人国产麻豆网| 国产成人aa在线观看| 久久久久久久久久人人人人人人| 午夜亚洲福利在线播放| 欧美潮喷喷水| 亚洲伊人久久精品综合| 国产精品久久久久久久久免| 欧美精品一区二区大全| 亚洲精品影视一区二区三区av| 精品久久久久久久人妻蜜臀av| 日韩中字成人| 国产精品国产三级国产专区5o| 高清午夜精品一区二区三区| 偷拍熟女少妇极品色| 成人美女网站在线观看视频| 国产伦精品一区二区三区视频9| 成人av在线播放网站| 国产白丝娇喘喷水9色精品| 久久久久久国产a免费观看| 国产精品伦人一区二区| 亚洲av中文av极速乱| 18禁裸乳无遮挡免费网站照片| 高清视频免费观看一区二区 | 日韩一区二区视频免费看| 看非洲黑人一级黄片| 成年人午夜在线观看视频 | 色哟哟·www| 午夜福利成人在线免费观看| 国产精品国产三级专区第一集| 国产成人a∨麻豆精品| 熟妇人妻不卡中文字幕| 人妻少妇偷人精品九色| 免费大片18禁| 最后的刺客免费高清国语| 麻豆精品久久久久久蜜桃| 亚洲三级黄色毛片| 两个人的视频大全免费| 精品国产三级普通话版| 五月玫瑰六月丁香| 丰满少妇做爰视频| 亚洲久久久久久中文字幕| 国产精品99久久久久久久久| 久久热精品热| 亚洲内射少妇av| 国产片特级美女逼逼视频| 国产在线男女| 亚洲成色77777| 99热网站在线观看| 国模一区二区三区四区视频| 伊人久久国产一区二区| 看十八女毛片水多多多| 日韩中字成人| 欧美zozozo另类| 九九爱精品视频在线观看| 久久热精品热| 国产亚洲精品久久久com| www.av在线官网国产| 一级片'在线观看视频| 欧美高清性xxxxhd video| 街头女战士在线观看网站| 大香蕉97超碰在线| 看十八女毛片水多多多| 日本爱情动作片www.在线观看| 赤兔流量卡办理| 一本—道久久a久久精品蜜桃钙片 精品乱码久久久久久99久播 | 水蜜桃什么品种好| 精品一区二区三区人妻视频| 亚洲四区av| 成年版毛片免费区| 亚洲av一区综合| 久久这里有精品视频免费| 日日撸夜夜添| 亚洲av在线观看美女高潮| 中文欧美无线码| 亚洲成人久久爱视频| 亚洲电影在线观看av| 日日摸夜夜添夜夜爱| 欧美日本视频| 国产视频首页在线观看| 成人午夜精彩视频在线观看| 九色成人免费人妻av| 高清在线视频一区二区三区| 热99在线观看视频| 亚洲精品456在线播放app| 亚洲精品自拍成人| 2021少妇久久久久久久久久久| 深爱激情五月婷婷| 久久亚洲国产成人精品v| 男女边吃奶边做爰视频| 精品久久久噜噜| 菩萨蛮人人尽说江南好唐韦庄| 如何舔出高潮| 国产 一区精品| 少妇人妻精品综合一区二区| 国内精品美女久久久久久| 精品一区在线观看国产| 成人亚洲精品av一区二区| av在线播放精品| 在现免费观看毛片| 免费av观看视频| 久久国产乱子免费精品| 有码 亚洲区| 久久国内精品自在自线图片| 日韩视频在线欧美| 免费观看a级毛片全部| 亚洲精品影视一区二区三区av| 国产高清三级在线| av在线蜜桃| 色哟哟·www| 成人二区视频| 身体一侧抽搐| 国产高清国产精品国产三级 | 91午夜精品亚洲一区二区三区| 精品久久久久久久久av| 国产成人aa在线观看| 在线天堂最新版资源| 国产黄频视频在线观看| 亚洲综合精品二区| 国产在线男女| 少妇被粗大猛烈的视频| 国产精品美女特级片免费视频播放器| 网址你懂的国产日韩在线| 亚洲av.av天堂| 麻豆精品久久久久久蜜桃| 国产高潮美女av| 欧美成人一区二区免费高清观看| 国产精品不卡视频一区二区| 国产精品久久久久久精品电影| 色视频www国产| 国产高清不卡午夜福利| 欧美另类一区| 男女那种视频在线观看| 国产真实伦视频高清在线观看| 精品一区二区三区视频在线| 国产成人精品福利久久| av免费在线看不卡| 少妇人妻精品综合一区二区| 日本黄大片高清| 亚洲高清免费不卡视频| 日韩视频在线欧美| 亚洲熟女精品中文字幕| 国产黄色视频一区二区在线观看| 国产伦在线观看视频一区| 看非洲黑人一级黄片| 国产成人aa在线观看| 日韩国内少妇激情av| 99久久精品热视频| 欧美丝袜亚洲另类| 国产毛片a区久久久久| 国产精品国产三级国产av玫瑰| 亚洲精品日本国产第一区| 91精品一卡2卡3卡4卡| 免费不卡的大黄色大毛片视频在线观看 | av线在线观看网站| 久久99精品国语久久久| 人妻少妇偷人精品九色| 大话2 男鬼变身卡| 能在线免费看毛片的网站| 久久精品国产亚洲av涩爱| 听说在线观看完整版免费高清| 国产日韩欧美在线精品| 免费电影在线观看免费观看| 欧美成人精品欧美一级黄| 2022亚洲国产成人精品| 午夜精品在线福利| 熟妇人妻久久中文字幕3abv| 黑人高潮一二区| 国产精品嫩草影院av在线观看| 99久久精品一区二区三区| 看非洲黑人一级黄片| 亚洲自偷自拍三级| 久久人人爽人人爽人人片va| 国产片特级美女逼逼视频| 黄色欧美视频在线观看| 中文欧美无线码| 亚洲国产最新在线播放| 联通29元200g的流量卡| 亚洲av中文av极速乱| 亚洲精品影视一区二区三区av| 国产成人午夜福利电影在线观看| 国产成人精品婷婷| 亚洲人成网站在线播| 日韩一本色道免费dvd| 欧美成人a在线观看| 国产激情偷乱视频一区二区| 久久久久久伊人网av| 久99久视频精品免费| 欧美最新免费一区二区三区| 夫妻午夜视频| 18禁动态无遮挡网站| 大话2 男鬼变身卡| 国产黄片视频在线免费观看| 成人欧美大片| 九九久久精品国产亚洲av麻豆| 亚洲国产成人一精品久久久| 久久精品人妻少妇| 国产在视频线精品| 大香蕉久久网| 淫秽高清视频在线观看| 十八禁国产超污无遮挡网站| 国产一区二区三区av在线| 一区二区三区乱码不卡18| 不卡视频在线观看欧美| 床上黄色一级片| 免费少妇av软件| 在线观看一区二区三区| 国产精品国产三级国产专区5o| 国产熟女欧美一区二区| 日日干狠狠操夜夜爽| 国产伦一二天堂av在线观看| 国产亚洲91精品色在线| 日本黄色片子视频| 女人久久www免费人成看片| 综合色丁香网| av在线亚洲专区| 国产成人91sexporn| 99热全是精品| 国产免费福利视频在线观看| 欧美激情在线99| 国产成人一区二区在线| 中文精品一卡2卡3卡4更新| 内地一区二区视频在线| av播播在线观看一区| 午夜免费激情av| 伦理电影大哥的女人| 一级a做视频免费观看| 国产色爽女视频免费观看| 日本色播在线视频| 午夜爱爱视频在线播放| 精品熟女少妇av免费看| 69av精品久久久久久| 久久久久久久久久成人| 国产高清国产精品国产三级 | 亚洲av.av天堂| 亚洲美女搞黄在线观看| 亚洲欧美日韩无卡精品| 亚洲精品成人av观看孕妇| 天堂中文最新版在线下载 | 亚洲av成人av| 精品久久久久久久人妻蜜臀av| 久久精品夜夜夜夜夜久久蜜豆| 99热这里只有是精品在线观看| 人妻夜夜爽99麻豆av| 国产精品久久久久久av不卡| 日韩一区二区视频免费看| 日韩制服骚丝袜av| 美女高潮的动态| 亚洲激情五月婷婷啪啪| 97精品久久久久久久久久精品| 全区人妻精品视频| 午夜福利视频精品| 欧美日本视频| 2018国产大陆天天弄谢| 最近最新中文字幕大全电影3| 汤姆久久久久久久影院中文字幕 | 亚洲人成网站高清观看| 美女国产视频在线观看| 三级国产精品片| 日韩欧美 国产精品| 人人妻人人澡人人爽人人夜夜 | 国产69精品久久久久777片| 成人亚洲欧美一区二区av| 日本免费a在线| 久久久久久久久久成人| 国产精品爽爽va在线观看网站| 小蜜桃在线观看免费完整版高清| 亚洲综合色惰| 亚洲久久久久久中文字幕| 免费播放大片免费观看视频在线观看| 国产精品国产三级国产专区5o| 成人毛片a级毛片在线播放| 能在线免费看毛片的网站| 岛国毛片在线播放| 免费观看性生交大片5| 日本熟妇午夜| 国产亚洲91精品色在线| 日韩视频在线欧美| 99久久中文字幕三级久久日本| 精品久久久久久成人av| 精品久久久久久久久亚洲| 免费在线观看成人毛片| 两个人的视频大全免费| 最近手机中文字幕大全| 人人妻人人澡人人爽人人夜夜 | 国产单亲对白刺激| 3wmmmm亚洲av在线观看| 别揉我奶头 嗯啊视频| 国产成人免费观看mmmm| 高清在线视频一区二区三区| 99久久精品热视频| 99久久人妻综合| 国产精品久久久久久精品电影| 午夜久久久久精精品| 高清日韩中文字幕在线| 亚洲不卡免费看| 热99在线观看视频| 欧美丝袜亚洲另类| 亚洲精品,欧美精品| 成人鲁丝片一二三区免费| 日产精品乱码卡一卡2卡三| 最近的中文字幕免费完整| 亚洲精品乱码久久久久久按摩| 男人和女人高潮做爰伦理| 国内少妇人妻偷人精品xxx网站| 男人爽女人下面视频在线观看| 在线a可以看的网站| 最近中文字幕高清免费大全6| 亚洲国产日韩欧美精品在线观看| 亚洲精品国产成人久久av| 久久精品熟女亚洲av麻豆精品 | 天堂俺去俺来也www色官网 | 观看美女的网站| 少妇熟女aⅴ在线视频| 久久午夜福利片| av天堂中文字幕网| 免费观看性生交大片5| 欧美不卡视频在线免费观看| av卡一久久| 人人妻人人澡人人爽人人夜夜 | 亚洲在线自拍视频| 国产国拍精品亚洲av在线观看| 亚洲三级黄色毛片| 亚州av有码| 亚洲不卡免费看| 久久久成人免费电影| 精品亚洲乱码少妇综合久久| 婷婷六月久久综合丁香| 久久久久久久久久久丰满| 最近最新中文字幕免费大全7| 午夜精品一区二区三区免费看| 亚州av有码| 欧美97在线视频| 一边亲一边摸免费视频| 国产午夜精品一二区理论片| 欧美日韩视频高清一区二区三区二| 国产精品99久久久久久久久| 久久97久久精品| 久久久久久久久久久免费av| 能在线免费看毛片的网站| 亚洲欧美精品自产自拍| 国产成人aa在线观看| 人人妻人人澡欧美一区二区| 麻豆av噜噜一区二区三区| 日韩av在线免费看完整版不卡| 日韩 亚洲 欧美在线| 身体一侧抽搐| 久久久久网色| 亚洲av中文av极速乱| 婷婷色av中文字幕| 免费高清在线观看视频在线观看| 免费在线观看成人毛片| 汤姆久久久久久久影院中文字幕 | 免费av不卡在线播放| 大片免费播放器 马上看| 国产精品一区二区三区四区免费观看| 午夜福利视频精品| 夫妻性生交免费视频一级片| 插阴视频在线观看视频| 中文字幕av成人在线电影| 日本一二三区视频观看| 欧美区成人在线视频| 婷婷色综合www| 1000部很黄的大片| 熟女人妻精品中文字幕| 亚洲精品乱码久久久久久按摩| 非洲黑人性xxxx精品又粗又长| 亚洲精品自拍成人| 99久国产av精品| 久久久久久伊人网av| 免费少妇av软件| 一级二级三级毛片免费看| 黄色一级大片看看| 丰满少妇做爰视频| 欧美三级亚洲精品| 亚洲精品第二区| 国产一区二区在线观看日韩| 又爽又黄a免费视频| 欧美精品国产亚洲| 久久久久久久久中文| 日日干狠狠操夜夜爽| 国产毛片a区久久久久| videossex国产| 亚洲电影在线观看av| 少妇熟女欧美另类| 久久这里只有精品中国| 久久久久久久久久久丰满| 日韩大片免费观看网站| 久久亚洲国产成人精品v| 18禁在线无遮挡免费观看视频| 身体一侧抽搐| 久久99热6这里只有精品| 黄片wwwwww| 精品亚洲乱码少妇综合久久|